导读:本文包含了发卡状核酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鼻咽肿瘤,联合基因治疗,小发夹状RNA,DNA,催化性
发卡状核酶论文文献综述
王祎琴,洪苏玲,杨玉成,钱迪,柯霞[1]（2010）在《小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白基因表达研究》一文中研究指出目的:探讨小发卡状RNA单独及联合脱氧核酶对鼻咽癌细胞中EB病毒EBV潜伏膜蛋白1(LMP1)基因表达的抑制作用。方法:带绿色荧光报告基团的LMP1mRNA表达载体,小发卡状RNA及脱氧核酶按照阳性对照组、RNA干扰组、联合组和脱氧核酶组4组分别共转染HNE1细胞,观察分析计数细胞中绿色荧光表达情况,检测LMP1mRNA和蛋白表达水平。结果:联合组细胞绿色荧光OD值均数与RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.01);联合组绿色荧光抑制率分别为86.31%和88.88%,比RNA干扰组抑制率75.15%高;EBVLMP1mRNA和蛋白水平检测提示联合组抑制效率较RNA干扰组高。结论:小发卡状RNA联合脱氧核酶能够提高抑制EBV-LMP1基因表达的效率。(本文来源于《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》期刊2010年06期）
郭子健,严玲玲,杨吉成,谢宇锋,盛伟华[2]（2007）在《抗VEGF发卡状核酶抑制肝癌VEGF表达和移植瘤生长》一文中研究指出目的:采用抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发卡状核酶基因转染肝癌细胞,观察核酶对VEGF表达及肿瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导的方法,将人工合成的抗VEGF发卡状核酶基因转染肝癌细胞SMMC-7721,同时制备空载体和细胞对照,经G418筛选获得阳性克隆,基因组水平鉴定核酶在细胞中的表达,半定量RT-PCR法和免疫组化法观察核酶对SMMC-7721细胞VEGF表达的影响。接种各组细胞于裸鼠皮下,观察瘤体体积大小和质量,免疫组化法观测各组肿瘤微血管变化和VEGF的表达。结果:核酶基因成功导入到肿瘤细胞中,转基因细胞的增殖速率明显下降(P<0.01),转染核酶组细胞VEGF水平明显下降(P<0.01)。移植瘤成瘤率和生长速度减慢(P<0.01),肿瘤组织VEGF表达和血管形成减少(P<0.01)。结论:抗人VEGF发卡状核酶基因在体内、体外均可抑制肝癌VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肝癌血管靶向基因治疗提供实验依据。(本文来源于《肿瘤》期刊2007年10期）
王祎琴[3]（2007）在《小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌EBV-LMP1基因表达的实验研究》一文中研究指出鼻咽癌是我国高发肿瘤,国内外研究证明EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)在其发生发展中起重要作用,被认为是鼻咽癌的致癌基因。RNA干扰(RNA interference,RNAi)和脱氧核酶(deoxyribozyme,DNAzyme,DZ)技术是能够有效抑制目的基因表达的两种基因治疗策略,已被广泛应用于目的基因功能研究和肿瘤及病毒的基因治疗中。本研究针对EBV-LMP1 mRNA设计、构建表达小发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组表达载体(pshRNA-LMP1),观察pshRNA-LMP1在鼻咽癌细胞内抑制EBV-LMP1基因表达的效率及对鼻咽癌细胞产生的生物学影响,以及联合脱氧核酶抑制EBV-LMP1基因表达的效应,为鼻咽癌的预防和临床治疗提供新的基因治疗策略。目的:设计构建针对绿色荧光蛋白(GFP)小发卡状RNA表达载体,观察其在鼻咽癌细胞中对绿色荧光蛋白表达的抑制作用,证实shRNA表达载体诱导的RNA干扰技术在鼻咽癌细胞株中沉默目标基因表达的可行性。方法:增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-N1)转染鼻咽癌HNE1细胞并予G418筛选稳定表达GFP的细胞克隆(HNE1-GFP);设计构建针对GFP的小发卡状RNA表达载体(pshRNA-GFP);观察不同浓度pshRNA-GFP抑制HNE1-GFP靶基因mRNA、蛋白表达情况及细胞毒性大小。结果: pshRNA-GFP能够显着抑制鼻咽癌细胞中GFP基因mRNA和蛋白水平的表达且无细胞毒性;pshRNA-GFP1:3和2:5浓度级别组有较高的抑制效率。结论:特异性小发卡状RNA能够有效抑制鼻咽癌细胞内源性GFP的表达,表明shRNA表达载体介导的RNA干扰在鼻咽癌细胞株中抑制目标基因表达具有可行性。目的:构建EBV-LMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体,观察绿色荧光融合蛋白在鼻咽癌细胞的表达情况,为利用该荧光可视化细胞系统筛选高效特异的pshRNA-LMP1建立细胞平台。方法:从B95-8细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增EBV-LMP1 cDNA片段,构建重组T载体pMD18-T-LMP1m。以重组T载体为模板,构建LMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-LMP1m、pEGFP-C1-LMP1m、pEGFP-N1-LMP1a、pEGFP-C1-LMP1c。在鼻咽癌HNE1细胞中观察融合蛋白荧光表达情况,RT-PCR及western blot鉴定融合蛋白在HNE1细胞中的表达。结果:成功构建pEGFP-N1-LMP1m、pEGFP-C1-LMP1m、pEGFP-N1-LMP1a、pEGFP-C1-LMP1c真核表达重组载体,转染HNE1细胞后可见荧光融合蛋白的表达,RT-PCR和western blot证实LMP1融合蛋白表达成功。结论:在鼻咽癌HNE1细胞中实现了LMP1蛋白的N端、C端及全长蛋白表达,成功建立了EBV-LMP1相关荧光可视化细胞平台,为进一步进行EBV-LMP1靶向小干扰RNA的荧光可视化筛选奠定了基础。目的:构建并筛选高效特异抑制鼻咽癌细胞内EBV-LMP1基因表达的靶向小发卡状RNA表达载体(pshRNA-LMP1),并观察其在鼻咽癌细胞内产生的生物学效应。方法:设计构建5个pshRNA-LMP1。优化重组质粒pEGFP-N1-LMP1m和pshRNA-LMP1共转染HNE1细胞的条件。观察pshRNA-LMP1抑制荧光融合蛋白表达的高效性和特异性,RT-PCR及Western Blot检测LMP1mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增值活力、AO/EB检测细胞凋亡、流式检测荧光抑制率。结果:成功构建5个LMP1靶向小发卡状RNA表达载体: pshRNA-LMP1-130/318/3521/3519/3519c。pEGFP-N1-LMP1m与pshRNA-LMP1共转染HNE1细胞的最佳比例为0.5μg:1.0μg。筛选出pshRNA-LMP1-3519具有最佳特异性和高效性且无细胞毒性,能有效降低LMP1mRNA和蛋白质表达水平,并能抑制HNE1细胞的生长及促进细胞凋亡。结论:利用荧光可视化的细胞平台,构建并筛选出高效特异的EBV-LMP1靶向shRNA表达载体pshRNA-LMP1-3519,证实了其在鼻咽癌细胞中的对靶基因沉默作用,及其促进鼻咽癌细胞的凋亡和抑制鼻咽癌细胞的生长的作用。为进一步应用RNA干扰技术抑制鼻咽癌增殖生长等动物实验提供了实验基础。目的:观察小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EBV-LMP1基因表达的协同作用,为进一步进行动物及临床试验提供实验依据。方法:pshRNA-LMP1-3519联合前期实验证实能在鼻咽癌细胞中有效抑制EBV-LMP1表达的脱氧核酶DZ167和DZ509,与重组载体pEGFP-N1-LMP1m共转染HNE1细胞,流式检测荧光抑制率、RT-PCR和Western Blot分别检测EBV-LMP1基因mRNA和蛋白表达。结果:荧光表达抑制率分别为pshRNA-LMP1-3519单独干扰组75.15% ; pshRNA-LMP1-3519联合DZ167干预组86.31% ; pshRNA-LMP1-3519联合DZ509干预组88.88%,流式检测绿色荧光表达率pshRNA-LMP1-3519单独干扰组12.99%,联合干预组5.60%;RT-PCR和Western Blot均证实pshRNA-LMP1-3519联合DZ167/509干预组能更有效降低EBV-LMP1基因mRNA和蛋白表达。结论:小发卡状RNA联合脱氧核酶较各自单独应用时可提高抑制EBV-LMP1基因表达的效率。表明RNA干扰和脱氧核酶技术的联合应用可提高目标基因的抑制效率,为鼻咽癌的基因治疗提供了一种新的策略。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2007-05-01）
郭子健,李莉华,严玲玲,杨吉成,王学浩[4]（2006）在《抗人VEGF发卡状核酶基因的构建及其对肝癌细胞VEGF蛋白表达的影响》一文中研究指出利用计算机辅助设计合成针对人VEGF的发卡状核酶(RZ),定向亚克隆于真核表达载体pcDNA 3.1+中,转染肝癌细胞SMM C-7721,RT-PCR鉴定。EL ISA法和M TT法检测SMM C-7721细胞对照组、SMM C-7721/pcDNA 3.1+空载体对照组和SMM C-7721/RZ基因转染组细胞VEGF表达和增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡情况。结果为SMM C-7721/RZ基因转染组细胞VEGF表达水平和细胞增殖速率显着低于SMM C-7721细胞对照组和SMM C-7721/pcDNA 3.1+空载体对照组。M C-7721/RZ基因转染组细胞出现凋亡峰,其凋亡率达11.0%,而细胞对照和空载体细胞对照均末出现。认为SMM C-7721/RZ转基因细胞株的成功构建和生物学特性的初步研究为进一步建立裸鼠人肝癌模型及评价RZ对体内肝癌生长的抑制作用奠定了一定的基础。(本文来源于《山东医药》期刊2006年21期）
严玲玲[5]（2006）在《抗人VEGF发卡状核酶治疗肝癌的实验研究》一文中研究指出目的采用脂质体法将抗人血管内皮生长因子(VEGF)发卡状核酶转染肝癌细胞,研究抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性和裸鼠肝癌移植瘤的影响。方法合成针对人VEGF的发卡状核酶(以下简称RZ),定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1+中;经双酶切和测序鉴定后,用脂质体法将pcDNA3.1+/RZ转染SMMC-7721肝癌细胞,经G418(500μg/ml)加压筛选获得抗性细胞株,基因组DNA法和RT-PCR法鉴定其在肝癌细胞内的表达;MTT法分析RZ对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响,半定量RT-PCR法和ELISA法观察对SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的影响;用FCM分析其对SMMC-7721细胞凋亡的影响。接种RZ组和空载体组肝癌细胞于裸鼠皮下,观察成瘤时间、肿瘤体积和重量变化,免疫组化法观测肿瘤组织微血管变化及VEGF表达变化。结果获得pcDNA3.1+/RZ重组真核表达载体和SMMC-7721/RZ转基因细胞。RZ能明显下调SMMC-7721肝癌细胞VEGF的表达,减慢其增殖速率,诱导一定程度的细胞凋亡,使肝癌移植瘤组织VEGF表达水平明显下降,瘤体积变小,重量减轻,瘤组织血管密度减少。结论抗人VEGF发卡状核酶基因能够降低肝癌VEGF的表达,能够抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,并可减少肿瘤组织血管的形成,为进一步开展基因治疗提供实验依据。(本文来源于《苏州大学》期刊2006-04-01）
严玲玲,郭子健,杨吉成,李莉华,黄朝晖[6]（2005）在《抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响》一文中研究指出我们设计了针对VEGF的发卡状核酶,观察其对肝癌细胞生物学特性的影响。一、材料和方法1.主要试剂和细胞系:Lipofectamine、G418购自Gibco公司;UNIQ柱式总RNA抽提试剂盒购自上海Sangon生物技术有限公司;人VEGF ELISA检(本文来源于《中华实验外科杂志》期刊2005年11期）
严瑞兰,钱新华,辛晓燕,金明,惠宏襄[7]（2002）在《抗血管内皮生长因子发卡状核酶基因抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖》一文中研究指出目的 观察抗VEGF发卡状核酶基因对卵巢癌细胞增殖的影响。方法 采用脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗VEGF发卡状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌细胞 ,通过MTT、细胞贴壁克隆形成试验、软琼脂克隆形成试验及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 转染后的SKOV3 RZ细胞生长减慢 ,细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低 (P <0 .0 0 1)。G1期细胞显着增多 (P <0 .0 1) ,S期细胞显着减少 (P <0 .0 1)。结论 抗VEGF发卡状核酶基因可显着抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖 ,为进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗提供了实验依据(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2002年03期）
严瑞兰,辛晓燕,王健,王德堂,钱新华[8]（2001）在《抗VEGF发卡状核酶基因抑制VEGF表达及卵巢癌细胞增殖的实验研究》一文中研究指出肿瘤的生长和转移与肿瘤区血管有着密切的关系,肿瘤血管为肿瘤细胞的生长输送营养物质并排泄代谢废物,肿瘤转移灶的形成和发展也依赖于肿瘤血管的形成。因此,切断肿瘤的血供可能达到抑制肿瘤生长和转移的效果。新近的研究表明。血管内皮生长因子(VEGF)通过其受体参与了肿瘤血(本文来源于《中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编》期刊2001-09-01）
发卡状核酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:采用抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发卡状核酶基因转染肝癌细胞,观察核酶对VEGF表达及肿瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导的方法,将人工合成的抗VEGF发卡状核酶基因转染肝癌细胞SMMC-7721,同时制备空载体和细胞对照,经G418筛选获得阳性克隆,基因组水平鉴定核酶在细胞中的表达,半定量RT-PCR法和免疫组化法观察核酶对SMMC-7721细胞VEGF表达的影响。接种各组细胞于裸鼠皮下,观察瘤体体积大小和质量,免疫组化法观测各组肿瘤微血管变化和VEGF的表达。结果:核酶基因成功导入到肿瘤细胞中,转基因细胞的增殖速率明显下降(P<0.01),转染核酶组细胞VEGF水平明显下降(P<0.01)。移植瘤成瘤率和生长速度减慢(P<0.01),肿瘤组织VEGF表达和血管形成减少(P<0.01)。结论:抗人VEGF发卡状核酶基因在体内、体外均可抑制肝癌VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肝癌血管靶向基因治疗提供实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
发卡状核酶论文参考文献
[1].王祎琴,洪苏玲,杨玉成,钱迪,柯霞.小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白基因表达研究[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志.2010
[2].郭子健,严玲玲,杨吉成,谢宇锋,盛伟华.抗VEGF发卡状核酶抑制肝癌VEGF表达和移植瘤生长[J].肿瘤.2007
[3].王祎琴.小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌EBV-LMP1基因表达的实验研究[D].重庆医科大学.2007
[4].郭子健,李莉华,严玲玲,杨吉成,王学浩.抗人VEGF发卡状核酶基因的构建及其对肝癌细胞VEGF蛋白表达的影响[J].山东医药.2006
[5].严玲玲.抗人VEGF发卡状核酶治疗肝癌的实验研究[D].苏州大学.2006
[6].严玲玲,郭子健,杨吉成,李莉华,黄朝晖.抗人VEGF发卡状核酶对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响[J].中华实验外科杂志.2005
[7].严瑞兰,钱新华,辛晓燕,金明,惠宏襄.抗血管内皮生长因子发卡状核酶基因抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖[J].肿瘤防治研究.2002
[8].严瑞兰,辛晓燕,王健,王德堂,钱新华.抗VEGF发卡状核酶基因抑制VEGF表达及卵巢癌细胞增殖的实验研究[C].中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编.2001