导读:本文包含了减毒突变体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肠炎沙门氏菌,转座子,突变体库,减毒菌株
减毒突变体论文文献综述
吕爽,朱婷,王秀梅,刘慧芳,司微[1]（2013）在《鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选》一文中研究指出为筛选减毒肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对S.enteritidis SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌E.coliβ2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建了SM6的随机转座突变体库。其中包含5个子库,共计获得364株突变体,经PCR鉴定表明转座子均插入SM6株的基因组中。通过Caco-2细胞侵袭试验筛选S.enteritidis侵袭力减弱并在细胞内增殖受到抑制的减毒突变株,经初筛及验证最终获得3株稳定减毒菌株,为进一步研究减毒菌株突变毒力基因的定位及SM6株的侵袭及感染机制奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2013年03期）
王思雄[2]（2008）在《葡萄球菌肠毒素超抗原抑制性肽与减毒突变体的构建和功能研究》一文中研究指出超抗原是一种具有强大免疫刺激功能的新型蛋白质抗原,业已证明超抗原参与多种疾病的发病过程。金黄色葡萄球菌(金葡菌)肠毒素超抗原家族涉及的疾病谱非常广泛,并且也是一种失能型的生物战剂,一直是比较活跃的研究领域。已取得的研究进展提示我们,目前针对金葡菌肠毒素超抗原所致疾病除了临床对症支持治疗外,尚无很好的针对超抗原的治疗手段,因此,从其超抗原特性入手,寻找有效控制肠毒素毒性作用的方法,可以进一步为相关疾病的防治研究和生物武器防护提供新的手段。SEA、SEB、SEC和SED是常见的毒性作用较强的金葡菌肠毒素,国内外对其研究内容大多数是利用其超抗原免疫活性进行抗肿瘤临床治疗等,针对超抗原的活性本身来研究超抗原相关疾病的防治手段较少。目前的研究主要是针对肠毒素的免疫识别区域设计小分子多肽和构建并筛选肠毒素的减毒突变体,从这两方面研究抑制肠毒素超抗原的活性的手段。但是大多数研究都是对单一种类的肠毒素研究,针对多种肠毒素的广谱抑制性手段的研究很少。基于上述问题,我们针对葡萄球菌肠毒素同源序列设计了9条小分子多肽,通过细胞模型筛选具有广谱抑制性的多肽分子,并运用动物模型检测筛选到的抑制性多肽对动物的保护作用,研究抑制性肽与MHCⅡ类分子的亲和力,预测抑制性肽的空间结构,探讨其广谱抑制活性的机制;同时构建了SED减毒突变体,并检测了该突变体的促人PBMC增殖活性、MHCⅡ类分子结合活性和TCRVβ特异性。主要研究内容和结果包括以下几方面:1.抑制性多肽的设计和合成,对金葡菌肠毒素家族的序列进行比较,选择具有同源性的保守序列设计多肽,共设计了9条多肽。2.建立人外周血单个核细胞的细胞模型,检测9条合成多肽对超抗原的抑制效应。主要从多肽对SEs刺激人PBMC的增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β的抑制效应进行检测,筛选具有广谱抑制性效应的多肽,试验结果显示多肽P72对SEA、SEB和SEC超抗原活性具有明显抑制作用,其他8条多肽对SEs的抑制作用不明显。确证试验显示P72对PHA、ConA的促PBMC增殖活性无抑制作用。3.建立8周龄雌性BALB/c小鼠感染性休克的动物模型,以脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)致敏小鼠,再用不同剂量的SE进行攻击,获得了此条件下SEA、SEB和SEC的最低致死剂量。利用该动物模型检测多肽P72对SEA、SEB和SEC攻击小鼠的保护效果,结果显示P72对SEA、SEB和SEC致休克效应具有显着的保护作用。4.竞争结合实验检测抑制性多肽P72与MHCⅡ类分子的结合活性,结果显示多肽P72不能与SEA、SEB和SEC有效竞争结合Raji细胞上的MHCⅡ类分子,提示P72可能不是通过与MHCⅡ类分子结合产生的抑制活性。5.对抑制性多肽P72的空间结构进行预测,将P72在SEA、SEB、SEC的同源序列的空间结构进行对比,结果显示3种超抗原与P72同源的序列在空间结构上具有高度的相似性。6.构建了SEDN23A/H26R突变体。并对突变体蛋白进行纯化、定量和免疫印迹分析。检测了SEDN23A/H26R突变体促T淋巴细胞增殖的活性,结果显示其促增殖活性比SED显着降低;以竞争实验检测SEDN23A/H26R突变体与MHCⅡ类分子的结合活性,并用流式细胞仪检测突变体TCRVβ特异性变化。结果:突变体SEDN23A/H26R与MHCⅡ类分子的亲合力未发生变化,但刺激人TCRVβ5+T细胞水平显着降低。综上,本研究设计并筛选到了1条广谱抑制性多肽P72,P72能够在体外和体内显着抑制SEA、SEB、SEC的超抗原活性,证实了P72可能不是通过与MHCⅡ类分子结合对SEs产生的抑制作用;发现N23、H26位氨基酸残基可能是SED与人TCRVβ5结合的关键位点;研究结果丰富了对SEs超抗原免疫识别机制的认识,为细菌性超抗原相关疾病的防治以及生物武器防护技术的研究提供了新的手段。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2008-11-01）
Jian,Ma~(1,2),Liping,Zhao~1,Shuqin,Zhang~1,Wei,Guo~1,Ping,Zhang~1,Liang,Guo~1,Xiangang,Kong~1,Jianhua,Zhou~(1*),1:State,key,Laboratory,of,Veterinary,Biotechnology,Harbin,Veterinary,Research,Institute,Chinese,Academy,of,Agricultural,Sciences,Harbin,150001[3]（2007）在《从中国马传染性贫血病毒减毒疫苗FDDV毒株中鉴定出跨膜蛋白(TM或gp45)的截断突变体(英文)》一文中研究指出The fetal donkey dermal cell-adapted viral strains (FDDV) of Chinese equine infectious anemia virus (EIAV) are attenuated vaccine strains,which induce stronger protective immune response to EIAV virulent strains than their parental strain,the(本文来源于《第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会论文集》期刊2007-10-01）
汪海鹏,张雪莲,曹健[4]（2006）在《结核分枝杆菌活性减毒突变体——新型抗结核分枝杆菌候选疫苗》一文中研究指出结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是已经发现的最为重要的传染性病原体之一。其影响到了世界人口的1/3,导致每年300万人死亡;尽管有效的化疗和适度保护性疫苗的使用,但由于艾滋病的流行和MTB耐多药菌株的出现,结核(本文来源于《中国感染控制杂志》期刊2006年04期）
柳燕[5]（2005）在《志贺菌减毒疫苗株表达的4型产肠毒素性大肠杆菌菌毛和不耐热肠毒素突变体诱导的免疫应答》一文中研究指出志贺菌和产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)是引起245 7T株的gua BA突变株 )为载体株 ,以 p GA2质粒为 ETEC基因的表达载体。将编码 4型不同 ETEC菌毛 ( CFA/ 、CS2、CS3、CS4)和脱毒的人 ETEC不耐热肠毒素 ((本文来源于《国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)》期刊2005年01期）
减毒突变体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
超抗原是一种具有强大免疫刺激功能的新型蛋白质抗原,业已证明超抗原参与多种疾病的发病过程。金黄色葡萄球菌(金葡菌)肠毒素超抗原家族涉及的疾病谱非常广泛,并且也是一种失能型的生物战剂,一直是比较活跃的研究领域。已取得的研究进展提示我们,目前针对金葡菌肠毒素超抗原所致疾病除了临床对症支持治疗外,尚无很好的针对超抗原的治疗手段,因此,从其超抗原特性入手,寻找有效控制肠毒素毒性作用的方法,可以进一步为相关疾病的防治研究和生物武器防护提供新的手段。SEA、SEB、SEC和SED是常见的毒性作用较强的金葡菌肠毒素,国内外对其研究内容大多数是利用其超抗原免疫活性进行抗肿瘤临床治疗等,针对超抗原的活性本身来研究超抗原相关疾病的防治手段较少。目前的研究主要是针对肠毒素的免疫识别区域设计小分子多肽和构建并筛选肠毒素的减毒突变体,从这两方面研究抑制肠毒素超抗原的活性的手段。但是大多数研究都是对单一种类的肠毒素研究,针对多种肠毒素的广谱抑制性手段的研究很少。基于上述问题,我们针对葡萄球菌肠毒素同源序列设计了9条小分子多肽,通过细胞模型筛选具有广谱抑制性的多肽分子,并运用动物模型检测筛选到的抑制性多肽对动物的保护作用,研究抑制性肽与MHCⅡ类分子的亲和力,预测抑制性肽的空间结构,探讨其广谱抑制活性的机制;同时构建了SED减毒突变体,并检测了该突变体的促人PBMC增殖活性、MHCⅡ类分子结合活性和TCRVβ特异性。主要研究内容和结果包括以下几方面:1.抑制性多肽的设计和合成,对金葡菌肠毒素家族的序列进行比较,选择具有同源性的保守序列设计多肽,共设计了9条多肽。2.建立人外周血单个核细胞的细胞模型,检测9条合成多肽对超抗原的抑制效应。主要从多肽对SEs刺激人PBMC的增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-β的抑制效应进行检测,筛选具有广谱抑制性效应的多肽,试验结果显示多肽P72对SEA、SEB和SEC超抗原活性具有明显抑制作用,其他8条多肽对SEs的抑制作用不明显。确证试验显示P72对PHA、ConA的促PBMC增殖活性无抑制作用。3.建立8周龄雌性BALB/c小鼠感染性休克的动物模型,以脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)致敏小鼠,再用不同剂量的SE进行攻击,获得了此条件下SEA、SEB和SEC的最低致死剂量。利用该动物模型检测多肽P72对SEA、SEB和SEC攻击小鼠的保护效果,结果显示P72对SEA、SEB和SEC致休克效应具有显着的保护作用。4.竞争结合实验检测抑制性多肽P72与MHCⅡ类分子的结合活性,结果显示多肽P72不能与SEA、SEB和SEC有效竞争结合Raji细胞上的MHCⅡ类分子,提示P72可能不是通过与MHCⅡ类分子结合产生的抑制活性。5.对抑制性多肽P72的空间结构进行预测,将P72在SEA、SEB、SEC的同源序列的空间结构进行对比,结果显示3种超抗原与P72同源的序列在空间结构上具有高度的相似性。6.构建了SEDN23A/H26R突变体。并对突变体蛋白进行纯化、定量和免疫印迹分析。检测了SEDN23A/H26R突变体促T淋巴细胞增殖的活性,结果显示其促增殖活性比SED显着降低;以竞争实验检测SEDN23A/H26R突变体与MHCⅡ类分子的结合活性,并用流式细胞仪检测突变体TCRVβ特异性变化。结果:突变体SEDN23A/H26R与MHCⅡ类分子的亲合力未发生变化,但刺激人TCRVβ5+T细胞水平显着降低。综上,本研究设计并筛选到了1条广谱抑制性多肽P72,P72能够在体外和体内显着抑制SEA、SEB、SEC的超抗原活性,证实了P72可能不是通过与MHCⅡ类分子结合对SEs产生的抑制作用;发现N23、H26位氨基酸残基可能是SED与人TCRVβ5结合的关键位点;研究结果丰富了对SEs超抗原免疫识别机制的认识,为细菌性超抗原相关疾病的防治以及生物武器防护技术的研究提供了新的手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
减毒突变体论文参考文献
[1].吕爽,朱婷,王秀梅,刘慧芳,司微.鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选[J].中国预防兽医学报.2013
[2].王思雄.葡萄球菌肠毒素超抗原抑制性肽与减毒突变体的构建和功能研究[D].第叁军医大学.2008
[3].Jian,Ma~(1,2),Liping,Zhao~1,Shuqin,Zhang~1,Wei,Guo~1,Ping,Zhang~1,Liang,Guo~1,Xiangang,Kong~1,Jianhua,Zhou~(1*),1:State,key,Laboratory,of,Veterinary,Biotechnology,Harbin,Veterinary,Research,Institute,Chinese,Academy,of,Agricultural,Sciences,Harbin,150001.从中国马传染性贫血病毒减毒疫苗FDDV毒株中鉴定出跨膜蛋白(TM或gp45)的截断突变体(英文)[C].第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会论文集.2007
[4].汪海鹏,张雪莲,曹健.结核分枝杆菌活性减毒突变体——新型抗结核分枝杆菌候选疫苗[J].中国感染控制杂志.2006
[5].柳燕.志贺菌减毒疫苗株表达的4型产肠毒素性大肠杆菌菌毛和不耐热肠毒素突变体诱导的免疫应答[J].国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册).2005