导读:本文包含了病毒颗粒包装论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:日本脑炎病毒,假病毒颗粒,互补包装
病毒颗粒包装论文文献综述
张亚南[1]（2018）在《日本脑炎病毒假病毒颗粒的包装》一文中研究指出日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)成员,与其同属的其它成员包括蜱传脑炎病毒(TBEV)、登革病毒(DENV)、黄热病毒(YFV)、和西尼罗病毒(WNV)等,这些均是引起人类致病的重要病原体。JEV病毒是虫媒病毒,感染后引发乙型脑炎,致死率较高,且多数幸存者患有严重的神经性后遗症,对人类健康造成重大威胁。由于野生型病毒潜在的生物安全问题在一定程度上限制了对该病毒的深入研究,所以目前针对日本脑炎病毒仍然没有有效的和特异性的治疗方法。因此包装日本脑炎病毒假毒颗粒(Virus like particles,VLPs)对于进一步开展致病机制、疫苗研究、筛选病毒药物及开发新型的治疗方法具有重要的意义。本次研究以JEV-SA14株基因序列为基础,利用复制子与结构蛋白反式互补原理包装JEV VLPs。前期实验室构建了JEV-Rluc复制子和VEEV-JEV-CprME克隆:JEV复制子上带有海肾荧光素酶(Renilla Luciferase,Rluc)报告基因,Rluc的表达水平可快速、灵敏的反应复制子的复制水平;委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复制子因其较高的复制及翻译水平可用于高效表达JEV结构蛋白CprME。实验中通过脂质体DMRIE-C顺次转染JEV-Rluc RNA和VEEV-JEV-CprME RNA于BHK-21细胞,转染完成后收取不同时间点的上清感染Vero细胞,通过荧光素酶Rluc活性检测证明了JEV复制子与VEEV复制子为载体提供的结构蛋白可以互补产生JEV VLPs。基于以上实验结果我们又构建了VEEV-PAC-2A-JEV-CprME克隆,其中PAC基因是嘌呤霉素抗性基因可用于后续筛选稳定表达JEV CprME的细胞系,2A片段为口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的自切割肽2A序列,目的是加强切割将PAC基因从翻译后的多聚蛋白上切割并释放出来。克隆构建完成后通过体外转录得到VEEV-PAC-2A-JEV-CprME RNA,首先为验证JEV复制子是否可以与VEEV-PAC-2A-JEV-CprME RNA互补产生JEV VLPs,同样通过脂质体顺次转染二者RNA本RNA和于BHK-21细胞,转染完成后收取不同时间点的上清感染BHK-21细胞,并通过荧光素酶Rluc活性检测和间接免疫荧光证明了结构蛋白与复制子可以互补产生JEV VLPs,但Rluc活性值≤2.7×10~4 light units,同时IFA结果也检测到较低阳性率,表明使用脂质体转染方法互补产生JEV VLPs效率较低。为进一步提高VLPs的产量我们采用电转的方法依次转染上述两种RNA,结果表明电转后Rluc信号值最高达可达10~8 light units,IFA显示阳性率明显提高,说明了利用电转在一定程度上着提高VLPs产量。为进一步优化该系统且使VLPs在特定细胞系上实现连续传代,将VEEV-PAC-2A-JEV-CprME RNA电转于BHK-21细胞通过嘌呤霉素筛选出了稳定表达JEV-CprME的细胞系,利用该细胞系可以源源不断的产生JEV VLPs。综上所述,本研究建立了VEEV复制子为表达载体提供JEV结构蛋白CprME与复制子互补包装JEV VLPs的新方法。结果表明脂质体转染VEEV-PAC-2A-JEV-CprME RNA与JEV-Rluc复制子互补效率较低,电转在一定程度上可以提高二者的互补效率,增加VLPs产量。为快速、简便包装出大量VLPs用于实验研究筛选出了稳定表达JEV结构蛋白CprME的细胞系,可以源源不断产生大量VLPs。由于本研究中复制子基因组插入了Rluc报告基因该VLPs为建立抗病毒药物的高通量筛选提供了可行性。(本文来源于《东北农业大学》期刊2018-06-01）
廖贵益,钟金彪,赵飞,朱道方[2]（2016）在《HLA-G慢病毒表达载体的构建及病毒颗粒的包装》一文中研究指出设计合成全长人类白细胞抗原G(HLA-G)基因系列,在克隆质粒pLV-EF1a-EGFP-N的基础上构建HLA-G基因慢病毒表达载体,测序鉴定pLV-EF1a-EGFP-N-HLA-G构建成功。与包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)转染293T包装细胞,包装出高效感染率的慢病毒颗粒,测定病毒滴度为1×10~9 TU/ml。HLA-G慢病毒表达载体的构建及病毒颗粒的包装为转染HLA-G诱导移植肾免疫耐受的研究奠定了基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2016年03期）
蒋易楠,李长燕,詹轶群,杨晓明,汪思应[3]（2011）在《GATA2分子RNAi慢病毒颗粒的包装制备及表达研究》一文中研究指出目的制备GATA2分子慢病毒干涉颗粒,建立GA-TA2表达下调的K562稳定细胞系。方法采用第3代慢病毒包装系统,将携带特异性干涉GATA2的DNA序列克隆入穿梭质粒PsicoR中,转染K562细胞,Western blot法检测对内源性GATA2干涉效果。在脂质体介导下,siGATA2质粒同包装质粒plP1、plP2、pl/VSVG共同转染HEK 293T细胞,获得慢病毒干涉颗粒,感染K562细胞,检测干涉效果。结果构建的重组质粒经酶切,测序鉴定结果正确,并有干涉效果。该重组质粒与包装质粒共同转染HEK293T细胞,获得干涉慢病毒并利用该病毒建立稳定表达的siGATA2-K562细胞系,经Western blot鉴定,稳定细胞系的内源性GATA2表达下调。结论成功制备siGATA2干涉病毒颗粒并构建si-GATA2-K562稳定细胞系,为后续实验奠定基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2011年09期）
杨景辉,吴勇,字友梅,李先芳,廖晓莹[4]（2011）在《重组hβc基因的慢病毒颗粒的包装及其在NB4细胞过表达研究》一文中研究指出本研究旨在通过慢病毒介导的基因转移方法,使NB4细胞稳定过表达hβc基因,观察过表达hβc基因的NB4细胞在IL-3或GM-CSF作用下分化行为的改变,探讨hβc基因与NB4细胞分化之间的关系。以本实验室前期构建的携带hβc基因ORF的克隆质粒为模板,用带PmeI和BstBI酶切位点的引物PCR获得目的基因,酶切PCR产物,定向克隆至慢病毒载体pRRLSIN.cPPT.PGK/IRES/GFP.WPRE,构建含hβc基因的慢病毒载体,经酶切及测序鉴定其正确性,将构建好的重组质粒与包装质粒一起共转染293T细胞,收集培养液上清,感染NB4细胞,用Western blot鉴定目的基因在NB4细胞中的表达情况。以转染空载体慢病毒的NB4细胞(简称NB4-blank细胞)为对照,观察过表达hβc基因的NB4细胞(简称NB4-hβc细胞)在IL-3、GM-CSF、全反式维甲酸(ATRA)作用下分化行为的改变。结果表明:含有hβc基因的重组慢病毒载体能高效转染NB4细胞,并使NB4细胞稳定过表达hβc基因。NB4-hβc细胞,在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平上调,但上调的幅度均低于ATRA作用下的上调幅度,且未观察到形态学改变。NB4-Blank细胞在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平无明显变化。结论 :通过慢病毒介导的基因转移方法,成功地使NB4细胞稳定过表达hβc基因,IL-3或GM-CSF在一定程度上能诱导过表达hβc基因的NB4细胞向中性粒细胞分化,但不能使其完全分化成熟。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2011年03期）
华敏敏,刘默芳[5]（2010）在《ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装》一文中研究指出慢病毒载体主要用于感染对常规方法转染效率较低的细胞,如原代细胞等。慢病毒颗粒可同时感染增殖和非增殖的细胞,且感染比较稳定、持久。运用慢病毒载体,可实现特定基因的高表达,也可以表达ShRNA以RNAi方式下调某基因的表达。本文主要介绍ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装。实验步骤如下:(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2010年04期）
周仕香,王治东,董波,张学清,韩春光[6]（2010）在《MyD88干涉慢病毒颗粒的包装和鉴定》一文中研究指出目的制备MyD88分子的慢病毒干涉颗粒,建立稳定下调MyD88的HEK293细胞系。方法将携带特异性干涉序列的DNA片段克隆入干涉质粒pSicoR中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将慢病毒颗粒感染HEK293细胞,建立稳定细胞系,经RT-PCR和报告基因分析方法确定不同干涉序列对MyD88表达的下调及信号通路激活的阻断作用。结果成功制备携带干涉序列的慢病毒颗粒,并获得稳定感染慢病毒的HEK293细胞系,经鉴定发现感染912位序列的细胞MyD88mRNA表达水平下调为对照组的28%,对CBLB502的激活作用下降为对照组的24%。结论成功制备MyD88的慢病毒干涉颗粒,可用于建立MyD88稳定下调的细胞系。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2010年02期）
王治东,葛常辉,许望翔,詹轶群,李长燕[7]（2009）在《慢病毒颗粒包装、浓缩及对脐带血CD34~+细胞感染》一文中研究指出目的:建立慢病毒包装、浓缩及感染脐带血CD34+细胞的条件方法。方法:采用第3代慢病毒系统包装病毒上清,结合超滤和超速离心两种方法对病毒进行浓缩。联合应用体外扩增培养,促进静止期细胞进入细胞周期、感染过程中促进细胞黏附和固定及重复感染等方法促进病毒感染。结果:CD34+细胞体外培养48h,细胞表面CD34标志物表达水平没有明显改变,通过两步法浓缩后,病毒滴度可达5.06×107/ml,对脐带血CD34+细胞的感染效率可达37.7%。结论:通过上述方法可以获得滴度为107/ml以上的慢病毒上清,实现对脐带血CD34+细胞的有效感染。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2009年06期）
王星星[8]（2009）在《重组hTERT启动子启动CD基因慢病毒载体构建及电穿孔法包装慢病毒颗粒》一文中研究指出骨髓干细胞(BMSCs)由于具有横向分化能力和跨胚层发育潜能等优势而被用于多种疾病的治疗。随着BMSCs移植的临床实验的增多,越来越多的文献表明BMSCs经过体外培养后有部分细胞不可避免地要发生瘤变。为充分开发BMSCs的临床治疗潜力,必需对人体骨髓干细胞移植进行生物安全性研究。目的:构建用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD,并包装成慢病毒颗粒,为进一步筛选可控移植骨髓干细胞,研究骨髓干细胞移植瘤变打下基础。方法:1.根据GeneBank中大肠杆菌CD基因序列和本实验室保存的慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP设计合成分别引入Xho I和BamH I酶切位点的上下游引物,以大肠杆菌基因组为模板扩增CD基因,克隆到pLenti-hTERT-eGFP中得到pLenti-hTERT-CD质粒。然后将Telve-C002中Luci-ires片段酶切克隆到pLenti-hTERT-CD中得到质粒pLenti-hTERT-Luci-ires-CD。根据pLenti-hTERT-eGFP上eGFP的基因序列设计引入Smal和Xbal酶切位点的上下游引物扩增eGFP,克隆到pLenti-hTERT-Luci-ires-CD替换Lcuirise基因得到重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD。2.用电穿孔法将重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD和包装质粒混合物共转染来源于人胚肾细胞系的293T细胞,探讨各个质粒分子量对包装的影响,确定电穿孔包装病毒时各个质粒的质量比,建立慢病毒包装体系。3.用收集浓缩的病毒上清液系列稀释后感染Hela细胞,通过荧光定量PCR测定病毒滴度。结果:1.成功克隆有Xho I和BamH I酶切位点且始密码子为ATG的大小为1359bp的CD基因DNA片段并成功构建携带CD基因重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD。2.建立电穿孔法病毒包装体系,将慢病毒成功转染293T包装细胞。3.通过感染Hela细胞,测得的慢病毒滴度数量级达到为106TU/ml。结论:1.重组慢病毒载体pLenti-hTERT-eGFP-ires-CD构建成功。2.电穿孔法包装病毒时各个质粒按分子量平方比设置包装比例,可以得到较高滴度病毒。(本文来源于《重庆大学》期刊2009-04-01）
刘立鸿[9]（2008）在《新疆株HPV16的全基因组序列分析以及病毒颗粒在293T细胞中包装的初步研究》一文中研究指出人乳头瘤病毒(HPV,human papillomavirus)是一种常见的小DNA双链病毒,其基因组大小约为8kb,主要感染上皮黏膜细胞,可引起良性乳头瘤病变和恶性肿瘤,高危型HPV在子宫颈癌组织中的检出率可高达90%以上。大量研究资料证明,50%的宫颈癌与HPV16感染相关。目前在世界不同各地和种族已鉴定出多种HPV16变异株,并发现不同的变异株与其致病力等方面有关。新疆南部维吾尔族聚居区是宫颈癌高发区,高危型人乳头状瘤病毒16和18是宫颈癌主要病因之一,尤其以HPV16最为常见。本论文主要包括对新疆HPV16全基因组序列分析及其病毒颗粒在293T细胞包装,目的为探讨新疆HPV16变异与该地区宫颈癌高发的关系、新疆当地的宫颈癌疫苗开发和相关致癌机理研究奠定良好基础。本论文工作主要包括五部分:1、新疆维吾尔族宫颈癌患者的HPV16基因组克隆及序列分析;2、新疆株HPV16 E1多态型分析、E1核心片段的克隆及原核表达;3、新疆株HPV16 L1在真核细胞中表达水平的初探;4、密码子优化HPV16衣壳基因单价、真核共表达载体的构建及细胞转染;5、探索新疆株HPV16病毒颗粒在293T细胞中的包装。1、新疆维吾尔族宫颈癌患者的HPV16基因组克隆及序列分析根据GenBank中发表的HPV16基因的保守序列设计引物,利用LA-PCR扩增的方法,获得新疆HPV16基因组,命名为XJHPV16。测序结果表明,序列长为7963bp,其包含2606个腺嘌呤、1392个胞嘧啶、1537个鸟嘌呤、2428个胸腺嘧啶,GC含量为36.8 %,是世界上已报道的最长的HPV16。新疆HPV16E1基因内部存在63个核苷酸重复。2、新疆株HPV16 E1多态型分析、E1核心片段的克隆及原核表达从41份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,其中有32份可以扩增出HPV16E1基因,HPV16 E1阳性率为78%(32/41)。E1基因测序和序列分析表明E1基因核苷酸多处发生变异,并引起编码氨基酸的变异;E1基因在核苷酸水平上形成11种突变模式,各模式与HPV16原型比较,同源性在96.67%～99.95%之间;在氨基酸水平上形成5种突变模式,各模式与HPV16原型比较,同源性在99.7%～100%之间,其中E1基因内部63个重复突变在世界未见报道。根据GenBank已公布E1,克隆新疆HPV16 E1核心片段,核心大小1011 bp,将核心分别构建到原核表达载体pMAL-p2x、pGEX-4T-1上,利用大肠杆菌原核表达系统进行蛋白表达,结果在大肠杆菌中成功诱导融合蛋白表达。3、密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染;用PCR技术从988载体中获得密码子优化L1,L1-IRES-L2片段,将片段克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1、pcDNA3.1-L1-IRES-L2;水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外发生转录情况;pcDNA3.1-L1、pcDNA3.1-L1-IRES-L2重组质粒转染后293T细胞后发生CPE(cytopathic effect)现象,Western blot方法检测到L1衣壳基因在293T细胞中蛋白表达。4、新疆株HPV16 L1在真核细胞中表达水平的初探新疆株HPV16 L1基因发生了多位点变异,为探索新疆株HPV16 L1在真核细胞中表达水平,构建pcDNA3。1-xj-L1,转染293T细胞,Western blot无法检测到相应蛋白的表达,说明新疆株HPV16 L1与其它已报道的HPV16野生型的L1一样在真核细胞中的表达量仍然很低,这将为新疆当地的宫颈癌疫苗和相关致癌机理研究奠定良好基础。5、探索新疆株HPV16病毒颗粒在293T细胞中的包装将线性或者环化的XJHPV16单独转染293T细胞,或者与衣壳基因共同转染293T细胞,RT-PCR(reverse transcription PCR)均能够检测到病毒E2基因和E5基因的转录,Southern blot结果表明线性的XJHPV16在293T细胞重新成环,但是只有在病毒基因组(线性或环化)与衣壳基因共同转染的实验组中检测到L1蛋白的表达。实验结果表明单独转染线性或者环化的XJHPV16 ,在293T细胞无法形成病毒样颗粒,密码子优化HPV16衣壳基因是病毒颗粒形成所必需。(本文来源于《新疆大学》期刊2008-05-01）
武文斌[10]（2001）在《乙型肝炎病毒核心蛋白突变体抑制病毒颗粒包装的实验研究》一文中研究指出乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）持续性感染在我国是一个严重的健康问题，探索有显着疗效的治疗措施是目前的研究热点。基因治疗是抗HBV持续性感染一个颇有希望的途径。随着分子生物学的发展，对HBV生物学性状尤其是复制、包装过程的了解逐步加深：HBV颗粒包装始于核心颗粒（core particle）的形成，二个核心蛋白形成一个二聚体，120个二聚体聚合成一个核心颗粒。核心颗粒与前基因组RNA、DNA聚合酶结合，被覆表面蛋白后，包装形成成熟的HBV颗粒。在这一过程中，起关键作用的是C蛋白二聚体的形成。利用突变型HBV C蛋白干扰野生型C蛋白形成二聚体的显性负调节（dominant negative，DN）突变体，已证明在体外有明显抑制HBV颗粒包装的作用，有望成为in vivo基因治疗HBV持续感染的理想方法。 基于对HBV分子生物学性状和抗HBV感染胞内免疫的相关研究成果，本研究对中国人adr_1亚型HBV体外DN突变体治疗进行了基础研究。为此，我们通过PCR从pHBV-A_1质粒中扩增了全长的C基因及S基因，亚克隆至pGEM-T载体上后，选择合适方向的两株质粒进行C基因与S基因融合。构建出C蛋白C末端与S蛋白N末端的融合基因表达质粒pcDNA3.1~+-CS。该表达载体经脂质体介导同时转染两株细胞HepG2及HepG2215。转染48-72h后加入G418筛选10天左右。挑选阳性克隆扩增后，RT-PCR和免疫组化证实了突变核心蛋白的胞内表达。直接抽提HepG2215细胞浆内HBV DNA，斑点杂交显示表达了突变C蛋白（融合蛋白）的HepG2215细胞浆内HBV DNA量不同程度地低于阴性对照组（未转染质粒和转染pcDNA3.1~+空质粒）。10％ HBV阳性血清（PCR证实HBV DNA的存在）感染HepG2后72h，抽提细胞浆内HBV DNA。斑点杂交显示，与阴性对照组比较，表达了突变C蛋白的HepG2不同程度地抑制了HBV的攻击。 以上工作表明，本研究所构建的pcDNA3.1~+-CS真核表达载体可以在HepG2及HePG2215细胞内表达出突变型核心蛋白，进一步研究表明该突变蛋白具有抗HBV颗粒包装的显性负调节功能，能不同程度地提高转染细胞的胞内免疫能力。本研究在成功构建了中国人adr_1亚型HBV感染的突变型核心蛋白表达载体的同时，证实了国外DN突变体抗病毒感染结论，为进一步DN突变体抗HBV感染研究奠定了基础。(本文来源于《第二军医大学》期刊2001-05-01）
病毒颗粒包装论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
设计合成全长人类白细胞抗原G(HLA-G)基因系列,在克隆质粒pLV-EF1a-EGFP-N的基础上构建HLA-G基因慢病毒表达载体,测序鉴定pLV-EF1a-EGFP-N-HLA-G构建成功。与包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)转染293T包装细胞,包装出高效感染率的慢病毒颗粒,测定病毒滴度为1×10~9 TU/ml。HLA-G慢病毒表达载体的构建及病毒颗粒的包装为转染HLA-G诱导移植肾免疫耐受的研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒颗粒包装论文参考文献
[1].张亚南.日本脑炎病毒假病毒颗粒的包装[D].东北农业大学.2018
[2].廖贵益,钟金彪,赵飞,朱道方.HLA-G慢病毒表达载体的构建及病毒颗粒的包装[J].安徽医科大学学报.2016
[3].蒋易楠,李长燕,詹轶群,杨晓明,汪思应.GATA2分子RNAi慢病毒颗粒的包装制备及表达研究[J].安徽医科大学学报.2011
[4].杨景辉,吴勇,字友梅,李先芳,廖晓莹.重组hβc基因的慢病毒颗粒的包装及其在NB4细胞过表达研究[J].中国实验血液学杂志.2011
[5].华敏敏,刘默芳.ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装[J].中国细胞生物学学报.2010
[6].周仕香,王治东,董波,张学清,韩春光.MyD88干涉慢病毒颗粒的包装和鉴定[J].军事医学科学院院刊.2010
[7].王治东,葛常辉,许望翔,詹轶群,李长燕.慢病毒颗粒包装、浓缩及对脐带血CD34~+细胞感染[J].军事医学科学院院刊.2009
[8].王星星.重组hTERT启动子启动CD基因慢病毒载体构建及电穿孔法包装慢病毒颗粒[D].重庆大学.2009
[9].刘立鸿.新疆株HPV16的全基因组序列分析以及病毒颗粒在293T细胞中包装的初步研究[D].新疆大学.2008
[10].武文斌.乙型肝炎病毒核心蛋白突变体抑制病毒颗粒包装的实验研究[D].第二军医大学.2001