导读:本文包含了基因文库构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鹿结核病野毒株,卡介苗,抑制性差减杂交,基因文库
基因文库构建论文文献综述
刘东旭,时坤,李健明,杜锐[1]（2016）在《鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库的构建》一文中研究指出应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果:RsaI酶切产生的酶切产物在0.1~2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,成功的构建了鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库。应用制性消减杂交技术构建鹿结核病野毒株与卡介苗基因组差减文库,为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防制奠定了基础。(本文来源于《“十二五” 鹿科学研究进展》期刊2016-06-01）
成雪晴,朱涛,邓子新,由德林[2]（2016）在《藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建》一文中研究指出【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS~(TM)载体,大肠杆菌EP1300~(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的叁级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。(本文来源于《微生物学报》期刊2016年02期）
薛浩,张志宏,傅俊范,王丰,马跃[3]（2015）在《利用抑制消减杂交技术构建苹果同源四倍体差异表达基因文库研究》一文中研究指出寒富苹果是沈阳农业大学育成的二倍体、抗寒大苹果品种,通过秋水仙素诱导获得寒富苹果同源四倍体在田间表现明显矮化等特性。为了探寻苹果同源四倍化后表型差异的分子机理,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,分别建立寒富四倍体上调和下调表达cDNA文库。分别从这两个cDNA文库中各随机挑取200个阳性克隆测序,发现其中有211条序列与已知植物基因同源性大于80%,定量RT-PCR验证了部分uni ESTs的表达趋势和表达水平。初步筛选获得了与植株矮化相关的BKI1和DWF4基因,与植物光合特性相关的光系统II中的关键基因Psb Z;发现了四倍体中表达显着上调的Chitinase基因,推测四倍体可能在真菌病害的胁迫中表现更为优良的抗性。本研究为探究同源多倍体差异表型的分子机理奠定基础。(本文来源于《沈阳农业大学学报》期刊2015年03期）
刘建青,孙垚,宁保安,李晓芳,高志贤[4]（2014）在《核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库的构建及初步鉴定》一文中研究指出脂质运载蛋白(lipocalin)是一类广泛存在于生物界的小分子蛋白质家族,具备一些抗体所没有的优点。为了构建库容量大、多样性好的核糖体展示模拟抗体Anticalin文库,本研究以脂质运载蛋白家族之一大菜粉蝶(Pieris brassicae)中提取到的胆汁叁烯结合蛋白基因(bilin-binding protein,bbp)(GenBank登录号:X76568.1)为模板,设计了包含16个随机突变位点的引物,采用重迭延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)构建bbp基因文库。然后,利用SOE-PCR法引入核糖体展示元件(T片段与P片段),体外构建核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库。结果表明,本研究成功构建了模拟抗体Anticalin基因文库,其库容达到3.76×1023,文库的可扩增性、完整性及多样性良好,为筛选多种小分子化学残留的模拟抗体提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2014年09期）
任玥,王彤,王杰[5]（2013）在《儿童急性淋巴细胞白血病差异表达基因文库的构建和筛选》一文中研究指出目的克隆和分离儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)差异表达基因,探讨小儿白血病的发病机制。方法 Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,抽取mRNA,逆转录成cDNA;经RsaⅠ酶切,实验组cD-NA被分成两组,分别与两种不同的接头连接后,与对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应(PCR),提取、纯化PCR产物,与PT-Adv载体连接构建cDNA消减文库,利用PCR扩增、测序和同源性分析差异表达的序列。结果选取文库中60个克隆进行菌落PCR分析,可以检出大小为200～600bp的插入片段。从中随机挑选20个克隆进行测序、生物信息学分析,其中18个克隆与已知基因有高度序列同源性,符合率为98%～100%,共编码17种基因。这些基因大多涉及基因表达调控、DNA损伤修复、细胞周期、物质代谢等,均与细胞增殖、分化有关。此外发现2个新基因。结论本实验表明我们已成功构建小儿ALL相关消减cDNA文库,为小儿ALL发病机制的研究奠定了基础。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2013年08期）
刘东旭,时坤,李健明,杜锐[6]（2012）在《鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因基因文库的构建》一文中研究指出应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果表明,RsaI酶切产生的酶切产物在0.1～2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,构建鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库,可为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防治奠定基础。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2012年12期）
徐建,陆宇[7]（2012）在《结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库的构建》一文中研究指出目的构建结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库,克隆和筛选结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因。方法通过毒力测定,选择出临床强弱毒株各1株。利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),对强弱菌株基因组用RsaI酶切,连接adaptor后进行两轮消减杂交和两次PCR。将第2次PCR产物纯化后与pGEM-T载体连接,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α进行文库扩增和蓝白斑筛选。挑取阳性克隆进行质粒提取,酶切验证阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果以结核分枝杆菌强毒株DNA为检测子的正向杂交和以弱毒株DNA为检测子的反向杂交各自高表达或特异性表达的片段得到选择性扩增,连接adaptor效率大于50%,消减组与非消减组差异明显,成功构建了结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库A库和B库。挑出阳性克隆102个,片段大小集中在100～900 bp之间。结论利用SSH技术成功构建了结核分枝杆菌强弱毒株差异基因文库,该消减文库的建立为进一步筛选、克隆这两种菌株之间差异的毒力基因奠定了基础。(本文来源于《中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会论文集》期刊2012-07-01）
刘东旭[8]（2012）在《鹿结核菌野毒株与卡介苗差异基因文库的构建》一文中研究指出结核分枝杆菌是引起鹿结核病的主要病原菌。其可引起鹿慢性消耗性传播性疾病,鹿结核病广泛的流行于各个国家的鹿场中,几乎每一个国家在其鹿场中均能检测出结核病或结核分支杆菌。鹿结核病的病理特点是组织器官形成结核肉芽肿和干酪样坏死。近年来,鹿结核病广泛的流行于国内鹿场中,其造成了巨大的经济损失,并严重的影响到鹿业的发展。许多国家根据鹿结核病的情况不同,采取全群检查、剔除病畜、分群等措施来对鹿结核病进行防治。我国目前应用卡介苗(BCG)来预防鹿结核病。由于卡介苗本身就是牛型结核分枝杆菌。因此,对结核病的诊断,尤其是结核菌素的诊断产生干扰,无法准确鉴别疫苗株与自然流行株、疫苗免疫动物与自然感染动物,以至于许多国家不用其对动物进行免疫,影响了结核病的防治进程。但实践证明,目前BCG免疫仍是最佳的预防鹿结核病的有效制剂。由于BCG免疫给鹿结核病的诊断造成严重的干扰,如果能够利用分子生物学的方法,筛选出鹿结核病野毒株与卡介苗的差异基因,并建立一种诊断方法,区分出疫苗株与自然流行株、疫苗免疫动物与自然感染动物,这无疑会更好的促进养鹿业的发展,有着巨大的经济意义。1996年Diatchenko等人建立一种以抑制性PCR为基础的DNA差减杂交技术-抑制性差减杂交(SSH)。该方法运用的原理为杂交二级动力学,即在退火时产生同源杂交的速率是丰度高的单链DNA快于丰度低的单链DNA,从而单链DNA丰度的相对含量达到基本一致。而抑制PCR则是利用链内退火优于链间退火的特点,使非目的序列片段两端反向重复序列在退火时产生类似发卡的互补结构,无法作为模板与引物配对,从而选择性地抑制了非目的基因片段的扩增。该方法相比于其他筛选差异基因的方法,其灵敏度、效率及特异性较高,更易于操作,有良好的通用性及较低的假阳性。本实验通过抑制性消减杂交技术建立鹿结核菌野毒株与卡介苗的差异基因的文库,筛选其差异基因：应用Clontech公司的抑制性差减杂交试剂盒PCR-SelectTM Bacterial Genome Subtraction Kit,对鹿结核菌野毒株和卡介苗进行差减杂交。经过两次杂交和两次PCR后,第二次PCR产物与pMD18-T载体连接,转化到JM109感受态细胞中,进行蓝白斑筛选,建立鹿结核菌野毒株与卡介苗的差异基因的文库,得到232个阳性克隆。挑取白色菌落以Nester primer1和Nester primer2R为引物,扩增插入片段,208个克隆获得了单一的且大于100bp的插入片段。将PCR产物相应的点于两张尼龙膜上,分别采用标记的鹿结核菌野毒株与卡介苗全基因组酶切产物作为探针,进行斑点杂交,共获得60个阳性克隆子。对筛选出的60个阳性克隆进行测序。测序的结果通过NCBI的BLAST服务器,对每个序列进行BLASTN和BLASTX检索分析。在核苷酸水平的分析上,位于所报道的缺失区域RD1区中片段共有13个。通过对测序结果的分析,对部分结果进行了功能上的预测,本试验将对鹿结核菌的防制、鉴别诊断和新型疫苗研制打下良好基础。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2012-06-01）
王雪敏,梁玉荣,吕学泽,张培君,龚玉梅[9]（2012）在《副鸡嗜血杆菌基因文库的构建与筛选》一文中研究指出为了筛选副鸡嗜血杆菌的体内表达基因,提取了副鸡嗜血杆菌的全基因组,构建了副鸡嗜血杆菌基因组的pET系统表达文库。运用PCR及核酸内切酶(SalⅠ+NdeⅠ)鉴定基因文库,并以病原菌吸附后的康复血清作为探针,采用菌落原位杂交的方法对基因文库进行筛选。结果显示,重组质粒中有0.5～2kb的片段插入,99%的基因包含在基因文库中;重复筛选后得到的阳性克隆再经过PCR与SalⅠ+NdeⅠ酶切鉴定后定向测序,并对测序结果在NCBI上进行分析后发现筛选获得的基因中,有1个表达为转运谷氨酰还原酶、1个表达为转录终止因子,1个表达为荚膜合成域2,还有2个表达为保守假想蛋白。结果表明,本研究应用体内诱导抗原技术(IVIAT)筛选到了一些副鸡嗜血杆菌体内诱导表达基因,并对基因的功能做了初步探讨,在找寻副鸡嗜血杆菌在体内生存以及致病关键基因的道路上前进了一步,为传染性鼻炎的预防和治疗积累了有价值的资料。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2012年04期）
马玉成,姜玉新[10]（2012）在《构建突变基因文库的定向进化研究进展》一文中研究指出1.介绍定向分子进化是在实验室条件下模拟自然选择过程,改变原有蛋白的氨基酸序列,以期找寻预期性能的突变蛋白。定向分子进化实验的成功与否取决于制备的突变体库的质量和简捷、高效的筛选方法。随着体外定向进化分子改造新策略的不断涌现,以及相关领域如生物信息学、功能基因组学、功能蛋白质组学等的更新和完善,各种基因改组技术的应用正受到足够的重视。其中,酶工程的定向进化已为基因(本文来源于《科技信息》期刊2012年10期）
基因文库构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS~(TM)载体,大肠杆菌EP1300~(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的叁级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因文库构建论文参考文献
[1].刘东旭,时坤,李健明,杜锐.鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库的构建[C].“十二五”鹿科学研究进展.2016
[2].成雪晴,朱涛,邓子新,由德林.藤黄生孢链霉菌NRRL2401遗传操作系统和基因文库的构建[J].微生物学报.2016
[3].薛浩,张志宏,傅俊范,王丰,马跃.利用抑制消减杂交技术构建苹果同源四倍体差异表达基因文库研究[J].沈阳农业大学学报.2015
[4].刘建青,孙垚,宁保安,李晓芳,高志贤.核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库的构建及初步鉴定[J].农业生物技术学报.2014
[5].任玥,王彤,王杰.儿童急性淋巴细胞白血病差异表达基因文库的构建和筛选[J].中华临床医师杂志(电子版).2013
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[7].徐建,陆宇.结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库的构建[C].中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会论文集.2012
[8].刘东旭.鹿结核菌野毒株与卡介苗差异基因文库的构建[D].吉林农业大学.2012
[9].王雪敏,梁玉荣,吕学泽,张培君,龚玉梅.副鸡嗜血杆菌基因文库的构建与筛选[J].中国兽医科学.2012
[10].马玉成,姜玉新.构建突变基因文库的定向进化研究进展[J].科技信息.2012