导读:本文包含了促肾上腺皮质激素细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:手性,拟除虫菊酯,顺式联苯菊酯,肾上腺皮质激素
促肾上腺皮质激素细胞论文文献综述
王春蕾,杨叶,朱光平,刘克澄,姚春冀[1]（2019）在《顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应》一文中研究指出[背景]手性农药是指分子结构中含有手性中心的农药化合物,含有一对或多对呈镜像关系的对映异构体(简称对映体)。顺式联苯菊酯(cis-bifenthrin,cis-BF)是当前应用较为广泛的一种手性拟除虫菊酯农药,含有1S-cis-BF和1R-cis-BF两个对映体。cis-BF是一种潜在的内分泌干扰物,有研究发现,cis-BF对下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴分泌的糖皮质激素和盐皮质激素受体具有明显的拮抗效应,但关于cis-BF对映体对HPA轴激素合成分泌的选择性干扰效应及其机制仍不甚明了。[目的]探讨手性农药cis-BF对映体对人肾上腺皮质癌(H295R)细胞肾上腺皮质激素(皮质醇和醛固酮)分泌水平的影响及其分子机制。[方法]利用高效液相色谱仪对cis-BF进行手性拆分,用圆二色谱仪对单个对映体(1S-cisBF/1R-cis-BF)构型进行鉴定,用气相色谱对单个对映体浓度进行分析。体外培养H295R细胞,以不同浓度(0、1×10~(-9)、1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5) mol/L)1S-cis-BF/1R-cis-BF染毒细胞,用单溶液噻唑兰(MTS)比色法检测细胞增殖活性,确定染毒浓度。以无细胞毒性浓度(0、1×10~(-9)、1×10~(-8)、1×10~(-7) mol/L)1S-cis-BF/1R-cis-BF处理细胞24 h,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(real-time PCR)检测肾上腺皮质激素合成相关酶基因的表达水平,用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量和细胞上清液中皮质醇、醛固酮水平。[结果]利用高效液相色谱仪完成cis-BF对映体的拆分,两种对映体1S-cis-BF和1R-cis-BF纯度分别高达99.5%和99.2%。MTS实验结果显示,与对照组相比,1×10~(-6)和1×10~(-5) mol/L浓度组细胞增殖活性升高(P <0.05),而1×10~(-9)、1×10~(-8)和1×10~(-7) mol/L 1S-cis-BF/1R-cis-BF对H295R细胞增殖活性无明显影响。PCR结果显示,相对于对照组,1×10~(-7) mol/L1S-cis-BF可下调类固醇合成急性调节蛋白(St AR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD2)和17α-羟化酶(CYP17)的mRNA水平(P <0.05);1×10~(-8)、1×10~(-7) mol/L1R-cis-BF可下调3βHSD2 mRNA水平(P <0.05),且在1×10~(-7) mol/L浓度组St AR、3βHSD2和CYP17 mRNA水平具有对映体差异,1S-cis-BF的抑制作用分别是1R-cis-BF的2.23、2.04和5.00倍(P <0.05)。cAMP测定结果显示,1×10~(-7) mol/L 1S-cis-BF染毒致细胞内cAMP含量相对于对照组下降了8.10%(P <0.05),而1R-cis-BF与对照组差异无统计学意义;且1×10~(-7) mol/L浓度组cAMP含量有明显的对映体差异,1S-cis-BF的抑制作用高于1R-cis-BF(P <0.05)。激素测定结果显示,与对照组相比,所有浓度组(1×10~(-9)、1×10~(-8)、1×10~(-7) mol/L)皮质醇分泌水平均明显降低(P <0.05),1×10~(-9)、1×10~(-7) mol/L1S-cis-BF及1×10~(-7) mol/L1R-cis-BF组醛固酮分泌水平明显降低(P <0.05);其中在1×10~(-8) mol/L浓度组,S型对映体对皮质醇分泌水平的抑制作用是R型对映体的1.68倍,在1×10~(-7) mol/L浓度组,S型对映体对醛固酮分泌水平的抑制作用是R型对映体的2.16倍,差异均有统计学意义(P <0.05)。[结论]cis-BF对映体通过降低c AMP水平,下调c AMP依赖性类固醇激素合成酶mRNA的表达而抑制H295R细胞内皮质醇和醛固酮的分泌水平,且1S-cis-BF的干扰效应明显高于1R-cis-BF。(本文来源于《环境与职业医学》期刊2019年10期）
胡玥,陈超英,张梦,吕宾[2]（2019）在《细胞角蛋白8在促肾上腺皮质激素释放因子诱导的肠上皮通透性改变中的作用》一文中研究指出目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将其分为对照组和CRF组,CRF组以100 nmol/L CRF处理细胞72 h。采用Transwell小室检测2组细胞FITC标记的dextran透过率,透射电镜观察2组细胞紧密连接结构变化,并用Western blot法检测2组细胞CK8及紧密连接相关蛋白(ZO-1和occludin)的表达,免疫荧光检测CK8表达微结构变化,ELISA检测加药5 min、10 min、30 min、1 h及2 h后蛋白激酶C(PKC)活性。采用sh-CK8慢病毒构建CK8低表达HT29细胞,检测给予CRF处理后相应蛋白表达量、FITC标记的dextran透过率及PKC活性的改变。结果:HT29细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,而CRF处理后,FITC标记的dextran透过率高于对照组(P<0.05),透射电镜观察可见对照组细胞紧密连接通道关闭, CRF处理后紧密连接开放。同时,CRF可引起HT29细胞CK8的荧光强度增高,呈颗粒样浓聚,其蛋白表达明显增加(P<0.05),而occludin和ZO-1表达下调(P<0.05)。此外,CRF处理1 h时,PKC的活性下降(P<0.05)。sh-CK8慢病毒转染HT29细胞后成功建立低表达CK8细胞株,与阴性对照组相比,CRF刺激后肠上皮细胞通透性并未明显降低, occludin蛋白表达仍下调(P<0.05),而ZO-1则无明显改变。同时,与阴性对照组相比,CK8低表达后,CRF刺激并未引起PKC活性的下降。结论:CK8可能通过抑制PKC活性参与CRF诱导的肠上皮通透性的增加,同时可能存在其它信号通路共同参与。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2019年05期）
黄凯丰[3]（2018）在《糖皮质激素短疗程雾化吸入对嗜酸粒细胞性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻部症状及肾上腺皮质功能的影响》一文中研究指出目的探讨糖皮质激素短疗程雾化吸入对嗜酸粒细胞性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻部症状及肾上腺皮质功能的影响。方法将嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者40例,以随机数字表法分为对照组(20例)和观察组(20例),分别给予糖皮质激素短疗程喷鼻和雾化吸入方案治疗。比较两组患者近期疗效,治疗前后鼻部症状VAS评分,内镜Lund-Kennedy评分,嗜酸性粒细胞绝对值(EOS)计数水平、血清皮质醇水平及随访复发率等。结果观察组患者治疗显效率和总有效率均高于对照组(P<0.05);观察组患者治疗后鼻部症状VAS评分和内镜Lund-Kennedy评分均低于对照组及本组治疗前(P<0.05);观察组患者随访3个月和6个月复发率均低于对照组(P<0.05);观察组患者治疗后EOS计数水平均低于对照组及本组治疗前(P<0.05);同时两组患者治疗前后血清皮质醇水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论相较于喷鼻方案,糖皮质激素短疗程雾化吸入方案治疗嗜酸粒细胞性鼻窦炎伴鼻息肉可有效缓解鼻部症状体征,抑制嗜酸性粒细胞聚集,降低远期复发风险,且未对肾上腺皮质功能产生明显影响。(本文来源于《山东大学耳鼻喉眼学报》期刊2018年04期）
李然[4]（2018）在《热休克转录因子1在垂体促肾上腺皮质激素腺瘤细胞增殖和激素分泌中的作用及其相关机制研究》一文中研究指出第一部分HSF1在人垂体促肾上腺皮质激素腺瘤组织标本中的表达及其临床意义目的探究HSF1在人垂体促肾上腺皮质激素腺瘤中的表达及其潜在的临床意义方法从马普学会精神医学中心临床神经内分泌实验室标本库中收集的47例垂体促肾上腺皮质激素腺瘤和4例正常人垂体组织标本纳入此项研究。使用免疫组织化学染色的方法在石蜡组织切片中进行HSF1的染色。使用半定量方法评估组化染色的强度。使用Graph Pad Prism 7.0进行临床数据及HSF1表达水平的统计分析。结果47例垂体促肾上腺皮质激素腺瘤中共3例(6.38%)为男性患者,其余44例(93.62%)皆为女性患者。在39例已知肿瘤直径的病例当中,14例(35.90%)为大腺瘤(平均肿瘤直径15.86±4.67mm),25例(64.10%)为微腺瘤(平均肿瘤直径7.68±1.91mm),其中3例大腺瘤、1例微腺瘤及1例肿瘤直径未知病例为侵袭性肿瘤。主要激素水平如下:上午9点血清皮质醇水平827.2±290.4 nmol/ml,夜晚12点血清皮质醇水平653±347.7 nmol/ml,24小时尿游离皮质醇2488.6±1932.99 nmol/ml,上午9点ACTH水平99.77±52.23ng/ml。4例正常垂体组织及47例ACTH腺瘤中均可检测出HSF1阳性染色细胞。通过半定量分析HSF1的染色强度,26例ACTH腺瘤(55.31%)中HSF1的染色强度高于正常垂体组织,21例ACTH腺瘤(44.69%)中的HSF1染色强度与正常垂体相近。通过统计分析,未能发现HSF1的表达水平与患者性别(p=0.8382)、肿瘤侵袭性(p=0.2374)、上午9点血清皮质醇水平(p=0.4627)、上午9点ACTH水平(p=0.6679)、24小时尿游离皮质醇(p=0.9048)、肿瘤直径(p=0.5581)有显着相关性。结论HSF1在人ACTH腺瘤中差异性表达,但普遍高于正常垂体组织,其表达水平对患者的激素水平及肿瘤特性并没有显着的关联。第二部分HSF1在促肾上腺皮质激素腺瘤细胞模型中的活化状态及其对细胞增殖和激素分泌的影响目的探究HSF1在促肾上腺皮质激素腺瘤细胞模型中的活化状态及抑制HSF1对细胞增殖以及激素分泌的影响方法使用Western Blot和HSE-Luc报告基因检测方法来检测At T20细胞对热休克刺激及HSF1抑制剂KRIBB11的反应。Cell Titer Glo试剂盒及细胞绝对计数的方法用来检测KRIBB11对At T20细胞活性及细胞增殖的影响。流式细胞计数用来检测KRIBB11对At T20细胞周期的影响。Caspase-Glo 3/7试剂盒用来检测KRIBB11对细胞凋亡的影响。Pomc-Luc和Nur RE-Luc报告基因检测方法用来检测KRIBB11对At T20细胞Pomc启动子活性的影响。实时定量PCR用来确定KRIBB11对Pomc转录的影响。放射免疫法用来检测At T20细胞、小鼠原代垂体细胞、人促肾上腺皮质激素腺瘤原代培养细胞上清ACTH的浓度。HSF1小干扰RNA用来确认HSF1抑制剂对细胞活性及ACTH分泌的影响。结果热休克刺激并不影响At T20细胞内HSF1的表达。与对照组相比,KRIBB11刺激会引起HSF1特异性条带下移。热休克刺激可以极大提高HSE的启动子活性,HSP90的N末端抑制剂17-AAG则在非热休克和热休克刺激条件下均提高HSE的启动子活性。KRIBB11处理会降低非热休克和热休克刺激条件下基础状态HSE启动子活性或17-AAG激活的HSE启动子活性。KRIBB11刺激也可以浓度或时间依赖性地降低At T20细胞的细胞活性,IC50为10μM。通过台盼蓝染色细胞绝对计数的方法也确认了KRIBB11对At T20细胞增殖的浓度依赖性抑制性作用。并且KRIBB11诱导At T20细胞G2/M期阻滞。KRIBB11也被发现在非细胞毒性浓度条件下并不影响细胞凋亡进程。KRIBB11可以降低基础状态或地塞米松刺激下的Pomc及Nur RE元件启动子活性,此抑制效应也通过RT-PCR及两条不同序列的HSF1小干扰RNA沉默所确认。此外,KRIBB11浓度依赖性地降低基础状态及小剂量地塞米松刺激下的At T20细胞上清ACTH的分泌,HSF1小干扰RNA沉默也可抑制细胞上清ACTH的分泌。而且,在4例原代培养的人ACTH腺瘤中,KRIBB11抑制了3例ACTH的分泌,但不与地塞米松产生迭加抑制效应。然而KRIBB11并不影响小鼠正常垂体原代培养细胞的ACTH分泌。结论HSF1在基础状态下的At T20细胞系内处于组成性活化状态,其活力可以被正负调节。在At T20细胞中,HSF1特异性抑制剂KRIBB11是通过抑制HSF1的活性来发挥其HSF1抑制作用。KRIBB11可以抑制At T20细胞活性及细胞增殖,诱导G2/M期阻滞,但并不影响细胞凋亡。此外,KRIBB11及HSF1小干扰RNA均可在体外降低促肾上腺皮质激素腺瘤细胞ACTH的分泌。HSF1可以作为库欣病的潜在治疗靶点。第叁部分抑制HSF1调节糖皮质激素受体活性反式阻抑POMC的转录目的探讨HSF1抑制对At T20细胞内糖皮质激素受体活性的调节作用方法MMTV-Luc报告基因法和实时定量PCR用来检测GR激动剂地塞米松和HSF1抑制剂KRIBB11对At T20细胞内GR转录活性及表达的影响。细胞总蛋白Western Blot用来检测HSF1失活后GR、HSP70蛋白水平的变化。细胞质蛋白和细胞核蛋白的Western Blot用来检测地塞米松和HSF1抑制剂KRIBB11对At T20细胞内GR胞核转运的影响。HSF1小干扰RNA用来确认HSF1抑制剂对GR活性造成的影响。结果与空白组或单独地塞米松组相比,HSF1抑制剂KRIBB11能提高At T20细胞基础状态或地塞米松诱导下的MMTV报告基因活性,基础状态下的最大效应浓度为10μM,地塞米松诱导下KRIBB11 2.5μM也可提高3.2倍的MMTV报告基因活性。KRIBB11和地塞米松下调At T20细胞的GR转录水平,但延长药物作用时间至24h则可逆转此抑制效应。KRIBB11处理下的At T20细胞内Hsp70和Hsf1基因的转录下降。Western Blot显示KRIBB11可以浓度依赖性的增加GR蛋白表达,但对HSP70蛋白的表达无明显影响。蛋白酶体抑制剂MG132作用下,KRIBB11可以抑制蛋白酶体抑制剂MG132诱导的HSP70蛋白表达的增加,而蛋白翻译抑制剂Cycloheximide作用下,KRIBB11并不影响HSP70蛋白的表达。此外检测细胞质及细胞核组分,KRIBB11并不会增加地塞米松诱导的GR胞核转运效应。两条不同的沉默序列产生的HSF1的暂时沉默也会增加MMTV报告基因的活性、降低GR的转录水平、增加GR的蛋白表达。结论HSF1抑制可以增加糖皮质激素受体的转录活性及蛋白表达,激活GR对其自身基因转录的负反馈调节机制,发挥其对POMC基因的反式阻抑效应。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
李文华,范卫捷,张群辉,任军[5]（2017）在《高原低氧应激条件下促肾上腺皮质激素释放激素对免疫细胞作用机制的研究进展》一文中研究指出促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)是急性高原低氧应激损伤的生物标志物,本文主要探讨在高原低氧应激条件下,CRH在免疫调节中发挥的作用,为高原疾病研究提供依据。以中文医学主题词表(MeSH)词汇"CRH High altitude"和"CRH Immune Cell"检索PubMed数据库;同时,以"促肾上腺皮质激素释放激素"和"免疫细胞"为关键词检索中国知网和万方数据知识服务平台,最终筛选出68篇符合标准的文献。提示,在高原低氧应激下产生的CRH对免疫系统具有抑制作用。这为进一步对高原低氧应激下发生的免疫系统性疾病的诊疗提供了理论基础。(本文来源于《中国全科医学》期刊2017年36期）
苏珊珊[6]（2017）在《促肾上腺皮质激素释放激素对小鼠小脑皮层浦肯野细胞简单峰电位活动的影响》一文中研究指出[目的]小脑是哺乳动物重要的运动中枢,外部信息经攀爬纤维(Climbing fiber,CF)和苔藓纤维(Mossy fiber,MF)传入小脑皮层,经精密运算后,由浦肯野细胞(Purkinje cell,PC)发出各种输出指令,来完成各种生理活动。促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin releasing hormone,CRH)是调控应激反应和内脏活动的一种重要神经肽,CRH可通过传入纤维分布于哺乳动物小脑环路,影响PCs的自发性放电和指令输出,但其影响机制尚不明确。本研究拟采用在体的电生理记录技术以及神经药理学手段,在乌拉坦麻醉的状态下,研究不同浓度CRH对小鼠小脑PC自发性单纯峰电位活动的影响,探讨CRH对小脑皮层PC自发性活动影响的受体机制。[实验材料与方法]成年(6-8周龄)ICR小鼠,腹腔注射乌拉坦(1.3 g/kg)麻醉后,于小脑Vermis区的相应部位行一个直径为1-1.5 mm的开颅术,剥除硬脑膜,脑表面的暴露部位持续给予人工脑脊液(Artificial cerebrospinal fluid,ACSF)灌流。PC自发性放电活动采用细胞外贴附式记录记录方法,通过膜片钳放大器(AxopatCh--200B)及数据采集软件记录小脑皮层PC自发性活动;CRH及受体阻断剂采用小脑表面灌流给药;电生理实验数据分析采用Clampfit 10.3软件。各组数据均用Mean 土 S.E.M.表示,记录细胞数用n表示.采用SPSS(Version 21)软件进行数据统计学的分析,使用单因素方差分析进行均数的比较,P<0.05认为有统计学意义。[结果](1)脑表面灌流CRH,可导致PC自发性简单峰电位放电即时频率显着减少,峰值左移;简单峰电位放电频率由给药前的24.3 ± 1.6 Hz降低到19.4 ± 2.1 Hz(P<0.05),但CRF对简单峰电位放电的变异系数(Coefficient of variation,CV)无显着影响。(2)在GABAA受体阻断剂存在下,CRH可导致PC自发性简单峰电位放电即时频率显着增加,峰值右移。简单峰电位放电频率由25.5 ± 1.8 Hz升高到30.7 ±2.4 Hz(P<0.05),表明CRF可能兴奋小脑皮层抑制性中间神经元,导致PC简单峰电位放电频率减少;阻断抑制性中间神经元的抑制性传入后,CRH可兴奋PC导致简单峰电位放电频率升高。(3.)在阻断抑制性中间神经元介导的GABA能突触传递后,CRH对PC自发性简单峰电位放电频率的升高作用具有浓度依存性,引起PC自发性简单峰电位升高的半数有效浓度是53.8 nM,最大浓度是1μ M。(4)阻断GABAA和AMPA受体,CRH可使PC自发性简单峰电位频率升高,即时频率显着升高,峰值右移;CRH对fPC自发性简单峰电位放电CV影响不大,表明CRH兴奋PC导致简单峰电位放电频率升高不是通过增加CF和PF的兴奋性传入来实现的。(5)在非选择性CRH受体阻断剂存在下,CRH对PC自发性简单峰电位放电即时频率影响消失,简单峰电位平均频率不再升高,表明CRH通过CRF受体兴奋小脑皮层PC,导致PC自发性简单峰电位放电频率升高。(6)在CRH-R2阻断剂存在下,CRH对PC自发性简单峰电位放电即时频率的影响依然存在,简单峰电位平均频率显着升高,表明CRH兴奋小脑皮层PC,不依赖于CRH-R2,提示CRH直接作用于PC膜上的CRH-R1而兴奋PC导致自发性简单峰电位频率升高。[结论]本研究结果表明,CRH可兴奋小脑皮层抑制性中间神经元导致PC抑制,阻断MLI-PC间的GABA能突触传递后,CRH通过CRH-R1兴奋PC,导致PC自发性简单峰电位放电频率升高,提示应激刺激可通过CRH受体作用于小脑皮层PC,影响PC的指令输出以及运动调节功能。(本文来源于《延边大学》期刊2017-05-10）
李霞,李理想,李铭,陈飞雪,左秀丽[7]（2017）在《促肾上腺皮质激素释放因子对肠道杯状细胞分泌产物的影响》一文中研究指出目的探讨促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)对肠道杯状细胞分泌产物的影响。方法首先用不同浓度的CRF作用于LS174T细胞以确定最佳作用浓度;用10~(-10)mol/L的CRF作用于LS174T细胞,利用Real-time q PCR、Western blotting、免疫荧光染色和ELISA技术对肠道杯状细胞分泌产物的表达量进行检测。结果 Realtime q PCR结果显示,与PBS对照组相比,CRF作用6 h后,黏蛋白2(M UC2),岩藻糖基转移酶-2(FUT2)和叁叶因子-3(TFF3)的mRNA表达量均下降(P<0.05)。细胞免疫荧光和ELISA的结果显示,CRF作用6 h后,MUC2的蛋白表达量降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,CRF作用24 h后,FUT2和TFF3的蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论 CRF可以通过改变LS174T细胞分泌产物的表达,从而破坏肠黏膜屏障功能。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2017年04期）
全香花,邢晓敏,崔萌纳,隋忠国[8]（2016）在《临床药师对小细胞肺癌合并异位促肾上腺皮质激素综合征致低钾血症患者的药学监护》一文中研究指出目的:探讨临床药师对小细胞肺癌合并异位促肾上腺皮质激素综合征致低钾血症患者开展药学监护的实践。方法:临床药师参与1例小细胞肺癌伴低钾血症患者的治疗过程,提供药学服务。结果:临床药师积极参与,协助医师及早查明了导致低钾血症的原因是该患者并发异位促肾上腺皮质激素综合征,并制订了合理的治疗方案,为患者提供了个体化用药监护。结论:临床药师以自身药学专业知识为切入点,深入临床,提供及时、合理的药学监护,促进了个体化治疗,体现了临床药师的价值。(本文来源于《中国医院用药评价与分析》期刊2016年09期）
陈连刚,刘建坤,朱铁年[9]（2016）在《小细胞肺癌并异位促肾上腺皮质激素综合征的诊治进展》一文中研究指出肺癌为临床高度恶性肿瘤之一,5年生存率仅10%左右[1-2]。小细胞肺癌(small sell lung cancer,SCLC)占肺癌总数15%,恶性程度居原发性支气管肺癌之首。副癌综合征是肿瘤细胞产生某种特殊激素、抗原、酶或代谢产物所引起的非转移性肺外临床表现。SCLC起源于支气管黏膜上皮和黏液腺内嗜(本文来源于《临床误诊误治》期刊2016年09期）
董丽华[10]（2016）在《肾上腺皮质激素受体激动剂对T细胞凋亡的保护作用及机制》一文中研究指出目的:脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合,是严重危害人类健康的主要疾病之一。其发病率以每年8.7%的速度逐年增高,但死亡率却没有下降。严重脓毒症和脓毒性休克死亡人数高于急性心肌梗死的死亡人数。脓毒症的发病机制为早期过度的炎症反应及晚期淋巴细胞的过度凋亡。脓毒症时淋巴细胞凋亡的主要机制为激活诱导的细胞死亡(activation induced cell death,AICD)。糖皮质激素早在20世纪40年代就被用于严重性全身感染的治疗,但由于其除了抗炎作用外,尚有免疫抑制作用,至今对其能否提高脓毒性休克患者的生存率、改善预后尚存在争议。糖皮质激素治疗脓毒症引发争议的原因在于糖皮质激素作用的多样性,尤其对于淋巴细胞的活性有双向调节作用:一方面糖皮质激素通过内源性线粒体凋亡途径诱导未成熟的胸腺细胞、成熟的脾T淋巴细胞、前B淋巴瘤细胞及白血病细胞凋亡;另一方面可以通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR),以DNA结合的方式下调Fas L基因的表达,从而抑制AICD。由于糖皮质激素对淋巴细胞的双重作用,使其无法成为脓毒症治疗的理想药物。与GR密切相关的盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptors,MR)也在T细胞上高度表达,而在其他具有吞噬作用的白细胞上表达很低,这提示MR可能调节T细胞的功能,而不影响免疫系统的清除细菌的功能。目前临床应用糖皮质激素治疗脓毒性休克的作用机制普遍认为是通过GR介导的。由于GR的过于广泛的基因调节作用,使糖皮质激素治疗有相当多的副作用。MR激动剂与GR激动剂相似,通过糖皮质激素反应元件(glucocorticoid response element,GRE)和负性糖皮质激素反应元件(negative glucocorticoid response element,n GRE)启动子结合位点来发挥其作用,但目前发现的MR作用的靶基因较少。MR对淋巴细胞凋亡相关基因的作用尚无报道。本研究中拟检测两种肾上腺皮质激素受体对于激活诱导原代培养的人外周血T细胞凋亡的调节作用。选择地塞米松(dexamethasone,DEX),一种选择性的GR受体激动剂,和去氧皮质酮(deoxycorticosterone,DOC),一种选择性的MR受体激动剂作为干预药物。(1)探索GR和MR受体激动剂对于有丝分裂原-植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)或者金黄色葡萄球菌超抗原(Staphylococcus aureus enterotoxin B,SEB)诱导的人原代培养的淋巴细胞凋亡的作用;(2)探索DEX和DOC对于外源性凋亡途径的激活(caspase-8)和相关的信号分子IL-2和Fas L的作用;(3)探索GR和MR在基因的诱导、转录抑制和直接DNA结合方面的作用;(4)最后超表达野生型和突变型MR(转录抑制功能逆转为转录激活功能)来验证转录抑制是一种可能的机制,以及DOC的作用的MR依赖性。旨在为盐皮质激素治疗脓毒症提供理论依据,为提高脓毒症的治疗提供有益的线索。方法:从健康志愿者外周血分离淋巴细胞,体外培养2周后用PHA或SEB诱导其凋亡。采用流式记录法检测细胞凋亡及荧光检测法测试细胞caspase-8,caspase-9/6,caspase-3活性,进一步检测DEX和DOC作用下细胞凋亡及上述caspases活性的变化。在PHA与12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)刺激的Jurkat细胞检测IL-2及IL-2 m RNA和Fas L m RNA水平及DEX与DOC作用下IL-2及IL-2 m RNA和Fas L m RNA水平。为检测DEX和DOC的作用是否为转录水平,引入蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(cytoheximide,CHX),检测CHX存在下,DEX和DOC对IL-2 m RNA和Fas m RNA的作用。将Fas L报告基因质粒、NF-κB报告基因质粒、及NF-κB位点突变的Fas L报告基因质粒分别转入Jurkat细胞,检测荧光素酶活性及DEX和DOC作用后对其活性的影响。为进一步探索GR和MR对Fas L基因的作用及其作用机制,采用凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测DEX和DOC对于含有NF-κB/AP-1序列的IL-2启动子探针及含有NF-κB/GRE序列的Fas L启动子探针与核蛋白复合体的结合作用的影响。最后为检测DOC的作用的MR依赖性,将NF-κB或Fas L报告基因质粒及野生型MR质粒或显性负突变的MR基因质粒共转染Jurkat细胞,检测Fas L的表达及DEX及DOC对Fas L转录和表达的影响。结果:PHA或SEB均可以诱导原代培养的人外周血T细胞凋亡及caspase-8、caspase-9/6、caspase-3活性升高。DEX或DOC均可减低细胞凋亡百分率及caspase-8、caspase-9/6、caspase-3活性。PHA可以诱导人外周血T细胞产生大量的IL-2及IL-2、Fas L基因的表达,PHA与PMA可以诱导Jurkat细胞产生大量的IL-2,及IL-2、Fas L基因的表达,而DEX及DOC均抑制上述PHA或PHA与PMA诱导的IL-2的升高,及IL-2 m RNA和Fas L m RNA的水平的升高。DEX和DOC均可抑制野生型Fas L及NFκB报告基因表达,但对于NF-κB位点突变的Fas L报告基因表达无作用。无论是DEX,还是DOC都没有改变IL-2启动子探针与NF-κB核蛋白复合体的结合。DEX和DOC也均没有改变Fas L启动子探针与NF-κB核蛋白复合体的结合。在转染了显性负突变MR基因的Jurkat细胞中,DOC对NF-κ报告基因的活性无作用,对Fas L报告基因的活性的抑制作用也消失。而DEX对Fas L报告基因及Fas L m RNA水平的影响也部分被抑制。结论:PHA和SEB均可以诱导的人原代培养的淋巴细胞激活诱导细胞凋亡作用。DEX和DOC通过抑制IL-2与Fas L的表达及IL-2的生成阻断外源性凋亡路径,保护激活诱导的T细胞凋亡。GR与MR均可通过抑制NF-κB而下调Fas L转录,但对抗炎基因的作用不同,提示有着不同的作用机制。DOC抑制NF-κB信号路径和Fas L的产生是经典的核受体作用途径,通过与MR形成配体-受体复合物发挥功能的。DOC的作用是MR依赖性的。MR配体可能成为阻断脓毒症和其他免疫异常疾病的副作用较小的理想治疗药物。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-05-01）
促肾上腺皮质激素细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将其分为对照组和CRF组,CRF组以100 nmol/L CRF处理细胞72 h。采用Transwell小室检测2组细胞FITC标记的dextran透过率,透射电镜观察2组细胞紧密连接结构变化,并用Western blot法检测2组细胞CK8及紧密连接相关蛋白(ZO-1和occludin)的表达,免疫荧光检测CK8表达微结构变化,ELISA检测加药5 min、10 min、30 min、1 h及2 h后蛋白激酶C(PKC)活性。采用sh-CK8慢病毒构建CK8低表达HT29细胞,检测给予CRF处理后相应蛋白表达量、FITC标记的dextran透过率及PKC活性的改变。结果:HT29细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,而CRF处理后,FITC标记的dextran透过率高于对照组(P<0.05),透射电镜观察可见对照组细胞紧密连接通道关闭, CRF处理后紧密连接开放。同时,CRF可引起HT29细胞CK8的荧光强度增高,呈颗粒样浓聚,其蛋白表达明显增加(P<0.05),而occludin和ZO-1表达下调(P<0.05)。此外,CRF处理1 h时,PKC的活性下降(P<0.05)。sh-CK8慢病毒转染HT29细胞后成功建立低表达CK8细胞株,与阴性对照组相比,CRF刺激后肠上皮细胞通透性并未明显降低, occludin蛋白表达仍下调(P<0.05),而ZO-1则无明显改变。同时,与阴性对照组相比,CK8低表达后,CRF刺激并未引起PKC活性的下降。结论:CK8可能通过抑制PKC活性参与CRF诱导的肠上皮通透性的增加,同时可能存在其它信号通路共同参与。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
促肾上腺皮质激素细胞论文参考文献
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