本文主要研究内容
作者许涛（2019）在《适配体干扰致仔猪腹泻ETEC K88与仔猪肠道上皮细胞IPEC-J2黏附作用研究》一文中研究指出：断奶应激可导致仔猪易受病原菌感染,从而引起腹泻甚至死亡。产肠毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)主要包括K88、K99、987P以及F4,它们是引起仔猪断奶后腹泻的典型菌株。因此,预防和治疗ETEC感染的方法倍受大众关注。适配体主要是通过指数富集系统进化技术筛选出来的一段对靶标具有高亲和力和特异性的ssDNA或RNA。本文以猪肠上皮细胞系IPEC-J2为体外模型,发现K88-Apt 37(ETEC K88的菌毛适配体)和K88-Apt A04(ETEC K88的菌体适配体)能有效地减少病原菌ETEC K88对肠上皮细胞的黏附,从而减少随后的炎症反应。我们的研究工作主要包括以下几点:(1)将仔猪肠道上皮细胞系IPEC-J2用作体外模型以评估适配体对ETEC K88的黏附和细胞毒性作用的影响,确定了ETEC K88-IPEC-J2互作模型的基础浓度(10 MOI)以及作用时间。在此作用条件下,评估适配体在黏附抑制,黏附竞争,黏附置换三种作用模式下对此互作模型的影响。结果显示,适配体在三种互作模型下都能减少细菌对细胞的黏附。(2)为更好地观察适配体对ETEC K88黏附细胞的作用效果,我们构建了荧光质粒并导入ETEC K88中使细菌ETEC K88成功表达EGFP荧光蛋白。流式细胞仪分析以及荧光显微镜观察以进一步探究适配体对三种互作模型的作用效果,发现K88-Apt 37与靶标菌的亲和力较高,K88-Apt A04造成的细胞毒性较小,低浓度的K88-Apt 37或高浓度的K88-Apt A04用作抑制剂来减少肠道上皮细胞感染的效果更好。除此之外,互作模型中适配体对减少细菌造成的细胞凋亡的效果基本呈现黏附抑制>黏附竞争>黏附置换的趋势,提示将适配体作为预防性药物在病原菌感染之前使用可能效果更好。(3)使用荧光定量PCR和ELISA试剂盒分析了两种适配体分别对ETEC K88-IPEC-J2互作模型中的IPEC-J2细胞的主要炎症因子的mRNA和蛋白表达情况,探讨适配体帮助IPEC-J2细胞免受ETEC K88攻击损伤的分子机制。结果表明,适配体的存在能下调ETEC K88引起的IPEC-J2细胞中TNF-α的表达,也能下调由ETEC K88引起的细胞中模式识别受体(PRR)和促炎细胞因子的mRNA的表达,说明适配体能降低致病菌攻击引起的炎症因子的分泌。总之,适配体K88-Apt 37和K88-Apt A04能通过与细菌相互作用从而减少细菌对肠上皮细胞的黏附,进而减少细菌造成的细胞毒性与炎症反应,保护肠上皮细胞免受ETEC K88攻击,对大肠杆菌ETEC K88引起的仔猪腹泻的防治具有重要作用,也为其他致病微生物所引起的腹泻的治疗提供了新思路。
Abstract
duan nai ying ji ke dao zhi zai zhu yi shou bing yuan jun gan ran ,cong er yin qi fu xie shen zhi si wang 。chan chang du xing da chang gan jun (Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)zhu yao bao gua K88、K99、987Pyi ji F4,ta men shi yin qi zai zhu duan nai hou fu xie de dian xing jun zhu 。yin ci ,yu fang he zhi liao ETECgan ran de fang fa bei shou da zhong guan zhu 。kuo pei ti zhu yao shi tong guo zhi shu fu ji ji tong jin hua ji shu shai shua chu lai de yi duan dui ba biao ju you gao qin he li he te yi xing de ssDNAhuo RNA。ben wen yi zhu chang shang pi xi bao ji IPEC-J2wei ti wai mo xing ,fa xian K88-Apt 37(ETEC K88de jun mao kuo pei ti )he K88-Apt A04(ETEC K88de jun ti kuo pei ti )neng you xiao de jian shao bing yuan jun ETEC K88dui chang shang pi xi bao de nian fu ,cong er jian shao sui hou de yan zheng fan ying 。wo men de yan jiu gong zuo zhu yao bao gua yi xia ji dian :(1)jiang zai zhu chang dao shang pi xi bao ji IPEC-J2yong zuo ti wai mo xing yi ping gu kuo pei ti dui ETEC K88de nian fu he xi bao du xing zuo yong de ying xiang ,que ding le ETEC K88-IPEC-J2hu zuo mo xing de ji chu nong du (10 MOI)yi ji zuo yong shi jian 。zai ci zuo yong tiao jian xia ,ping gu kuo pei ti zai nian fu yi zhi ,nian fu jing zheng ,nian fu zhi huan san chong zuo yong mo shi xia dui ci hu zuo mo xing de ying xiang 。jie guo xian shi ,kuo pei ti zai san chong hu zuo mo xing xia dou neng jian shao xi jun dui xi bao de nian fu 。(2)wei geng hao de guan cha kuo pei ti dui ETEC K88nian fu xi bao de zuo yong xiao guo ,wo men gou jian le ying guang zhi li bing dao ru ETEC K88zhong shi xi jun ETEC K88cheng gong biao da EGFPying guang dan bai 。liu shi xi bao yi fen xi yi ji ying guang xian wei jing guan cha yi jin yi bu tan jiu kuo pei ti dui san chong hu zuo mo xing de zuo yong xiao guo ,fa xian K88-Apt 37yu ba biao jun de qin he li jiao gao ,K88-Apt A04zao cheng de xi bao du xing jiao xiao ,di nong du de K88-Apt 37huo gao nong du de K88-Apt A04yong zuo yi zhi ji lai jian shao chang dao shang pi xi bao gan ran de xiao guo geng hao 。chu ci zhi wai ,hu zuo mo xing zhong kuo pei ti dui jian shao xi jun zao cheng de xi bao diao wang de xiao guo ji ben cheng xian nian fu yi zhi >nian fu jing zheng >nian fu zhi huan de qu shi ,di shi jiang kuo pei ti zuo wei yu fang xing yao wu zai bing yuan jun gan ran zhi qian shi yong ke neng xiao guo geng hao 。(3)shi yong ying guang ding liang PCRhe ELISAshi ji he fen xi le liang chong kuo pei ti fen bie dui ETEC K88-IPEC-J2hu zuo mo xing zhong de IPEC-J2xi bao de zhu yao yan zheng yin zi de mRNAhe dan bai biao da qing kuang ,tan tao kuo pei ti bang zhu IPEC-J2xi bao mian shou ETEC K88gong ji sun shang de fen zi ji zhi 。jie guo biao ming ,kuo pei ti de cun zai neng xia diao ETEC K88yin qi de IPEC-J2xi bao zhong TNF-αde biao da ,ye neng xia diao you ETEC K88yin qi de xi bao zhong mo shi shi bie shou ti (PRR)he cu yan xi bao yin zi de mRNAde biao da ,shui ming kuo pei ti neng jiang di zhi bing jun gong ji yin qi de yan zheng yin zi de fen bi 。zong zhi ,kuo pei ti K88-Apt 37he K88-Apt A04neng tong guo yu xi jun xiang hu zuo yong cong er jian shao xi jun dui chang shang pi xi bao de nian fu ,jin er jian shao xi jun zao cheng de xi bao du xing yu yan zheng fan ying ,bao hu chang shang pi xi bao mian shou ETEC K88gong ji ,dui da chang gan jun ETEC K88yin qi de zai zhu fu xie de fang zhi ju you chong yao zuo yong ,ye wei ji ta zhi bing wei sheng wu suo yin qi de fu xie de zhi liao di gong le xin sai lu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自湖南师范大学的许涛，发表于刊物湖南师范大学2019-10-31论文，是一篇关于产肠毒性大肠杆菌论文,适配体论文,猪肠上皮细胞系论文,细菌黏附论文,黏附抑制论文,湖南师范大学2019-10-31论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自湖南师范大学2019-10-31论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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