导读:本文包含了单链抗体可变区论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:HER2,单链抗体,蛋白纯化,T6-17细胞系
单链抗体可变区论文文献综述
刘宁波[1]（2015）在《HER2单链抗体可变区表达与纯化及抑制肿瘤细胞T6-17增殖的实验研究》一文中研究指出目的:构建HER2-sc Fv表达载体,体外纯化获得HER2-sc Fv蛋白,进而探讨HER2-sc Fv抑制高表达HER2的肿瘤细胞系T6-17增殖,为下一步抗肿瘤研究奠定实验基础。方法:①根据已有质粒p UC57-HER2-sc Fv为模板设计引物,采用PCR技术获取目的基因HER2-sc Fv。②运用双酶切及分子克隆等技术将目的基因片段克隆入原核表达质粒p ET28a,构建p ET28a-HER2-sc Fv重组质粒。③重组质粒p ET28a-HER2-sc Fv转化Rosetta大肠杆菌,利用IPTG诱导表达获得HER2-sc Fv蛋白。④蛋白亲和层析方法纯化蛋白,进而对包涵体蛋白复性。⑤SDS-PAGE及Western blot证实IPTG诱导HER2-sc Fv蛋白表达。⑥实验分为叁组,分别为空白对照组,HER2-sc Fv组和曲妥珠单抗组。应用MTT法研究HER2-sc Fv对HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖的生长抑制作用。结果:①PCR技术成功获得HER2-sc Fv目的基因。②构建的原核表达质粒载体p ET28a-HER2-sc Fv,经鉴定证实插入序列方向大小正确,质粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot证实IPTG诱导p ET28a-HER2-sc Fv转化的Rosetta大肠杆菌表达HER2-sc Fv蛋白成功,大小约为29KDa。获得包涵体蛋白并复性,浓度为1358.3mg/L,纯度约为90%,一升菌液可获得蛋白约10mg左右。③MTT实验检测叁组结果显示:HER2-sc Fv组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的抑制率为33.52%,与PBS组比较差异有统计学意义(P=0.000,P<0.05);曲妥珠单抗组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的抑制率为34.79%,与PBS组比较差异有统计学意义(P=0.000,P<0.01);而HER2-sc Fv组与曲妥珠单抗组比较差异无统计学意义(P=0.429,P>0.05)。结论:①成功构建重组质粒pET28a-HER2-sc Fv。②重组质粒转化Rosetta大肠杆菌后经IPTG诱导可高效稳定的表达HER2-sc Fv蛋白。③HER2-sc Fv蛋白在体外可以显着抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17的增殖,该蛋白可进一步应用于体内实验研究。(本文来源于《天津医科大学》期刊2015-05-01）
孙元杰,李永明,刘志佳,张葵,魏玉英[2]（2013）在《抗SEB单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的基因构建和表达》一文中研究指出目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。方法从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因;通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达。通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性。结果测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性。结论制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2013年01期）
李巍[3]（2011）在《鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体轻重链可变区基因的扩增与序列分析》一文中研究指出鸡球虫病是由艾美耳属的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)等7种球虫单独或混合感染肠道不同部位引起的一种肠道细胞内寄生性原虫病。目前,防治鸡球虫病主要依靠抗球虫药物,但长期的使用使球虫产生了耐药性,同时畜禽产品的药物残留影响人类的健康,使得利用免疫防治来取代药物治疗成为控制球虫病的必然。本试验对鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)建立了针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株并对E. tenella单链的轻重链可变区基因进行了扩增和序列分析。为以后进行E. tenella单链抗体的构建及特异性单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE40重组毒素的构建、表达及活性测定奠定基础,该重组毒素有望成为对抗柔嫩艾美耳球虫病的新工具。本试验具体研究内容如下：1.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子特异性单抗的制备首先制备鸡柔嫩艾美耳球虫(农安株)子孢子可溶性抗原,即经过卵囊的复壮、收获、体外孢子化、纯化、研磨、胰酶脱囊、DEAE-52层析柱纯化、反复冻融、超声裂解,离心所得上清即为子孢子可溶性抗原。经紫外法测得抗原样品的浓度为330ug/ml。建立针对子孢子可溶性抗原的单克隆抗体细胞株,利用此抗原检测杂交瘤细胞上清液,获得阳性杂交瘤细胞叁株4C6、4D8、4E11,并对其进行克隆及扩大培养。2.鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子单链抗体可变区基因的扩增与序列分析复苏分泌抗鸡柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体杂交瘤细胞,达最佳生长状态后应用琼脂糖扩散法检测该杂交瘤细胞的活性。Trizol法提取活性高的杂交瘤细胞总RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示鸡柔嫩艾美耳球虫特异性杂交瘤细胞基因组RNA提取成功,A260/280值=1.96；根据GenBank上发表的鸡堆型艾美耳球虫单克隆抗体轻重链可变区相关序列(登录号AJ298107),合成特异性引物,以提取的RNA为模板,RT-PCR一步法扩增目的基因,将目的基因与pMD18-T载体连接,经PCR鉴定后,对阳性重组质粒进行测序。结果获得的轻链可变区基因的大小约321bp,重链可变区基因的大小约369bp。测序结果显示符合鸡抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,但发现与抗原表位互补结合的互补决定区(CDR)基因有多数发生改变,且在轻链可变区基因的CDR3中有基因缺失现象。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2011-06-01）
汪桦,薛小平,雷迎峰,宋凯,呼延霆[4]（2010）在《鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达》一文中研究指出目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重迭延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2010年05期）
杨怡,刘明,王蕊,张捷,章金刚[5]（2009）在《抗红细胞H抗原单链抗体中可变区重链和轻链顺序对其活性的影响》一文中研究指出目的探讨抗红细胞H抗原单链抗体(scFv)中可变区重链(VH)和轻链(VL)顺序对该单链抗体活性的影响。方法采用PCR方法从质粒pMD-18T-2E8scFv(VH-linker-VL型)中克隆出VL和VH可变区基因,通过重迭引物延伸法将这2种基因连接,并引入连接肽(linker)编码序列,构建VL-linker-VH型的单链抗体基因,将VL-linker-VH和原有的VH-linker-VL2种形式的单链抗体基因分别插入到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用镍亲和层析柱纯化;免疫荧光法、竞争ELISA和低离子聚凝胺法检测纯化后scFv活性。结果酶切及测序表明VL-linker-VH型单链抗体表达载体构建成功,SDS-PAGE和Western blot分析表明VL-linker-VH和VH-linker-VL2型抗人红细胞scFv均在BL21菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为27kD,表达产物以包涵体形式存在,分别占菌体总蛋白的26.8%和27.6%,纯化后获得了高纯度的scFv;免疫荧光、竞争ELISA和低离子聚凝胺试验分析证明2种单链抗体均可特异结合红细胞表面H抗原,VH-linker-VL结合活性高于VL-linker-VH。结论成功制备了VL-linker-VH型2E8scFv;VH-linker-VL型2E8scFv抗原的纯合活性高于VL-linker-VH型2E8scFv。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2009年02期）
杨丽娟,侯颖春,白玉杰,药立波,苏成芝[6]（2008）在《抗胃癌单链抗体可变区序列分析及空间结构模拟》一文中研究指出目的:考察抗人胃癌抗体可变区轻、重链序列,选择合适的连接肽构建单链抗体,并模拟其叁级结构,预测单链抗体结构与功能关系.方法:利用获得的源自抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出的抗体可变区轻、重链序列,通过分析抗体轻重链可变区C-端、N-端结构特征,选择合适的连接肽,进而利用分子模拟原理构建单链抗体可变区的空间构象;经过力学优化、动力学模拟确定其稳定的叁维结构;借助距离几何学、表观静电分布、溶液可及性表面积分析,对单链抗体的结构特征及理化性质进行理论分析.结果:成功获得的单链抗体稳定构象,除连接肽位置的1个氨基酸构象不合理之外,其他位置构象合适.轻链CDR1、CDR2以及重链CDR3溶液可及性表面积分布较强,而轻链CDR3、重链CDR1、CDR2分布较弱.重链CDR3区带有较强的负电性.结论:所构建的单链抗体叁维空间结构具有较高的合理性和可靠性.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2008年21期）
王宏,陈丹,邓宁,向军俭,靳英杰[7]（2007）在《抗重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达》一文中研究指出目的:从分泌抗重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株B2F3中克隆抗体可变区(V)基因,构建bFGF单链抗体(scFv),并进行可溶性表达。方法:从分泌bFGF mAb杂交瘤细胞株B2F3提取总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链的可变区基因(VL);再通过重迭延伸拼接(SOE)PCR方法,在VH和VL基因之间引入linker(Gly4Ser)3,构建bFGFscFv。将测序正确的scFv基因克隆到表达载体pCANTAB5E中,选择非抑制型菌株E.coli HB2151进行可溶性表达;经SDS-PAGE检测抗体表达水平,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序分析结果显示,VH基因序列全长375碱基对,编码125个氨基酸,VL基因序列全长399碱基对,编码133个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FR)、3个抗原互补决定区(CDR)及抗体特征性的2个半胱氨酸残基;构建的scFv全长789碱基对,编码263个氨基酸,连接结构为VH-linker-VL。SDS-PAGE分析表明scFv基因在大肠杆菌为可溶性表达,表达产物主要位于周质腔中,表达产物的Mr为27000,与理论预期值相符;间接ELISA检测结果显示原核表达的scFv具有与bFGF特异性结合的活性。结论:成功地克隆bFGF mAb可变区基因,并构建表达bFGF scFv,为下一步研究bFGF抗体人源化改造奠定实验基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2007年12期）
郭莉[8]（2007）在《鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体可变区基因文库的构建》一文中研究指出鸡球虫病对养鸡业的危害程度十分严重，全世界每年因鸡球虫病造成的损失超过20亿美元。最近的研究证明主要由堆型艾美耳球虫感染引起的亚临床型球虫病对养鸡业造成的损失有时要比临床型球虫病大的多，因此对堆型艾美耳球虫进行专门详尽的深入研究是非常必要的。本文建立了针对鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原的鼠源抗体基因文库，并对其进行了初步鉴定。本试验利用单卵囊分离技术从鸡场分离了四株纯种艾美耳球虫卵囊，经增殖纯化后，提取卵囊基因组DNA，用特异性引物进行PCR扩增鉴定，结果显示其中两株为纯种鸡堆型艾美耳球虫。将增殖的卵囊接种无球虫感染的健康雏鸡，确定提取裂殖子的最佳时间为接种后56小时；并进行第二代裂殖子的提取纯化试验。纯化的裂殖子经超声裂解，高速离心，取上清，得到裂殖子可溶性抗原。将提取的堆型艾美耳球虫裂殖子可溶性抗原与等量佐剂乳化，免疫BALB／C小鼠。采取免疫小鼠的血液，制备阳性血清，应用本实验室建立的间接ELISA方法检测抗体效价，取抗体效价高的小鼠作为脾脏供体。提取脾脏的总RNA，琼脂糖凝胶电泳证明小鼠脾细胞总RNA提取成功。以提取的RNA为模板，利用引物Oligo(dT)_(15)合成cDNA。根据小鼠抗体可变区的恒定区的氨基酸序列设计合成扩增鼠抗体轻链和重链可变区的兼并引物，并以cDNA为模板，扩增出轻链可变区和重链可变区基因。经琼脂糖凝胶电泳检测，发现轻链可变区基因的大小约390bp，重链可变区基因在420bp左右。从琼脂糖凝胶上切下所需DNA片段，用回收试剂盒回收轻链、重链可变区，经琼脂糖凝胶电泳检测回收产物，将回收的轻链基因等量混合即制成轻链可变区基因文库，将回收的重链基因等量混合，即制成重链可变区基因文库。轻链、重链分别与克隆载体PGM-T连接，转化于感受态细胞TOP10，蓝白斑法筛选出阳性重组子。提取阳性质粒DNA并测序。测序结果显示轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征，与预期结果一致，证明鼠抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗体的轻链可变区基因文库和重链可变区基因文库构建成功。(本文来源于《河北农业大学》期刊2007-06-03）
张志超,胡学军,包永明,安利佳[9]（2001）在《大容量人源单链抗体库构建中轻链重链可变区的连接》一文中研究指出目的单链抗体库的构建过程中 ,多采用轻链可变区 (VL)、重链可变区 (VH)、和 linker 3条片段重迭延伸拼接法 (SOE)进行连接。为了优化抗体库的多样性 ,提高效率 ,探讨了新的连接方法。方法通过不对称 PCR制备单链 DNA,再俩俩连接 ,得到单链抗体 (Sc Fv)基因。分别将 SOE法及不对称 PCR法连接得到的 Sc Fv基因与载体连接 ,转化 E.coli TG1,构建抗体库。结果后者只需 2 5次连接反应 ,78次电击转化 ,既可达到 1× 10 1 0库容量。结论可以认为新方法具有更高的基因构建效率 ,并有效提高了抗体库的多样性。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2001年06期）
张宏斌,江悦华,王捷,杨太成,吴锦银[10]（2001）在《抗人血管生长素单链抗体可变区基因的定向克隆及序列分析》一文中研究指出血管生长素(angiogenin,ANG)是一种存在于正常人血浆及实体肿瘤组织中的蛋白质,它具有很强的促血管生长作用。大量研究表明:ANG与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系[1]。ANG单抗可以通过中和ANG或阻断ANG与血管内皮细胞受体的结合而实现其抑(本文来源于《免疫学杂志》期刊2001年01期）
单链抗体可变区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。方法从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因;通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达。通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性。结果测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性。结论制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
单链抗体可变区论文参考文献
[1].刘宁波.HER2单链抗体可变区表达与纯化及抑制肿瘤细胞T6-17增殖的实验研究[D].天津医科大学.2015
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