导读:本文包含了巢式建立论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:咖啡叶锈病,咖啡驼孢锈菌,巢式PCR,分子检测
巢式建立论文文献综述
吴伟怀,梁艳琼,郑金龙,黄兴,习金根[1]（2019）在《咖啡锈菌巢式PCR分子检测方法的建立》一文中研究指出由驼孢锈菌(H.vastatrix)引起的咖啡叶锈病是小粒种咖啡生长过程中一种毁灭性病害。利用现代分子检测技术对该病原菌进行监测有助于咖啡锈病的预测预报。本研究利用真菌基因组内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4为第一轮扩增引物,以咖啡锈菌特异性引物Hv-ITS-F (GGTACACCTGTTTGAGAGTATG),Hv-ITS-R (CAAAATATGTCATACCTCTC ATTCT)为第二轮扩增引物,以建立咖啡锈菌巢式PCR检测技术。试验结果表明,利用上述引物对,前后两轮扩增退火温度分别为55℃与58℃时,该检测技术仅能从含有咖啡锈菌NDA组中扩增出约346bp的特异条带,而从其他真菌DNA中均扩增不出任何条带。其检测灵敏度在DNA水平上可达10～(-4)ng/μL,较常规PCR提高100倍。利用该检测技术对91个大田疑似样品进行检测,其检出率为95.6%。总之,本研究所建立的咖啡锈菌巢式PCR检测方法对病原菌的早期快速检测、鉴定及病害流行学研究具有重要意义。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
陈细红,杨小龙,廖富荣,高芳銮,沈建国[2]（2019）在《美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测方法的建立》一文中研究指出本文以我国台湾进境美人蕉病株为材料,根据已报道的美人蕉黄斑驳病毒Canna yellow mottle virus(CaYMV)基因序列设计2对特异性引物(外侧引物1对、内侧引物1对),建立了巢式PCR快速检测CaYMV的方法,并对进境的50份美人蕉样品进行了检测。结果显示,该方法特异性强,且灵敏度高于常规PCR,是常规PCR的1 000倍,表明该方法能够实现对CaYMV的快速、准确、灵敏检测,适用于口岸快速检测CaYMV。(本文来源于《植物保护》期刊2019年04期）
赵娜,王丽媛,赵歆伊,曹福源,陈松[3]（2019）在《小鼠诺如病毒巢式PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出为了建立一种高敏感性和特异性的检测方法,突破目前小鼠诺如病毒(MNV)检测局限,根据MNV保守区基因组序列设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立MNV的巢式PCR检测方法。结果表明,该方法仅能特异的扩增MNV目的基因而不能扩增其他病毒,且敏感度达到500个拷贝,比普通PCR提高1 000倍。说明本研究建立的巢式PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速的用于小鼠诺如病毒的病原检测。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2019年07期）
钟鸣[4]（2019）在《禽腺病毒血清4型巢式PCR和环介导等温扩增检测方法建立及应用》一文中研究指出2015年6月起,由禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的以心包积聚淡黄色液体、肝炎和肾炎为主要临床特征的新型家禽传染性疾病——心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)在我国山东、安徽、江苏、河南等省份大面积流行。该病易发生混合感染,主要危害3~6周龄的肉鸡,死亡率最高可达90%,给家禽养殖业带来重大的经济损失。常规实验室检测方法需要特殊的仪器设备,仪器价格昂贵而且检测场地受到限制,检测耗时费力,在基层生产过程中存在诸多不便,所以建立一种快速、灵敏、便捷的检测方法十分必要。本研究建立了巢式PCR和环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种方法用于检测FAdV-4。通过对GenBank上已公布的27株禽腺病毒全基因序列进行比对,针对其高度保守区域设计特异性的分别针对I群禽腺病毒和FAdV-4的2对巢式PCR引物,建立了一种FAdV-4巢式PCR检测方法,并对该方法的反应条件以及反应体系进行优化。巢式PCR优化后反应条件为:第一轮反应最佳退火温度为60.4℃,退火时间35 s,循环30次,外引物浓度为0.9μmol/L,Mg~(2+)浓度为2.5 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U;第二轮反应最佳退火温度为54.6℃,退火时间30 s,循环30次,内引物浓度为0.5μmol/L,Mg~(2+)浓度为1.0 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U。该检测方法优化后呈现最高效率的特异性扩增,未见与其他鸡源易感病毒发生交叉反应,同时该检测方法具有较高的灵敏度,最低可检测到5.2 pg/μL的病毒DNA。同时,针对FAdV-4 Hexon基因序列设计了特异性LAMP引物,建立了一种对FAdV-4的LAMP检测方法,并对其反应条件和反应体系进行优化。优化后反应温度为62℃,反应时间为30 min,当外引物与内引物浓度之比为1:2时,扩增效果显着提升。当Mg~(2+)浓度为6.0μmol/L时显示当前最好扩增效果。灵敏性试验结果显示该方法比巢式PCR检测方法灵敏度高出10倍,同时具有良好的特异性。最后运用两种检测方法同时对102份临床样本进行检测,LAMP检测方法检出的阳性率为34.3%,巢式PCR方法检出的阳性率为20.5%,说明LAMP检测方法更特异灵敏而有较好的应用前景。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
杨萱桐[5]（2019）在《十二指肠贾第虫ELISA、巢式PCR和LAMP诊断方法的建立》一文中研究指出贾第虫病是由寄生于人畜肠道的十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)简称贾第虫引起的原虫性人畜共患病,该病呈全球性流行,是一种严重危害人类健康的寄生虫病。贾第虫具有极高的感染性,能够导致水源性暴发流行,人感染贾第虫后临床表现主要为腹泻,目前对于贾第虫病的防治工作越来越深入。贾第素(giardin)是贾第虫一种独有的细胞骨架成分,目前将贾第素分为4类:α-giardin、β-giardin、δ-giardin和γ-giardin,其中贾第虫γ-giardin作为贾第虫特异性蛋白,且具有免疫原性,所以本研究选择贾第虫γ-giardin作为抗原建立贾第虫病诊断方法,旨在将γ-giardin作为贾第虫病免疫预防和诊断的重要依据。本研究中利用制备保存的γ-giardin重组蛋白表达菌进行表达纯化,并对表达纯化的条件进行优化,用所得的γ-giardin蛋白对BALB/c小鼠进行免疫制备多克隆抗体。用γ-giardin蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,同时优化ELISA过程条件。用此法对隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫阳性血清检测进行特异性实验,并对50份采集的血清样品进行检测。根据γ-giardin基因序列设计并合成巢式PCR引物,以提取的贾第虫滋养体DNA为模板,建立贾第虫巢式PCR检测方法。同时优化PCR反应程序,利用此法检测含有不同贾第虫滋养体个数的DNA模板,并以隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫的DNA模板进行特异性实验,对110份采集的粪便样品进行检测。根据γ-giardin基因设计并合成环介导等温扩增技术(LAMP)引物,以提取的贾第虫滋养体DNA为模板,利用HNB-LAMP显色反应作为结果指标,建立贾第虫LAMP检测方法,同时优化LAMP反应程序,利用此法检测含有不同贾第虫滋养体个数的DNA模板,并以隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫的DNA模板进行特异性实验,对110份采集的粪便样品进行检测。本研究建立的ELISA检测方法最终确定最佳的γ-giardin抗原包被量为200 ng/孔;最佳血清稀释度为1:25600;阴阳性临界值判定标准为0.252;同一贾第虫阳性血清含量测定的批内和批间重复实验的最大变异系数均小于10%,测得P/N值均大于2.1;且与隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫均无交叉反应。50份采集的临床样品被检出阳性率为22%(11/50)。结果表明γ-giardin蛋白具有较强的免疫原性,且敏感性和特异性良好。建立的巢式PCR检测方法,可以在待检样品中含有100个贾第虫滋养体时检测出贾第虫,对隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫进行检测均无阳性结果。110份采集的临床样品被检出阳性率为20.91%(23/110)。实验结果表明以γ-giardin基因建立的巢式PCR反应检测方法具有良好的敏感性和特异性。建立的LAMP检测方法,能够在样本贾第虫滋养体含量至少为10个时,显色反应仍然具有明显的颜色变化。特异性实验中,隐孢子虫、微孢子虫和毛滴虫均不能发生颜色变化,110份采集的临床样品被检出阳性率为23.63%(26/110)。实验结果表明以γ-giardin基因建立的LAMP检测方法具有良好特异性,且有更高的敏感性,同时显色反应结果更便于肉眼观察。本研究根据γ-giardin建立叁种贾第虫病诊断方法,经验证叁种方法均具有良好敏感性和特异性,为贾第虫免疫学和分子生物学诊断方法提供了新的思路。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
赵莉[6]（2019）在《一步法巢式实时荧光定量PCR检测呼吸道病毒方法的建立及应用》一文中研究指出第一部分多重实时荧光定量PCR方法在呼吸道合胞病毒和腺病毒检测中的意义:Meta分析目的:通过Meta分析评价多重实时荧光定量PCR(multiplex real time PCR,mRT-qPCR)方法在常见呼吸道病毒呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)和腺病毒(adenovirus,ADV)感染的诊断价值,为临床应用提供参考。方法:检索数据库包括PubMed、EMBASE、Cochrane、万方、CNKI等,检索2010年1月至2018年1月关于mRT-qPCR方法检测呼吸道病毒感染的中英文文献,由2位研究者独立筛选文献和提取资料,并采用QUADAS-2工具评价纳入研究的偏倚风险后,采用Meta-disc 1.4对数据进行统计分析,Deek检验检测发表偏倚的存在。结果:本研究纳入10篇文献共2528例样本。Meta分析结果显示,mRT-qPCR检测RSV的合并灵敏度(sensitivity,Sen)=0.87(95%CI:0.83-0.90)、合并特异性(specificity,Spe)=0.98(95%CI:0.97-0.98)和受试者工作特征曲线下面积(area under curve,AUC)=1.00。mRT-qPCR检测ADV的合并Sen=0.64(95%CI:0.56-0.71)、合并Spe=0.99(95%CI:0.98-0.99)和AUC=0.99。Deek漏斗图提示存在发表偏倚的可能性较小。结论:mRT-qPCR方法检测RSV和ADV的灵敏度有待提高,但检测综合能力较好,对临床早期诊断呼吸道病毒感染具有一定的应用价值。第二部分一步法巢式实时荧光定量RT-PCR检测呼吸道合胞病毒方法的建立及应用目的:呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)在全世界范围内引起严重的呼吸道感染。体弱、老年人和严重免疫受损的病人感染RSV后病毒载量较低,很难检测,因此,能够高灵敏和准确的检测RSV感染十分必要。方法:本研究利用锁核酸(locked nucleic acid,LNA)修饰外引物建立了一步法巢式实时荧光定量RT-PCR(one tube nested real time RT-PCR,OTNRT-PCR)检测呼吸道合胞病毒的方法,其具有灵敏度高、操作简便和避免交叉污染的优点。利用RSV毒株进行灵敏度评价,采用常见呼吸道病毒进行特异性评价,616例临床标本用于临床检测效能评价,并与传统的基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-qPCR)方法和传统的两步巢式PCR(two-step nested PCR,N-PCR)方法进行平行比较。结果:OTNRT-PCR方法检测RSV的分析灵敏度为1.02×10~-11 TCID50/ml,与传统的N-PCR方法相同,较RT-qPCR方法灵敏25倍。该方法检测特异性好,与其他常见的呼吸道病毒未发生交叉反应。616例临床标本检测结果显示,143例OTNRT-PCR检测为阳性而RT-qPCR检测为阴性的标本经过测序OTNRT-PCR产物证实为真阳性。结论:OTNRT-PCR方法检测RSV感染比RT-qPCR更敏感。第叁部分多重一步法巢式实时荧光定量PCR检测14种呼吸道病毒方法的建立及应用目的:多重实时荧光定量PCR(multiplex real time PCR,mRT-qPCR)普遍应用于临床实验室检测呼吸道病毒感染,然而,大多数报道的多重检测呼吸道病毒的方法灵敏度有限。本研究利用锁核酸(locked nucleic acid,LNA)修饰外引物首先建立了单管多重一步法巢式实时荧光定量PCR(multiplex one-tube nested real-time PCR,mOTNRT-PCR)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)和人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)的方法,进而建立了5管mOTNRT-PCR同时检测14种呼吸道病毒的方法。方法:采用质粒标准品评估mOTNRT-PCR方法的灵敏度和重复性,采用常见呼吸道病毒进行特异性评价,临床标本用于评估mOTNRT-PCR方法的临床检测效能,并与单重的实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-qPCR)方法进行比较。结果:本研究所建立的单管mOTNRT-PCR检测RSV、HRV和HMPV的分析灵敏度均为5拷贝/反应,5管mOTNRT-PCR检测14种呼吸道病毒的分析灵敏度范围为2-20拷贝/反应。该方法检测特异性好,与其他常见的呼吸道病毒未发生交叉反应。临床标本检测结果显示,33例单管mOTNRT-PCR检测为阳性而RT-qPCR检测为阴性的标本经过测序文献报道的传统两步巢式PCR(two-step nested PCR,N-PCR)产物证实为真阳性。35例5管mOTNRT-PCR检测为阳性而RT-qPCR检测为阴性的标本经过测序文献报道的N-PCR产物证实为真阳性。结论:和RT-qPCR相比,mOTNRT-PCR是更灵敏的高通量检测14种呼吸道病毒的方法。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-03-01）
王素华,袁淑辉,吴绍强,吕继洲,帅江冰[7]（2019）在《蜱传反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出为建立一种快速、敏感检测反刍动物艾立希体的方法,本研究根据GenBank中登录的反刍动物艾立希体pCS20基因保守区设计2对特异性引物,经各反应条件的优化,建立了反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测反刍动物艾立希体DNA,而对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫和弓形虫的检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法灵敏度可达1.04×101拷贝/μL,是反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒的10倍,是常规PCR的1 000倍。对50只血蜱、花蜱和微小牛蜱DNA进行检测,巢式PCR、反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒和常规PCR的阳性检出率分别为26.0%,14.0%和0.0%。本试验建立的巢式PCR检测方法适用于反刍动物艾立希体病的早期诊断和分子流行病学调查,为蜱传反刍动物艾立希体病的防控提供技术支持。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年02期）
孙明,王锦明,刘爱红,刘志杰,聂英[8]（2019）在《牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的建立》一文中研究指出为建立一种适用于基层兽医实验室特异、敏感、快速检测牛巴贝斯虫感染的方法,以牛巴贝斯虫球状体蛋白4(SBP4)基因为靶基因设计引物,建立检测牛巴贝斯虫的巢式PCR方法。结果表明,该方法可特异性地检测牛巴贝斯虫感染,与14种动物梨形虫无交叉反应。该方法能够检测到1 copy的SBP4基因,其敏感性分别是对应的内、外引物普通PCR的10倍和1 000倍。应用该巢式PCR方法,对田间随机采集的136份野外样品进行检测,检出阳性样品9份,显着高于AbouLaila等报道的方法(5份)。这些数据表明,建立的巢式PCR方法可用于基层兽医实验室敏感、准确地检测牛巴贝斯虫感染。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年02期）
陈杰,朱天辉[9]（2018）在《核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立》一文中研究指出近年来,小新壳梭孢Neofusicoccum parvum导致的核桃枝枯病屡有报道,该病防治困难,发病率高,是核桃的一种灾难性病害。为建立N.parvum的快速、灵敏的分子检测体系,根据N.parvum的几丁质合酶1基因(CHS1)及其前后100bp序列,分别设计了两对特异性引物CT-WK3-S/CT-WK3-A和CT-N-S/CT-N-A,建立了N.parvum的巢式PCR检测方法。结果表明,建立的体系可以从不同来源的5个N.parvum菌株中特异性地扩增出97bp的目的条带,灵敏度达30fg/μL,是常规PCR的10倍,而从其近缘种葡萄座腔菌属Botryosphaeriasp.的病原菌及其他供试菌株均未扩增出任何条带。以感染N.parvum的核桃组织总DNA为模板进行检测,可以在发病早期检测出N.parvum的存在。本研究建立的巢式PCR体系可以为核桃枝枯病的田间检测提供思路。(本文来源于《植物保护》期刊2018年03期）
刘珍珍[10]（2018）在《猪等孢球虫、贾第虫双重巢式PCR方法和隐孢子虫基于Lectin基因的PCR方法的建立》一文中研究指出猪等孢球虫是猪场防治的主要寄生虫之一,对仔猪的致病性较强,常导致仔猪腹泻和体重降低。成年猪常呈隐性感染或携带者,可对仔猪健康造成潜在威胁,患病仔猪可继发其他肠道疾病,对发病猪场造成重大经济损失。贾第虫是另一种重要的肠道寄生虫,具有人兽共患性。其感染猪病例已被很多国家报道,表明贾第虫病猪可作为十二指肠贾第虫感染人的传播来源。对猪场进行贾第虫和猪等孢球虫感染的调查,在防控猪的两虫病上有重要意义。目前,对这两种寄生虫的检查常用的是显微镜形态学检测和单病原PCR检测。传统的显微镜检测方法对操作者技术水平和经验有较高要求,且阳性检出率不高;而PCR检测法虽然灵敏度高但同时检测多个病原时,却需对一份样品多个虫种不同基因位点分别扩增和检测,耗时费力。故寻找一种能同时检测出两种虫的灵敏度高的双重PCR检测方法,可有效地提高检测效率。因此,本研究分别针对贾第虫GDH基因和猪等孢球虫SSU rRNA基因,建立并优化了一套灵敏度高、特异性强的双重巢式PCR方法,并使用该方法对我国河南省部分地区猪场的猪等孢球虫和贾第虫感染情况进行了流行病学调查,为了解猪等孢球虫和贾第虫在猪场中的流行情况提供了理论依据。隐孢子虫是另一种重要的人兽共患性原虫,主要引起肠胃炎和急慢性腹泻,世界各地广泛流行。现有的隐孢子虫基因分型和亚型分型工具已将隐孢子虫分为36个种,70多个基因型,但仍有其局限性。对于和人隐孢子虫(C.hominis)SSU rRNA基因相似的兔隐孢子虫(C.cuniculus)、horse genotype、donkey genotype、来自袋鼠的与C.hominis完全相似的隐孢子虫,及其人和不同动物来源的C.parvum之间的区分依靠现有的分型工具,仍难以区分出动物来源和不同虫株间的差异。而Lectin基因作为分型工具时发现不同隐孢子虫种类在该位点的序列不同,尤其是不同种隐孢子虫有数量不等的CAA叁联密码子重复序列。根据其他原虫相关研究,如溶组织阿米巴凝集素蛋白对阿米巴致病力的影响,推测该基因编码的蛋白可影响隐孢子虫的入侵、繁殖和致病力。因此,该基因位点极有可能成为人兽共患隐孢子虫的分类和遗传研究的有效得力的工具。1猪等孢球虫和贾第虫双重巢式PCR检测方法的建立和应用为同步检测引起猪腹泻的猪等孢球虫和贾第虫这两种重要的肠道寄生虫,本研究分别针对猪等孢球虫SSU rRNA基因和贾第虫GDH基因建立并优化了一套双重巢式PCR方法。结果显示:双重巢式PCR对GDH和SSU rRNA扩增的产物大小分别为432bp和530bp。该双重巢式PCR对贾第虫和猪等孢球虫的敏感性分别为5.51pg·μL~(-1)和385fg·μL~(-1),表明该双重巢式PCR的敏感性较高。临床检测:用优化好的双重巢式PCR对53份临床样品进行检测,结果显示:双重巢式PCR扩增猪等孢球虫阳性率为20.7%(11/53),贾第虫阳性率为5.7%(3/53),混合感染阳性率为3.8%(2/53);单病原PCR检测与双重巢式PCR检测结果相差不大,无统计学意义(P>0.05)。该双重巢式PCR方法可以用来对猪十二指肠贾第虫和猪等孢球虫进行快速准确地检测。2河南省部分地区猪等孢球虫和贾第虫的分子流行病学调查为了解河南省部分地区猪等孢球虫和贾第虫的分子流行情况,共采集212份猪粪便样品,分别采用单巢式PCR方法和本试验所建立的双重巢式PCR方法特异性扩增猪等孢球虫SSU rRNA基因和贾第虫GDH基因片段。结果显示,猪等孢球虫和贾第虫的总体阳性率为25.9%(55/212),猪等孢球虫的总感染率为20.3%(43/212),贾第虫的总感染率为5.7%(12/212),两种虫的混合感染率为2.8%(6/212)。所有场都至少感染一种虫种。仔猪阶段猪等孢球虫和贾第虫的感染率最高35.8%(39/109),育肥猪阶段最低3.4%(1/29),表明不同年龄段间猪等孢球虫和贾第虫感染情况差异较大;正阳县某猪场猪等孢球虫和贾第虫的总阳性率最高为45.5%(5/11),许昌市某猪场的阳性率最低为17.9%(7/39),表明不同地区猪等孢球虫和贾第虫的感染差异较大。以上结果表明,猪等孢球虫和十二指肠贾第虫在我国猪场中猪的感染率较高,分布较为广泛,需进行更深入的流行病学调查,以期为猪等孢球虫病和贾第虫病的防控提供合理的实验依据。3隐孢子虫基于Lectin基因PCR鉴定方法的建立为了解隐孢子虫凝集素基因在不同分离株的序列差异及其遗传进化关系,以SSU rRNA基因作参照,评价Lectin基因位点作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的可行性。对实验室分离保存的多份隐孢子虫分离株分别在Lectin和SSU rRNA位点处采用巢式PCR方法进行扩增。并用ClustalX对扩增序列与参考序列进行比对,用MEGA5中的邻近法(Neighborjoiningmethod NJ),进行进化树的构建。结果显示:基于Lectin基因位点,在C.parvum,C.hominis,C.cuniculus及其在SSU rRNA处与人源C.hominis极为相近的horsegenotype,驴源C.hominis均成功扩增出了大小在450bp左右的目的条带,并进行了进化树的分析,不同种类和同种不同动物来源的隐孢子虫分布在不同的分支上。结论:Lectin基因位点可很好地区分SSU rRNA序列极为相似的几种隐孢子虫,有望为人兽共患隐孢子虫分类和遗传研究提供新的基因靶标。(本文来源于《河南农业大学》期刊2018-06-01）
巢式建立论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文以我国台湾进境美人蕉病株为材料,根据已报道的美人蕉黄斑驳病毒Canna yellow mottle virus(CaYMV)基因序列设计2对特异性引物(外侧引物1对、内侧引物1对),建立了巢式PCR快速检测CaYMV的方法,并对进境的50份美人蕉样品进行了检测。结果显示,该方法特异性强,且灵敏度高于常规PCR,是常规PCR的1 000倍,表明该方法能够实现对CaYMV的快速、准确、灵敏检测,适用于口岸快速检测CaYMV。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
巢式建立论文参考文献
[1].吴伟怀,梁艳琼,郑金龙,黄兴,习金根.咖啡锈菌巢式PCR分子检测方法的建立[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
[2].陈细红,杨小龙,廖富荣,高芳銮,沈建国.美人蕉黄斑驳病毒巢式PCR检测方法的建立[J].植物保护.2019
[3].赵娜,王丽媛,赵歆伊,曹福源,陈松.小鼠诺如病毒巢式PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医杂志.2019
[4].钟鸣.禽腺病毒血清4型巢式PCR和环介导等温扩增检测方法建立及应用[D].东北农业大学.2019
[5].杨萱桐.十二指肠贾第虫ELISA、巢式PCR和LAMP诊断方法的建立[D].东北农业大学.2019
[6].赵莉.一步法巢式实时荧光定量PCR检测呼吸道病毒方法的建立及应用[D].河北医科大学.2019
[7].王素华,袁淑辉,吴绍强,吕继洲,帅江冰.蜱传反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报.2019
[8].孙明,王锦明,刘爱红,刘志杰,聂英.牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学.2019
[9].陈杰,朱天辉.核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立[J].植物保护.2018
[10].刘珍珍.猪等孢球虫、贾第虫双重巢式PCR方法和隐孢子虫基于Lectin基因的PCR方法的建立[D].河南农业大学.2018