导读:本文包含了抗原的克隆与表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:α1-抗胰蛋白酶,基因克隆,基因表达,抗原性鉴定
抗原的克隆与表达论文文献综述
宋帅[1]（2019）在《α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定》一文中研究指出α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)是人体内重要的蛋白酶抑制剂,主要是由肝细胞合成的一种糖蛋白,也能在肠上皮细胞肾实质等肝外组织和某些肿瘤细胞中产生,它能抑制多种蛋白酶与丝氨酸内切肽酶。在电泳中,其迁移位点位于α1蛋白带,因而又被称为α1蛋白酶抑制剂。在多种肺部炎性疾病中,胰蛋白酶-抗胰蛋白酶系统起到关键作用。某些有关α1-抗胰蛋白酶疾病的诊治,尤其α1-抗胰蛋白酶与肝脏疾病,有待进一步研究。在胃癌患者胃液中存在大量的α1-抗胰蛋白酶,其具体原因尚不明确,有待进一步研究。目的:克隆人α1-抗胰蛋白酶基因使其在细胞中表达,进行其抗原性鉴定。方法:(1)表达质粒的构建:以人胚肾细胞系293T的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人α1-AT cDNA序列(1200bp),克隆至载体后酶切鉴定,进行序列分析。(2)融合蛋白的表达与纯化:提取序列正确的重组质粒转入大肠杆菌M_(15)中表达,GST亲和纯化方法纯化上清(过柱法),还原型谷氨酸溶液洗杂蛋白,用PBS(pH7.4)缓冲液洗目的蛋白,分别取10μl过柱前上清、过柱后上清和所得目的蛋白进行SDS-PAGE分析。(3)重组蛋白的抗原性鉴定:免疫印迹(Western blot)法验证目的蛋白是否符合α1-AT的抗原性。结果:基因克隆方法得到人α1-AT基因cDNA,获得的人α1-AT序列与Gene bank文献报道的核苷酸序列一致,Western blot法验证目的蛋白符合α1-AT的免疫学特性。结论:(1)以人胚肾细胞系293T细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR法获得α1-AT基因cDNA,构建人α1-AT的表达载体PQE_(30)-α1-AT,可在大肠杆菌M_(15)中获得高效表达的α1-AT蛋白。(2)采用基因工程技术获得并纯化的人α1-AT蛋白具有同天然α1-AT相同抗原性。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
程凯慧,沈付娆,邹积振,苗自利,解晓莉[2]（2019）在《A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出为构建A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术将不同株的A型口蹄疫病毒抗原表位A-A10-61-VP1(第141～160位氨基酸)、A-A10-61-VP1(第200～212位氨基酸)、A22Iraq-VP1(第136～164位氨基酸)串联,在其间引入合适的linker序列,重组得到pET-28a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。成功构建了A型口蹄疫病毒抗原表位原核表达载体,获得高纯度重组蛋白和含A型口蹄疫病毒抗体的兔抗血清,为A型口蹄疫病毒诊断试剂盒的研发和A型口蹄疫病毒表位多肽疫苗的研究奠定基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年08期）
赵亭亭[3]（2019）在《Zika病毒NS1抗原的原核表达和单克隆抗体的制备》一文中研究指出寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种新发的虫媒传播病毒,属于黄病毒属(Flavivirus)成员,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播。ZIKV感染后80%的成年患者几乎没有任何明显症状,而20%的患者有轻微的症状,通常表现为发热、黄斑皮疹、关节痛、结膜炎、头痛等。ZIKV感染的严重疾病包括先天性小头畸形和神经性格林-巴利综合征等。黄病毒NS1蛋白是7种非结构蛋白中唯一能从感染病人血清中分泌的蛋白。在病毒感染细胞后,NS1能够以可溶的六聚体形式分泌出细胞外,在病毒感染早期即能够在血清中检测到NS1,因此,NS1可作为临床快速诊断病毒早期感染的标志。有研究发现NS1携带的特异性表位会诱导出黄病毒属病毒中无交叉反应的特异性抗体。本研究旨在制备针对ZIKV NS1蛋白的单克隆抗体。以ZIKV的NS1片段为模板进行PCR扩增,连接目的片段和表达载体pET-32a,将其重组作为本实验的表达载体,并用IPTG进行诱导获得重组蛋白。借助蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbence assay,ELISA)鉴定重组蛋白的特异性,实验结果表明NS1蛋白具有良好的免疫反应性。大量表达重组蛋白,经过包涵体清洗、目的蛋白透析复性、His-taq和分子筛层析等方式纯化后,获得了高纯度的重组NS1蛋白。选取周龄在6~8周内的BALB/c雄鼠,将获取的高纯度重组蛋白注射到小鼠皮下,分多个点注射,每只小鼠注射的重组蛋白量为100μg,免疫周期为14天。在小鼠接受免疫前,借助间接ELISA试验观察记录目的抗体在小鼠血清中的效价变化。小鼠接受叁次免疫后取血清十万倍稀释后血清OD_(4 5 0 n m)≥0.5。加强免疫小鼠脾脏,叁天后分离脾脏细胞让其与骨髓瘤细胞SP2/6完成融合,用20%FBS-HAT-DMEM培养基对融合的细胞进行筛选,并使用WB和间接ELISA试验鉴定抗体的特异性,保证最后筛选出的细胞株能正常稳定分泌抗NS1单克隆抗体。本实验成功在大肠埃希菌中表达出纯度较高的重组NS1蛋白,并筛选得到叁株活性较高、免疫反应性明显的单克隆抗体,为后续建立针对NS1蛋白的ELISA检测方法及相关研究提供了基础。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2019-05-01）
刘琼,刘永仕,尚晓敏,李桂玲,姜延龙[4]（2019）在《产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究》一文中研究指出为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,L.plantarum)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac-STa-LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac-STa-LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为12lb。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年01期）
霍海龙,张霞,范俐,赵筱,唐宏涛[5]（2018）在《猪雄性增强抗原1基因MEA1编码区克隆、表达及生物信息学分析》一文中研究指出【目的】克隆猪MEA1基因编码区序列,获得基因表达谱并了解其蛋白质的基本功能。【方法】从GenBank下载猪及近缘物种MEA1序列作为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(BMI)睾丸组织中扩增MEA1基因完全编码序列及部分侧翼序列,对MEA1翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析并构建多物种系统进化树,最后用实时荧光定量PCR技术检测BMI 15个重要组织的MEA1 mRNA转录表达水平。【结果】扩增得到BMI MEA1编码区序列长525 bp,编码174个氨基酸。功能生物信息学分析表明:MEA1含有1个完整的保守结构域,无跨膜螺旋结构,无N端信号肽序列,二级结构以无规卷曲为主,N末端疏水,C末端均亲水,有3类功能活性位点。系统进化分析表明:MEA1基因在进化中高度保守,且与人、长臂猿的亲缘关系最近,符合物种的系统分类地位。多组织相对荧光定量表达分析表明:MEA1基因在睾丸中高表达,在心、肝等其他14个组织中低表达。【结论】为探索BMI MEA1基因在睾丸形成和精子发生过程中的作用及功能奠定基础。(本文来源于《云南农业大学学报(自然科学)》期刊2018年06期）
王彩霞,冯春燕,杜方原,刘丹丹,张永宁[6]（2018）在《非洲猪瘟病毒主要抗原p54-1的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的主要抗原表位及抗原性质,本试验根据GenBank中p54基因序列(登录号:NC_001659.2)设计表达区域特异性引物,PCR扩增后连接表达载体pGEX6p-1构建pGEX6p-1-p54-1原核表达质粒;将该质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,切除GST标签后采用阴离子柱纯化目的蛋白并鉴定;将纯化蛋白与佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫小鼠制备p54-1蛋白多克隆抗体;采用ELISA和Western blotting检测抗体的效价和反应特性。结果显示,重组p54-1融合蛋白以可溶形式表达,切除标签后的纯化蛋白能够与ASFV阳性血清发生反应,而与PRRSV和PCV3不发生反应。利用该蛋白免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能够识别ASFV p54蛋白。表明本研究成功获得了较高纯度的p54-1蛋白,制备的p54-1多克隆抗体具有较高反应性和特异性,为后续非洲猪瘟双抗夹心ELISA检测方法的建立提供依据。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年10期）
冯春燕,王彩霞,杜方原,张永宁,刘丹丹[7]（2019）在《非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒。将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白。将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗。用ELISA、Western blot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定。结果显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000,说明该蛋白有很好的免疫原性。Western blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年06期）
刘韬,陈德芳,段靖,王二龙,王亚军[8]（2018）在《海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测及免疫效果评价》一文中研究指出为检测斑点叉尾鮰源海豚链球菌兼职蛋白(fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10_RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(r FBA),制备了兔抗r FBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,海豚链球菌DX09 fba基因有1个882 bp的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸。生物信息学分析显示,其分子式为C_(1378)H_(2172)N_(368)O_(422)S_8,分子质量为30.9 ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100%;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位。SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47 ku。Western blot分析表明,兔抗r FBA血清能特异性结合菌体蛋白。同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55%,免疫后鱼体抗体水平相对对照组显着升高。本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09 rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值。(本文来源于《水产学报》期刊2018年09期）
杨菊梅,马建忠,潘博,李印武[9]（2018）在《草莓镶脉病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及鉴定》一文中研究指出为实现草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的简单和快速检测,应用生物信息学方法分析了SVBV外壳蛋白的线性抗原表位及其理化性质,以大肠杆菌的优势密码子对所预测的优势抗表原位进行设计并合成,同时进行了最佳异源表达条件优化。结果表明,第218~238位的氨基酸残基序列为SVBV外壳蛋白的优势抗原表位,其编码片段为5-AE。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测结果表明,重组融合蛋白的分子量约为24.8 kD,与其理论分子量20.5 kD基本一致。异源表达优化的结果表明,当IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度为40℃、诱导时间为4 h时,重组融合蛋白的表达量最高,为23.6 mg/L。Western blot结果表明重组融合蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。串联质谱结果表明,5-AE肽段氨基酸残基序列正确。(本文来源于《植物保护学报》期刊2018年03期）
张婕婕,杨自华[10]（2018）在《M2型抗线粒体抗体的靶抗原叁联体克隆表达技术改良》一文中研究指出目的改良构建M2型抗线粒体抗体(AMA-M2)靶基因叁联体重组表达载体技术,建立检测AMA-M2的酶联免疫吸附法(ELISA)并进行评价。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增基因叁联体BPO,构建表达载体pGEX-4T-1-BPO,转入大肠杆菌BL21表达,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到重组蛋白,并通过亲和层析纯化得到目的蛋白,建立ELISA检测AMA-M2。结果获得纯度大于95%的重组蛋白;检测326例临床样本,43例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中有41例呈AMA-M2阳性,灵敏度为95.3%(41/43),特异度为98.2%(278/283),PBC组与非PBC组的AMA-M2检出率差异有统计学意义(P<0.05)。结论该改良技术获取的目的蛋白可以用于AMA-M2检测,AMA-M2对PBC的临床诊断具有较高的灵敏度和特异度。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2018年10期）
抗原的克隆与表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为构建A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术将不同株的A型口蹄疫病毒抗原表位A-A10-61-VP1(第141～160位氨基酸)、A-A10-61-VP1(第200～212位氨基酸)、A22Iraq-VP1(第136～164位氨基酸)串联,在其间引入合适的linker序列,重组得到pET-28a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。成功构建了A型口蹄疫病毒抗原表位原核表达载体,获得高纯度重组蛋白和含A型口蹄疫病毒抗体的兔抗血清,为A型口蹄疫病毒诊断试剂盒的研发和A型口蹄疫病毒表位多肽疫苗的研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原的克隆与表达论文参考文献
[1].宋帅.α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定[D].吉林大学.2019
[2].程凯慧,沈付娆,邹积振,苗自利,解晓莉.A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达及多克隆抗体的制备[J].江苏农业科学.2019
[3].赵亭亭.Zika病毒NS1抗原的原核表达和单克隆抗体的制备[D].湖南师范大学.2019
[4].刘琼,刘永仕,尚晓敏,李桂玲,姜延龙.产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[5].霍海龙,张霞,范俐,赵筱,唐宏涛.猪雄性增强抗原1基因MEA1编码区克隆、表达及生物信息学分析[J].云南农业大学学报(自然科学).2018
[6].王彩霞,冯春燕,杜方原,刘丹丹,张永宁.非洲猪瘟病毒主要抗原p54-1的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J].中国畜牧兽医.2018
[7].冯春燕,王彩霞,杜方原,张永宁,刘丹丹.非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J].动物医学进展.2019
[8].刘韬,陈德芳,段靖,王二龙,王亚军.海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测及免疫效果评价[J].水产学报.2018
[9].杨菊梅,马建忠,潘博,李印武.草莓镶脉病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及鉴定[J].植物保护学报.2018
[10].张婕婕,杨自华.M2型抗线粒体抗体的靶抗原叁联体克隆表达技术改良[J].国际检验医学杂志.2018