导读:本文包含了基因型分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:结核分枝杆菌,北京基因型,脂阿拉伯甘露聚糖,外周血单个核细胞
基因型分化论文文献综述
吴启航[1]（2019）在《北京基因型结核杆菌脂聚糖对T淋巴细胞分化的调节作用研究》一文中研究指出目的:本研究以北京基因型结核分枝杆菌临床株的脂阿拉伯甘露聚糖(BJLAM)为研究对象,通过BJ-LAM与人外周血单个核细胞体外共培养,然后检测上清液中的细胞因子。探讨BJ-LAM对T淋巴细胞分化的调控作用,也为BJ-LAM的进一步应用提供可靠的理论参考。方法:菌株筛选:于2018年6月20日从武汉市医疗救治中心一例临床结核患者的痰标本中,筛选到了一株结核分枝杆菌临床分离株(WH322636),用分枝杆菌特异性引物ITS和RD105区域缺失法进行基因鉴定。LAM的提取、纯化:用Triton X-114提取临床分离株WH322636、耻垢分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、结核分枝杆菌H37Ra的粗提物,用葡聚糖凝胶柱对粗提物进行纯化;得到的LAM通过聚丙烯酰氨凝胶电泳联合硝酸银染色进行显色,初步判断四种LAM结构的大小。北京型结核分枝杆菌LAM对T淋巴细胞功能的调节作用:从武汉市医疗救治中心筛选出30例肺结核患者(其中菌阴结核患者19人),12例健康人作对照。抽取受检者静脉血2ml,提取PBMC,用纯化的LAM(BCG-LAM、BJ-LAM)刺激42个受试者的PBMC细胞,培养48h后检测PBMC释放细胞因子(IL-6、TNFα、IL2、IFNγ、IL17、IL-10)的水平。结果:临床株WH322636为一株抗酸阳性的慢生长北京基因型结核分枝杆菌。银染鉴定表明不同菌株来源LAM的分子量由小到大依次为:耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌H37Ra、北京基因型结核分枝杆菌(WH322636)、牛结核分枝杆菌。健康组经BJ-LAM刺激后,PBMCs上清中释放的IL-17的量为41.73±4.32pg/m L,而健康空白对照组上清中IL-17的释放量为21.50±4.566pg/m L,差异显着(P<0.005);健康组的PBMCs在上清中释放的IFN-γ的量为15.73±1.27pg/m L,而结核组上清中IFN-γ的释放量为31.41±3.642pg/m L,差异显着(P<0.005);健康组的PBMCs在上清中释放的IL-10的量为0.6644±0.1012pg/m L,而结核组上清中IL-10的含量为2.601±0.3952pg/m L,差异显着(P<0.01)。结论:健康组PBMCs上清释放的IL-17高于空白对照组,可能预示BJ-LAM具有调节T细胞释放IL-17的能力,IL-17介导促炎反应,促进趋化因子分泌和感染处中性粒细胞积聚,达到保护机体的作用。IFN-γ可以调控30个基因的表达水平,具有抗细菌感染等免疫调控的作用,BJ-LAM刺激全血γ-干扰素明显升高,说明BJ-LAM对机体具有免疫增强作用,显示了其对肺结核的诊断有一定的应用价值。IL-10是一种抗炎因子,在细菌感染期间下调炎症反应和拮抗炎症介质中起作用。BJ-LAM刺激结核病组中IL10的释放高于健康组,表明它可能导致单核巨噬细胞共刺激分子的下调,从而使抗原提呈途径减少,CD4+T和CD8+T的活性也会随之下降。BJ-LAM刺激病人的IL-6释放水平与空白对照组相比略有下降,这可能预示着BJLAM刺激后向Th2极化的可能性不大,但需进一步数据验证。结果显示BJ-LAM具有诊断、免疫治疗和预防的潜在应用价值,也为进一步探讨其免疫机制提供参考。(本文来源于《武汉轻工大学》期刊2019-05-01）
叶玲敏[2]（2016）在《胰岛素信号对不同基因型小鼠ADSCs成脂后去分化的影响》一文中研究指出迄今为止的国内外研究表明,从动物体内分离得到的内脏或皮下白色成熟脂肪细胞在无外源胰岛素的体外培养条件下,可自主发生去分化;而添加胰岛素则可维持其原有成熟表型、抑制其去分化。我推测胰岛素信号与脂肪细胞去分化存在相关性。然而胰岛素信号影响脂肪细胞去分化的分子机制尚不明了。本文采用形态学和分子细胞生物学检测手段,通过研究胰岛素信号对肥胖和非肥胖小鼠成脂细胞去分化的影响,进而对不同遗传背景小鼠的内脏白色脂肪细胞去分化机制进行初步探讨。本文选用7-8周龄的四种基因型(C57BL/6J遗传背景,WT、TNF-α-/-、Leprdb/db以及DT)雄性小鼠为实验材料。前两种小鼠为非肥胖小鼠,后两种为遗传性自发性肥胖小鼠。首先,使用经典的“鸡尾酒法”,分别诱导上述不同基因型小鼠内脏原代白色脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外成脂分化为成熟脂肪细胞,然后,采用不同的方法处理细胞,令其去分化。共设叁组:(1)单纯对照组,成脂诱导后10天后去除胰岛素,细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中(含有未知的微量胰岛素);(2)干预组,在去除胰岛素的同时添加胰岛素信号抑制剂(OSI-906,linstinib),细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中;(3)DMSO对照组,在去除胰岛素的同时添加OSI-906的溶剂(DMSO),细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中。叁组细胞去分化实验开始后,在相应培养条件下,继续培养8天。此外,为了验证去分化的成脂细胞(dedifferentiated fat cells,DFATCs)是否重新获得干细胞特性,对其进行了成脂再分化和成骨转分化诱导实验。通过一般形态学和特殊染色方法,以及针对脂解、成脂、胰岛素信号通路和脂肪干细胞相关靶基因的转录和翻译水平的检测,探究胰岛素信号对不同基因型小鼠成脂细胞去分化的影响。结果如下:1.分离纯化WT小鼠ADSCs,以确定成脂分化、成脂后去分化以及DFATCs成脂再分化的检测时期。通过细胞形态变化特征确定了以下五个时期:成脂分化0天(D0)、10天(D10),成脂后去分化3天(DD3)、8天(DD8),DFATCs成脂再分化10天(RD10)。2.选用不同浓度(0、0.1、0.3和1μM)的胰岛素信号通路抑制剂(OSI-906)干预WT ADSCs成脂分化。通过细胞形态变化特征和靶蛋白表达水平的检测结果,确定了在胰岛素和血清均存在的条件下完全抑制胰岛素信号通路的最小药物(OSI-906)浓度。结果表明0.3μm最佳。3.形态学检测结果:(1)adscs成脂诱导10天后成功分化为成熟脂肪细胞;(2)成熟脂肪细胞随着去分化时间的延长逐渐发生去分化,dd8时完成去分化;(3)去分化速率为:干预组>对照组,单纯对照组≈dmso对照组;(4)干预组和对照组的dfatcs成脂诱导10天后,再分化为成熟脂肪细胞,两组之间的成脂率无显着差异;(5)wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的形态变化特征差异不大。4.wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠的对照组和干预组dfatcs获得前后的脂肪干细胞标志cd105表达持续上升;wtdfatcs成骨诱导21天后,茜素红钙结节染色结果为阳性,表明dfatcs重新获得干细胞特性。5.实时荧光定量rt-pcr(qpcr)检测结果显示:在小鼠成脂细胞去分化过程(dd0至dd8)中,胰岛素信号通路关键因子akt、glut-4的mrna表达水平无显着变化;成脂相关因子c/ebpα、pparγ、adiponectin和srebp-1的mrna表达水平持续下降;脂解关键因子atgl的mrna表达水平呈先升高后下降的趋势。单纯对照组、dmso对照组进行比较发现,两个对照组之间无显着差异。与对照组相比,osi-906干预组的atgl的mrna表达水平上调,c/ebpα、pparγ、adiponectin和srebp-1的mrna表达水平下调。另外,wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的各检测分子在基因转录水平的表达变化趋势一致,主要差异在于各检测分子(同一时期和同一组)的相对表达量有所不同。6.westernblotting结果显示:在adscs成脂后去分化过程中(dd0至dd8),p-akt(thr308)的蛋白激活水平大幅下降,glut-4的蛋白表达水平呈先上升后下降的变化趋势,srebp-1和adiponectin的蛋白表达水平在去分化早期(dd3)已下降至检测极限。比较叁组结果发现,单纯对照组和dmso对照组间无显着差异,osi-906干预组的p-akt(thr308)的蛋白激活水平极显着低于对照组。另外,wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的各检测分子在基因翻译水平的表达变化趋势一致,主要差异在于各检测分子(同一时期和同一组)的相对表达量有所不同。综上所述,胰岛素信号缺失对肥胖(leprdb/db、dt)和非肥胖(wt、tnf-α-/-)小鼠成脂细胞去分化起到促进作用,即胰岛素信号缺失在成脂细胞中抑制srebp-1、pparγ和c/ebpα表达的同时,促进了脂解关键分子和脂肪干细胞标志分子的表达,从而促进成脂细胞去分化的发生。此外,胰岛素信号缺失对小鼠成脂细胞去分化的促进作用与小鼠基因型及肥胖程度关系不大。(本文来源于《山东师范大学》期刊2016-06-01）
彭思佳,肖亮,刘清波,易自力,蒋建雄[3]（2015）在《不同基因型南荻愈伤组织诱导及分化的差异》一文中研究指出以8种基因型南荻(Miscanthus lutarioriparius)幼穗为材料进行组织培养,并对其茎秆成份含量进行测定。结果表明:不同基因型南荻愈伤组织诱导率和分化率均存在显着差异,A4和A6均最高:诱导率分别为97.5%和94.2%、分化率分别为91.8%和83.3%。对南荻诱导率和分化率与茎秆成份进行回归分析显示:愈伤组织诱导率和分化率均与茎秆中半纤维素、木质素含量、105℃含水量存在显着相关性,此外,分化率还与45℃总含水量有显着相关性。(本文来源于《湖南农业科学》期刊2015年09期）
刘文萍,刘建新,南相日[4]（2015）在《不同基因型对寒地粳稻成熟胚愈伤组织诱导及绿苗分化的影响》一文中研究指出水稻成熟胚培养是基因工程和细胞工程等研究的基础。以30个不同基因型的寒地粳稻成熟胚为材料,研究了其在相同条件下的培养特性,分析了不同粳稻间愈伤组织诱导率和绿苗分化率的差异以及与培养力之间的关系。结果表明:诱导率最高为83.5%,最低为1.3%。分化率最高为64.0%,最低为0。不同基因型间诱导率及绿苗分化率差异明显;培养力与诱导率呈显着正相关,与绿苗分化率呈极显着正相关,诱导率和绿苗分化率之间无绝对相关性;培养力聚类分析表明,供试基因型被聚为不同的类群,第叁类群中有5个基因型来自相同亲本组合。(本文来源于《北方水稻》期刊2015年04期）
刘玲玲[5]（2015）在《Chemerin寡肽对不同基因型小鼠前脂肪细胞成脂分化中Wnt/β-catenin信号通路的影响》一文中研究指出肥胖的发生与脂肪组织过度增殖和分化有关，脂肪细胞的分化过程中存在复杂网络调控。Chemerin/CMKLR1信号通路、Wnt/-catenin信号通路和TNF-α共同参与成脂分化过程。敲低chemerin后成脂分化过程被抑制，说明chemerin在成脂分化过程中起关键作用，但其作用机制尚未见报道。激活Wnt/-catenin信号通路可以通过抑制成脂关键分子PPARγ的表达抑制成脂。研究表明，添加外源chemerin全蛋白（1μg/ml）可降低骨骼肌细胞GSK-3的磷酸化水平。GSK-3是-catenin降解复合物的组成分子，而-catenin是Wnt/-catenin信号通路的关键分子。我们猜测在成脂分化过程中，chemerin与Wnt/-catenin信号通路存在串话。脂肪细胞因子TNF-α也参与成脂分化过程，对前脂肪细胞的分化起抑制作用。其与chemerin/CMKLR1信号通路、Wnt/-catenin信号通路密切相关。本实验利用实验室现有野生型（WT）、TNF-α缺失(TNF-α-/-)、瘦素受体基因突变(Leprdb/db，db/db）以及瘦素受体和TNF-α双基因突变（DT）小鼠，从其腹股沟处内脏白色脂肪组织中分离脂肪干细胞（ADSCs）进行原代培养，于成脂诱导的同时添加chemerin149-157寡肽（C9）处理细胞，在成脂诱导的4个不同时期（诱导前I0、诱导早期I3、诱导中期I7、诱导后期I14）固定细胞、抽提细胞总RNA以及抽提细胞总蛋白，分别从形态学、靶基因的转录和翻译水平上探究C9对不同基因型小鼠原代ADSCs成脂分化中Wnt/-catenin信号通路的影响。（1）通过人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMCs)迁移、NIH3T3细胞增殖及WT小鼠原代ADSCs蛋白免疫印迹检测ERK磷酸化水平实验，证明添加的C9寡肽对于促进HA-VSMCs迁移、促进NIH3T3细胞增殖以及提高WT小鼠原代ADSCs ERK蛋白磷酸化水平具有生物学活性，10nM是其最佳效应浓度。（2）形态学观察发现，四种不同基因型小鼠ADSCs成脂率高低顺序为TNF-α-/-小鼠>WT小鼠>DT小鼠>Leprdb/db小鼠；C9对四种基因型小鼠ADSCs成脂分化的成脂率、脂滴大小和脂滴出现的时间均无显着影响。（3）针对靶基因转录水平的检测发现：与非处理组相比，C9处理组四种基因型小鼠ADSCs成脂标志分子PPARγ2、adiponectin、C/EBPα和C/EBP的mRNA水平无显着差异（p>0.05）；Wnt/-catenin信号通路关键分子如Wnt10b、-catenin的mRNA水平，在处理组和非处理组之间，也无显着差异（p>0.05）。（4）针对靶基因翻译水平的检测发现：与非处理组相比，C9处理组的四种基因型小鼠ADSCs的adiponectin水平无显着差异（p>0.05），Wnt/-catenin信号通路关键分子-catenin蛋白水平显着下调（p<0.05）。以上实验结果表明，添加外源C9对四种不同基因型小鼠ADSCs成脂分化的成脂率、脂滴大小、脂滴出现时间，成脂相关分子PPARγ2、adiponectin、C/EBPα和C/EBP的mRNA水平，成脂相关分子adiponectin的蛋白水平，均无显着影响。另外，添加外源C9对四种不同基因型小鼠ADSCs成脂分化中Wnt/-catenin信号通路关键分子Wnt10b和-catenin的RNA水平无显着影响（p>0.05），然而其可显着降低-catenin的蛋白水平，说明C9的作用是可以促进-catenin蛋白的磷酸化降解。由此猜测C9可以通过促进-catenin蛋白的磷酸化降解与Wnt/-catenin信号通路发生串话。另外，TNF-α缺失可以减弱C9对-catenin蛋白的磷酸化降解作用，瘦素受体缺失引起的肥胖可以促进C9对-catenin蛋白的磷酸化降解作用，其作用机制还需进一步研究探讨。(本文来源于《山东师范大学》期刊2015-04-08）
李文娟[6]（2015）在《LiCl对不同基因型小鼠前脂肪细胞成脂分化中Chemerin表达的影响》一文中研究指出目前，越来越多的人患有肥胖症，其可引发多种并发症，如冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病、高血压、高血脂及肿瘤等疾病，严重威胁着人类健康。因此，研究肥胖的发生机制和防治措施已成为21世纪生命科学和医学研究的迫切任务。白色脂肪组织的过度积累引发肥胖，而脂肪细胞的分化在肥胖发生过程中扮演了重要角色，涉及复杂的网络分子调控。Wnt/β-catenin信号通路、chemerin/CMKLR1信号通路及TNF-α均参与脂肪细胞分化的调控过程。其中，Wnt/β-catenin信号通路通过下调C/EBPs和PPARγ的表达水平，抑制成脂分化。Chemerin作为新近发现的脂肪因子，通过自分泌和旁分泌的方式调节脂肪细胞分化。有研究表明，分别抑制chemerin及其受体CMKLR1的表达后，可使脂肪细胞的分化过程明显受阻；同时，chemerin可降低GSK-3β的磷酸化水平，激活GSK-3β，而后者是影响Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin是否降解的关键因子。由此推测，Wnt/β-catenin信号通路与chemerin信号分子在调控成脂分化过程中存在串话。然而，其串话机制还未明确，尤其在脂肪细胞分化过程中，激活Wnt/β-catenin信号通路对chemerin的表达有何影响？其影响机制是什么？目前未见研究报道。另外，TNF-α作为一种炎症因子，也通过多种机制抑制成脂分化，而它与Wnt/β-catenin及chemerin/CMKLR1信号通路之间的关系还不清楚。本实验以WT小鼠、TNF-α-/-小鼠、Leprdb/db小鼠及DT小鼠为实验材料，使用Wnt/β-catenin信号通路的激活剂LiCl，干预四种基因型小鼠前脂肪细胞的分化过程，建立Wnt/β-catenin信号通路激活模型，通过实时荧光定量PCR和免疫印迹技术，检测成脂分化中chemerin及成脂相关因子的表达变化，并分析TNF-α缺失情况下，对LiCl引起chemerin表达变化的影响。实验结果如下：1.诱导WT小鼠前脂肪细胞分化，确定成脂分化过程中四个关键时期，即未诱导时期（诱导前）、诱导早期（诱导3天后）、诱导中期（诱导7天后）及诱导晚期（诱导14天后）。2.形态学观察发现，20mM LiCl显着抑制四种基因型小鼠前脂肪细胞的分化，且抑制效果无明显差异。另外，TNF-α-/-小鼠脂肪细胞的成脂诱导率最高，约80%，WT小鼠次之，DT小鼠再次之，Leprdb/db小鼠最低，约40%。3.实时荧光定量PCR结果表明，使用LiCl干预四种基因型小鼠前脂肪细胞分化过程中，与非干预组相比，成脂相关因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ2及adiponectin的基因表达水平均下调，Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin的基因表达水平上调，而chemerin的基因表达水平于分化早期下调，分化中期和晚期均上调。另外，TNF-α缺失可上调成脂分化早期chemerin基因的表达，并且对LiCl通过正反馈调节机制引起的chemerin基因表达的上调起促进作用。4.免疫印迹结果表明，使用LiCl干预四种基因型小鼠前脂肪细胞分化过程中，与非干预组相比，adiponectin蛋白的表达水平显着下调，Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin蛋白的表达水平略上调，而chemerin蛋白的表达水平于分化早期下调，分化中期和晚期均无明显变化。上述结果表明，在脂肪细胞分化过程中，Wnt/β-catenin信号通路主要在转录水平调控chemerin的表达，其调控作用主要表现在两个阶段：一是激活Wnt/β-catenin信号通路后，成脂分化早期的启动成脂过程被阻止，从而下调分化早期chemerin的基因表达；二是LiCl通过抑制GSK-3β的活性，激活Wnt/β-catenin信号通路后，由于正反馈调节机制上调分化中期和晚期chemerin的基因表达。同时，TNF-α参与Wnt/β-catenin信号通路对chemerin的调控过程，并且可能是负调控，其具体机制还需进一步探讨。(本文来源于《山东师范大学》期刊2015-04-08）
雷伟,文建成,普世皇,王昌江,刘华萍[7]（2015）在《海拔差异对水稻雌配子体基因型选择及其后代表型遗传分化的影响》一文中研究指出【目的】分析海拔环境差异对水稻雌配子体基因型选择及其对后代表型遗传分化的影响,为研究植物表型对海拔环境的遗传响应及利用海拔差异进行雌配子体选择育种的方法提供理论参考。【方法】利用2个滇1型细胞质雄性不育系与耐寒粳稻地方老品种杂交,在4个具有明显海拔背景差异的试验点构建并种植了7个水稻F1雌配子体基因型选择群体及其28个F2遗传分离群体,通过估算这些世代群体的形态性状差异来检测不同海拔条件对雌配子体基因型频率变化和后代表型遗传分化的影响。【结果】对F1雌配子体基因型选择群体的形态性状分析发现,在4个不同海拔点都检测到8个性状发生了偏分离,说明海拔背景差异对F1雌配子体基因型具有选择作用,且在2 200和400 m两种海拔环境的影响都大于海拔1 860和1 250 m;产生于海拔1 860 m群体的形态性状多样性指数最大,据此随产生海拔的升高和降低,其多样性指数均减小;差异性比较显示产生于2 200 m高海拔的群体几乎与其他3个海拔产生的群体在所有性状上的差异都达显着水平。对种植于不同海拔环境的28个F2遗传分离群体的形态性状分析,结果显示海拔差异导致的雌配子体基因型选择影响其F2群体的表型遗传分化,且产生海拔差异越大,其后代表型分化就越明显。经2 200和400 m选择过的分离群体,在7个性状上检测出21处差异达显着水平;经1 860和1 250 m选择过的分离群体,仅在3个性状上检测出6处差异达显着水平。总体变化趋势是,经高海拔2 200 m选择的群体,种植在不同海拔表现结实率高、整体生长势较差,而经低海拔400 m选择的群体的性状表现与高海拔的相反,经中海拔1 860和1 250 m选择过的群体表现多居于高、低海拔之间,但群体形态性状多样性指数较大。【结论】海拔环境差异对水稻F1雌配子体基因型具有选择作用,进而影响其后代的表型遗传分化,形成对不同海拔环境条件的生态适应性,这意味着利用海拔背景差异进行雌配子体选择育种的方法是可行的。(本文来源于《中国农业科学》期刊2015年07期）
Sugita,S,Arai,Y,Tonooka,A,胡舜,余英豪[8]（2015）在《一种新发现具有CIC-FOXO4基因融合的未分化小圆细胞肉瘤:独特基因型的尤因样肉瘤》一文中研究指出尤因肉瘤家族肿瘤(Ewing's sarcoma family tumor,ESFT)分类下的小圆细胞肉瘤(SRCS)进行鉴别诊断是病理医师面临的重要挑战。近期的研究发现,某些尤因样肉瘤表现为典型的ESFT形态,但缺乏EWSR1-ETS基因融合。作者在1例(X;19)(Q13;q13.3)易位的尤因样肉瘤病例中发现了一种新的基因融合CIC-FOXO4。患者63岁,男性,无明显临床症状,肿物位于右后颈部肌间,肿瘤直径30 mm,边界清(本文来源于《临床与实验病理学杂志》期刊2015年03期）
陈阳,袁思安,赵耀,吕晋慧[9]（2013）在《抗生素对不同基因型矮牵牛分化及再生的影响》一文中研究指出以矮牵牛4个品种美声晨光、黄金肉红、珊瑚红、黄金紫罗兰星条为试材,分别以卡那霉素Kan和头孢霉素Cef为选择抗生素和抑菌剂,研究不同浓度抗生素对叶片不定芽再生和试管苗生根的影响,分别筛选出适宜的抗生素浓度。结果表明:30 mg/L Kan可以抑制叶片不定芽再生,50mg/L Kan条件下,无不定芽再生。低浓度Kan即可抑制试管苗不定根再生,30 mg/L Kan条件下试管苗不再生根。550 mg/L Cef条件下,叶片不定芽再生受到抑制,而试管苗生根的适宜Cef浓度是400 mg/L Cef。(本文来源于《西南林业大学学报》期刊2013年04期）
刘琳,俞斌,黄鹏燕,贾军,赵华[10]（2013）在《芒不同基因型愈伤组织诱导及分化的差异》一文中研究指出芒(Miscanthus sinensis)具较高的生物学产量,是一种极具发展前景的纤维素类能源植物。以芒的8种不同基因型幼穗为外植体,进行了组织培养研究。结果表明,不同基因型芒在愈伤组织诱导率、胚性愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织分化率等方面均存在显着差异。W89和W70均具较高的愈伤组织诱导率,分别为91.7%和89.1%;W69的外植体几乎全部褐化,且未能诱导出愈伤组织。W89、W70和W17的胚性愈伤组织分化率较高,达50%以上。另外,发现愈伤组织诱导率与细胞壁木质素含量间呈显着的负相关。该研究建立了稳定且有效的再生体系,并初步确定W89和W70可作为芒组织培养的理想材料,为芒的遗传转化、定向改良和良种快繁提供了技术支持。(本文来源于《植物学报》期刊2013年02期）
基因型分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
迄今为止的国内外研究表明,从动物体内分离得到的内脏或皮下白色成熟脂肪细胞在无外源胰岛素的体外培养条件下,可自主发生去分化;而添加胰岛素则可维持其原有成熟表型、抑制其去分化。我推测胰岛素信号与脂肪细胞去分化存在相关性。然而胰岛素信号影响脂肪细胞去分化的分子机制尚不明了。本文采用形态学和分子细胞生物学检测手段,通过研究胰岛素信号对肥胖和非肥胖小鼠成脂细胞去分化的影响,进而对不同遗传背景小鼠的内脏白色脂肪细胞去分化机制进行初步探讨。本文选用7-8周龄的四种基因型(C57BL/6J遗传背景,WT、TNF-α-/-、Leprdb/db以及DT)雄性小鼠为实验材料。前两种小鼠为非肥胖小鼠,后两种为遗传性自发性肥胖小鼠。首先,使用经典的“鸡尾酒法”,分别诱导上述不同基因型小鼠内脏原代白色脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外成脂分化为成熟脂肪细胞,然后,采用不同的方法处理细胞,令其去分化。共设叁组:(1)单纯对照组,成脂诱导后10天后去除胰岛素,细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中(含有未知的微量胰岛素);(2)干预组,在去除胰岛素的同时添加胰岛素信号抑制剂(OSI-906,linstinib),细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中;(3)DMSO对照组,在去除胰岛素的同时添加OSI-906的溶剂(DMSO),细胞继续培养于含有10%胎牛血清的完全生长培养基中。叁组细胞去分化实验开始后,在相应培养条件下,继续培养8天。此外,为了验证去分化的成脂细胞(dedifferentiated fat cells,DFATCs)是否重新获得干细胞特性,对其进行了成脂再分化和成骨转分化诱导实验。通过一般形态学和特殊染色方法,以及针对脂解、成脂、胰岛素信号通路和脂肪干细胞相关靶基因的转录和翻译水平的检测,探究胰岛素信号对不同基因型小鼠成脂细胞去分化的影响。结果如下:1.分离纯化WT小鼠ADSCs,以确定成脂分化、成脂后去分化以及DFATCs成脂再分化的检测时期。通过细胞形态变化特征确定了以下五个时期:成脂分化0天(D0)、10天(D10),成脂后去分化3天(DD3)、8天(DD8),DFATCs成脂再分化10天(RD10)。2.选用不同浓度(0、0.1、0.3和1μM)的胰岛素信号通路抑制剂(OSI-906)干预WT ADSCs成脂分化。通过细胞形态变化特征和靶蛋白表达水平的检测结果,确定了在胰岛素和血清均存在的条件下完全抑制胰岛素信号通路的最小药物(OSI-906)浓度。结果表明0.3μm最佳。3.形态学检测结果:(1)adscs成脂诱导10天后成功分化为成熟脂肪细胞;(2)成熟脂肪细胞随着去分化时间的延长逐渐发生去分化,dd8时完成去分化;(3)去分化速率为:干预组>对照组,单纯对照组≈dmso对照组;(4)干预组和对照组的dfatcs成脂诱导10天后,再分化为成熟脂肪细胞,两组之间的成脂率无显着差异;(5)wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的形态变化特征差异不大。4.wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠的对照组和干预组dfatcs获得前后的脂肪干细胞标志cd105表达持续上升;wtdfatcs成骨诱导21天后,茜素红钙结节染色结果为阳性,表明dfatcs重新获得干细胞特性。5.实时荧光定量rt-pcr(qpcr)检测结果显示:在小鼠成脂细胞去分化过程(dd0至dd8)中,胰岛素信号通路关键因子akt、glut-4的mrna表达水平无显着变化;成脂相关因子c/ebpα、pparγ、adiponectin和srebp-1的mrna表达水平持续下降;脂解关键因子atgl的mrna表达水平呈先升高后下降的趋势。单纯对照组、dmso对照组进行比较发现,两个对照组之间无显着差异。与对照组相比,osi-906干预组的atgl的mrna表达水平上调,c/ebpα、pparγ、adiponectin和srebp-1的mrna表达水平下调。另外,wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的各检测分子在基因转录水平的表达变化趋势一致,主要差异在于各检测分子(同一时期和同一组)的相对表达量有所不同。6.westernblotting结果显示:在adscs成脂后去分化过程中(dd0至dd8),p-akt(thr308)的蛋白激活水平大幅下降,glut-4的蛋白表达水平呈先上升后下降的变化趋势,srebp-1和adiponectin的蛋白表达水平在去分化早期(dd3)已下降至检测极限。比较叁组结果发现,单纯对照组和dmso对照组间无显着差异,osi-906干预组的p-akt(thr308)的蛋白激活水平极显着低于对照组。另外,wt、tnf-α-/-、leprdb/db以及dt小鼠adscs的各检测分子在基因翻译水平的表达变化趋势一致,主要差异在于各检测分子(同一时期和同一组)的相对表达量有所不同。综上所述,胰岛素信号缺失对肥胖(leprdb/db、dt)和非肥胖(wt、tnf-α-/-)小鼠成脂细胞去分化起到促进作用,即胰岛素信号缺失在成脂细胞中抑制srebp-1、pparγ和c/ebpα表达的同时,促进了脂解关键分子和脂肪干细胞标志分子的表达,从而促进成脂细胞去分化的发生。此外,胰岛素信号缺失对小鼠成脂细胞去分化的促进作用与小鼠基因型及肥胖程度关系不大。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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