导读:本文包含了体外间接共培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨关节炎,软骨单位,种子细胞,Transwell
体外间接共培养论文文献综述
赵瑞鹏[1]（2017）在《体外间接共培养兔膝关节软骨单位对软骨细胞生物学特性的影响》一文中研究指出目的:通过Transwell间接共培养技术研究兔膝关节软骨单位对软骨细胞生物学特性的影响,为组织工程技术修复损伤软骨选取良好种子细胞提供依据。方法:用不同消化酶将2月龄新西兰兔膝关节软骨分别消化成软骨细胞和软骨单位。按2×105个细胞/孔浓度接种于Transwell双层细胞培养板。实验组:软骨单位接种于上室,软骨细胞接种于下室;对照组:下室接种软骨细胞,上室未接种。分别在2、4、6、8天提取各组Transwell下室软骨细胞进行指标检测。早期凋亡率检测:Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测,TUNEL染色荧光显微镜检测;增殖率检测:PCNA标记流式细胞仪检测,Ed U染色荧光显微镜检测;相关基因相对表达量检测:PCR技术检测AGG、Col-II、MMP-13基因相对表达量。结果:Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测Transwell下室软骨细胞早期凋亡率发现,在实验早期(第2、4天)实验组与对照组Transwell下室软骨细胞早期凋亡率差异不明显,差别没有统计学意义(p>0.05)。在实验第6天、第8天实验组软骨细胞早期凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。TUNEL染色荧光显微镜检测Transwell下室软骨细胞凋亡率发现,实验组和对照组软骨细胞凋亡率没有显着差异,但有实验组软骨细胞凋亡率低于对照组的趋势。PCNA标记流式细胞仪检测Transwell下室软骨细胞增殖率发现,在实验早期(第2、4天)实验组与对照组Transwell下室软骨细胞增值率差异不明显,差别没有统计学意义(p>0.05)。在实验第6天、第8天实验组软骨细胞增殖率明显高于对照组(P<0.05)。Ed U染色荧光显微镜检测Transwell下室软骨细胞增殖率发现,第6天实验组软骨细胞增殖率明显高于对照组(P<0.05)。PCR技术检测Transwell下室软骨细胞相应基因表达量发现,在实验早期(第2、4天)实验组与对照组Transwell下室软骨细胞AGG、Col-II,MMP-13基因表达较为相似,实验组与对照组差异不明显,差别没有统计学意义(P>0.05)。在实验后期AGG、Col-II基因相对表达量在第6天、第8天时实验组明显高于对照组(P<0.05),MMP-13表达量在第8天时对照组明显高于实验组(P<0.05)。结论:1.软骨单位作为关节软骨的基本功能单位,能够更长时间有效抵抗或延缓软骨细胞凋亡、维持软骨细胞增殖及正向调节软骨基质相关物质的基因表达。2.软骨单位有望在组织工程中作为种子细胞用于骨关节炎关节软骨缺损的修复。(本文来源于《山西医科大学》期刊2017-04-20）
邓林红,赵国栋,石晓灏,张治国,王悦[2]（2013）在《体外直接或间接共培养条件下压力经上皮细胞层对气道平滑肌细胞的影响》一文中研究指出通过建立气道上皮细胞与平滑肌细胞体外共培养模型,研究气体压力经上皮细胞对气道平滑肌细胞的作用和机制,为理解真实气道内气体压力作用下气道上皮与平滑肌细胞层之间的信息交流方式及其生理病理效应提供科学依据。首先在体外分别单独培养原代大鼠气道上皮细胞和气道平滑肌细胞,然后以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜为介质建立气道上皮细胞与气道平滑肌细胞直接或间接的共培养模型,同时利用自制的气体增压装置对共培养模型中的上皮细胞层施加0-6kPa的压力。之后,采用倒置显微镜、MTT法和原子力显微镜(AFM)等观测共培养模型中气道平滑肌细胞在不同压力作用下和不同时间点的形态特征、细胞增殖和杨氏模量。无论在直接和间接共培养模型中,经上皮细胞施加外部压力都导致气道平滑肌细胞形态变宽、变扁,促进细胞增殖和硬化。而且在直接共培养模型下,气道平滑肌细胞对外加压力的响应更为明显。外加压力透过气道上皮细胞确实能够影响气道平滑肌细胞的结构与功能,这种影响很可能随着上皮细胞和平滑肌细胞间的距离靠近而增强。这一发现对于揭示不同细胞之间的力学信号传导方式有重要的意义,特别是有助于理解哮喘病中气道上皮细胞挤压与气道平滑肌细胞病理变化的关系及其在哮喘病理机制中的作用。(本文来源于《常州大学学报(自然科学版)》期刊2013年01期）
王梓[3]（2010）在《大鼠骨髓基质干细胞与肌腱细胞在体外间接共培养的实验研究》一文中研究指出目的肌腱病的治疗是临床骨科的难点,骨髓基质干细胞的应用为肌腱病的治疗提供了新思路。骨髓基质干细胞具有多向分化潜能并可以被诱导分化为多种细胞,但由于骨髓基质干细胞的分化机制及在治疗过程中的作用方式尚未明确,限制了其在肌腱病治疗中的应用。本课题通过体外构建骨髓基质干细胞与自体肌腱细胞的间接共培养体系,在单纯间接共培养环境下与间接共培养同时添加自体富血小板血浆进行干预的情况下研究间接共培养环境对骨髓基质干细胞的分化诱导作用,以探索骨髓基质干细胞的分化机制并为骨髓基质干细胞在肌腱病治疗中的应用提供参考。方法应用组织块培养法分离培养大鼠肌腱细胞。体外采集大鼠骨髓基质干细胞并扩增。采集大鼠血液制备富血小板血浆并激活以获取富血小板血浆萃取液。利用孔径0.4μm的细胞共培养嵌盒与6孔板构建培养液相通但细胞不直接接触的间接共培养体系。将生长状态良好的第叁代(P3)大鼠肌腱细胞及第四代大鼠骨髓基质干细胞(P4)用于实验,实验组骨髓基质干细胞被接种于间接共培养体系外室,将同体肌腱细胞种植于内室,另外单独设置一组间接共培养组并加入富血小板血浆萃取液。于间接共培养后第3天、第7天及第10天,分别提取各组间接共培养体系内外室的细胞进行形态学观察,并利用RT-PCR及免疫组化染色技术分别对各组肌腱细胞与骨髓基质干细胞的Ⅰ型胶原与腱调蛋白(TNMD)进行基因层面与蛋白层面的检测,以分析间接共培养环境对骨髓基质干细胞分化与细胞外基质表达的影响。结果应用组织块培养法成功分离出细胞,并经鉴定证实为肌腱细胞。应用肌腱细胞与骨髓基质干细胞间接共培养3天后,间接共培养组的骨髓基质干细胞在RT-PCR检测与免疫组化染色检测中均未表达Ⅰ型胶原与腱调蛋白(TNMD)。间接共培养7天后,间接共培养组干细胞在Ⅰ型胶原的PCR电泳图像中出现模糊条带,同时Ⅰ型胶原免疫组化显示部分细胞呈弱阳性染色,单纯间接共培养组与富血小板血浆干预组之间结果无显着差异。间接共培养组干细胞在各种检测中未出现对腱调蛋白(TNMD)的表达。间接共培养10天后,间接共培养组干细胞在Ⅰ型胶原的PCR电泳图像中出现清晰条带,但亮度低于肌腱细胞对照组。同时Ⅰ型胶原免疫组化显示间接共培养组干细胞呈广泛弱阳性染色,通过测定免疫组化结果的平均光密度进行统计学分析,结果显示间接共培养组骨髓基质干细胞Ⅰ型胶原表达量显着高于干细胞阴性对照组,但低于肌腱细胞对照组。间接共培养组干细胞在腱调蛋白(TNMD)的PCR电泳图像中表现为模糊条带,但腱调蛋白(TNMD)免疫组化染色结果为阴性。结论通过组织块培养法可以在体外成功分离并培养大鼠肌腱细胞。与肌腱细胞间接共培养的培养环境可以诱导骨髓基质干细胞表达Ⅰ型胶原。间接共培养环境下骨髓基质干细胞未出现明显的腱调蛋白表达。根据实验结果,不能认为富血小板血浆的干预对间接共培养环境诱导后骨髓基质干细胞细胞外基质的分泌产生影响。尚不能认为间接共培养环境可以诱导骨髓基质干细胞向肌腱细胞分化。(本文来源于《大连医科大学》期刊2010-05-01）
张蕾[4]（2007）在《机械牵张和间接共培养诱导骨髓间充质干细胞向韧带细胞分化的体外研究》一文中研究指出研究背景韧带在维持关节稳定，协调关节运动中发挥着重要作用。外伤、长期反复劳累过度等会造成韧带损伤，但由于韧带组织血供少，损伤后很难完全愈合，最终造成关节功能严重障碍的病例。韧带损伤也使得很多优秀的运动员就此葬送了运动生涯。现代外科的发展已使人类替换病损韧带成为现实，外科使用过的替换物包括异种韧带、同种异体韧带、自体韧带和人工合成材科等，但这些措施的远期效果都不够理想。组织工程学的诞生使体外构建有活性的生物韧带的研制成为可能，为这一疾病的治疗提供了新途径细胞成分对提高韧带的力学负载的承受力，基因激活和韧带自我更新和调节的能力非常重要。但如何选择理想的种子细胞?种子细胞需要怎样的微环境才能达到预期的功能要求?这些问题都有待进一步研究。本试验的目的是：探索在体外条件下如何诱导BMSCs向韧带成纤维细胞分化。因此，本实验中我们采用与韧带成纤维细胞间接共培养和力学刺激两种方法，研究体外条件下诱导BMSCs向韧带成纤维细胞转化，试图为体外诱导BMSCs向韧带成纤维细胞转化提供可行的方法，为韧带组织工程学种子细胞的研究提供思路。研究方法1．采用Percoll液密度梯度离心法和传代贴壁筛选法相结合分离获得骨髓间充质细胞，建立大鼠BMSCs(rBMSCs)和人BMSCs(hBMSCs)体外培养的方法；通过形态学方法与细胞表面特异抗原流式细胞术检测方法，对在体外所培养的rBMSCs和hBMSCs进行鉴定；采用体外诱导rBMSCs和hBMSCs向成骨细胞和成脂细胞分化的方法，对BMSCs的干细胞生物学功能进行鉴定。2．实时荧光定量PCR检测第一代到第六代大鼠BMSCsⅠ型胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白和韧粘素-C mRNA的表达。3．将大鼠BMSCs和大鼠韧带成纤维细胞间接共培养3、6、12天，用实时荧光定量PCR检测，间接共培养后BMSCs叁种韧带特性蛋白(Ⅰ型胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白和韧粘素-C)的mRNA表达；竞争放免法和免疫组化的方法，检测细胞这叁种蛋白合成。4．对大鼠BMSCs施以10％，1赫兹的周期性牵张刺激不同时段后，分析细胞的变形和重排；并用实时荧光定量PCR检测牵张不同时间段后，其Ⅰ型、Ⅲ型胶原和韧粘素-C mRNA的表达；用竞争放免法和免疫组化，检测细胞这叁种蛋白合成；激光共聚焦显微镜观察力学刺激对细胞骨架的影响。实验结果1．成功获得了rBMSCs和hBMSCs两种干细胞。我们获得的细胞具有干细胞的形态学特征(核大浆少)；细胞表面特异性抗原鉴定(rBMSCs CD44、CD90表达阳性而CD34、CD45表达阴性，hBMSCs CD44表达阳性CD14、CD45表达阴性)，且这些特征在第一代到第六代的细胞中稳定；rBMSCs和hBMSCs这两种细胞具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力。综合上述叁个特点，我们认为实验中分离培养的细胞为骨髓间充质干细胞。2．Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和韧粘素-C mRNA在第一代到第六代大鼠BMSCs中均稳定表达。3．间接共培养6天，BMSCsⅠ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达分别是对照组的2.0和2.2倍，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA与内参照GAPDH的相对表达量在间接共培养6天组分别为：3.9±0.2和1.9±0.2，对照组分别为：1.9±0.3和0.8±0.1，间接共培养组与对照组相比有统计学差异(P＜0.05)而韧粘素-C的表达无明显改变。间接共培养12天，Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白含量增加，分别从对照组的12.4±0.8 ng／μg和5.0±0.4 ng／μg增加到间接共培养组的13.6±1.3 ng／μg和5.9±0.5 ng／μg，间接共培养组与对照组相比有统计学差异(P＜0.05)；韧粘素-C mRNA的表达，为对照组的2.0倍，对照组和间接共培养组的相对表达量分别为0.07±0.02和0.14±0.02。4．力学刺激使细胞胞体较对照组变细长，细胞重新定向排列在远离牵张力方向60～80°和100～130°这两个以90°轴对称的区域。力学刺激12小时后，BMSCsⅠ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达与对照组相比增高有显着差异(P＜0.05)；24小时后，两种胶原蛋白的合成有统计学差别。韧粘素-C mRNA的表达在力学作用24h和36h后，分别增高到对照组的2.65±0.03和2.89±0.04倍；细胞骨架在力学刺激作用下亦发生了改变，F-actin随牵张时间增长，含量逐渐减少。结论1．我们分离获得的rBMSCs和hBMSCs细胞具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力，且它们表面特征分子和胶原蛋白，在第一代到第六代的细胞中稳定表达。2．Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和韧粘素-C mRNA在第一代到第六代BMSCs中稳定表达。3．与韧带成纤维细胞间接共培养，可以促进BMSCsⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白和韧粘素-C的合成。4．力学刺激可以促进BMSCs合成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和韧粘素-CmRNA的表达及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成，使细胞重排，细胞骨架发生改变。(本文来源于《四川大学》期刊2007-04-25）
朱伟南,杨志明,李秀群,张敏[5]（2002）在《兔骨膜成骨细胞与肾血管内皮细胞间接共培养的体外实验研究》一文中研究指出目的 探讨兔骨膜成骨细胞 (RPOB)和肾血管内皮细胞 (RRVEC)不同比例下间接共培养对成骨细胞增殖及功能的影响 ,优选细胞间接共培养的适宜比例。方法 取 RPOB和 RRVEC,采用细胞嵌盒培养系统 ,对照组、试验 1、2、3组分别以 RPOB和 RRVEC按 1∶ 0、2∶ 1、1∶ 1和 1∶ 2间接共培养 4天。通过细胞计数、碱性磷酸酶 (AL P)活性测定及 3H-脯氨酸掺入试验观察 RPOB和 RRVCE增殖分化能力及功能状态。结果 试验 1组 RPOB较对照组、试验2、3组增殖活跃 (P<0 .0 5 ) ,且 3H-脯氨酸掺入较高 (P<0 .0 5 ) ;试验 1组 AL P活性较对照组和试验 3组高 (P<0 .0 5 ) ,但与试验 2组无显着差异 (P>0 .0 5 )。结论 RPOB和 RRVEC以 2∶ 1进行间接共培养时 RPOB增殖能力强、功能活跃 ,适宜进一步组织工程研究(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2002年05期）
体外间接共培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过建立气道上皮细胞与平滑肌细胞体外共培养模型,研究气体压力经上皮细胞对气道平滑肌细胞的作用和机制,为理解真实气道内气体压力作用下气道上皮与平滑肌细胞层之间的信息交流方式及其生理病理效应提供科学依据。首先在体外分别单独培养原代大鼠气道上皮细胞和气道平滑肌细胞,然后以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜为介质建立气道上皮细胞与气道平滑肌细胞直接或间接的共培养模型,同时利用自制的气体增压装置对共培养模型中的上皮细胞层施加0-6kPa的压力。之后,采用倒置显微镜、MTT法和原子力显微镜(AFM)等观测共培养模型中气道平滑肌细胞在不同压力作用下和不同时间点的形态特征、细胞增殖和杨氏模量。无论在直接和间接共培养模型中,经上皮细胞施加外部压力都导致气道平滑肌细胞形态变宽、变扁,促进细胞增殖和硬化。而且在直接共培养模型下,气道平滑肌细胞对外加压力的响应更为明显。外加压力透过气道上皮细胞确实能够影响气道平滑肌细胞的结构与功能,这种影响很可能随着上皮细胞和平滑肌细胞间的距离靠近而增强。这一发现对于揭示不同细胞之间的力学信号传导方式有重要的意义,特别是有助于理解哮喘病中气道上皮细胞挤压与气道平滑肌细胞病理变化的关系及其在哮喘病理机制中的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外间接共培养论文参考文献
[1].赵瑞鹏.体外间接共培养兔膝关节软骨单位对软骨细胞生物学特性的影响[D].山西医科大学.2017
[2].邓林红,赵国栋,石晓灏,张治国,王悦.体外直接或间接共培养条件下压力经上皮细胞层对气道平滑肌细胞的影响[J].常州大学学报(自然科学版).2013
[3].王梓.大鼠骨髓基质干细胞与肌腱细胞在体外间接共培养的实验研究[D].大连医科大学.2010
[4].张蕾.机械牵张和间接共培养诱导骨髓间充质干细胞向韧带细胞分化的体外研究[D].四川大学.2007
[5].朱伟南,杨志明,李秀群,张敏.兔骨膜成骨细胞与肾血管内皮细胞间接共培养的体外实验研究[J].中国修复重建外科杂志.2002