导读:本文包含了鸡氨肽酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:IBV,生物淘选,特异性,噬菌体
鸡氨肽酶论文文献综述
孙晓琦,李兰兰,潘龙,李伟群,陈慧杰[1]（2019）在《鸡氨肽酶N噬菌体高亲和配体筛选及其抑制IBV感染研究》一文中研究指出研究目的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为鸡传染性支气管炎(IB)的病原,属冠状病毒科冠状病毒属。氨肽酶N(APN)是细胞表面的一种金属糖蛋白,是大多数I型和II型冠状病毒的细胞受体。在之前的研究中,我们发现IBV可以与天然和原核表达的鸡APN(g APN)蛋白结合。那么,阻断g APN是否能够抑制IBV感染将成为一个有意义的研究方向。噬菌体展示技术是一种可利用生物淘选,获得靶蛋白的亲和配体的生物试验技术。本试验以原核重组蛋白p ET-g APN为靶蛋白,利用噬菌体展示技术,筛选出其高亲和性噬菌体,并合成其特异性十二肽序列,分别在体内和体外两种条件下检测该亲和配体的抗病毒活性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
李广兴,郭德启,王雪,葛旭影,任玉东[2]（2015）在《稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系构建及其对传染性支气管炎病毒感染的影响》一文中研究指出为研究鸡氨肽酶N(Chicken aminopeptidase N,c APN)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染细胞过程中作用,构建稳定表达c APN的MDCK细胞系。将重组质粒pc DNA3.1-c APN通过脂质体转染到MDCK细胞中并利用G418筛选,克隆纯化获得稳定表达c APN的MDCK细胞系。通过RT-PCR和间接免疫荧光检测表明c APN在MDCK细胞中持续稳定表达。IBV可以感染稳定表达c APN的MDCK细胞并连续传代,该细胞系接种IBV阳性样品24 h即可产生典型细胞融合病变,而对照MDCK细胞接种后没有细胞病变出现。结果表明c APN在介导IBV感染宿主细胞过程中发挥重要作用。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2015年10期）
郭德启[3]（2015）在《稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系建立及其初步鉴定》一文中研究指出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是冠状病毒科(Coronaviridae)的单股正链RNA病毒。临床上传染性支气管炎(IB)可以导致患病鸡产蛋量下降,肉鸡的生长速度减慢,给养殖业造成重大的经济损失。IBV不同血清型的毒株众多,在同一地区可能同时出现多个血清型的毒株,且他们之间交叉保护效果较低,给IB的综合防治带来巨大的困难。IB致病机制的阐明,尤其是对IBV感染宿主细胞过程的研究是该病防治的基础,有研究表明鸡氨肽酶N(c APN)在IBV感染宿主细胞的过程中发挥重要作用。为了进一步研究c APN的生物学功能及其对IBV感染宿主细胞的影响,我们开展了稳定表达c APN的MDCK细胞系建立及其初步特性的研究。本文构建了p ET30a-c APN原核重组质粒,鉴定正确的质粒转化Rosetta宿主菌中进行诱导表达,SDS-PAGE表明重组表达蛋白分子量为113Ku,且以包涵体的形式表达。重组蛋白纯化和复性后作为免疫原免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体。为了进行c APN稳定表达细胞系的筛选,将pc DNA3.1-c APN转染MDCK细胞,通过G418筛选和多次克隆筛选出稳定表达cAPN基因的细胞株,RT-PCR和间接免疫荧光检测表明c APN在获得的MDCK细胞中可以稳定表达,并命名为MDCK-c APN。病毒感染实验表明IBV可以感染MDCK-c APN细胞,并且在接种后24 h后出现了典型的细胞病变,而对照MDCK细胞不能感染IBV,说明cAPN在IBV感染细胞的过程中可能作为细胞受体发挥着重要的生物学功能。总之,本实验筛选成功稳定表达cAPN的MDCK-c APN细胞系,为进一步研究IB致病机理及在IBV毒株的分离和生物学特性鉴定方面奠定了基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2015-06-01）
李广兴,李兰兰,潘龙,洪琴,张恒[4]（2015）在《鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究》一文中研究指出试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2015年02期）
李兰兰[5]（2014）在《鸡氨肽酶N蛋白亲和肽的筛选与生物学活性鉴定》一文中研究指出病毒受体是指存在于宿主细胞表面的,能够被病毒的吸附性蛋白识别并且与之结合,进而引起病毒感染动物的分子复合物。氨肽酶N(APN)是位于细胞表面的一种锌离子依赖的金属糖蛋向,是大多数Ⅰ型和Ⅱ型冠状病毒发生感染时的细胞受体。鸡传染性支气管炎病毒(IBV)属于Ⅲ型冠状病毒中的一种禽类冠状病毒,在进化上被认为是处于Ⅰ型和Ⅱ刑冠状病毒之间,目前IBV发生感染时的功能性细胞受体还没有完全被确定,在IBV的功能性细胞受体研究中,鸡氨肽酶N的研究最为广泛,目前IBV侵染的宿主大多限于禽类,因此更详细深入的探讨禽类APN是否是IBV感染的功能性受体是非常具有研究价值的。本实验从18日龄鸡的肾脏中提取了其总RNA,利用设计的分段引物采用RT-PCR方法对gAPN基因进行了分段克隆,然后利用SOE-PCR将各个片段连接构成了大小为2906bp的gAPN全长基因,将全长基因连接到原核表达载体pET30a (+)中构建原核表达质粒pET-gAPN,将其转化到E.Coli Rosetta中,诱导得到了大小为113kDa的重组蛋白,以重组蛋白pET-gAPN免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测多抗血清的效价高达215,以原核重组蛋白pET-gAPN和制备的多克隆抗血清进行、Vestern blot试验,结果此多抗能与pET-gAPN蛋白发生特异性反应。此外,从18日龄鸡肾组织分离到天然gAPN蛋向,Western blot检测发现多抗能与天然蛋白发生特异性结合。为了进一步检测多抗血清活性,将真核质粒pcDNA-gAPN转染到Hela细胞上,间接免疫荧光检测多抗血清与细胞上表达的蛋白有很好的反应性,说明制备的多克隆抗体具有良好的生物学活性。以表达的原核重组蛋白pET-gAPN为靶蛋白,利用噬菌体展示技术,以噬菌体十二肽库对gAPN蛋白进行四轮生物淘选,对竞争ELISA检测中阳性的单克隆进行核苷酸序列测定,推导出它们的多肽序列,选取同源性较好的两条多肽序列合成多肽HDYLYYTFTGNP (H)、 TKFSPPSFWYLH (T)。间接ELISA结果显示,所合成两种多肽具有与S蛋白多抗血清特异性结合的特性。病毒体外抑制实验表明H和T多肽对IBV在鸡胚肾细胞上的复制具有一定的抑制作用。用亲和多肽所对应的噬菌体培养物免疫鸡检测其体内抗病毒活性,结果表明多肽H、T免疫组鸡体内产生抗IBV S蛋白特异性抗体,且具有体外中和IBV的能力,荧光定量PCR检测证明免疫组雏鸡气管、肺脏和肾脏内IBV的含量有一定程度的减少,说明其有一定的抑制病毒在鸡体内繁殖的能力。本实验为进一步研究鸡APN是否能作为IBV感染的功能性受体提供了依据,也为研究开发相关的多肽疫苗提供了一些理论基础和研究依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2014-06-01）
明晓波,张颖,刘澜澜,魏萍[6]（2010）在《鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变》一文中研究指出构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5代,用间接免疫荧光检测各代次病毒感染转染BHK-21细胞,可见随着代次增加,感染程度增加;病毒毒力EID50逐渐增加,第5代时原病毒毒力基本恢复,半定量RT-PCR检测各代次病毒也可见病毒含量逐渐增加。结果表明,鸡氨肽酶N转染至IBV非易感的BHK-21细胞系后,BHK-21细胞变得对IBV敏感,鸡氨肽酶N可能用作IBV感染的细胞受体。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2010年06期）
尹鑫,刘澜澜,贾莹,明晓波,张颖[7]（2010）在《鸡氨肽酶N的高效可溶性表达及生物学功能分析》一文中研究指出本研究旨为克隆鸡氨肽酶N(chAPN)基因,高效表达可溶性目的蛋白,并测定其生物学功能。应用RT-PCR方法从鸡胚肾细胞中克隆chAPN的基因片段,经测序鉴定后再克隆至原核表达载体pCOLD-TF,构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-chAPN,在大肠杆菌BL21(DE3)中经不同条件诱导表达目的蛋白;利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;Leu-PNA酶促反应和ELISA等方法检测目的蛋白生物学功能。结果显示,重组质粒pCOLD-TF-chAPN在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;酶促反应及ELISA结果显示该蛋白具有酶活性,可结合传染性支气管炎病毒(IBV),并表现为剂量依赖性。这为今后研究chAPN的酶活性、作为IBV受体及抗病毒功能奠定了实验基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2010年04期）
赖庆安,刘树滔,卢菀华,陈莉,Toshihide,NISHIMURA[8]（2009）在《鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析》一文中研究指出氨肽酶H(Aminopeptidase H,APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了APH的全基因序列,并把该序列亚克隆到载体pET22b(+)上,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),构建了APH的表达菌株。该菌株经IPTG诱导,在SDS-PAGE上明显出现一条与天然APH理论分子量一致的新增蛋白带,该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深;6h基本达到平衡,此时重组蛋白占总蛋白的16.7%,表达水平高达94.7 mg/L。对表达产物进行了活性检测、纯化和酶学性质分析,发现重组蛋白在亚基构成,热稳定性,最适pH等方面与天然APH基本相同,据此可以确认表达产物确实是APH,发酵液总活力达到1636u/L。这些结果为APH的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第六届年会暨第五届东西方食品业高层论坛论文摘要集》期刊2009-11-11）
明晓波,张颖,尹鑫,魏萍,王宗尉[9]（2009）在《鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达》一文中研究指出本实验从鸡胚肾组织中克隆到表达鸡氨肽酶N的全长基因,将扩增到的全长鸡氨肽酶N基因连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌感受态TG1,提取重组质粒,经PCR及酶切鉴定阳性后送测序,结果与公布序列符合率达99.48%,与预期表达蛋白符合率99.28%,构建鸡氨肽酶N与原核表达载体pET-32a(+)的重组载体,经鉴定无任何突变,转化大肠杆菌感受态Rosetta G,待菌体生长至A600为0.4～0.6时用1.5 mM IPTG诱导5 h获得最大蛋白表达量,切胶纯化目的蛋白免疫新西兰纯系雌兔,制备得到多克隆抗血清.(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十叁次学术研讨会论文集（下册）》期刊2009-09-01）
刘树滔,赖庆安,Toshihide,Nishimura,饶平凡[10]（2008）在《大肠杆菌表达的重组鸡氨肽酶H的表征(英文)》一文中研究指出Background: Chicken Aminopeptidase H (APH) is an peptidase in the chicken sckeletal muscle, partially in charge of the production of flavor peptides and free amino acids after death stiffening. In this work, the gene of APH from chicken liver was expressed in E coli Rosetta(DE3),(本文来源于《华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编》期刊2008-08-01）
鸡氨肽酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为研究鸡氨肽酶N(Chicken aminopeptidase N,c APN)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染细胞过程中作用,构建稳定表达c APN的MDCK细胞系。将重组质粒pc DNA3.1-c APN通过脂质体转染到MDCK细胞中并利用G418筛选,克隆纯化获得稳定表达c APN的MDCK细胞系。通过RT-PCR和间接免疫荧光检测表明c APN在MDCK细胞中持续稳定表达。IBV可以感染稳定表达c APN的MDCK细胞并连续传代,该细胞系接种IBV阳性样品24 h即可产生典型细胞融合病变,而对照MDCK细胞接种后没有细胞病变出现。结果表明c APN在介导IBV感染宿主细胞过程中发挥重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
鸡氨肽酶论文参考文献
[1].孙晓琦,李兰兰,潘龙,李伟群,陈慧杰.鸡氨肽酶N噬菌体高亲和配体筛选及其抑制IBV感染研究[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[2].李广兴,郭德启,王雪,葛旭影,任玉东.稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系构建及其对传染性支气管炎病毒感染的影响[J].东北农业大学学报.2015
[3].郭德启.稳定表达鸡氨肽酶N的MDCK细胞系建立及其初步鉴定[D].东北农业大学.2015
[4].李广兴,李兰兰,潘龙,洪琴,张恒.鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究[J].东北农业大学学报.2015
[5].李兰兰.鸡氨肽酶N蛋白亲和肽的筛选与生物学活性鉴定[D].东北农业大学.2014
[6].明晓波,张颖,刘澜澜,魏萍.鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变[J].中国兽医学报.2010
[7].尹鑫,刘澜澜,贾莹,明晓波,张颖.鸡氨肽酶N的高效可溶性表达及生物学功能分析[J].生物工程学报.2010
[8].赖庆安,刘树滔,卢菀华,陈莉,Toshihide,NISHIMURA.鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析[C].中国食品科学技术学会第六届年会暨第五届东西方食品业高层论坛论文摘要集.2009
[9].明晓波,张颖,尹鑫,魏萍,王宗尉.鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十叁次学术研讨会论文集（下册）.2009
[10].刘树滔,赖庆安,Toshihide,Nishimura,饶平凡.大肠杆菌表达的重组鸡氨肽酶H的表征(英文)[C].华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编.2008