本文主要研究内容
作者李玉婷（2019）在《敲除两个拟南芥氯离子木质部装载通路的比较研究》一文中研究指出：盐胁迫下,氯离子（Cl?）在植物体内过量积累造成Cl?毒害（Cl?toxicity）。目前,针对盐胁迫下Cl?转运的研究还非常滞后。研究表明,NPF2.4和SLAH1/SLAH3介导了Cl?的木质部装载,从而响应盐胁迫,并调控Cl?在叶中的积累。由于这两个基因的T-DNA插入突变体都相对缺乏。因此,本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,在拟南芥野生型背景下,成功敲除了NPF2.4和SLAH1基因,得到npf2.4（1,2,3,4）和slah1-2突变体。将npf2.4突变体分别与slah1（SALK039811）和slah1 slah3杂交,进而得到纯合的npf2.4 slah1双突变体以及npf2.4 slah1 slah3三突变体。在正常条件下,单突变体slah1和npf2.4（1,2,4）叶中的Cl?含量,相比对照都有一定程度的减少。同时,双突变体npf2.4-2 slah1和npf2.4-4 slah1叶中的Cl?含量,相比对照分别减少了39%和27%。在200 mM NaCl处理的土壤培养条件下,双突变体npf2.4-2 slah1和npf2.4-4 slah1叶中的Cl?含量,相比对照分别减少了55%和33%。结果表明,同时敲除NPF2.4和SLAH1这两个Cl?木质部装载通路中的基因,对叶中Cl?含量的调节很可能有叠加效果。后续,用双突变体和三突变体材料进行RNAseq,以鉴定其它参与调控Cl?积累的新基因。本研究还发现,NPF2.4的基因表达水平在ABA受体缺失的突变体（pyr1 pyl1 pyl2 pyl4 pyl5 pyl8）背景下,被盐胁迫（75 mM NaCl）显著上调,不再受盐胁迫的抑制。这说明NPF2.4是处在ABA信号通路的下游,盐胁迫对其的抑制是通过ABA间接实现的。与NPF2.4不同的是,SLAH1的基因表达水平在ABA受体缺失的突变体背景下,仍然被强烈抑制,这说明NaCl对其的抑制是独立于ABA信号通路作用的。此外,在制备的4个独立株系npf2.4突变体中,npf2.4-4有着不同于WT或其它株系的表型,出现了种子的体积和重量都增大、叶形改变、叶缘锯齿状、表皮毛的数量减少和分叉数增多等表型,甚至个别突变体存在晚花和滞绿现象。这可能是因为非特异性的双链被编辑或者转基因片段插入造成内源基因的表达被阻断。
Abstract
yan xie pai xia ,lv li zi （Cl?）zai zhi wu ti nei guo liang ji lei zao cheng Cl?du hai （Cl?toxicity）。mu qian ,zhen dui yan xie pai xia Cl?zhuai yun de yan jiu hai fei chang zhi hou 。yan jiu biao ming ,NPF2.4he SLAH1/SLAH3jie dao le Cl?de mu zhi bu zhuang zai ,cong er xiang ying yan xie pai ,bing diao kong Cl?zai xie zhong de ji lei 。you yu zhe liang ge ji yin de T-DNAcha ru tu bian ti dou xiang dui que fa 。yin ci ,ben yan jiu tong guo CRISPR/Cas9ji yin bian ji ji shu ,zai ni na gai ye sheng xing bei jing xia ,cheng gong qiao chu le NPF2.4he SLAH1ji yin ,de dao npf2.4（1,2,3,4）he slah1-2tu bian ti 。jiang npf2.4tu bian ti fen bie yu slah1（SALK039811）he slah1 slah3za jiao ,jin er de dao chun ge de npf2.4 slah1shuang tu bian ti yi ji npf2.4 slah1 slah3san tu bian ti 。zai zheng chang tiao jian xia ,chan tu bian ti slah1he npf2.4（1,2,4）xie zhong de Cl?han liang ,xiang bi dui zhao dou you yi ding cheng du de jian shao 。tong shi ,shuang tu bian ti npf2.4-2 slah1he npf2.4-4 slah1xie zhong de Cl?han liang ,xiang bi dui zhao fen bie jian shao le 39%he 27%。zai 200 mM NaClchu li de tu rang pei yang tiao jian xia ,shuang tu bian ti npf2.4-2 slah1he npf2.4-4 slah1xie zhong de Cl?han liang ,xiang bi dui zhao fen bie jian shao le 55%he 33%。jie guo biao ming ,tong shi qiao chu NPF2.4he SLAH1zhe liang ge Cl?mu zhi bu zhuang zai tong lu zhong de ji yin ,dui xie zhong Cl?han liang de diao jie hen ke neng you die jia xiao guo 。hou xu ,yong shuang tu bian ti he san tu bian ti cai liao jin hang RNAseq,yi jian ding ji ta can yu diao kong Cl?ji lei de xin ji yin 。ben yan jiu hai fa xian ,NPF2.4de ji yin biao da shui ping zai ABAshou ti que shi de tu bian ti （pyr1 pyl1 pyl2 pyl4 pyl5 pyl8）bei jing xia ,bei yan xie pai （75 mM NaCl）xian zhe shang diao ,bu zai shou yan xie pai de yi zhi 。zhe shui ming NPF2.4shi chu zai ABAxin hao tong lu de xia you ,yan xie pai dui ji de yi zhi shi tong guo ABAjian jie shi xian de 。yu NPF2.4bu tong de shi ,SLAH1de ji yin biao da shui ping zai ABAshou ti que shi de tu bian ti bei jing xia ,reng ran bei jiang lie yi zhi ,zhe shui ming NaCldui ji de yi zhi shi du li yu ABAxin hao tong lu zuo yong de 。ci wai ,zai zhi bei de 4ge du li zhu ji npf2.4tu bian ti zhong ,npf2.4-4you zhao bu tong yu WThuo ji ta zhu ji de biao xing ,chu xian le chong zi de ti ji he chong liang dou zeng da 、xie xing gai bian 、xie yuan ju chi zhuang 、biao pi mao de shu liang jian shao he fen cha shu zeng duo deng biao xing ,shen zhi ge bie tu bian ti cun zai wan hua he zhi lu xian xiang 。zhe ke neng shi yin wei fei te yi xing de shuang lian bei bian ji huo zhe zhuai ji yin pian duan cha ru zao cheng nei yuan ji yin de biao da bei zu duan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自兰州大学的李玉婷，发表于刊物兰州大学2019-07-29论文，是一篇关于盐胁迫论文,毒害论文,兰州大学2019-07-29论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自兰州大学2019-07-29论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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