导读:本文包含了标记建立论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:番茄,灰叶斑病,Sm基因,分子标记
标记建立论文文献综述
高存,宋建军,杜朝[1]（2019）在《番茄灰叶斑病抗病基因Sm分子标记的建立》一文中研究指出以抗病纯合体(Sm/Sm)、抗病杂合体(Sm/sm)和感病纯合体(sm/sm)番茄为试验材料,以提取的基因组DNA为模板,根据与抗病基因Sm紧密连锁的RFLP标记设计特异引物进行PCR扩增,对扩增产物进行序列分析寻找酶切位点,采用限制性内切酶酶切的方法,创建新的与番茄灰叶斑病抗病基因Sm紧密连锁的CAPS标记,以期为今后番茄抗病育种工作提供技术支撑。结果表明:创建的T050标记稳定、可靠,是一个共显性分子标记,可用于番茄抗病育种的辅助选择中。(本文来源于《北方园艺》期刊2019年22期）
韩月然,陈妍,杜向瑞,吕品,刘博[2]（2019）在《前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证》一文中研究指出目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10~5、5×10~5和1×10~6个/mL)、PCSK9蛋白浓度(5、20、40、80μg/mL)、荧光标记的低密度脂蛋白(low density lipoprotein labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate,Dil-LDL)浓度(10、16、20μg/mL)、单克隆抗体的浓度梯度(200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL,200、30、10、6、4、1、0. 2μg/mL,200、28、9、6、4、2、0. 2μg/mL)进行优化,并对优化方法的专属性、准确度、精密度、线性范围、耐用性进行验证。结果最适方法检测条件:铺板密度为5×10~5个/mL,PCSK9蛋白和Dil-LDL浓度分别为20和16μg/mL,单克隆抗体的浓度梯度为200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL。该方法可特异性检测PCSK9单克隆抗体;供试品检测回收率在70%～130%之间;供试品检测结果的相对标准偏差(RSD)均<10%;供试品效价在50%～150%之间时,检测值与理论值呈良好的线性关系,线性拟合方程为y=1. 002 x-0. 006 7,R~2=0. 997 8;耐用性检测活性均在70%～140%范围内。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、准确度和精密度,可用于PCSK9单克隆抗体的生物学活性测定。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年11期）
刘畅,李楚楚,李智洋[3]（2019）在《基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立》一文中研究指出目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2019年10期）
石童,王陈,陈学军,张瑞华,李丽琴[4]（2019）在《基于实时无标记细胞分析的Toll样受体-5激动剂抗辐射作用体外评价方法建立》一文中研究指出TLR5是Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族成员,能够特异性识别并结合细菌鞭毛蛋白(flagellin),TLR5与flagellin相互作用能够激活MyD88依赖性的NF-κB信号通路,调节多种细胞因子的分泌,诱导产生多种有益的免疫刺激、抗感染和抗凋亡等作用。近年来,人们研究发现,flagellin衍生物能够显着提高接受致死剂量γ射线照射的小鼠和猕猴的存活率,且安全剂量范围大、毒副作用低,有望开发成为一种有效、低毒的抗辐射新药。目前,以TLR5为靶点的抗辐射药物的筛选与评价仍然以动物体内实验为主,周期长、通量低、受试样品需要量大,不利于进行大规模筛选。目的建立可用于靶向TLR5的抗辐射药物筛选的抗辐射作用体外评价方法。方法采用慢病毒感染宿主细胞的方法建立了稳定表达hTLR5的HEK-293细胞系(HEK293-hTLR5);利用实时无标记细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)技术对4种已知表达TLR5受体的细胞(HEK293-hTLR5、HIE-2、HCT116和IEC-6)的辐射剂量-细胞死亡效应关系进行分析,筛选合适的评价细胞模型;在接受60Coγ射线照射前24 h给予不同剂量的Fd(TLR5激动剂—flagellin的衍生物),利用RTCA方法观察各组细胞的生长情况,分析和评价Fd对辐射引起细胞损伤的保护作用。结果γ射线照射对HEK293-hTLR5细胞的损伤作用呈明显剂量依赖关系,辐照后48 h的IC50约为16Gy,而其它3种细胞在RTCA检测条件下对辐射不敏感,因此选择HEK293-hTLR5细胞作为细胞模型,16Gy作为体外评价实验的辐射剂量;辐照前24 h给予Fd对HEK293-hTLR5细胞具有辐射保护作用,且Fd剂量越高保护作用越强,具有显着的剂量依赖性。结论本研究成功建立了基于RTCA的TLR5激动剂抗辐射作用体外评价方法,为靶向TLR5的抗辐射药物筛选奠定了基础。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
罗华灶,李雪,依含,谢君,朱乃硕[5]（2019）在《荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型》一文中研究指出目的:建立稳定表达荧光素酶的小鼠结肠癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通过基因重组的方式,将外源基因插入到逆转录病毒载体上,以工具细胞293T包毒后得到病毒,将携带荧光素酶基因的质粒转染到小鼠结肠癌细胞株CT26中,Puromycin筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果:获得了高水平稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系CT26具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于BALB/c鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论:成功建立了稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的BALB/c鼠皮下结肠癌移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年17期）
陈琼,王兰芬,唐浩,邓超,马莹雪[6]（2019）在《普通菜豆SSR分子标记鉴定体系的建立及应用》一文中研究指出为了保护育种家合法权益、规范种业市场、提高种子市场监管效率等,本研究拟建立一套普通菜豆品种SSR分子标记鉴定体系。首先,遴选12个产地不同、植物学形态差异较大的普通菜豆品种,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选出120对多态性高、条带清晰的SSR引物;然后,利用荧光毛细管电泳技术对筛选出的引物多态性在96个普通菜豆品种中进一步检测,最终获得在菜豆基因组上均匀分布、多态性高、峰型稳定的33对SSR核心引物。在此基础上,依据扩增片段长度和荧光标记颜色对核心引物进行分组,并设置参照品种以校正不同实验批次和平台之间的误差,建立了基于SSR标记的品种鉴定体系。同时,构建了包含申请品种、保护品种、主栽品种和地方品系在内的161个普通菜豆品种的指纹数据库。这套核心引物能够将其中的140个品种区分开,遗传相似系数平均值为0.33,表明这些品种遗传多样性较丰富;未区分开的21个品种在产地、父母本、植物学性状等方面极其相似,但能通过部分性状加以区分,表明该套核心引物在辅助近似品种筛选方面非常有效。本研究建立的基于SSR分子标记的普通菜豆品种鉴定体系将为其真实性鉴定及DUS测试近似品种辅助筛选提供有力支撑。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2019年06期）
宫文萍,李凯,程敦公,武智民,李洪振[7]（2019）在《PLUG引物和IT引物在顶芒山羊草分子标记建立中的通用性分析》一文中研究指出分子标记是检测和追踪小麦背景中近缘物种染色体的重要手段。依据禾本科物种基因共线性原则,基于基因序列设计的引物在不同物种中可能具有通用性。本研究对水稻PLUG引物和簇毛麦IT引物在顶芒山羊草中的通用性进行了分析,并建立了顶芒山羊草染色体特异IT标记。供试的397对PLUG引物和841对IT引物对小麦-顶芒山羊草双二倍体与中国春的扩增结果显示,377对(95.0%)PLUG引物和593对(70.5%)IT引物可以在供试材料中扩增出清晰条带。因此,PLUG引物在顶芒山羊草中的通用性优于IT引物。相比小麦对照,PLUG引物和IT引物能在小麦-顶芒山羊草双二倍体中扩增出多态性条带的引物数分别有17对和5对,分别占供试PLUG引物和IT引物的4.3%和0.6%。利用获得的IT多态性引物对一套小麦-顶芒山羊草附加系和一套小麦-卵穗山羊草附加系进行扩增,结果发现仅引物CINAU1060、CINAU1465和CINAU1517能在相应附加系中扩增出大小分别约为300、480 bp和320 bp的多态性标记,为小麦背景中顶芒山羊草染色质的鉴定提供了新的检测手段。然而,本研究中IT引物建立顶芒山羊草分子标记的比率仅为0.4%,低于我们之前用PLUG引物建立顶芒山羊草分子标记的比率(8.9%)。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年07期）
李艳伟,宋兴辉,王佳佳,刘丽,黄莹莹[8]（2019）在《实时无标记肿瘤细胞凋亡筛选技术体系的建立》一文中研究指出将x CELLigence-RTCA细胞分析系统的实时无标记技术和流式细胞术结合,建立实时无标记的肿瘤细胞凋亡筛选技术体系。利用顺铂诱导非小肺癌细胞A549凋亡,使用xCELLigence-RTCA系统连续监测96 h获取A549细胞动态生长曲线图谱,分析图谱确定细胞凋亡最佳检测时间点和半有效抑制浓度(IC50),联合流式细胞术的精准定量技术,分析顺铂作用后A549细胞的凋亡率。结果确定这种实时无标记细胞凋亡筛选技术体系用于肿瘤细胞凋亡筛选的可行性和可靠性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年10期）
杨眈,王作欢,蒋小武,方维焕,宋厚辉[9]（2019）在《基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速、高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用》一文中研究指出赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通过采用量子点荧光微球(quantum dots,QDs)标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法(FICGA),15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测。该方法检测下限(IC_(10))达到0.04ng/mL,检测区间(IC_(20)-IC_(80))为0.05–0.59ng/mL,半数抑制率(IC_(50))为0.18ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3%和11.9%,对其他常见真菌毒素AFB_1、ZEN、FB_1和DON均无交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2%–117.8%,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景。(本文来源于《菌物学报》期刊2019年06期）
周正伟[10]（2019）在《建立Td-tomato标记KRT18基因的牛胎儿成纤维细胞系及用于iPS诱导的初步研究》一文中研究指出上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是上皮样细胞向间充质样细胞转变的过程,是一个中间态的变化,现已被证明在癌症发生、组织愈合以及iPS诱导过程中起着十分重要的作用。在iPS诱导过程中,主要发生的是EMT的逆过程,即成纤维样细胞-上皮样细胞的转化(MET),在这一过程中,会逐渐失去成纤维的细胞形态,转变为连接更为紧密的上皮细胞形态,且能表达简单上皮细胞的特异性标志物KRT18、KRT8、KRT19等。KRT18作为中间丝蛋白中的简单上皮蛋白,在癌症和早期胚胎发育与着床以及iPS诱导过程MET发生中起着标志性的作用,因此研究这一基因在胚胎发育与iPS诱导中的作用,对其在基础功能上的研究具有重要意义。本研究以实验室前期构建的pKlrkt打靶载体为基础载体,分别用PCR的方法从胎牛成纤维细胞基因组中获得包含有该基因启动区的5`同源臂和3`同源臂,以酶切连接的方法将两个同源臂连在基础载体的MluI和NheI两个位点,再对td-Tomato质粒进行BamHI和NotI双酶切,回收片段与连接好两个同源臂的pKlrkta载体进行连接,获得内含td-Tomato序列且无启动子的pTKlrkt打靶载体,通过电转染的方式将pTKlrkt打靶载体与实验室前期构建完成的CRISPR/Cas9表达质粒,以200V、5 ms、电击2次的条件共转染到胎牛成纤维细胞中,先经G418筛选后,分别以流式细胞分选和口吸管挑取的方式分选单克隆细胞,最终获得122株单克隆细胞,经跨臂PCR验证后,确定3株细胞具有正确整合,命名为BFF-KRT18-Tomato,打靶效率为2.46%,3株打靶细胞系均保持原始成纤维细胞的生长速率,能在体外正常传代5代以上。为研究iPS诱导过程中KRT18在不同转染体系和培养条件所表现出的特征,我们以获得的BFF-KRT18-Tomato打靶细胞系为初始诱导细胞,用慢病毒转染的方法分别将人源Oct4、Klf4、Sox2、C-Myc(h-OKSM)、人源Oct4、Klf4、Sox2、C-Myc、Nanog(h-OKSMN)和人源Oct4、Klf4、Sox2、C-Myc、Nanog、Lin28A(h-OKSMNL)导入打靶细胞系中,同时在CTFR培养体系(MTeSR E6、Low fatty acid BSA、rhFGF-2和IWR-1)和LCDM培养体系(DMEM/F12、Neurobasal、N-2、B27、L-Glutamine、NEAA、KSR、β-巯基乙醇、bLIF、CHIR-99021、DiM和MiN)进行培养,收集D18的细胞样品进行RT-PCR以及在荧光显微镜下观察显示,h-OKSMNL转染体系下更能促进成纤维向上皮样细胞的转变,而且两种培养体系都无法形成细胞克隆,表明均不适于biPS的诱导,但CTFR培养体系能更好的维持细胞的生长状态,同时经历向iPS诱导过程的中间上皮样形态,从而激发红色荧光蛋白的表达。综上所述,利用CRISPR/Cas9的方法可以将td-Tomato定点整合在牛胎儿成纤维细胞的KRT18的基因位点,建立的细胞系能够在MET研究中更好的起到标记作用,对研究KRT18基因的功能和iPS诱导过程提供了一个有力的工具。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-02）
标记建立论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10~5、5×10~5和1×10~6个/mL)、PCSK9蛋白浓度(5、20、40、80μg/mL)、荧光标记的低密度脂蛋白(low density lipoprotein labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate,Dil-LDL)浓度(10、16、20μg/mL)、单克隆抗体的浓度梯度(200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL,200、30、10、6、4、1、0. 2μg/mL,200、28、9、6、4、2、0. 2μg/mL)进行优化,并对优化方法的专属性、准确度、精密度、线性范围、耐用性进行验证。结果最适方法检测条件:铺板密度为5×10~5个/mL,PCSK9蛋白和Dil-LDL浓度分别为20和16μg/mL,单克隆抗体的浓度梯度为200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL。该方法可特异性检测PCSK9单克隆抗体;供试品检测回收率在70%～130%之间;供试品检测结果的相对标准偏差(RSD)均<10%;供试品效价在50%～150%之间时,检测值与理论值呈良好的线性关系,线性拟合方程为y=1. 002 x-0. 006 7,R~2=0. 997 8;耐用性检测活性均在70%～140%范围内。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、准确度和精密度,可用于PCSK9单克隆抗体的生物学活性测定。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
标记建立论文参考文献
[1].高存,宋建军,杜朝.番茄灰叶斑病抗病基因Sm分子标记的建立[J].北方园艺.2019
[2].韩月然,陈妍,杜向瑞,吕品,刘博.前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证[J].中国生物制品学杂志.2019
[3].刘畅,李楚楚,李智洋.基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立[J].临床检验杂志.2019
[4].石童,王陈,陈学军,张瑞华,李丽琴.基于实时无标记细胞分析的Toll样受体-5激动剂抗辐射作用体外评价方法建立[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
[5].罗华灶,李雪,依含,谢君,朱乃硕.荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型[J].中国免疫学杂志.2019
[6].陈琼,王兰芬,唐浩,邓超,马莹雪.普通菜豆SSR分子标记鉴定体系的建立及应用[J].植物遗传资源学报.2019
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[10].周正伟.建立Td-tomato标记KRT18基因的牛胎儿成纤维细胞系及用于iPS诱导的初步研究[D].内蒙古大学.2019