导读:本文包含了胰岛样结构论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:BMSC,定向诱导,胰岛样结构,胰岛素
胰岛样结构论文文献综述
刘红静[1]（2019）在《胰岛样结构分泌功能的初步评价》一文中研究指出目的:以胰腺组织裂解液定向诱导骨髓间充质干细胞分化,形成胰岛样结构并对其进行评价,探究分化过程中细胞形态变化的规律;探讨胰岛样结构的形态变化与内分泌功能的关系。方法:采用胰腺组织裂解液,诱导骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构;倒置相差显微镜下观察细胞、结构的变化;以石蜡包埋切片并HE染色,观察组织结构和细胞形态;以双硫腙染色对分化形成的细胞团进行初步筛选;Mallory染色鉴别细胞及分布;使用免疫细胞化学染色技术检测Insulin、C-peptide、Glucagon、和Somatostatin蛋白;实时荧光定量PCR检测Pdx1、Ngn3、MaFA、Nkx6.1、Insulin、Glucagon、Somatostatin、GLUT-2基因的表达;酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中Insulin和C-peptide,以评价胰岛样结构的分泌功能。结果:1.诱导分化过程中,细胞形态变化规律。诱导早期,散在的细胞增多并聚集成细胞团;细胞团收缩、细胞密度增加,逐渐形成有被膜包绕的结构。2.胰岛样结构内可检测到Insulin、C-peptide、Glucagon、Somatostatin阳性细胞;Nkx6.1在诱导早期低表达,诱导后期持续高表达;GLUT-2在诱导早期低表达,诱导后期开始表达,至形成胰岛样结构时达峰值。3.酶联免疫吸附实验检测:培养液中Insulin和C-peptide的浓度先升高,随后逐渐趋于稳定。结论:以胰腺组织裂解液定向诱导骨髓间充质干细胞分化、发育为胰岛样结构,其形态变化具有明显的规律:开始诱导后,散在的细胞增多并聚集成细胞团;随后细胞团收缩、细胞密度增加,逐渐形成表面有被膜包绕的结构。诱导早期Nkx6.1开始表达,并持续趋高,提示细胞开始分化的状态;随着结构越来越复杂,GLUT-2的表达逐渐趋高,表明向具有转运葡萄糖载体结构的细胞分化,并持续稳定在较高水平;通过检测Insulin和C-peptide分泌的关联,初步评价胰岛样结构的功能发育状态。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
刘红静,王慧丰,韦雅淑,赵文婧,陈维平[2]（2019）在《胰腺组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞分化为胰岛样结构的鉴定》一文中研究指出背景:目前,体外已成功将骨髓间充质干细胞定向诱导分化为能够分泌胰岛素的胰岛样细胞团,但是对细胞的形态变化规律、胰岛样细胞团中内分泌细胞的类型及其相互关系的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构过程中细胞的形态变化、内分泌细胞的组成及分布规律。方法:取生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,扩增培养至细胞集落汇合占据瓶底面积80%,加入胰腺组织裂解液连续诱导培养。以双硫腙染色方法对骨髓间充质干细胞定向分化形成的细胞团进行初步筛选,Mallory染色鉴别胰岛内分泌细胞的类型及其分布;采用免疫荧光细胞化学染色法检测胰岛内分泌细胞中胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素蛋白表达。结果与结论:①双硫腙染色显示,随着诱导时间延长,阳性细胞数量逐渐增多;②Mallory染色显示,胰岛样细胞团内α样细胞位于周边,β样细胞分布在中央及周边,成纤维样细胞分布在周围;③免疫荧光染色显示,胰岛样细胞团内有胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素阳性细胞;④结果表明,在特定的微环境条件下,骨髓间充质干细胞能分化为胰岛样结构,内含α、β、δ样细胞,周围有类成纤维细胞包绕。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年13期）
王慧丰,吴丽情,徐亦辰,韦雅淑,刘红静[3]（2018）在《不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较》一文中研究指出为了探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向诱导分化成胰岛样结构的变化规律,本研究以胰腺组织裂解液为诱导剂,同时采用尼克酰胺诱导剂作为对照,以双硫腙染色筛选诱导所获得的细胞团,采用Mallory染色鉴别胰岛细胞,RT-PCR检测Insulin基因的表达。实验结果表明:诱导形成的胰岛样结构具有结缔组织样被膜包裹,Mallory染色可见胰岛样结构内有α、β样细胞,RT-PCR可检测到胰岛样结构内Insulin基因表达的阳性细胞。以上结果说明:胰腺组织裂解液能更好地模拟体内胰腺组织结构的微环境,诱导BMSCs分化为多种细胞,最终形成比较复杂的胰岛样结构。本研究结果为BMSCs定向诱导分化成胰腺细胞,提供了新的思路和方法。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2018年04期）
王慧丰,吴丽情,徐亦辰,韦雅淑,刘红静[4]（2018）在《不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较》一文中研究指出为了探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向诱导分化成胰岛样结构的变化规律,本研究以胰腺组织裂解液为诱导剂,同时采用尼克酰胺诱导剂作为对照,以双硫腙染色筛选诱导所获得的细胞团,采用Mallory染色鉴别胰岛细胞,RT-PCR检测Insulin基因的表达。实验结果表明:诱导形成的胰岛样结构具有结缔组织样被膜包裹,Mallory染色可见胰岛样结构内有α、β样细胞,RT-PCR可检测到胰岛样结构内Insulin基因表达的阳性细胞。以上结果说明:胰腺组织裂解液能更好地模拟体内胰腺组织结构的微环境,诱导BMSCs分化为多种细胞,最终形成比较复杂的胰岛样结构。本研究结果为BMSCs定向诱导分化成胰腺细胞,提供了新的思路和方法。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2018年04期）
吴丽情,寇亚丽,赵文婧,吴卓,徐亦辰[5]（2015）在《体外定向诱导小鼠胰腺干细胞分化形成胰岛样结构》一文中研究指出目的体外探讨胰腺干细胞形成胰岛样结构并对其进行相关检测,探寻胰腺干细胞分化为胰岛样结构可行性及初步鉴定的技术方法。方法从新生小鼠胰腺组织中通过原位传代扩增培养获得富足数量PSC,以尼克酰胺定向诱导PSC,观察细胞的形态变化、形成的细胞团双硫腙染色、免疫荧光组织化学染色及Mallory染色鉴定。结果PSC集落分布,细胞为单个大核、胞质折光透亮,巢蛋白(nestin)及碱性磷酸酶(AKP)染色阳性;诱导后聚集成团,最终形成具被膜包裹的细胞团;双硫腙染色阳性,胰岛素免疫荧光染色可见胞质被激发出绿色荧光的胰岛素阳性细胞;细胞团中央β样细胞及周围α样细胞,形成类似正常胰岛细胞组成的胰岛样结构。结论胰腺干细胞在适宜条件下可定向分化,形成胰岛样结构。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2015年12期）
吴丽情[6]（2015）在《体外诱导骨髓源间充质干细胞分化为胰岛样结构的初步探讨》一文中研究指出目的：探讨诱导BM-MSCs跨胚层分化为胰岛样结构的方法；探究诱导BM-MSCs分化为胰岛样结构的可行性,并初步建立相关的实验室技术方法。方法：优化BM-MSCs的培养体系,建立骨髓源间充质干细胞系；选用第二代BM-MSCs分两组诱导：Ⅱ尼克酰胺组,含10%FBS、10mM尼克酰胺的高糖DMEM液培养BM-MSCs;Ⅱ胰腺组织裂解液组：用胰腺组织裂解液配制条件培养液培养BM-MSCs。诱导2个月,观察细胞形态变化,诱导后以双硫腙染色对细胞团进行初步鉴定；RT-PCR检测insulin基因的表达,胰岛素免疫组织化学染色方法检测细胞团内胰岛素阳性细胞；Mallory染色区分细胞团内不同胰岛细胞。结果：BM-MSCs集落分布,单个大核,折光透亮。在连续诱导培养过程中,①尼克酰胺组：诱导10d出现细胞聚集；诱导19d聚集的细胞增多形成细胞团；诱导的细胞团表面未有被膜包裹；DTZ染色可见细胞团中央部分染成棕红色,RT-PCR证明诱导细胞insulin基因表达；Mallory染色仅见细胞团内淡黄色的类β细胞。②胰腺组织裂解液组：诱导31d细胞成团；诱导47d形成有被膜包裹的细胞团。DTZ染色可见细胞团染色,其中大部分呈棕红色,部分成猩红色；RT-PCR证明诱导细胞insulin基因表达,免疫组织化学染色可见棕色的胰岛素阳性细胞,Mallory染色可见细胞团周围呈黄色的类β细胞及中央呈红色的类α细胞。结论：适宜条件下,BM-MSCs可跨胚层分化形成胰岛样结构。胰腺组织裂解液能更好的模拟微环境,诱导BM-MSCs形成由类Q细胞与类β细胞组成的,且有被膜包裹的胰岛样结构。(本文来源于《广西医科大学》期刊2015-05-01）
寇亚丽[7]（2011）在《体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛样结构的初步探讨》一文中研究指出目的:优化胰腺干细胞原位传代扩增培养方法和技术,建立并形成稳定的胰腺干细胞系,获得较大量胰腺干细胞并体外诱导分化为胰岛样结构。方法:优化原位传代扩增培养的方法对胰腺干细胞进行扩增,建立胰腺干细胞系。选择生长状态良好的的第二代胰腺干细胞分为四组:空白对照组、葡萄糖组、尼克酰胺组、血清尼克酰胺组,体外连续诱导培养4周,观察胰腺干细胞的形态学特征变化规律;以DTZ染色、Mallory染色对诱导后获得的胰岛样结构行进行初步鉴定;胰岛素抗体免疫荧光组织化学染色方法,检测所诱导的胰岛样结构中的胰岛素阳性细胞。结果:空白对照组:胰腺干细胞随着培养时间的延长,细胞形态及生长方式发生改变,由原来的圆形、立体感强变为扁平、折光性降低、立体感减弱;葡萄糖诱导组:诱导9天后,胰腺干细胞聚集,成串样生长,诱导20天后,细胞变扁平,未形成胰岛样结构;尼克酰胺诱导组:诱导5天后,胰腺干细胞逐渐靠拢,诱导25天后,胰腺干细胞形成椭圆形结构;血清尼克酰胺组:诱导1周后,胰腺干细胞逐渐靠拢,汇集成团,诱导2周后,汇集的细胞团增大,但未形成圆形或者椭圆形的结构,诱导3周后,细胞团逐渐形成有完整包膜包裹的胰岛样结构;胰岛样结构DTZ染色,呈棕红色;Mallory染色可见胰岛样结构中周围的细胞呈红色,中央的细胞呈淡黄色;收集胰岛样结构,制作石蜡切片后行Mallory染色,可见有橘黄色、红色两种细胞;胰岛素抗体免疫荧光组织化学染色,在紫外光线激发下,检测到呈绿色荧光的胰岛素阳性细胞。结论:(1)优化后的原位传代扩增培养方法,可扩增并建立胰腺干细胞系,获得较多数量的胰腺干细胞,满足后续实验的需要。(2)在血清尼克酰胺诱导条件下,胰腺干细胞可分化为有完整包膜包裹、DTZ染色阳性、Mallory染色可见两种细胞、胰岛素抗体免疫荧光组织化学染色检测到阳性细胞的胰岛样结构。(本文来源于《广西医科大学》期刊2011-05-01）
许世清,门秀丽,张文健,娄晋宁,蔡寒青[8]（2009）在《诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的实验研究》一文中研究指出目的建立一种体外诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的技术方法。方法体外诱导人胚胎胰腺干细胞分化为胰岛细胞,将胰岛细胞制备成浓度分别为1×104/ml、3×104/ml、1×105/ml、3×105/m(l1×104/ml、3×104/ml、1×105/ml、3×105/ml组)单细胞悬液,在含有细胞外基质(ECM)的培养基中悬浮培养24h以诱导形成胰岛样结构,在荧光体视显微镜下观察胰岛样结构的形态和大小;采用免疫荧光染色方法检测胰岛样结构中ECM成分及其细胞组成与定位。将胰岛样结构分别在含5.6和30.0mmol/L葡萄糖的培养基中体外培养2h,采用放射免疫法测定上清中胰岛素水平。建立糖尿病大鼠模型,经门静脉将胰岛样结构移植至大鼠肝脏,移植后连续3d经鼠尾静脉检测血糖水平。结果90%人胚胎胰腺干细胞分化的胰岛细胞形成了胰岛样结构,其包膜、大小均与天然人胰岛组织结构相似;以形成直径150μm大小胰岛样结构的比例为标准,比较各组细胞浓度与胰岛样结构形成率的关系,结果显示分别与1×104/ml、3×104/ml、3×105/ml组(25.0%±2.5%、28.0%±3.0%、21.5%±2.5%)相比,1×105/ml组胰岛样结构形成率最佳(36.5%±4.0%,均P<0.01)。胰岛样结构包膜上含有与天然人胰岛组织类似的ECM成分,且其中含有胰岛素、胰高血糖素和C-肽阳性细胞,其细胞比例与分布均与天然人胰岛组织类似。30.0mmol/L高糖浓度刺激后胰岛样结构胰岛素释放水平[(110±12)μIU/ml]较5.6mmol/L基础糖浓度[(59.5±8.0)μIU/ml]明显增加(P<0.01),胰岛样结构移植后糖尿病大鼠血糖水平较移植前均明显降低(P<0.01)。结论本研究建立的技术方法可以将干细胞分化的胰岛细胞在体外大量、快速、高效地诱导形成具有功能的胰岛样结构。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2009年06期）
郑伟[9]（2008）在《同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病》一文中研究指出目的:通过分离、纯化大鼠的胰岛及胰腺导管上皮细胞,并在体外一定条件下培养,使胰腺导管上皮细胞扩增、转分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛细胞,将胰岛及诱导分化2周的胰腺导管上皮细胞来源的胰岛样结构序贯移植到药物诱导的糖尿病大鼠体内,观察糖尿病大鼠的血糖及生存情况来探讨胰岛及胰腺导管上皮细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病的可能性并为将此方法用于临床提供实验依据。方法:将大鼠胰腺组织以胶原酶V消化,然后用非连续性密度梯度离心法将胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛分离纯化,导管上皮细胞即具有转分化潜能的胰腺干细胞,在体外经CMRL1066及不含血清的DMEM/F12加多种营养因子的培养液中培养27d。于培养的不同时间点(1,3,5,7,14,21,27d)取细胞作PDX-1、CK-19等单抗的免疫组化染色,光镜和电镜观察不同时间点的细胞形态学变化。按照60mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(STZ),选取连续2次血糖浓度高于16.7mmol/L的大鼠作为糖尿病模型。采用完全随机法将已成模的糖尿病大鼠分为3组:A组:胰岛移植组13只,肾被膜下植入新鲜大鼠胰岛(200±50个);B组:胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植组13只,肾被膜下植入新鲜大鼠胰岛(200±50个)及胰腺干细胞来源的胰岛样结构约2×106个;C组:糖尿病对照组10只,肾被膜下植入培养液。3组大鼠均于移植前及移植后48h测空腹血糖浓度,之后每天经尾静脉采血测空腹血糖观察生存情况。结果:通过分离纯化平均每只大鼠可获得100±50个胰岛及大量胰腺导管上皮细胞。体外培养时光镜下胰腺干细胞在培养后第1d即贴壁生长。培养5d内,贴壁细胞迅速扩增为鹅卵石样小细胞片、大细胞片进而分裂增殖成单层细胞。细胞培养第7d,鹅卵石样细胞片迅速扩大,胰岛样芽团开始从细胞片或单层细胞的中央或边缘出现。培养第21到27d,大量较成熟的胰岛样结构出现,双硫腙染色呈强阳性。细胞培养第7d,几乎所有细胞表面均可见短粗的微绒毛及细胞间较致密的连接复合体。第15d,部分细胞的短粗微绒毛消失,细胞内出现大小不等且密度不均的颗粒,其周围可见较多的中间丝。第27d,部分细胞内出现密度较高的颗粒,另有部分细胞内有较多具有低密度晕环的颗粒,大量含颗粒的细胞连接成片,中间丝基本消失。免疫组织化学染色显示:细胞培养第1d,6孔玻板中的部分细胞呈CK-l9抗体染色强阳性。大部分细胞呈PDX-l抗体染色阳性,部分呈强阳性,部分呈弱阳性,少数细胞为阴性。第7d起,可见胰岛样细胞芽团出现并逐渐增多,绝大多数细胞集落和胰岛样细胞芽团均为CK-19强阳性。14d至27d,胰岛样细胞芽团不断增大,PDX-l抗体染色呈强阳性。移植前3组大鼠的血糖均在16.7mmol/L以上,胰岛移植组和胰岛+胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植组在移植后1周内测血糖浓度均有所降低,序贯移植组降低的幅度较胰岛组大,但仍高于10mmol/L。第2周后两组的血糖浓度均降低到10mmol/L以下,序贯移植组大鼠的血糖均低于胰岛移植组。第3周后胰岛移植组的血糖开始上升逐渐升高到移植前的血糖水平,而序贯移植组的血糖则维持到5mmol/L水平。糖尿病对照组大鼠血糖浓度始终在16.7mmol/L以上,无一血糖下降。结论:通过分离、纯化可以获得大量的新鲜胰岛和胰腺导管上皮细胞,大鼠的胰腺导管上皮细胞具有干细胞潜能,在合适的培养条件下早期即能够转分化为PDX-1阳性的胰腺干细胞。胰腺干细胞体外可诱导分化为分泌胰岛素的胰岛样结构,胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植可有效地纠正糖代谢紊乱对大鼠糖尿病有治疗作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2008-04-01）
胰岛样结构论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:目前,体外已成功将骨髓间充质干细胞定向诱导分化为能够分泌胰岛素的胰岛样细胞团,但是对细胞的形态变化规律、胰岛样细胞团中内分泌细胞的类型及其相互关系的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构过程中细胞的形态变化、内分泌细胞的组成及分布规律。方法:取生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,扩增培养至细胞集落汇合占据瓶底面积80%,加入胰腺组织裂解液连续诱导培养。以双硫腙染色方法对骨髓间充质干细胞定向分化形成的细胞团进行初步筛选,Mallory染色鉴别胰岛内分泌细胞的类型及其分布;采用免疫荧光细胞化学染色法检测胰岛内分泌细胞中胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素蛋白表达。结果与结论:①双硫腙染色显示,随着诱导时间延长,阳性细胞数量逐渐增多;②Mallory染色显示,胰岛样细胞团内α样细胞位于周边,β样细胞分布在中央及周边,成纤维样细胞分布在周围;③免疫荧光染色显示,胰岛样细胞团内有胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素阳性细胞;④结果表明,在特定的微环境条件下,骨髓间充质干细胞能分化为胰岛样结构,内含α、β、δ样细胞,周围有类成纤维细胞包绕。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰岛样结构论文参考文献
[1].刘红静.胰岛样结构分泌功能的初步评价[D].广西医科大学.2019
[2].刘红静,王慧丰,韦雅淑,赵文婧,陈维平.胰腺组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞分化为胰岛样结构的鉴定[J].中国组织工程研究.2019
[3].王慧丰,吴丽情,徐亦辰,韦雅淑,刘红静.不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较[J].基因组学与应用生物学.2018
[4].王慧丰,吴丽情,徐亦辰,韦雅淑,刘红静.不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较[J].基因组学与应用生物学.2018
[5].吴丽情,寇亚丽,赵文婧,吴卓,徐亦辰.体外定向诱导小鼠胰腺干细胞分化形成胰岛样结构[J].基础医学与临床.2015
[6].吴丽情.体外诱导骨髓源间充质干细胞分化为胰岛样结构的初步探讨[D].广西医科大学.2015
[7].寇亚丽.体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛样结构的初步探讨[D].广西医科大学.2011
[8].许世清,门秀丽,张文健,娄晋宁,蔡寒青.诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的实验研究[J].中国医药生物技术.2009
[9].郑伟.同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病[D].第四军医大学.2008