导读:本文包含了内耳毛细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:感音神经性聋,细胞损伤,内耳毛细胞,ROS
内耳毛细胞论文文献综述
尹海燕,孔佑华,张慧[1]（2019）在《NLRX1激活ROS-自噬途径加剧顺铂致感音神经性聋内耳毛细胞损伤》一文中研究指出核苷酸结合结构域和含亮氨酸重复序列的家族成员1(NLRX1)是一种细胞浆模式识别受体,与线粒体功能,活性氧(ROS)产生和自噬紧密相关,NLRX1是否调控内耳毛细胞应激损伤,未见报道。通过免疫荧光、MTT、Western blotting、流式细胞术研究发现NLRX1表达于内耳毛细胞,顺铂促进NLRX1表达及自噬发生,过表达NLRX1促进HEI-OC1听细胞中自噬发生和顺铂(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
唐琦[2]（2019）在《新型内耳毛细胞时空特异性基因敲除工具Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠的构建和鉴定》一文中研究指出研究目的:时空特异性基因敲除是研究小鼠内耳基因功能的重要手段,它可以避免传统基因敲除导致的严重发育畸形和出生后死亡。但现有的内耳毛细胞基因敲除工具多为不可诱导的Cre重组酶,无法对成年小鼠内耳毛细胞基因进行高效的时间特异性敲除。为了更好地实现对成年小鼠内耳毛细胞中基因功能的研究,我们设计构建了新型内耳毛细胞时空特异性基因敲除工具Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠,并对其GCE重组酶的功能进行了鉴定。研究方法:Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠的构建主要采用了胚胎干细胞显微注射的方法,将成功转染的带有Gfi1-P2A-GFP-CreERT2目的基因片段的胚胎干细胞显微注射进E3.5天的小鼠囊胚中,通过胚胎移植的方法移植到代孕母鼠子宫,最后获得Gfi1GEC/Neo嵌合体小鼠。经过多次交配后可得到稳定遗传的Gfi1GCE/+小鼠。通过长距离PCR、免疫荧光染色、耳蜗wholemount染色及听觉脑干反应检测等方法,对Gfi1GCE/+小鼠进行了鉴定。通过对Gfi1GC/+小鼠与Rosa26tdTomato reporter小鼠交配得到的Gfi1GGCE/+;Rosa26tdTmato小鼠进行研究,鉴定了 GCE重组酶的功能并找到了实现Gfi1GC/+GCE重组酶最佳酶切效率的Tamoxifen诱导方案。研究结果:基因型鉴定LR-PCR得到的1.7kb的5'端DNA序列和1.1kb的3'端序列以及使用AcGFP引物鉴定得到的508bp的DNA序列均可证明P2A-GFP-CreERT2 DNA序列被成功插入到小鼠Gfi1第6外显子之后,确定Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠构建成功。Gfi1GCE/+小鼠中GFI1与GFP共表达,且Gfi1基因的表达和功能不受基因重组的影响,即Gfi1GCE/GCE纯合小鼠无听力下降、平衡失调等内耳发育缺陷。在GCE重组酶诱导方案方面,研究明确了对小鼠连续5天腹腔注射Tamoxifen 1mg/次,可实现耳蜗内外毛细胞内基因接近100%的敲除。研究结论:Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠构建成功,可以实现可诱导的内耳毛细胞内基因的高效、时空特异性敲除。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2019-04-01）
谢益,韩锋产[3]（2019）在《miRNAs与内耳发育和听觉毛细胞凋亡与再生的研究进展》一文中研究指出MicroRNAs(miRNAs)是一种小的、非编码蛋白的RNA,它通过转录后机制的调控参与细胞的分化、增殖、凋亡和代谢等多种生物过程。近年来,许多研究发现miRNAs在脊椎动物内耳的发育、改善听觉毛细胞的凋亡以及促进毛细胞的再生中也发挥了重要作用,miRNAs的出现为听力障碍的机制研究与治疗提供了新的方法。(本文来源于《山东大学耳鼻喉眼学报》期刊2019年02期）
陈智斌[4]（2019）在《MicroRNA 384靶向Notch信号通路参与内耳毛细胞损伤修复的相关性研究》一文中研究指出目的:目前认为两栖类、鸟类等低等动物的内耳毛细胞损伤后能部分修复和再生,但哺乳类动物(包括人类)的耳蜗毛细胞损伤不可逆而前庭毛细胞能少量再生。Notch信号通路在内耳毛细胞再生与修复中扮演重要角色,能够介导旁侧抑制作用,抑制毛细胞发生发育的必需基因Atoh1的表达,从而抑制支持细胞分化为毛细胞。在哺乳动物前庭毛细胞修复过程中,Notch信号通路受抑制,导致Atoh1表达上调,虽现今调控机制仍不明确,但一些研究提示micro RNAs(miRNAs)分子可能通过RNA沉默方式调控Notch信号通路中的某些重要基因。本研究旨在通过生物信息学方法筛选出内耳中靶向调控Notch信号通路的miRNAs,并在体内水平验证其对内耳毛细胞损伤修复的影响。方法:首先广泛地文献阅读搜集内耳中差异表达miRNAs,检索KEGG、String、targetscan等数据库获得Notch信号通路相关基因和miRNAs已验证与预测的相互作用关系,并绘制生物分子相互作用网络图。对网络图进行拓扑学分析,筛选核心基因并基于其提取子网络图Core-Notch。通过对Core-Notch进行拓扑学分析与GO分析,筛选目前研究较少并预测对Notch信号通路具有调控作用的miRNAs。获取小鼠包括耳蜗在内的各组织,Q-PCR检测miRNA和靶基因的组织差异性表达情况。将该miRNA的mimic转染Hela细胞,使用Q-PCR和western blot方法检测靶基因的表达量变化。使用targetscan在线工具预测miRNA与靶基因的结合位点,并基于预测位点构建靶基因3’UTR-WT-psiCHECK2表达载体,继而点突变PCR获得3’UTR-MUT-psiCHECK2载体;分别将miRNA mimic与构建的野生型或突变型表达载体共转染3T3-L1细胞,进行双荧光素酶报告基因实验验证miRNA对靶基因的调控作用。结果:本研究采用Cytoscape绘制Notch信号通路相关基因与miRNAs的相互作用网络图,并基于筛选出的核心基因Notch1和Notch2提取Core-Notch子网络图;GO分析显示其富集于Notch信号通路,验证了网络构建的可靠性,且进一步发现在内耳受体细胞命运决定等途径中也有不同程度的富集;拓扑学分析筛选出预测对Notch信号通路具有较强调控作用且目前研究较少的内耳差异表达miRNA——miR-384。Q-PCR显示miR-384在小鼠脑与内耳中特异性表达。miR-384 mimic转染HeLa细胞后,Notch1的mRNA和蛋白表达水平都显着下调。Targetscan预测miR-384对Notch1和Dll4都具有调控作用,基于预测的结合位点分别构建了Notch1和Dll4的3’UTR-WT-psiCHECK2与3’UTR-MUT-psiCHECK2表达载体,测序验证正确。双荧光素酶报告基因实验显示共转染Notch1和Dll4野生型3’UTR与miR-384 mimic质粒组荧光素酶活性都一定程度下调。结论:内耳特异性表达的miRNA-384能够靶向调控Notch1和Dll4,并可能在内耳损伤修复过程中发挥潜在的作用。(本文来源于《南京医科大学》期刊2019-03-01）
Lu-wen,ZHANG,Xiao-hui,CANG,Ye,CHEN,Min-xin,GUAN[5]（2019）在《哺乳动物内耳毛细胞的体外培养（英文）》一文中研究指出由于内耳的血脑屏障作用,药物渗入到内耳比较困难。新生小鼠内耳毛细胞的体外培养体系的建立,为体外进行支持细胞转分化机制的研究和进行体外药物损伤毛细胞实验等提供实验技术的前提。为了避免毛细胞体外培养过程中污染杂菌,解剖内耳耳蜗的整个过程十分重要。处死小鼠后,将其浸泡在75%酒精中1～3分钟,防止鼠毛污染培养基。打开内耳耳蜗之前,选用添加了青霉素的磷酸盐缓冲液(1×PBS);培养过程中使用的是仅仅添加青霉素的培养基来减少对毛细胞的损伤。在基底膜培养的第一步,选用DMEM(包含5%马血清体积比和5%胎牛血清)作为组织粘附培养的培养基,保证足够的营养,同时更好地维持整个基底膜培养状态下的形态。在之后的培养中,选用DMEM(添加了10%胎牛血清、1%N2和1%B27)作为长期的培养基。使用含有表皮生长因子的N2和B27的培养基进行基底膜以及椭圆囊之后的培养,有助于维持毛细胞的体外生长时间。选用鼠尾胶包被盖玻片后培养,可以增加基底膜和椭圆囊的粘附作用,保证毛细胞静纤毛的向上生长。该文章展现了哺乳动物毛细胞的体外培养的具体方法,能够较好地维持耳蜗基底膜在体外培养的形态,并增加毛细胞体外培养的存活时间。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2019年02期）
房冉,孟飞龙,李高鹏,饶琳,赵小立[6]（2019）在《Math1基因在内耳毛细胞发育及再生过程中的作用》一文中研究指出耳蜗感觉毛细胞作为听觉机械感受器,在听觉的发生过程中起着至关重要的作用。哺乳动物的毛细胞损伤后无法再生,往往会造成听力障碍或永久性听力缺失。因此,阐明内耳感觉毛细胞发育过程中的分子机制对听力损伤的诊断与治疗具有非常重要的意义。Math1是毛细胞发育与再生过程中的关键基因,本文就Math1及其相关基因和信号通路在毛细胞的发育与再生过程中的调控作用做简要概述。(本文来源于《浙江大学学报(理学版)》期刊2019年01期）
谢利红,王梦琳,唐安洲[7]（2018）在《内耳毛细胞再生及其信号通路的研究进展》一文中研究指出噪声暴露、环境因素、药物毒性或年龄老化等均可导致耳蜗毛细胞损伤,并继发螺旋神经节细胞损伤,成年哺乳动物毛细胞损伤后无自发再生能力可导致永久性的感音神经性聋~([1～3])。近年来国内外学者对于激活内耳相关通路、诱导内耳感觉前体细胞(部分具有增殖能力的支持细胞亦称感觉前体细胞)(本文来源于《听力学及言语疾病杂志》期刊2018年05期）
杨志,姚俊,曹新[8]（2018）在《FGF信号通路在内耳发育调控和毛细胞再生中的作用》一文中研究指出内耳是感受听觉和平衡觉的复杂器官。在内耳发育过程中,成纤维生长因子(fibroblast growth factor,FGF)信号通路参与了听基板的诱导、螺旋神经节(statoacoustic ganglion,SAG)的发育以及Corti器感觉上皮的分化。FGF信号开启了内耳早期发育的基因调控网络,诱导前基板区域以及听基板的形成。正常表达的FGF信号分子可促进听囊腹侧成神经细胞的特化,但成熟SAG神经元释放的过量FGF5可抑制此过程,形成负反馈环路使SAG在稳定状态下发育。FGF20在Notch信号通路的调控下参与了前感觉上皮区域向毛细胞和支持细胞的分化过程,而内毛细胞分泌的FGF8可调控局部支持细胞分化为柱细胞。人类FGF信号通路异常可导致多种耳聋相关遗传病。此外,FGF信号通路在低等脊椎动物毛细胞自发再生以及干细胞向内耳毛细胞诱导过程中都起到了关键作用。本文综述了FGF信号通路在内耳发育调控以及毛细胞再生中的作用及其相关研究进展,以期为毛细胞再生中FGF信号通路调控机制的阐明奠定理论基础。(本文来源于《遗传》期刊2018年07期）
唐小林,李洋,余菲,贾立峰,李华君[9]（2018）在《miR-140在内耳毛细胞中的表达及其对突触蛋白Dynamin-1的调控作用》一文中研究指出目的研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用。方法取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜,免疫荧光染色和原位杂交法观察Dynamin-1与miR-140的表达定位情况。构建荧光素酶报告基因载体转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确Dnm1是否是miR-140的靶基因。携带miR-140前体及空载的腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)通过圆窗膜注射传递到耳蜗中,14 d后RT-PCR检测miR-140及Dnm1的mRNA表达水平,Western blot检测Dynamin-1蛋白的表达水平。结果 miR-140表达于内外毛细胞细胞质,Dynamin-1主要表达于内毛细胞细胞质;荧光素酶活性检测结果显示,miR-140抑制Dnm1的3'UTR荧光素酶报告基因活性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot检测结果显示:转染AAV-miR-140后miR-140的相对表达量明显升高,Dnm1的mRNA及其蛋白表达水平显着降低(P<0.05)。结论Dnm1是miR-140的靶基因,且miR-140可以抑制内耳毛细胞中Dynamin-1的表达,表明miR-140可能通过抑制Dynamin-1蛋白负向调控内毛细胞突触囊泡内吞过程,进而影响听觉信号的传递。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2018年11期）
陈倩倩[10]（2017）在《STAT3信号通路在哺乳动物内耳毛细胞发育中的作用及机制研究》一文中研究指出随着城市化机械噪音加剧,抗生素滥用,人口老龄化推进等,听力损害(hearing impairment)患者正逐年增加,严重影响了人们的生活质量。听觉构成由一系列高度精细而复杂的组织组成,其中内耳毛细胞是重要的组成成分,将机械振动转化为电信号,后经连接的传入神经传至中枢神经系统。听力损害主要原因是内耳毛细胞的损伤。而哺乳动物的毛细胞损伤是永久性损伤,即不可再生出新的毛细胞。因此,从基因或分子水平上(根源上)发现诱导毛细胞发育的因子和引起听力损伤的原因是治疗该疾病的关键。毛细胞坐落于内耳柯蒂斯器(Organ of Corti)内,由3排外毛细胞和1排内毛细胞组成,外部由支持细胞包绕,底部与神经连接。在小鼠内耳发育过程中,胚胎期14天,内耳上皮中-基底区最初产生毛细胞,并按照基底-顶端和内侧-外侧的方式逐渐发育为成熟毛细胞。研究发现,多种信号通路参与内耳毛细胞的发育过程。比如,Notch是经典的调节毛细胞发育的信号通路之一,在内耳发育早期,激活的Notch信号通路维持前感觉上皮的形成;在发育后期,Notch信号通过“侧抑制”机制介导毛细胞和支持细胞的分化;抑制Notch信号通路促进毛细胞的再生。Wnt信号通路的激活可促进感觉上皮的增殖和分化,并与Notch相互作用共同介导毛细胞的分化。再有,Math1基因是介导毛细胞分化的重要因子。Math1的过表达促进毛细胞的分化及再生;相反,抑制Math1的表达则抑制毛细胞的分化。除此之外,STAT3信号通路在斑马鱼神经丘(Zebrafish neuromasts)发育过程中有调节作用,在毛细胞损伤再生过程中,STAT3活化;而敲除Stat3基因抑制了Math1表达,从而造成毛细胞数量减少。但是,STAT3信号通路在哺乳动物内耳发育中的功能不明确,及与Notch信号间的相互关系也没有探讨。另一方面,干细胞的对称与不对称分裂模式(symmetric and asymmetric division mode)是维持干细胞干性及定向分化的重要机制之一,干细胞通过对称分裂产生两个子代干细胞,或两个子代分化细胞;或通过不对称分裂产生一个干细胞和一个子代细胞。然而,哺乳动物内耳干细胞是否存在对称与不对称分裂模式仍不清楚,及STAT3信号通路是否影响内耳干细胞的对称不对称分裂模式未有研究。本课题通过条件性敲除小鼠模型结合体外诱导毛细胞分化体系,揭示STAT3信号通路在内耳干细胞发育中的功能。在第一章中,我们发现,在内耳发育早期,STAT3广泛的表达在内耳感觉上皮,随着发育进程逐渐表达在内耳毛细胞上,同时STAT3 pS727也表达在内耳毛细胞上。在体外诱导毛细胞分化体系中,Stat3的表达随分化的进程表达增加,并与Math1的表达呈正相关;同时在毛细胞上出现STAT3磷酸化。由Sox2CreER诱导的STAT3敲除的小鼠模型发现,敲除STAT3后,内耳耳蜗结构紊乱,毛细胞数量减少,Math1及内耳发育相关基因表达减少;特别重要的是,出现外毛细胞的缺失数目多,内毛细胞缺失数目少。同样,体外组织培养和诱导分化的体系中,也发现敲除STAT3后出现毛细胞发育障碍。另一方面,通过对内耳支持细胞(干细胞)有丝分裂过程分析,抑制STAT3信号通路可降低通过有丝分裂途径产生的毛细胞,进一步分析,在体外诱导毛细胞分化体系中,支持细胞通过对称与不对称分裂模式产生子代细胞。而抑制STAT3信号通路可降低不对称分裂比例,造成毛细胞数量减少。在第二章中,我们研究了STAT3和Notch信号通路在内耳毛细胞发育中的相互作用及功能。通过Sox2-CreER诱导的Notch1敲除小鼠模型及组织培养,STAT3及STAT3 pS727表达在再生的毛细胞上,且STAT3表达上调,说明STAT3是由抑制Notch再生毛细胞过程的参与分子。组织培养及体外诱导体系中,同时抑制Notch和STAT3信号通路时,与单独抑制Notch信号通路相比,毛细胞数量降低。更重要的是,抑制Notch信号,干细胞通过不对称分裂产生毛细胞比例增加,而同时是抑制STAT3和Notch信号通路时,与单独抑制Notch信号相比,不对称分裂比例下降,表明,抑制STAT3信号通路可通过减少不对称分裂模式而降低由抑制Notch信号通路再生毛细胞。综上所述,STAT3信号通路参与内耳毛细胞发育过程。STAT3,作为Notch信号下游分子,通过对称与不对称分裂方式调控内耳毛细胞的分化。(本文来源于《上海交通大学》期刊2017-06-01）
内耳毛细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究目的:时空特异性基因敲除是研究小鼠内耳基因功能的重要手段,它可以避免传统基因敲除导致的严重发育畸形和出生后死亡。但现有的内耳毛细胞基因敲除工具多为不可诱导的Cre重组酶,无法对成年小鼠内耳毛细胞基因进行高效的时间特异性敲除。为了更好地实现对成年小鼠内耳毛细胞中基因功能的研究,我们设计构建了新型内耳毛细胞时空特异性基因敲除工具Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠,并对其GCE重组酶的功能进行了鉴定。研究方法:Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠的构建主要采用了胚胎干细胞显微注射的方法,将成功转染的带有Gfi1-P2A-GFP-CreERT2目的基因片段的胚胎干细胞显微注射进E3.5天的小鼠囊胚中,通过胚胎移植的方法移植到代孕母鼠子宫,最后获得Gfi1GEC/Neo嵌合体小鼠。经过多次交配后可得到稳定遗传的Gfi1GCE/+小鼠。通过长距离PCR、免疫荧光染色、耳蜗wholemount染色及听觉脑干反应检测等方法,对Gfi1GCE/+小鼠进行了鉴定。通过对Gfi1GC/+小鼠与Rosa26tdTomato reporter小鼠交配得到的Gfi1GGCE/+;Rosa26tdTmato小鼠进行研究,鉴定了 GCE重组酶的功能并找到了实现Gfi1GC/+GCE重组酶最佳酶切效率的Tamoxifen诱导方案。研究结果:基因型鉴定LR-PCR得到的1.7kb的5'端DNA序列和1.1kb的3'端序列以及使用AcGFP引物鉴定得到的508bp的DNA序列均可证明P2A-GFP-CreERT2 DNA序列被成功插入到小鼠Gfi1第6外显子之后,确定Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠构建成功。Gfi1GCE/+小鼠中GFI1与GFP共表达,且Gfi1基因的表达和功能不受基因重组的影响,即Gfi1GCE/GCE纯合小鼠无听力下降、平衡失调等内耳发育缺陷。在GCE重组酶诱导方案方面,研究明确了对小鼠连续5天腹腔注射Tamoxifen 1mg/次,可实现耳蜗内外毛细胞内基因接近100%的敲除。研究结论:Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠构建成功,可以实现可诱导的内耳毛细胞内基因的高效、时空特异性敲除。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内耳毛细胞论文参考文献
[1].尹海燕,孔佑华,张慧.NLRX1激活ROS-自噬途径加剧顺铂致感音神经性聋内耳毛细胞损伤[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[2].唐琦.新型内耳毛细胞时空特异性基因敲除工具Gfi1-P2A-GFP-CreERT2小鼠的构建和鉴定[D].北京协和医学院.2019
[3].谢益,韩锋产.miRNAs与内耳发育和听觉毛细胞凋亡与再生的研究进展[J].山东大学耳鼻喉眼学报.2019
[4].陈智斌.MicroRNA384靶向Notch信号通路参与内耳毛细胞损伤修复的相关性研究[D].南京医科大学.2019
[5].Lu-wen,ZHANG,Xiao-hui,CANG,Ye,CHEN,Min-xin,GUAN.哺乳动物内耳毛细胞的体外培养（英文）[J].JournalofZhejiangUniversity-ScienceB(Biomedicine&Biotechnology).2019
[6].房冉,孟飞龙,李高鹏,饶琳,赵小立.Math1基因在内耳毛细胞发育及再生过程中的作用[J].浙江大学学报(理学版).2019
[7].谢利红,王梦琳,唐安洲.内耳毛细胞再生及其信号通路的研究进展[J].听力学及言语疾病杂志.2018
[8].杨志,姚俊,曹新.FGF信号通路在内耳发育调控和毛细胞再生中的作用[J].遗传.2018
[9].唐小林,李洋,余菲,贾立峰,李华君.miR-140在内耳毛细胞中的表达及其对突触蛋白Dynamin-1的调控作用[J].第叁军医大学学报.2018
[10].陈倩倩.STAT3信号通路在哺乳动物内耳毛细胞发育中的作用及机制研究[D].上海交通大学.2017