本文主要研究内容
作者王恺,赵海鑫,李金亮,夏晴（2019）在《构建钙荧光探针细胞用于探究胞浆和线粒体钙对ATP刺激的响应》一文中研究指出：目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)的细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内的响应和变化。方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内和线粒体内钙离子相对浓度的2种钙探针cyto-GCaMP6和4mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针的HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24 h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内的表达情况;在表达2种钙探针的细胞的培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP的响应。结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上的细胞表达了对应的钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3～6 s)升至10倍,200 s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)的时间稍滞后(5～8 s),并且回落更慢,300 s时至1.5倍。在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理的实验组,上述胞浆钙和线粒体钙浓度上升不明显。结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激的细胞实验体系,为进一步深入探究ATP等危险信号导致细胞的炎性损伤机制奠定了基础。
Abstract
mu de :gou jian biao da ji yin bian ji gai tan zhen (GECIs)de xi bao ji HeLa-GECIs,tan jiu xi bao ying da wai jie ATPci ji zhong gai li zi zai xi bao nei de xiang ying he bian hua 。fang fa :fen bie yong neng gou zhi jie tong guo ying guang jiang du fan ying xi bao bao jiang nei he xian li ti nei gai li zi xiang dui nong du de 2chong gai tan zhen cyto-GCaMP6he 4mt-GCaMP6gan ran HeLaxi bao ,huo de 2chong biao da gai li zi tan zhen de HeLaxi bao ji ;zai gan ran le 2chong xian bing du tan zhen 24 hhou ,yong gong ju jiao ying guang xian wei jing jian ce ying guang tan zhen zai HeLaxi bao nei de biao da qing kuang ;zai biao da 2chong gai tan zhen de xi bao de pei yang ji zhong jia ru wai yuan ATP,yong Time-lapsecheng xiang dong tai guan ce ji shu guan cha HeLaxi bao nei gai li zi dui wai huan jing zhong ATPde xiang ying 。jie guo :gong ju jiao ying guang xian wei jing guan cha ,que ding 95%yi shang de xi bao biao da le dui ying de gai li zi zhi shi ying guang tan zhen ;Time-lapsecheng xiang dong tai guan ce ji shu guan cha fa xian ,zai xi bao pei yang ji zhong jia ru ATPhou ,xi bao bao jiang gai tan zhen ying guang jiang du shun shi (3～6 s)sheng zhi 10bei ,200 shou zhu jian jiang di dao ji chu shui ping ;xian li ti gai dao da feng zhi (4bei )de shi jian shao zhi hou (5～8 s),bing ju hui la geng man ,300 sshi zhi 1.5bei 。zai ATPshou ti P2X7yi zhi ji A438079yu chu li de shi yan zu ,shang shu bao jiang gai he xian li ti gai nong du shang sheng bu ming xian 。jie lun :gou jian le neng zai huo ti xi bao nei tong guo ying guang tan zhen shi shi jian ce gai li zi xiang ying bao wai ATPci ji de xi bao shi yan ti ji ,wei jin yi bu shen ru tan jiu ATPdeng wei xian xin hao dao zhi xi bao de yan xing sun shang ji zhi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物技术通讯的王恺,赵海鑫,李金亮,夏晴，发表于刊物生物技术通讯2019年01期论文，是一篇关于基因编辑钙探针论文,钙稳态论文,钙瞬变论文,线粒体钙论文,胞浆钙论文,生物技术通讯2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物技术通讯2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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