卞立晴:阿魏酸己酯对单增李斯特菌的抑菌活性及亚细胞机理研究论文

卞立晴:阿魏酸己酯对单增李斯特菌的抑菌活性及亚细胞机理研究论文

本文主要研究内容

作者卞立晴(2019)在《阿魏酸己酯对单增李斯特菌的抑菌活性及亚细胞机理研究》一文中研究指出:阿魏酸(FA)是一种可再生的酚类芳香化合物,广泛存在于当归、阿魏、升麻等中草药中。FA分子中的酚羟基和C=C结构使其具有普遍的生物活性和药理作用,可用于抗血栓、抗衰老、抗肿瘤、提高人体免疫力等方面,但其烷烃基较短,脂溶性不佳,难以透过生物膜中的脂溶性双分子层,限制了其生物活性和复杂食品体系中的应用。因此本文为了提高阿魏酸的亲脂性,通过化学法和生物法,利用脂肪醇对FA进行共价修饰,提高其亲脂性及生物活性,拓宽其在食品体系中的应用范围,特别是富含油脂类的食品体系中。首先,采用化学法(Knoevenagel法)和生物法(脂肪酶催化法),制备了阿魏酸己酯(FAC6),并通过硅胶柱色谱分离法对FAC6进行分离纯化,再结合核磁共振(1H-NMR、13C-NMR)、二级质谱(MS2)与红外光谱(IR)技术对FAC6进行结构表征与鉴定。其次,研究了 FAC6对常见食源性致病菌单增李斯特菌(L.monocytogenes)的抑菌活性。FAC6对L.monocytogenes 的 MIC 值为0.1mM,MBC值为0.4mM;通过FAC6对L.monocytoge es的时间-杀灭动力曲线与生长曲线测定分析,发现FAC6的抑制作用具有浓度和时间依赖性,且随着时间的延长,L.monocytogenes的自溶活性逐渐增强。进一步对FAC6对L.monocytogenes抑菌的亚细胞机理进行了探讨,即通过FAC6对L.monocytogenes细胞膜的影响、膜蛋白的影响、与DAN的相互作用三个方面进行了研究。对细胞膜的影响,PI摄取量和胞内大分子蛋白质、核酸的泄漏量实验结果表明,FAC6显著改变了L.monocytogenes细胞膜的完整性和通透性;FAC6预处理使细胞膜表面ζ-电位表现出超极化现象;通过扫描电子显微镜(SEM)观察发现FAC6作用后的L.monocytogenes细胞壁局部消失、细胞膜表面形成孔洞,细胞裂解;观察透射电子显微镜(TEM)图可发现FAC6作用后的细胞表面出现破裂,细胞内部细胞质流失。以上系列结果说明,表明FAC6使L.monocytogenes的细胞膜受到了损伤。对蛋白质的影响,FAC6与L.monocytogenes膜蛋白作用6 h后,在SDS-PAGE电泳图中发现其蛋白条带出现颜色变浅、加深、甚至部分条带消失以及新条带生成的现象,表明FAC6对膜蛋白的成份产生了影响;在荧光光谱分析中发现FAC6对细胞膜表面的苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)残基具有猝灭作用,并伴随红移现象,说明FAC6使氨基酸残基的微环境更加亲水,改变了膜蛋白的构象。在DNA分子水平上,FAC6与基因组DNA相互作用(采用紫外-可见吸收光谱法、荧光光谱分析、熔点(Tm)值和分子对接(molecular docking))的研究结果表明FAC6与DNA是通过凹槽模式结合作用的。最后,测定了 0.1 mM FAC6在鲟鱼鱼子酱贮藏过程中对接种L.monocytogenes菌落总数的影响,结果表明FAC6能显著抑制贮藏过程中鳄鱼鱼子酱中L.monocytogenes的生长,延长鱼子酱的货架储存期。

Abstract

a wei suan (FA)shi yi chong ke zai sheng de fen lei fang xiang hua ge wu ,an fan cun zai yu dang gui 、a wei 、sheng ma deng zhong cao yao zhong 。FAfen zi zhong de fen qiang ji he C=Cjie gou shi ji ju you pu bian de sheng wu huo xing he yao li zuo yong ,ke yong yu kang xie shuan 、kang cui lao 、kang zhong liu 、di gao ren ti mian yi li deng fang mian ,dan ji wan ting ji jiao duan ,zhi rong xing bu jia ,nan yi tou guo sheng wu mo zhong de zhi rong xing shuang fen zi ceng ,xian zhi le ji sheng wu huo xing he fu za shi pin ti ji zhong de ying yong 。yin ci ben wen wei le di gao a wei suan de qin zhi xing ,tong guo hua xue fa he sheng wu fa ,li yong zhi fang chun dui FAjin hang gong jia xiu shi ,di gao ji qin zhi xing ji sheng wu huo xing ,ta kuan ji zai shi pin ti ji zhong de ying yong fan wei ,te bie shi fu han you zhi lei de shi pin ti ji zhong 。shou xian ,cai yong hua xue fa (Knoevenagelfa )he sheng wu fa (zhi fang mei cui hua fa ),zhi bei le a wei suan ji zhi (FAC6),bing tong guo gui jiao zhu se pu fen li fa dui FAC6jin hang fen li chun hua ,zai jie ge he ci gong zhen (1H-NMR、13C-NMR)、er ji zhi pu (MS2)yu gong wai guang pu (IR)ji shu dui FAC6jin hang jie gou biao zheng yu jian ding 。ji ci ,yan jiu le FAC6dui chang jian shi yuan xing zhi bing jun chan zeng li si te jun (L.monocytogenes)de yi jun huo xing 。FAC6dui L.monocytogenes de MIC zhi wei 0.1mM,MBCzhi wei 0.4mM;tong guo FAC6dui L.monocytoge esde shi jian -sha mie dong li qu xian yu sheng chang qu xian ce ding fen xi ,fa xian FAC6de yi zhi zuo yong ju you nong du he shi jian yi lai xing ,ju sui zhao shi jian de yan chang ,L.monocytogenesde zi rong huo xing zhu jian zeng jiang 。jin yi bu dui FAC6dui L.monocytogenesyi jun de ya xi bao ji li jin hang le tan tao ,ji tong guo FAC6dui L.monocytogenesxi bao mo de ying xiang 、mo dan bai de ying xiang 、yu DANde xiang hu zuo yong san ge fang mian jin hang le yan jiu 。dui xi bao mo de ying xiang ,PIshe qu liang he bao nei da fen zi dan bai zhi 、he suan de xie lou liang shi yan jie guo biao ming ,FAC6xian zhe gai bian le L.monocytogenesxi bao mo de wan zheng xing he tong tou xing ;FAC6yu chu li shi xi bao mo biao mian ζ-dian wei biao xian chu chao ji hua xian xiang ;tong guo sao miao dian zi xian wei jing (SEM)guan cha fa xian FAC6zuo yong hou de L.monocytogenesxi bao bi ju bu xiao shi 、xi bao mo biao mian xing cheng kong dong ,xi bao lie jie ;guan cha tou she dian zi xian wei jing (TEM)tu ke fa xian FAC6zuo yong hou de xi bao biao mian chu xian po lie ,xi bao nei bu xi bao zhi liu shi 。yi shang ji lie jie guo shui ming ,biao ming FAC6shi L.monocytogenesde xi bao mo shou dao le sun shang 。dui dan bai zhi de ying xiang ,FAC6yu L.monocytogenesmo dan bai zuo yong 6 hhou ,zai SDS-PAGEdian yong tu zhong fa xian ji dan bai tiao dai chu xian yan se bian jian 、jia shen 、shen zhi bu fen tiao dai xiao shi yi ji xin tiao dai sheng cheng de xian xiang ,biao ming FAC6dui mo dan bai de cheng fen chan sheng le ying xiang ;zai ying guang guang pu fen xi zhong fa xian FAC6dui xi bao mo biao mian de ben bing an suan (Phe)、se an suan (Trp)、lao an suan (Tyr)can ji ju you cu mie zuo yong ,bing ban sui gong yi xian xiang ,shui ming FAC6shi an ji suan can ji de wei huan jing geng jia qin shui ,gai bian le mo dan bai de gou xiang 。zai DNAfen zi shui ping shang ,FAC6yu ji yin zu DNAxiang hu zuo yong (cai yong zi wai -ke jian xi shou guang pu fa 、ying guang guang pu fen xi 、rong dian (Tm)zhi he fen zi dui jie (molecular docking))de yan jiu jie guo biao ming FAC6yu DNAshi tong guo ao cao mo shi jie ge zuo yong de 。zui hou ,ce ding le 0.1 mM FAC6zai xun yu yu zi jiang zhu cang guo cheng zhong dui jie chong L.monocytogenesjun la zong shu de ying xiang ,jie guo biao ming FAC6neng xian zhe yi zhi zhu cang guo cheng zhong e yu yu zi jiang zhong L.monocytogenesde sheng chang ,yan chang yu zi jiang de huo jia chu cun ji 。

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  • 论文详细介绍

    论文作者分别是来自浙江工商大学的卞立晴,发表于刊物浙江工商大学2019-06-06论文,是一篇关于阿魏酸己酯论文,单增李斯特菌论文,抑菌活性论文,抑菌机理论文,鱼子酱论文,浙江工商大学2019-06-06论文的文章。本文可供学术参考使用,各位学者可以免费参考阅读下载,文章观点不代表本站观点,资料来自浙江工商大学2019-06-06论文网站,若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权,请联系我们删除。

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