导读:本文包含了胰腺导管细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Smad4蛋白质,癌,胰腺管,突变,转染
胰腺导管细胞论文文献综述
占世雄,张顺,张璐,刘世国,王祖森[1]（2019）在《SMAD4基因新突变体对胰腺导管腺癌细胞迁移能力的影响》一文中研究指出目的研究SMAD4新突变体对胰腺导管腺癌(PDAC)发生发展的影响。方法将构建好的空白对照组(NC组)、野生型组(SMAD4wt组)、突变型组(SMAD4Y353C组)3组质粒用TransIntroTM EL转染试剂分别导入PDAC细胞PANC-1中,首先进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot实验,分析不同质粒对PDAC细胞mRNA和蛋白质表达的影响,然后进行伤口愈合实验和细胞侵袭实验,研究不同质粒对PDAC细胞PANC-1伤口愈合和侵袭能力的影响。结果 RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,NC组、SMAD4wt组、SMAD4Y353C组PDAC细胞PANC-1SMAD4 mRNA和蛋白表达量比较差异均有统计学意义(F=695.76、194.98,P<0.05),而且SMAD4Y353C组mRNA和蛋白表达量均低于SMAD4wt组,高于NC组,差异均有显着性(P<0.05)。体外伤口愈合实验和细胞侵袭实验结果显示,NC组、SMAD4wt组和SMAD4Y353C组细胞的迁移面积和侵袭能力比较差异有统计学意义(F=1 741.15、299.12,P<0.05),SMAD4Y353C组细胞的迁移面积和侵袭能力明显大于SMAD4wt组细胞,小于NC组细胞,差异均有显着意义(P<0.05)。结论突变型SMAD4Y353C能抑制PANC-1细胞SMAD4mRNA和蛋白质的表达,促进PANC-1细胞的迁移和侵袭,为PDAC的治疗提供理论依据。(本文来源于《精准医学杂志》期刊2019年03期）
黄杉[2]（2019）在《IGF2BP2通过稳定GLUT1 mRNA促进胰腺导管腺癌有氧糖酵解和细胞增殖》一文中研究指出胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)致死率极高,五年生存率不到6%,预后极差,诊断时往往已处于晚期,而现阶段仍缺乏针对晚期侵袭性胰腺导管腺癌的治疗手段,因此深入了解PDAC生理病理学机制才能有助于开发特异性的高效的靶向治疗药物。胰岛素样生长因子(Insulin growth factor,IGF)家族是公认的广泛参与生长发育的基因家族,该家族成员同样在癌症的发生发展中发挥着不可或缺的作用,通过查阅文献我们发现该家族的一个相关家族胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein,IGF2BP)家族在转录后水平发挥作用,即通过调控mRNA的生理过程对基因的表达进行调控。该家族作为m6A reader基因家族存在数以千计的靶基因,因此对细胞生理功能的调控是非常广泛的,越来越多的研究也显示出该家族成员在癌症中的功能。进一步阐明IGF2BP家族与癌症的关系具有非常重要的意义。本研究首先通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中的叁个PDAC基因表达谱芯片数据对IGF2BP家族成员在癌与癌旁的表达量进行了比较,发现其中只有IGF2BP2具有统一的变化趋势,均在癌症中发生了上调,然后我们利用OncoLnc数据库进行预后分析,发现IGF2BP2高表达与PDAC不良预后最为显着相关,通过以上分析我们猜想IGF2BP2具有潜在的促进PDAC发生发展的功能。为了证实数据库分析的结果,我们分别在细胞和组织水平对IGF2BP2的表达量进行了验证,发现正如数据库所展示的,IGF2BP2表达量在肿瘤中发生了上调。接着我们在LSL-Kras~(G12D/+);LSL-Trp53~(R172H/+);Pdx1-Cre(KPC,自发PDAC模型)小鼠的胰腺肿瘤组织切片中对IGF2BP2进行免疫组化染色,通过观察切片中不同恶性程度的病变组织的染色情况,我们发现随着恶性程度的递增,染色也越来越深,说明IGF2BP2可能具有促进PDAC发展的作用。接着我们通过细胞功能实验和皮下瘤模型对IGF2BP2在PDAC中的功能进行研究。我们发现使用siRNA在PDAC细胞系中对IGF2BP2进行干扰可以显着降低细胞的增殖能力,而IGF2BP2敲降后皮下瘤相比正常细胞的皮下瘤生长变慢,说明IGF2BP2对PDAC细胞的生长具有促进作用。进一步为了研究IGF2BP2促进细胞生长的机制,我们将IGF2BP2敲降的细胞系进行了转录组测序,并与未处理的野生型细胞的转录组数据共同进行了基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),使用Reactome基因集集合进行富集发现IGF2BP2敲降后引起显着改变的基因集有葡萄糖转运(Glucose transport),说明IGF2BP2会影响葡萄糖向细胞内的转运,而葡萄糖转运是细胞进行葡萄糖代谢的第一个关键步骤,而根据瓦伯格效应(Warburg Effect),癌细胞中主要使用糖酵解产生ATP,因此IGF2BP2敲降后有可能显着影响细胞的糖酵解过程。然后我们进行了糖酵解压力实验,发现IGF2BP2敲降后,PDAC细胞的糖酵解能力显着降低,说明IGF2BP2可以通过促进细胞的糖酵解能力促进细胞增殖的能力。接着我们检测了糖酵解相关基因的mRNA水平表达量,发现IGF2BP2敲降后GLUT1发生了显着并且较大幅度的减少,提示我们IGF2BP2可能通过调控GLUT1的表达来发挥功能。GLUT1是细胞中最常见的葡萄糖转运体,并且经常会在癌症细胞中发生上调并起到促进癌症发展的作用。由于IGF2BP2是mRNA结合蛋白,可以通过直接结合起到稳定mRNA的作用,且通过蛋白质与RNA相互作用数据库发现IGF2BP2可能与GLUT1 mRNA结合,因此我们分别进行了CLIP实验和RNA稳定性实验,分别验证了IGF2BP2可以与GLUT1 mRNA直接结合并且IGF2BP2能够促进GLUT1 mRNA的稳定性。以上结果表明IGF2BP2通过直接结合并稳定GLUT1 mRNA进而促进PDAC细胞糖酵解和增殖能力。为了进一步证实IGF2BP2通过调控GLUT1的表达进而影响细胞功能,我们在IGF2BP2敲降的细胞系中过表达GLUT1,并以IGF2BP2敲降细胞和野生型细胞为对照进行细胞增殖能力和糖酵解能力检测,观察IGF2BP2敲降的细胞系中过表达GLUT1是否能够回复细胞的功能。结果发现GLUT1过表达能够部分回复IGF2BP2敲降造成的细胞功能的减弱,说明IGF2BP2可以通过促进GLUT1表达促进细胞的增殖和糖酵解能力。综上所述,IGF2BP2在PDAC中表达上调并且其高表达会导致不良预后;IGF2BP2能够通过直接结合并稳定GLUT1 mRNA的方式提高GLUT1表达量,从而促进PDAC细胞的糖酵解和增殖能力。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
李馨雨[3]（2019）在《下调BAG3通过抑制ISG15翻译抑制胰腺导管腺癌干细胞样表型》一文中研究指出目的:胰腺癌是一种常见的难以诊断和治疗的恶性肿瘤。近年来因胰腺癌引起的发病率明显上升,其预后效果极差。所以研究胰腺癌的相关分子机制有助于在临床上针对潜在的治疗靶点进行用药。BAG3是人类共分子伴侣BAG家族(BAG1-6)中的一员,它对细胞存活、自噬、细胞骨架排列以及一些病毒的复制等过程都有影响。BAG3在各种癌症中均呈现高表达,其表达与胰腺癌、胶质母细胞瘤和甲状腺癌等癌症的不良预后有关。干扰素刺激基因ISG15在细胞内以游离型和与蛋白结合的两种形式存在,在多种原发性人类癌症(包括胰腺腺癌和消化系统恶性肿瘤)中常呈现高表达状态。已有报道发现细胞内的ISG15具有促肝癌细胞增殖和迁移等促肿瘤的功能。然而,细胞外ISG15是肿瘤启动子还是肿瘤抑制因子尚未明确。在胰腺导管腺癌中,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)分泌的ISG15蛋白可增强肿瘤干细胞表型。而在乳腺癌中,细胞外游离的ISG15会引起抗肿瘤免疫应答,抑制乳腺癌的生长。在本课题的前期研究中我们发现,BAG3敲低时ISG15的蛋白表达水平发生下调,而ISG15的mRNA水平发生上调。我们还发现BAG3并不能使ISG15的mRNA富集。BAG3和ISG15的敲低都会抑制干细胞样表型。综上,我们在前期的实验基础上继续探索BAG3与ISG15的具体机制以及BAG3和ISG15对胰腺癌的肿瘤干细胞样表型的影响,为胰腺癌的治疗提供新的治疗靶点。研究方法:1、构建BAG3、ISG15稳定表达的胰腺癌细胞株。2、使用RT-PCR技术检测ISG15和BAG3的mRNA的表达水平。3、使用Western blot技术检测目的基因的蛋白水平的变化。4、邻位连接技术PLA技术检测BAG3与ISG15是否相互作用。5、通过克隆形成实验检测BAG3或ISG15敲低时胰腺癌细胞的克隆形成能力。6、使用Actinomycin D按时间梯度处理细胞检测目的基因mRNA稳定性。7、使用试剂盒获取胰腺癌细胞中新生的mRNA。8、通过球囊形成实验检测BAG3或ISG15敲低时胰腺癌细胞的球囊形成能力。9、使用RNA结合蛋白免疫沉淀技术检测BAG3与ISG15的mRNA的相互作用。10、使用Transwell实验检测BAG3或ISG15敲低时胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。11、使用Dot Blot实验检测BAG3敲低的胰腺癌细胞中ISG15向胞外分泌水平。12、通过裸鼠成瘤实验检测BAG3敲低对肿瘤形成的影响。结果:1、BAG3在胰腺癌细胞系中正向调控ISG15的表达;2、在胰腺癌细胞系中敲低BAG3使ISG15 mRNA稳定但抑制其进行翻译;3、在胰腺癌细胞系中BAG3敲低通过Ago2调控ISG15的表达;4、BAG3敲低抑制胰腺癌细胞系干细胞样表型;5、敲低ISG15抑制胰腺癌细胞系干细胞样表型;6、过表达ISG15恢复BAG3敲低对胰腺癌细胞系干细胞样表型的抑制作用。结论:在胰腺癌细胞中,BAG3正向调控ISG15的表达,BAG3敲低通过Ago2对ISG15的翻译水平进行调控从而抑制胰腺导管腺癌干细胞样表型。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-05-01）
马龙飞[4]（2019）在《基于胰腺星状细胞“TGFβ/smads”通路探讨华蟾素抑制胰腺导管腺癌的机制研究》一文中研究指出研究目的胰腺癌微环境(基质)在胰腺癌的进展过程中发挥了至关重要的作用,而作为其重要塑造者,胰腺星状细胞能够促进肿瘤增殖、转移,诱导放化疗抵抗,被认为是胰腺癌研究的重要突破口。华蟾素是临床常用的抗肿瘤中药制剂,我们的前期研究与临床观察也表明,它能够减缓胰腺癌的进展。通过分析其抗肿瘤作用环节与机制,我们提出:华蟾素可能通过干预胰腺星状细胞的“TGFβ/smads”通路,改变癌细胞的癌微环境(基质)来达到抑制肿瘤作用的假说。本课题组运用胰腺癌SW1990细胞和人胰腺星状细胞,经华蟾素干预后,观察胰腺星状细胞I型胶原的表达情况、细胞因子的分泌情况以及迁移侵袭能力的改变,从转录和翻译水平检测TGFβ/smads通路中关键分子p-smad2/3等的活性,从细胞及分子层面系统探讨华蟾素对胰腺癌微环境(基质)的干扰作用,为胰腺癌中医药临床防治提供科学依据。研究方法培养人胰腺星状细胞及人胰腺癌SW1990细胞,设置不同浓度华蟾素,及吉西他滨干预相关细胞后,收集细胞上清液,运用间接共培养的方法,观察华蟾素对细胞之间互动通路的影响。包括细胞增殖实验(CCK-8实验);ELISA法检测华蟾素对胰腺癌细胞SW1990分泌PDGF、TGFβ的影响;transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;运用western blot法检测smad2,smad3,p-smad2/3,smad7,collgen Ⅰ;qRT-PCR检测smad2,smad3,smad7,collgen Ⅰ的转录情况,探讨华蟾素对该通路具体作用。研究结果1.华蟾素对于胰腺癌细胞株SW1990的半数抑制浓度(IC50)为0.18mg/ml,且抑制效果随浓度下降而逐渐下降。而华蟾素对于胰腺星状细胞的IC50为25.62mg/ml,其作用效果具有双向性,在低浓度(<20mg/ml)时呈促进增殖作用,在高浓度(>20mg/ml)时呈抑制增殖作用。吉西他滨对于胰腺癌细胞株SW1990的IC50为7.43μg/ml,对于胰腺星状细胞的IC50为1.67μg/ml,两者抑制效果均随浓度下降而逐渐下降。2.不同浓度(30mg/ml,6mg/ml,1.2mg/ml,Omg/ml)华蟾素干预胰腺星状细胞后收集胰腺星状细胞上清液并分别命名为PSC-SN3,PSC-SN2,PSC-SN1,PSC-SNO,随着华蟾素干预浓度的提高,上清液对SW1990细胞系促进增殖的作用逐渐减弱。而在加入1%胎牛血清后上述所用被反转,加入1%胎牛血清的上清液对SW1990细胞系促进增殖的作用逐渐增强。3.不同浓度(0.2mg/ml,0.04mg/ml,0.008mg/ml,Omg/ml)华蟾素干预胰腺星状细胞后收集胰腺星状细胞上清液并分别命名为PCC-SN3,PCC-SN2,PCC-SN1,PCC-SNO,上清液对胰腺星状细胞的作用组间未见明显差异。4.ELISA实验表明,不同浓度华蟾素对胰腺星状细胞和胰腺癌细胞分泌TGFβ和PDGF的量均无明显影响,华蟾素可能通过干预胰腺星状细胞上清液(PSC-SN)中其他可溶性成分的分泌从而对胰腺癌细胞的增殖起到了抑制作用。5.transwell实验证明,单纯的胰腺星状细胞培养上清液能够明显增强胰腺癌细胞的侵袭能力,经华蟾素处理后上清液,该作用逐渐被抑制,相应的穿膜的胰腺癌细胞数明显下降,呈剂量依赖性。低剂量华蟾素不足以完全阻断含胰腺星状细胞分泌物的上清液对胰腺癌细胞的趋化作用。中高剂量华蟾素则能够明显抑制胰腺星状细胞上清液中胰腺癌细胞侵袭迁移能力,使其弱于正常组(NORMAL组)。6.qRT-PCR实验中,华蟾素对smad2,smad3,smad7基因的转录的影响表现为随着华蟾素干预浓度的提高而逐渐上调两个基因的转录量,而Collagen I的mRNA的转录活性则随着华蟾素浓度的提高而降低。作用方式均呈浓度依赖型。但是,叁个基因转录量改变背后的调节机制却可能不同。其中smad2/3蛋白的转录活性的升高可能与TGFβ/smads通路的负反馈调节有关。7.Western blot实验证明,华蟾素能够上调TGFβ/smads通路中抑制性分子smad7分子表达(但与浓度梯度无关),抑制p-smad2/3的磷酸化水平,从而抑制Ⅰ型胶原(collgen I)的表达。高浓度时(30mg/ml),能轻度下调smad2,samd3分子的表达,而其他浓度时对samd2,smad3分子表达的影响则未见明显组间差异。结论华蟾素可能通过干预胰腺癌微环境中的胰腺星状细胞来抑制胰腺癌的进展。华蟾素的作用体现在两方面,华蟾素能够抑制胰腺星状细胞水溶性细胞因子的分泌,从而抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭和转移,但该作用与TGFβ和PDGF无关。华蟾素能够通过TGFβ/smads通路,上调抑制性分子smad7的表达,降低p-smad2/3的磷酸化水平,从而抑制collgen I的表达,抑制胰腺纤维化,从而抑制改变胰腺癌微环境。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2019-05-01）
唐永凤[5]（2019）在《甘油叁酯对胰腺导管上皮细胞增殖、凋亡、MLCK及细胞黏附分子表达影响的初步研究》一文中研究指出目的探讨不同浓度甘油叁酯对胰管上皮细胞增殖、凋亡的影响;甘油叁酯水平是否影响MLCK的基因、蛋白及细胞黏附分子ICAM-1、Desmocollin-3、β-Catenin、E–Cadherin的基因表达;miRNA基因干扰技术沉默MLCK基因后是否影响细胞黏附分子ICAM-1、Desmocollin-3、β-Catenin、E–Cadherin的基因表达,MLCK是否是介导胰管黏膜黏附分子表达的关键调节分子,以揭示甘油叁酯对胰管黏膜屏障的作用,进而阐明高甘油叁酯性胰腺炎可能的发病机制。方法采用人胰腺导管上皮细胞作为模型,在不同甘油叁酯水平下培养,按不同浓度梯度的甘油叁酯分组,分别为control、0.5mM、1.0 mM、2.5 mM、5.0 mM、10.0 mM,共6组。培养48小时后分别应用:(1)倒置显微境观察不同浓度甘油叁酯干预下细胞形态及细胞间接触距离变化;(2)CCK-8法、细胞流式术检测不同甘油叁酯水平对人胰腺导管上皮细胞增殖、凋亡的影响;(3)实时荧光定量PCR技术测定不同浓度甘油叁酯培养下细胞MLCK、ICAM-1、Desmocollin-3、β-Catenin、E–Cadherin的mRNA表达量;(4)免疫印迹法检测不同浓度甘油叁酯培养下细胞MLCK的蛋白表达量。(5)应用慢病毒介导miRNA干扰HPDE6-c7细胞株沉默MLCK基因构建稳定转染细胞株(MLCK-mirRNA)、阴性病毒对照转染HPDE6-c7细胞株构建稳定转染细胞株(NC-mirRNA),按不同浓度甘油叁酯干预HPDE6-c7、NC-mirRNA、MLCK-mirRNA细胞分组:HPDE6-c7(0、1.0 mM、2.5 mM),NC-mirRNA(0、1.0 mM、2.5 mM),MLCK-mirRNA(0、1.0 mM、2.5 mM)共9组,使用实时荧光定量PCR技术测定MLCK、ICAM-1、Desmocollin3、β-Catenin、E–Cadherin的黏膜屏障相关蛋白的基因表达量。结果(1)TG浓度为0.5 mM镜下细胞形态与control组相比无明显变化,随着TG浓度增加,显微镜下可见HPDE6-c7细胞凋亡数量增加,细胞变细变长,呈细胞纤维化损伤改变,细胞间距逐渐增大。(2)使用CCK-8法测甘油叁酯水平对HPDE6-c7正常细胞活性的影响,结果发现:低浓度甘油叁酯水平无明显抑制HPDE6-c7细胞增殖活性,高甘油叁酯浓度为(2.5、5.0、10mM)出现明显抑制细胞活性的表现,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);并呈剂量依赖的表现。(3)细胞流式技术测甘油叁酯水平对HPDE6-c7正常细胞凋亡的影响,结果发现:加入低浓度(0.5mM、1.0 mM)甘油叁酯培养HPDE6-c7细胞与正常组相比,并未引起明显细胞凋亡的现象,高浓度(2.5mM、5.0mM、10 mM)甘油叁酯水平促进细胞凋亡,与对照组比较、组间两两比较均有统计学差异(P<0.01)。当培养基TG水平为5mM时培养48小时后,HPDE6-c7细胞抑制增殖、促进凋亡率均在50%左右,出现严重的急性细胞毒性作用。(4)随着甘油叁酯浓度增加,可上调HPDE6-c7细胞MLCK基因及蛋白表达,并呈剂量依赖表现,各组间两两比较均有统计学差异(P<0.05)。甘油叁酯可上调ICAM-1、β-Catenin、E–Cadherin的基因表达,下调Desmocollin-3的表达。(5)应用慢病毒介导miRNA沉默HPDE6-c7细胞株MLCK基因后,结果显示HPDE6-c7、NC-mirRNA细胞株均随着甘油叁酯浓度升高明显上调MLCK的基因表达,沉默MLCK的基因表达后,随甘油叁酯浓度增加,细胞MLCK呈低表达且组间无明显变化;HPDE6-c7、NC-mirRNA、MLCK-mirRNA叁株细胞均随着甘油叁酯浓度增加,上调ICAM-1的表达;沉默MLCK的表达后ICAM-1明显上升;HPDE6-c7、NC-mirRNA细胞株均随着甘油叁酯浓度升高明显上调β-Catenin、E–Cadherin的基因表达,不同浓度间均有明显统计学差异(P<0.05),沉默MLCK的基因表达后,随甘油叁酯浓度增加,细胞β-Catenin、E–Cadherin表达无明显变化(P>0.05)。HPDE6-c7、NC-mirRNA、MLCK-mirRNA叁株细胞均随着甘油叁酯浓度增加,下调Desmocollin-3的表达;NC-mirRNA、MLCK-mirRNA细胞较正常HPDE6-c7细胞的Desmocollin-3的表达下调更显着,各组间两两比较均有统计学差异(P<0.05)。结论1、高浓度TG对HPDE6-c7细胞具有细胞毒性作用,可引起细胞呈纤维化损伤表现并影响细胞增殖、凋亡的相互平衡。2、TG上调HPDE6-c7细胞MLCK、ICAM-1、β-Catenin、CDH-1的基因表达,下调DSC-3的基因表达,相互间协同作用引起PDMB屏障功能损伤。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
卢梅,蔡夕倩,张声,陈余朋,陈林莺[6]（2019）在《胰腺导管腺癌肿瘤间质特征与肿瘤细胞PIN1表达的相关性》一文中研究指出目的探讨胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)肿瘤间质特征与临床病理特征,及与肿瘤细胞脯氨酸顺反异构酶PIN1表达的关系。方法收集2010～2016年PDAC临床样本120例,评价组织切片肿瘤间质特征,构建组织芯片,行肿瘤细胞PIN1免疫组化染色,并分析PDAC的临床病理特征。结果 120例PDAC患者中,肿瘤间质成熟型33例,不成熟型53例,中间型34例;低肿瘤间质容量85例,高肿瘤间质容量35例;肿瘤细胞PIN1低表达48例,高表达72例。肿瘤间质成熟度与PDAC组织学分级(P=0. 029)、淋巴结转移(P=0. 027)有相关性,肿瘤间质容量与PDAC组织学分级显着相关(P<0. 000 1)。肿瘤间质成熟度与肿瘤间质容量(P <0. 000 1)和肿瘤细胞PIN1表达有相关性。Kaplan-Meier生存分析显示PDAC中具有肿瘤间质成熟型(Log-rank=6. 03,HR=1. 83,95%CI=1. 13～2. 98,P=0. 014)和高肿瘤间质容量(Log-rank=15. 23,HR=2. 72,95%CI=1. 74～4. 27,P <0. 000 1)的患者预后较好。Cox多因素分析显示肿瘤间质容量是患者独立的预后指标。结论 PDAC肿瘤间质特征与PDAC预后差的临床病理特征及肿瘤细胞PIN1表达有关。PIN1可能参与PDAC肿瘤间质微环境的重塑,有望成为其靶向治疗的潜在分子。(本文来源于《临床与实验病理学杂志》期刊2019年04期）
张志文[7]（2019）在《胰腺导管腺癌中核蛋白AHNAK功能分析验证及胰腺星形细胞甲基化水平的检测》一文中研究指出背景及目的胰腺癌(PC)是目前消化系统中高度恶性的肿瘤,严重威胁人类健康及生活质量。胰腺癌最常见的组织学类型为胰腺导管腺癌(PDAC)。近十年来,全球范围内胰腺癌发病率及死亡率未见明显改变,而在全国范围内,流行病学证据显示胰腺癌患者的发病率无明显变化,但死亡率呈上升趋势。这提示近年来对胰腺癌的分子遗传学改变认识深度仍然不足,仍缺乏可以转化为有效的临床治疗相关的潜在靶点。随着分子生物学技术的发展和生物信息学分析方法的多样化,癌症大数据被越来越多的临床研究者所熟知。这给研究胰腺癌的分子生物学本质带来了极大的便利。通过组学分析,获得胰腺癌不同研究层面的变化情况,可以加深对胰腺癌分子遗传学改变的认识。核蛋白AHNAK是体内常见大分子蛋白(分子量约629kDa),在体内发挥多种生物学功能。AHNAK参与细胞间信号转导、钙离子通道调控及细胞的黏附等多个细胞生物学过程。研究证实AHNAK在多个类型的肿瘤中存在高表达状态,并且在肿瘤中发挥多种生物学作用,在多个肿瘤中AHNAK具有重要的预后评估意义。胰腺癌最经典的形态学特征就是间质纤维结缔组织显着增生,其中最重要的细胞成分为胰腺星形细胞(PSCs),PSCs在正常情况下呈静止状态,在受到体内外因素包括肿瘤刺激时,PSCs被激活。PSCs在PDAC发生发展过程中的作用仍未完全阐明,抑制PSCs活化是否可以降低PDAC的恶性潜能仍未可知。甲基化是目前最常见的表观遗传学修饰方式。研究证实了甲基化可以影响多个肿瘤的发生及进展。但是胰腺癌中的甲基化情况及作用并未全部明确,PSCs的甲基化情况及其临床作用少有人报道。因此,本研究通过生物信息学对胰腺癌公共数据进行分析,使用经典的分子生物学实验对预测结果进行验证,以期可以找到新的胰腺癌诊断或治疗相关的新靶点。在此基础上,本研究针对PDAC的形态学特征,通过分离培养获得PDAC中的活化PSCs,使用全反式维甲酸(ATRA)处理去活化后进行全基因组甲基化测序(WGBS)检测,以期明确PSCs活化过程中的甲基化改变,进一步理解PSCs在PDAC发生发展中的作用。方法一、使用生物信息学分析对网络公共胰腺癌高通量数据进行归纳整理。下载Gene Expression Omnibus(GEO)数据库和 The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中胰腺癌高通量遗传学数据及临床预后相关信息,首先使用R语言对GEO数据库中的PDAC芯片高通量数据进行标准化后,通过差异分析、聚类分析获得差异表达基因(DEGs)(logFC>2,P<0.05),使用 RobustRankAggreg(RRA)整合得到GEO芯片中共同的DEGs;使用GO、KEGG和GSEA分析得到整合DEGs参与的相关生物学功能及信号通路;使用STRING数据库分析整合DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI);使用Kaplan-Meier对DEGs进行预后分析,获得具有预后预测功能的DEGs。二、使用驱动基因预测网站IntoGen获得胰腺癌相关的驱动基因,并且降低胰腺癌中DEGs的筛选条件以扩大获取的胰腺癌中DEGs的范围(logFC>0.5,P<0.05)。联合分析得到在胰腺癌中表达差异且发挥重要功能的驱动基因。叁、结合生物信息学预测结果及文献报道,我们得到AHNAK在PDAC中具有表达差异并且与预后相关。因此,我们使用经典的分子生物学方法对AHNAK的功能进行了验证。首先纳入包含临床及预后数据的66例胰腺癌石蜡样本进行免疫组织化学染色(IHC),使用卡方检验及t检验分析AHNAK与PDAC临床病理数据之间的关系,然后明确AHNAK表达水平与PDAC患者的预后明确相关。使用qRT-PCR及Western blot等分子生物学实验在胰腺癌细胞系中对AHNAK相关的功能和信号通路进行分析,使用细胞学功能实验明确AHNAK参与的细胞功能;同时使用生物信息学方法GSEA,GO和KEGG分析对结果进行佐证。四、由于胰腺癌的组织特殊性,肿瘤主要由间质成分组成,而胰腺星形细胞(PSC)是胰腺癌间质最主要的成分。免疫组化发现在胰腺星形细胞中也可以高表达AHNAK,因此使用统计学方法明确PSCs中AHNAK的表达情况及其在PDAC中的临床意义。结合文献PSCs活化可以促进PDAC的进展,因此我们使用高通量测序方法—WGBS对PSCs进行检测,同时联合本实验室前期获得的PSCs转录组数据进行了进一步分析,进一步理解PSCs在PDAC发生发展中的作用。结果一、生物信息学获得的116对胰腺癌及正常对照样本中,共发现12个共同上调(POSTN、ITGA2、FN1、CEACAM5、LAMC2、SLC6A14、TSPAN1、CEACAM6、GALNT5、CTSE、C1S 和 LAMB3)和 6 个共同下调 DEGs(IAPP、RN7SL186P、ALB、SERPINI2、RNU6-570P、CTRL);GO 和 KEGG 分析发现这些 DEGs 主要参与细胞外基质的形成及分泌、细胞间相互作用等生物学功能;PPI分析发现DEGs之间存在密切的相互作用;预后分析发现LAMB3,LAMC2,SLC6A14,ITGA2,和C1S对胰腺癌预后具有评估作用;二、驱动基因预测发现胰腺癌中存在20个驱动基因,与扩大范围的DEGs取交集得到5个驱动基因存在表达差异(ARID、AHNAK、ATM、PCDH18和EPC1),结合文献我们选择AHNAK作为研究分子,使用IHC验证AHNAK在PDAC中表达高于癌旁正常对照,并且AHNAK高表达与PDAC患者的生存期(OS)及无病生存期(DFS)缩短相关,AHNAK是PDAC预后的独立预测因素。叁、分子生物学实验证实AHNAK可以通过调控多条信号通路(IL2/STAT5信号通路、TP53信号通路)改变胰腺癌细胞(PCCs)的上皮间质转化(EMT)过程进而促进PCCs的增殖的迁移能力,但并未影响PCCs的凋亡情况。四、IHC证实PSCs中高表达AHNAK也与PDAC患者预后较差相关。TCGA数据库中胰腺癌AHNAK低甲基化也与预后较差相关。结合本实验室之前的研究,我们使用ATRA处理去活化PSCs后,进行WGBS检测,结果发现,在PSCs活化过程中甲基化水平发生改变。基因组水平去活化PSCs的mCpG水平较活化PSCs更高(59.61%vs.48.8%),去活化 PSCs 的 mCpG 占比相对较低(79.39%vs.92.40%);Motif的甲基化模式也有不同;活化PSCs和去活化PSCs间不同基因功能区域的mCG、mCHG和mCHH之间存在较细微的差异;染色体水平也显示去活化PSCs具有更高的甲基化水平。五、全基因组甲基化水平差异区域(DMR)显示活化PSCs和去活化PSCs存在大量的DMRs,其中174个DMRs同时包括叁种甲基化模式(CG,CHG和CHH);启动子区有44个DMR同时包含CG,CHG和CHH叁种甲基化模式;GO分析发现全基因组DMRs主要富集于发育相关的生物学功能,启动子区DMRs主要富集于细胞器及细胞内相关功能;KEGG分析发现DMRs主要参与了多条肿瘤相关信号通路,如 Hippo signaling pathway(hsa043 90)、Pathway in cancer(hsa05200)、Rap 1 signaling pathway(hsa04015)、Hedgehog signaling pathway(hsa04340)和 Wnt signaling pathway(hsa04310)。六、联合转录组数据我们得到20个差异基因,并选择差异最明显的CARMIL3和MED12L进行验证,甲基化特异PCR(MSP)和qRT-PCR证实CARMIL3和MED12L证实了 WGBS的结果。然后使用GO和KEGG分析证实这些基因主要参与多态性(ploymorphism)、序列变异(sequence variant)等相关功能。结论一、胰腺癌中存在大量DEGs,并且主要参与细胞外基质的形成及分泌、细胞间相互作用等生物学功能;其中LAMB3,LAMC2,SLC6A14,ITGA2,和C1S与胰腺癌患者的预后明确相关;二、胰腺癌驱动基因AHNAK可以通过参与多条信号通路(IL2/STAT5信号通路、TP53信号通路)调控胰腺癌细胞(PCCs)的上皮间质转化(EMT)过程进而促进PCCs的增殖的迁移能力,进而与PDAC患者的预后相关;叁、胰腺癌促进PSCs活化过程中,PSC基因组甲基化水平发生改变并且参与了胰腺癌中多个生物学功能及信号通路。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2019-04-15）
孟强,张雷[8]（2019）在《肿瘤相关成纤维细胞与胰腺导管腺癌关系的研究进展》一文中研究指出肿瘤相关成纤维细胞是胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)肿瘤微环境的重要组成部分,可通过分泌各种细胞因子影响PDAC的生物学行为,包括增殖、存活、侵袭、转移、血管生成和免疫抑制。本文就肿瘤相关成纤维细胞对PDAC细胞增殖、迁袭和免疫监视及与化疗药物耐药关系的研究进展作一综述。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2019年01期）
崔立华,李彩霞,卓玉珍,崔乃强,张淑坤[9]（2018）在《胰腺星状细胞在胰腺导管腺癌中的作用》一文中研究指出胰腺星状细胞在正常胰腺中处于静息状态,而当胰腺受损时则被激活。胰腺星状细胞是胰腺癌微环境的重要组成,在癌细胞增殖、浸润、迁移及抵御治疗等方面发挥着重要作用。了解胰腺星状细胞在胰腺癌发生、发展中的作用,可以帮助我们更新对抗胰腺癌的治疗策略。(本文来源于《中国中西医结合外科杂志》期刊2018年04期）
方天逸,王宇夫,林轩,王浩,崔云甫[10]（2018）在《胰腺导管细胞癌组织CSF3R基因表达对患者预后的影响及其机制》一文中研究指出目的探讨粒细胞集落刺激因子3受体(CSF3R)基因表达对胰腺导管细胞癌患者预后的影响及其机制。方法从GEO数据库中下载包含CSF3R表达数据的人类胰腺导管细胞癌表达谱,包括132例份胰腺导管细胞癌样本。通过R2分析平台,以Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析CSF3R表达与患者预后的关系,筛选出与CSF3R表达显着相关的基因并进行KEGG通路分析与GO分析。结果 CSF3R表达与患者总体生存率呈负相关(P<0.05),CSF3R高表达患者的总体生存率低于低表达患者(P<0.05)。检测出与CSF3R表达呈显着相关的基因共6 521个,其中正相关基因3 040个、负相关基因3 481个。KEGG分析发现,有27个高表达基因(C1QA、C1QB、C1QC、C2、C3AR1、C5、C5AR1、FCAR、FCGR2A、FCGR2B、FCGR3A、FCGR3B、FGG、FPR1、FPR2、FPR3、HLA-DMB、HLA-DQA1、HLA-DQB1、ICAM1、ITGAM、ITGB2、MASP1、MASP2、MBL2、PLG、SELPLG)仅涉及1个信号通路,即金黄色葡萄球菌感染。GO分析发现,CSF3R及其相关基因主要与细胞对刺激的反应、免疫反应、RAS调控、胰腺发育等相关。结论 CSF3R表达与胰腺导管细胞癌患者总体生存率相关,其可能是预测患者预后的潜在分子标记物。(本文来源于《山东医药》期刊2018年24期）
胰腺导管细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)致死率极高,五年生存率不到6%,预后极差,诊断时往往已处于晚期,而现阶段仍缺乏针对晚期侵袭性胰腺导管腺癌的治疗手段,因此深入了解PDAC生理病理学机制才能有助于开发特异性的高效的靶向治疗药物。胰岛素样生长因子(Insulin growth factor,IGF)家族是公认的广泛参与生长发育的基因家族,该家族成员同样在癌症的发生发展中发挥着不可或缺的作用,通过查阅文献我们发现该家族的一个相关家族胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein,IGF2BP)家族在转录后水平发挥作用,即通过调控mRNA的生理过程对基因的表达进行调控。该家族作为m6A reader基因家族存在数以千计的靶基因,因此对细胞生理功能的调控是非常广泛的,越来越多的研究也显示出该家族成员在癌症中的功能。进一步阐明IGF2BP家族与癌症的关系具有非常重要的意义。本研究首先通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中的叁个PDAC基因表达谱芯片数据对IGF2BP家族成员在癌与癌旁的表达量进行了比较,发现其中只有IGF2BP2具有统一的变化趋势,均在癌症中发生了上调,然后我们利用OncoLnc数据库进行预后分析,发现IGF2BP2高表达与PDAC不良预后最为显着相关,通过以上分析我们猜想IGF2BP2具有潜在的促进PDAC发生发展的功能。为了证实数据库分析的结果,我们分别在细胞和组织水平对IGF2BP2的表达量进行了验证,发现正如数据库所展示的,IGF2BP2表达量在肿瘤中发生了上调。接着我们在LSL-Kras~(G12D/+);LSL-Trp53~(R172H/+);Pdx1-Cre(KPC,自发PDAC模型)小鼠的胰腺肿瘤组织切片中对IGF2BP2进行免疫组化染色,通过观察切片中不同恶性程度的病变组织的染色情况,我们发现随着恶性程度的递增,染色也越来越深,说明IGF2BP2可能具有促进PDAC发展的作用。接着我们通过细胞功能实验和皮下瘤模型对IGF2BP2在PDAC中的功能进行研究。我们发现使用siRNA在PDAC细胞系中对IGF2BP2进行干扰可以显着降低细胞的增殖能力,而IGF2BP2敲降后皮下瘤相比正常细胞的皮下瘤生长变慢,说明IGF2BP2对PDAC细胞的生长具有促进作用。进一步为了研究IGF2BP2促进细胞生长的机制,我们将IGF2BP2敲降的细胞系进行了转录组测序,并与未处理的野生型细胞的转录组数据共同进行了基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),使用Reactome基因集集合进行富集发现IGF2BP2敲降后引起显着改变的基因集有葡萄糖转运(Glucose transport),说明IGF2BP2会影响葡萄糖向细胞内的转运,而葡萄糖转运是细胞进行葡萄糖代谢的第一个关键步骤,而根据瓦伯格效应(Warburg Effect),癌细胞中主要使用糖酵解产生ATP,因此IGF2BP2敲降后有可能显着影响细胞的糖酵解过程。然后我们进行了糖酵解压力实验,发现IGF2BP2敲降后,PDAC细胞的糖酵解能力显着降低,说明IGF2BP2可以通过促进细胞的糖酵解能力促进细胞增殖的能力。接着我们检测了糖酵解相关基因的mRNA水平表达量,发现IGF2BP2敲降后GLUT1发生了显着并且较大幅度的减少,提示我们IGF2BP2可能通过调控GLUT1的表达来发挥功能。GLUT1是细胞中最常见的葡萄糖转运体,并且经常会在癌症细胞中发生上调并起到促进癌症发展的作用。由于IGF2BP2是mRNA结合蛋白,可以通过直接结合起到稳定mRNA的作用,且通过蛋白质与RNA相互作用数据库发现IGF2BP2可能与GLUT1 mRNA结合,因此我们分别进行了CLIP实验和RNA稳定性实验,分别验证了IGF2BP2可以与GLUT1 mRNA直接结合并且IGF2BP2能够促进GLUT1 mRNA的稳定性。以上结果表明IGF2BP2通过直接结合并稳定GLUT1 mRNA进而促进PDAC细胞糖酵解和增殖能力。为了进一步证实IGF2BP2通过调控GLUT1的表达进而影响细胞功能,我们在IGF2BP2敲降的细胞系中过表达GLUT1,并以IGF2BP2敲降细胞和野生型细胞为对照进行细胞增殖能力和糖酵解能力检测,观察IGF2BP2敲降的细胞系中过表达GLUT1是否能够回复细胞的功能。结果发现GLUT1过表达能够部分回复IGF2BP2敲降造成的细胞功能的减弱,说明IGF2BP2可以通过促进GLUT1表达促进细胞的增殖和糖酵解能力。综上所述,IGF2BP2在PDAC中表达上调并且其高表达会导致不良预后;IGF2BP2能够通过直接结合并稳定GLUT1 mRNA的方式提高GLUT1表达量,从而促进PDAC细胞的糖酵解和增殖能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰腺导管细胞论文参考文献
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