导读:本文包含了播散肿瘤细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵巢癌,腹水,肿瘤相关成纤维细胞,Leptin
播散肿瘤细胞论文文献综述
章凡,杨宗元[1]（2018）在《Leptin促进肿瘤相关成纤维细胞活化及卵巢癌腹腔播散》一文中研究指出目的探索腹水中瘦素(Leptin)对成纤维细胞活化的作用以及对卵巢癌腹腔播散的影响。方法恶性腹水中分离肿瘤相关成纤维细胞并鉴定;Transwell及系膜撕开试验探究其对卵巢癌细胞侵袭能力的影响;ELISA比较良恶性腹水中Leptin表达水平差异;数据库分析微环境细胞Leptin受体表达情况;免疫荧光、Western blot及胶原回缩试验探究Leptin对成纤维细胞活化的影响;SKOV3原位移植模型探索Leptin对成纤维细胞活化及腹腔播散的影响。结果腹水中肿瘤相关成纤维细胞高表达α-SMA;其显着增加卵巢癌细胞体外侵袭能力;Leptin在良恶性腹水中表达分别为(132.1±15.6)pg/mL、(576.4±60.4)pg/mL;成纤维细胞高表达Leptin受体;Leptin重组蛋白显着增加成纤维细胞活化;移植瘤模型中IgG/Leptin封闭组活化成纤维细胞比例分别为(24.6±3.5)%、(8.5±1.6)%;腹腔种植灶数目分别为(20±3)、(7±2)个;总的转移灶重量分别为(2±0.5)、(0.5±0.1)g。结论卵巢癌腹水中Leptin维持成纤维细胞的活化,可考虑作为遏制卵巢癌腹腔播散的治疗靶点。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年18期）
李勇超[2]（2017）在《循环肿瘤细胞通过诱导系统性炎症及调控中性粒细胞的功能促进播散肿瘤细胞转移克隆的形成》一文中研究指出尽管肿瘤的检测和治疗手段不断进步,但肿瘤的远处转移依然是导致肿瘤相关死亡的最大原因。循环肿瘤细胞在临床多种不同类型的肿瘤病人体内都能检测出来,并且体内高水平的循环肿瘤细胞往往导致肿瘤病人的差预后及生存期缩短。临床上,循环肿瘤细胞可以作为液态活检的目标用来预测病人的预后及监测肿瘤的复发情况。但除了被认为是肿瘤转移起始细胞的来源外,关于循环肿瘤细胞是否能通过其他机制影响肿瘤转移还知之甚少。目的:本研究为了探索循环肿瘤细胞对肿瘤转移的作用及其作用机制。方法:(1)利用两种转移能力不同的细胞系--B16F0和B16F1细胞,分别构建循环肿瘤细胞小鼠模型(cir-B16F0鼠)和肿瘤转移模型(B16F1荷瘤鼠);(2)小鼠尾静脉先后接种B1F0细胞和CFSE标记的B16F1细胞,并分别于接种B16F1后5 h和24 h处死小鼠并取其肺脏,然后冰冻切片并荧光显微镜下观察肺组织中CFSE标记肿瘤细胞的分布情况;(3)ELISA检测不同动物模型血清中促炎因子--IL-6和IL-1β--的浓度;(4)免疫组化检测不同模型小鼠肺组织中中性粒细胞的浸润情况;(5)B16F1荷瘤鼠和B16F0与B16F1混合接种鼠通过腹腔注射anti-Ly6G单克隆抗体体内清除中性粒细胞,然后观察观察其肺脏表面转移结节形成情况;(6)从不同动物模型体内分离其骨髓和腹腔趋化来的中性粒细胞,并将其与B16F1细胞混合接种到正常小鼠大腿肌肉,荷瘤12天后去小鼠肌肉肿瘤组织并称重;(7)体内转染表达抗炎因子--IL-37的质粒,观察炎症对循环肿瘤细胞促进肿瘤转移及对中性粒细胞功能调控作用的影响;(8)real-time PCR检测cir-B16F0小鼠骨髓中性粒细胞中促瘤相关基因--Mmp9,Bv8,Arg1和Nos2及抑瘤相关基因--Trail和Rab27a的表达;分离cir-B16F0小鼠腹腔趋化来的中性粒细胞并体外用肿瘤组织间液(T-sMs)刺激培养12 h后real-time PCR检测上述促瘤和抑瘤相关基因的表达;(9)通过酶底物反应检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞中MPO的释放,及通过流式细胞术检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞表面与其脱颗粒相关的表面标记分子--CD63的表达情况;Western blot检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞中与脱颗粒相关的信号通路--p38MAPK和PI3K信号通路的激活情况;(10)分别用real-time PCR和ELISA检测cir-B16F0小鼠肺脏和脾脏中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平,及其血清中G-CSF,IL-6和IL-1β的水平;(11)cir-B16F0小鼠体内中和IL-1β后real-time PCR检测其肺和脾中Csf3(g-csf)和II6的mRNA水平;(12)Western blot检测cir-B16F0小鼠血清和肺脏中TLR2和TLR4配体--HMGB1,HSP70,S100A8,S100A9 和 SAA3 的水平;(13)cir-B 16F0小鼠体内转染表达可溶性TLR2(sTLR2)和TLR4(sTLR4)质粒,观察TLR2/4配体对循环肿瘤细胞诱导炎症反应和促进肿瘤转移的影响。结果:(1)循环肿瘤细胞通过促进播散肿瘤细胞(B16F1)的转移克隆形成进而促进肿瘤转移;(2)循环肿瘤细胞可以诱导IL-6,IL-1β等促炎因子的表达,进而诱导系统性炎症反应;(3)循环肿瘤细胞促进肺组织中中性粒细胞的浸润;(4)体内清除中性粒细胞导致循环肿瘤细胞不能促进B16F1细胞肺转移;(5)循环肿瘤细胞促进中性粒细胞中Mmp9,Bv8,Arg1和Nos2基因的表达,而抑制TRAIL和Rab27a的表达;(6)循环肿瘤细胞上调中性粒细胞对肿瘤微环境刺激物的反应性;(7)循环肿瘤细胞减弱中性粒细胞的脱颗粒能力及p38MAPK和PI3K细胞信号通路的激活;(8)体内转染表达IL-37能有效抑制循环肿瘤细胞诱导的系统性炎症反应及其对中性粒细胞功能的调控作用,但IL-37并不能直接作用于B16F1细胞,同时也不能直接影响循环肿瘤细胞对中性粒细胞的功能及反应性的调控作用;(9)cir-B 16F0小鼠肺脏和脾脏中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平上调,同时,其血清中G-CSF和IL-6的水平也上调;(10)cir-B16F0小鼠中和IL-1β后,其肺和脾中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平均显着降低;(11)cir-B16F0小鼠血清中TLR2/4配体--HMGB1和HSP70水平上升。同时,上调的TLR2/4配体进一步促进小鼠肺组织中内源性TLR2/4配体--S100A8,S100A9和SAA3的表达。这些TLR2/4配体共同促进G-CSF,IL-6和IL-1β的表达;(12)体内转染表达可溶性TLR2(sTLR2)和TLR4(sTLR4),可以有效抑制由循环肿瘤细胞诱导的G-CSF,IL-6和IL-1β浓度的上调,同时也能有效抑制循环肿瘤细胞对肿瘤转移的促进作用。结论:循环肿瘤细胞通过诱导系统性炎症反应,并促进中性粒细胞向转移前病灶浸润,及调控中性粒细胞向促瘤功能转变,进而促进播散肿瘤肿瘤细胞的转移克隆形成,最终促进肿瘤的远处转移。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-25）
贾静[3]（2016）在《乳腺癌播散肿瘤细胞检测进展》一文中研究指出本文通过文献回顾的方式对关于乳腺癌播散肿瘤细胞检测的方法及其进展进行了总结。免疫组化的方法因其特异性高而成为目前乳腺癌播散肿瘤细胞检测中的金标准,但由于其灵敏度稍低,而且由于各检测单位缺乏统一、标准的检测流程,故其临床的应用受到一定的限制。今后若能在大样本量、随机前瞻性研究的支持下,统一目前乳腺癌播散肿瘤细胞检测中的分歧,必将对乳腺癌的诊疗起到极大的促进作用。(本文来源于《心血管病防治知识(学术版)》期刊2016年04期）
牟云,韦堡升,于大海,施强,黎明武[4]（2016）在《小鼠口腔癌淋巴道转移模型颌下淋巴结播散肿瘤细胞的检测》一文中研究指出目的:检测小鼠口腔癌淋巴道转移模型癌变过程不同时期的颌下淋巴结播散肿瘤细胞(disseminated tumor cell,DTC),探讨小鼠口腔癌变过程与颌下淋巴结DTC的关系。方法:病理检查明确诊断为口腔正常组小鼠4只,轻至中度异常增生组8只、重度异常增生组4只,口腔鳞癌无淋巴结转移组、伴淋巴结转移组各4只。采用免疫组织化学指标广谱细胞角蛋白(pancytokeratin,pan-CK)检测颌下淋巴结DTC,比较其差异。结果:口腔正常组0只、轻至中度异常增生组2只,重度异常增生组1只,口腔鳞癌无淋巴结转移组2只,口腔鳞癌伴淋巴结转移组4只颌下淋巴结发现DTC,阳性率分别为0%(0/4)、25%(2/8)、25%(1/4)、50%(2/4)和100%(4/4);随着癌病程度的增加,DTC由簇状分布向片状分布发展。结论:小鼠口腔黏膜恶变过程中,区域淋巴结在轻至中度异常增生时即可检测到DTC,并随癌变程度加重,DTC的发生率及数量不断增加。(本文来源于《广西医科大学学报》期刊2016年02期）
盛慧,陈慧,潘丽,李丹[5]（2015）在《卵巢癌患者腹水中CD90(+)细胞促进肿瘤细胞腹腔播散》一文中研究指出目的检测卵巢癌患者腹水中的CD90(+)细胞含量,鉴定其对卵巢癌细胞生物学特性和腹腔种植的影响。方法从良性腹水和恶性腹水中成功分离细胞后流式细胞检测其中CD90细胞阳性率,磁珠分选得到CD90(+)细胞后培养得到其分泌上清刺激卵巢癌细胞qRT-PCR及Western blot,比较卵巢癌干细胞相关基因(CD44、CD133、ALDH1、OCT4、Nanog)表达情况;悬浮成球试验观察其分泌上清对卵巢癌细胞悬浮成球能力的影响;免疫缺陷小鼠体内的腹腔种植试验对比CD90(+)细胞对卵巢癌细胞成瘤能力以及腹腔播散的影响。结果良性腹水中可检测少量的CD90(+)细胞,其比例为(2.91±0.52)%,恶性腹水中比例为(22.95±6.24)%;CD90(+)细胞上清刺激SKOV3和CaOV3细胞后表达更高的干细胞基因CD133、CD44、ALDH1、OCT4和Nanog(P<0.01);悬浮成球试验结果示SKOV3细胞中对照组球体数目和球体大小分别是(50±2)个和(215±21)个细胞,CM处理组分别为(115±12)个和(620±54)个细胞;CaOV3细胞中对照组球体数目和球体大小分别是(65±6)个和(112±23)个细胞,CM处理组为(145±12)个和(315±34)个细胞;体内成瘤试验结果示SKOV3细胞组小鼠腹腔种植灶数目是(22±3)个,SKOV3联合CD90(+)细胞组种植灶数目是(46±5)个;总的转移灶重量分别是(1.8±0.4)g和(5.1±0.8)g。结论卵巢癌腹水中高表达CD90(+)细胞,这群细胞可以刺激卵巢癌细胞高表达干细胞基因,具备更强的成球能力,促进卵巢癌细胞腹腔播散,CD90(+)细胞可考虑作为卵巢癌靶向治疗靶点。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2015年24期）
史俊林[6]（2015）在《肿瘤微环境促进骨髓播散肿瘤细胞（DTCs）形成的机制研究》一文中研究指出目的：揭示肿瘤微环境启动前列腺癌细胞发生EMT并形成DTCs的分子机制,对该过程进行阻断,以减少肿瘤的复发和转移。方法：运用慢病毒转染法构建稳定表达luciferase的前列腺癌细胞系(PC3-luc, C4-2B-luc, RM-1-luc),并以皮下接种的方式建立小鼠前列腺癌模型,待肿瘤长到一定大小时,将皮下肿瘤取出再培养并运用Western blot检测EMT标记蛋白的变化；运用RT-PCR检测皮下接种前列腺癌小鼠的DTC细胞；对亲本前列腺癌细胞及小鼠皮下前列腺癌细胞进行生物学特点的比较,并探索其分子机制；此外本研究还建立了前列腺癌细胞心内注射和胫骨注射转移模型,并分离培养了特异性肺转移前列腺癌细胞。结果：本研究构建了稳定表达luciferase的前列腺癌细胞系,建立了小鼠皮下前列腺癌接种模型,检测到了小鼠骨髓中存在DTC细胞,且皮下肿瘤再培养的细胞发生了EMT改变,并获得了更强的增殖、迁移侵袭及血管再生能力。进一步的机制研究发现其可能是由于Akt调控MCP-1的表达来实现,或经Akt/AMPK α/mTOR信号通路调控所致。此外本研究建立的心内注射小鼠模型和胫骨注射小鼠模型均发生了全身多脏器的转移。结论：接种于小鼠皮下的前列腺癌细胞在体内微环境的作用下,发生了EMT转化并促进了DTCs的产生,且其获得了更强的增殖、迁移侵袭和血管形成能力。这可能是由于Akt调控MCP-1高表达或Akt/AMPK α /mTOR信号通路调控所致。心内注射及胫骨注射肿瘤模型可用于器官特异性转移的相关研究。第一部分建立稳定表达luciferase的前列腺癌细胞系目的：构建能够稳定表达luciferase的前列腺癌细胞系。方法：对pCDNA3.1、 pGL3-control、pGL4.50及包装质粒VSV-G、pRRE、 RSV-REV进行质粒的转化及扩增提取；对pCDNA3.1, pGL3-control脂质体共转染,pGL4.50脂质体转染,pGL4.50电穿孔转染法,pGLV4-EF1a-Luc慢病毒转染法构建稳定表达luciferase前列腺癌细胞株进行比较。根据GFP的表达量,运用流式细胞分选术收集高表达GFP的pGLV4-EF1a-Luc慢病毒转染的PC3-luc和C4-2B-luc细胞；构建luciferase慢病毒载体,运用菌液PCR,质粒电泳纯化双酶切及质粒测序等方法鉴定连接正确的慢病毒载体,运用VSV-G、pRRE、RSV-REV叁质粒包装系统在293T细胞中进行病毒包装并转染多种细胞株,Blasticidin抗生素进行阳性筛选构建稳定表达luciferase的前列腺癌细胞株以及其他种类的细胞株。结果：在对多种转染方法比较之后,本研究最终选用购白上海吉玛公司的pGLV4-EF la-Luc慢病毒液构建了稳定表达luciferase勺PC3和C4-2B两株前列腺癌细胞系PC3-luc和C4-2B-luc,并运用流式细胞仪分选出了GFP强阳性的细胞。另外本研究自行构建了luciferase慢病毒载体,挑选出菌液PCR、双酶切、测序等方法验证正确的载体进行扩增和包装,构建了稳定表达luciferase的小鼠RM-1前列腺癌细胞株RM-1-luc以及其他种类的前列腺癌细胞株,肝癌,乳腺癌,肺癌,卵巢癌及部分耐药株等在内的荧光素酶标记细胞,以供实验室其他研究所用。结论：与脂质体转染法及电穿孔转染法相比,慢病毒转染法更适于构建稳定表达目的基因的细胞株。第二部分建立前列腺癌细胞体内发生EMT的研究模型目的：建立PC3-luc, C4-2B-luc, RM-1-luc小鼠皮下接种肿瘤模型,发现肿瘤转移的早期事件。方法：将PC3-luc细胞接种于裸鼠皮下,C4-2B-luc细胞接种于SCID小鼠皮下和RM-1-luc细胞接种于C57BL/6J小鼠皮下(2×106cells/只)；接种后每周一次活体成像,每周2次游标卡尺测量肿瘤体积并监测小鼠体重变化,实时动态观察肿瘤生长；待肿瘤长到一定大小时,将小鼠处死,取皮下肿瘤进行体外再培养(PC3-lucs1, C4-2B-lucs1, RM-l-luc s1),观察皮下肿瘤细胞的形态改变并运用WB检测与亲本细胞相比,皮下肿瘤再培养细胞EMT标志蛋白的改变。结果：成功构建了PC3-luc, C4-2B-luc, RM-1-luc皮下接种肿瘤模型并获得了皮下肿瘤生长曲线；皮下肿瘤再培养细胞与亲本细胞相比,形态发生了改变。EMT标记检测发现在与亲本细胞相比,Vimentin和snail在PC3-luc s1细胞中的表达增高,而E-cadherin, claudin-1和ZO-1在PC3-lucs1细胞中的表达下降。结论：皮下肿瘤细胞发生了EMT改变。第叁部分骨髓播散肿瘤细胞的检测目的：检测皮下接种肿瘤细胞小鼠模型骨髓中是否存在DTC细胞方法：接种了肿瘤细胞的小鼠待皮下肿瘤长到一定大小时,将小鼠处死,分离髂骨、股骨和胫骨(髂骨和股骨用于分离骨髓,胫骨用于固定脱钙包埋),髂骨和股骨冲出骨髓后分别提取总RNA用于PCR检测。PC3-TxR, DU145, CNE2小鼠骨髓来自于本实验室其他课题组的皮下肿瘤细胞接种模型。总RNA逆转录后检测Luc2和Human GAPDH基因在小鼠骨髓mRNA水平的表达情况,小鼠GAPDH作为内参；胫骨置于10%中性福尔马林中固定24小时后,转入10%EDTA脱钙完全后转移至70%乙醇保存并进行石蜡包埋和切片。结果：PCR结果显示在这些肿瘤细胞接种的小鼠骨髓中有Luc2和Human GAPDH的表达,而他们在正常对照小鼠的骨髓中没有表达。结论：皮下接种了肿瘤细胞的小鼠骨髓中出现了DTCs第四部分肿瘤微环境促进前列腺癌细胞生物学功能的改变目的：检测EMT发生后,获得了间充质表型的PC3-luc s1细胞的生物学特性改变。方法：将PC3, PC3-luc和PC3-luc s1细胞分别再次注射于裸鼠皮下2×106cells/只),每周进行一次活体成像,每周两次游标卡尺测量肿瘤大小及体重监测,比较两株细胞在肿瘤生长过程中所发生的变化。待肿瘤生长到一定大小时,将小鼠处死,分离皮下肿瘤,比较组织改变；用MTS法体外比较PC3, PC3-luc和PC3-luc s1的细胞增殖情况；运用细胞划痕愈合实验及Transwell小室比较PC3, PC3-luc和PC3-luc s1叁株细胞的迁移和侵袭能力。结果：在体内,PC3-luc s1小鼠皮下肿瘤比PC3和PC3-luc小鼠皮下肿瘤生长速度快,均匀且表面布有更丰富的血管；体外实验证实与PC3及PC3-luc细胞相比,PC3-luc s1细胞增殖速度并未增加,迁移和侵袭能力均有增强。结论：与PC3和PC3-luc相比,发生了EMT改变后的PC3-luc s1具有了更强的增殖,迁移侵袭和血管生成能力。第五部分 微环境诱导前列腺癌细胞发生EMT并形成DTCs的作用机制目的：揭示前列腺癌细胞在体内生长过程中发生EMT并产生DTCs的分子机制。方法：运用antibody array, Protein/DNA array检测PC3, PC3-luc, PC3-luc s1, C4-2B, C4-2B-luc, C4-2B-Iuc s1细胞的差异条件培养上清蛋白表达和核蛋白差异表达转录因子;运用STRING 10.0软件分析其可能的相关通路；通过ELISA和荧光定量RT-PCR验证其差异表达蛋白在PC3, PC3-luc, PC3-luc s1中的表达,Western blot验证核差异表达转录因子,并检测相关重要通路蛋白的表达情况。结果：与亲本细胞相比,MCP-1在PC3-lucs1和C4-2B-lucs1条件培养上清中的表达均有增高;在PC3-lucs1细胞核中,转录因子c-Myb, SP-1表达下调,c-Jun表达上调,而CREB变化不大。总蛋白Western blot检测结果显示：p-Akt, Akt, p-AMPK α, AMPK α, p-mTOR, mTOR, p-p70S6K, p70S6K, p-4E-BP1,4E-BP1蛋白在PC3, PC3-luc, PC3-lucs1中的表达有变化,其中p-mTOR表达下调,p-p70S6K, p-4E-BP1和p-GSK-3β表达上调,总蛋白均不变。结论；EMT的发生,及肿瘤细胞的增殖、转移和血管形成有可能是通过Akt经AP-1调控MCP-1的表达来实现,或经Akt/AMPK α/mTOR信号通路调控所致。第六部分小鼠器官特异性转移模型的建立目的：建立PC3-luc及RM-1-luc小鼠心内注射和胫骨注射转移模型方法：将2×105个PC3-luc和RM-1-luc细胞以心内注射的方式和胫骨注射的方式分别注射于SCID小鼠和C57BL/6J小鼠,每周一次活体成像观察肿瘤转移情况,每周称重两次监测小鼠身体状况。待转移瘤长到一定大小时,将小鼠处死,取出内脏做活成像离体曝光,留取部分肺部转移小鼠做转移瘤体外再培养。结果：PC3-luc细胞建立的心内注射模型小鼠约在4周后开始出现转移,包括肺部转移、肝脏转移和骨转移；PC3-luc细胞建立的胫骨注射模型小鼠在原位生长充满整个腿部及脚部的骨髓腔,并在8周后开始转移到对侧腿部和脚部；RM-1-luc细胞心内注射的模型小鼠约在1周后就出现了全身脏器的转移,包括脑、心脏、肺脏、肝脏、肾脏等,RM-1-luc细胞胫骨注射的模型小鼠不仅在骨髓腔内生长,且约在1周后出现以肺部转移为主的脑转移、心脏转移和肝脏转移等；PC3-luc和RM-1-luc细胞的肺转移细胞株被收集体外再培养。结论：心内注射前列腺癌小鼠模型可发生全身主要脏器的转移及骨转移,而胫骨注射前列腺癌小鼠模型,肿瘤不仅在注射部分的骨髓腔内生长,并可发生远端转移。(本文来源于《广西医科大学》期刊2015-06-01）
于雪峰,薛英威[7]（2014）在《胃癌D2淋巴结清扫术对肿瘤细胞腹腔播散的影响》一文中研究指出目的:我们检测D2手术前后胃癌脱落细胞阳性率的差异,决定是否行腹腔灌洗并判定其有效性。方法:我们搜集了64例行胃癌根治术的病人,在肿瘤切除前,我们搜集腹腔冲洗液进行细胞图片和免疫组化分析,记做第一次冲洗(S1)。然后进行肿瘤切除和淋巴结清扫,清扫完毕进行第二次搜集腹腔冲洗液(S2)。接着选用生理盐水(31)和蒸馏水(33)分别进行腹腔灌洗术,腹腔灌洗术完毕后再次搜集腹腔冲洗液(S3),分析这3次冲洗液所含肿瘤细胞差异。结果:在S1阶段18例病人(28.1%)被认定或高度怀疑含有肿瘤细胞,在S2阶段有34例样本被认定为可疑肿瘤细胞,这表明D2手术造成了额外了16例样本肿瘤细胞阳性(16/46,34.8%)。在S3阶段通过用生理盐水及蒸馏水腹腔扩大灌洗后,冲洗液中无法检测到可疑的肿瘤细胞。结论:D2手术可能会导致医源性肿瘤细胞的腹腔播散,腹腔扩大冲洗术可避免手术所带来的肿瘤细胞播散并降低术后腹膜复发的风险。(本文来源于《第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编》期刊2014-06-27）
韦堡升[8]（2014）在《TGF-β1、N-cadherin在人和小鼠口腔鳞癌中表达及播散肿瘤细胞在小鼠颌下淋巴结中表达的研究》一文中研究指出目的：1.分别检测TGF-β1、N-cadherin在人和小鼠口腔正常粘膜组织、异常增生组织、鳞癌组织及淋巴结转移癌组织中的表达情况，初步探讨其表达的差异及在口腔癌发生发展中的意义；2.检测小鼠口腔癌淋巴道转移模型从口腔正常、异常增生到癌变过程中pan-CK在颌下淋巴结组织中的表达情况，初步观察播散肿瘤细胞表达分布及意义。方法：1.选取人口腔正常牙龈组织、舌异常增生组织、鳞癌原发灶组织及颈部淋巴结转移癌组织；以及课题组成员前期应用4-硝基喹啉-1-氧化物（4-NQO）饮水法构建的Balb/c小鼠口腔癌淋巴道转移模型，选取小鼠正常舌体组织、舌异常增生组织、舌鳞癌原发灶组织及颌下淋巴结转移癌组织。采用免疫组化方法分别检测各实验标本中TGF-β1、N-cadherin蛋白表达的差异。2.选取口腔正常、异常增生及鳞癌小鼠的颌下淋巴结组织，其中口腔鳞癌小鼠组包括伴有颌下淋巴结转移灶和无颌下淋巴结转移灶，采用免疫组织化学技术检测pan-CK阳性细胞在各颌下淋巴结组织标本中的表达情况。结果：1.TGF-β1蛋白在人口腔正常粘膜表达率为33.3%（4/12），口腔异常增生组织45.8%（11/24）、口腔鳞癌75.0%（18/24）及淋巴结转移癌83.3%（10/12），人口腔鳞癌组及淋巴结转移癌组TGF-β1蛋白表达水平明显高于正常组及口腔异常增生组（P＜0.05）；TGF-β1蛋白在小鼠正常口腔粘膜表达率为22.2%（2/9），在口腔异常增生组织表达率为45.0%（9/20），在口腔鳞癌组织中TGF-β1表达率为80.0%（16/20）及淋巴结转移癌组织中表达率为88.9%（8/9），小鼠口腔鳞癌组及淋巴结转移癌组TGF-β1蛋白表达水平明显高于正常组及口腔异常增生组（P＜0.05）。2.N-cadherin蛋白表达率在人口腔正常粘膜组为16.7%（2/12），口腔异常增生组45.8.0%（11/24）、口腔鳞癌组79.2%（19/24）及淋巴结转移癌组83.3%（10/12），人口腔鳞癌组及淋巴结转移癌组N-cadherin蛋白表达水平明显高于正常组及口腔异常增生组（P＜0.05）；N-cadherin蛋白在小鼠口腔正常粘膜组表达率为11.1%（1/9），口腔异常增生组45.0%（9/20）、口腔鳞癌组85.0%（17/20）及淋巴结转移癌组88.9%（8/9），小鼠口腔鳞癌组及淋巴结转移癌组N-cadherin蛋白表达水平明显高于正常组及口腔异常增生组（P＜0.05）。3.Pan-CK在正常小鼠颌下淋巴结组织中未见表达；在口腔异常增生组中，8例小鼠颌下淋巴结组织中发现2例有pan-CK阳性表达，阳性染色的细胞为散在的单个细胞；在鳞癌无淋巴结转移灶组中，4例小鼠颌下淋巴结中发现有2例有pan-CK阳性表达，阳性染色的细胞为数个细胞组成的细胞簇；在鳞癌伴淋巴结转移灶组中，4例小鼠颌下淋巴结中均出现了pan-CK的强阳性表达，阳性染色的细胞成片块状分布。结论：1.TGF-β1蛋白在人和小鼠口腔鳞癌组织及淋巴结转移癌组织中的表达高于口腔正常组织及异常增生组织，随着口腔病变程度的加重表达逐渐上升，提示TGF-β1蛋白参与了口腔癌变的进程，在EMT进展及肿瘤转移中作为促进因子。2.N-cadherin蛋白在人和小鼠口腔鳞癌组织及淋巴结转移癌组织中的表达高于口腔正常组织及异常增生组织，随着口腔病变程度加重表达呈上升趋势，提示N-cadherin蛋白作为EMT的重要标记物，在口腔癌变及转移的进程中起到促进作用。3.在口腔组织出现异常增生时即可以在局部淋巴结组织中检测到pan-CK的阳性表达，提示肿瘤细胞在肿瘤极早期甚至癌前病变阶段就已经可能出现了远处播散。(本文来源于《广西医科大学》期刊2014-05-01）
施强,黎明武,于大海,韦堡升,卿海云[9]（2014）在《小鼠口腔癌淋巴道转移模型骨髓播散肿瘤细胞的检测》一文中研究指出目的:检测小鼠口腔癌淋巴道转移模型癌变过程不同时期的骨髓播散肿瘤细胞(disseminated tumor cell,DTC),探讨小鼠口腔癌变过程与骨髓DTC的关系。方法:病理检查明确诊断为正常舌黏膜、舌单纯性增生的小鼠各10只,舌轻中度异常增生、舌重度异常增生、舌鳞癌的小鼠各20只。采用Ficoll密度梯度离心法提取小鼠股骨骨髓里单个核细胞并制成细胞涂片,免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)检测骨髓DTC,比较其数目差异。结果:舌重度异常增生8只、舌鳞癌组13只发现DTC,阳性率分别为40%(8/20)和65%(13/20),每100个单核细胞中DTC数分别为3.03±0.75个和5.20±0.74个,差异均有统计学意义(P<0.05)。其余各组均未发现DTC(0/10)。结论:小鼠舌黏膜恶变过程中,舌重度异常增生时已出现DTC,并随病变程度加重,骨髓DTC的发生率及其细胞数量增加。(本文来源于《临床口腔医学杂志》期刊2014年04期）
方伟岗[10]（2011）在《骨髓及外周血中播散肿瘤细胞的特性及临床意义》一文中研究指出(本文来源于《第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会报告集》期刊2011-08-19）
播散肿瘤细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
尽管肿瘤的检测和治疗手段不断进步,但肿瘤的远处转移依然是导致肿瘤相关死亡的最大原因。循环肿瘤细胞在临床多种不同类型的肿瘤病人体内都能检测出来,并且体内高水平的循环肿瘤细胞往往导致肿瘤病人的差预后及生存期缩短。临床上,循环肿瘤细胞可以作为液态活检的目标用来预测病人的预后及监测肿瘤的复发情况。但除了被认为是肿瘤转移起始细胞的来源外,关于循环肿瘤细胞是否能通过其他机制影响肿瘤转移还知之甚少。目的:本研究为了探索循环肿瘤细胞对肿瘤转移的作用及其作用机制。方法:(1)利用两种转移能力不同的细胞系--B16F0和B16F1细胞,分别构建循环肿瘤细胞小鼠模型(cir-B16F0鼠)和肿瘤转移模型(B16F1荷瘤鼠);(2)小鼠尾静脉先后接种B1F0细胞和CFSE标记的B16F1细胞,并分别于接种B16F1后5 h和24 h处死小鼠并取其肺脏,然后冰冻切片并荧光显微镜下观察肺组织中CFSE标记肿瘤细胞的分布情况;(3)ELISA检测不同动物模型血清中促炎因子--IL-6和IL-1β--的浓度;(4)免疫组化检测不同模型小鼠肺组织中中性粒细胞的浸润情况;(5)B16F1荷瘤鼠和B16F0与B16F1混合接种鼠通过腹腔注射anti-Ly6G单克隆抗体体内清除中性粒细胞,然后观察观察其肺脏表面转移结节形成情况;(6)从不同动物模型体内分离其骨髓和腹腔趋化来的中性粒细胞,并将其与B16F1细胞混合接种到正常小鼠大腿肌肉,荷瘤12天后去小鼠肌肉肿瘤组织并称重;(7)体内转染表达抗炎因子--IL-37的质粒,观察炎症对循环肿瘤细胞促进肿瘤转移及对中性粒细胞功能调控作用的影响;(8)real-time PCR检测cir-B16F0小鼠骨髓中性粒细胞中促瘤相关基因--Mmp9,Bv8,Arg1和Nos2及抑瘤相关基因--Trail和Rab27a的表达;分离cir-B16F0小鼠腹腔趋化来的中性粒细胞并体外用肿瘤组织间液(T-sMs)刺激培养12 h后real-time PCR检测上述促瘤和抑瘤相关基因的表达;(9)通过酶底物反应检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞中MPO的释放,及通过流式细胞术检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞表面与其脱颗粒相关的表面标记分子--CD63的表达情况;Western blot检测cir-B16F0小鼠腹腔中性粒细胞中与脱颗粒相关的信号通路--p38MAPK和PI3K信号通路的激活情况;(10)分别用real-time PCR和ELISA检测cir-B16F0小鼠肺脏和脾脏中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平,及其血清中G-CSF,IL-6和IL-1β的水平;(11)cir-B16F0小鼠体内中和IL-1β后real-time PCR检测其肺和脾中Csf3(g-csf)和II6的mRNA水平;(12)Western blot检测cir-B16F0小鼠血清和肺脏中TLR2和TLR4配体--HMGB1,HSP70,S100A8,S100A9 和 SAA3 的水平;(13)cir-B 16F0小鼠体内转染表达可溶性TLR2(sTLR2)和TLR4(sTLR4)质粒,观察TLR2/4配体对循环肿瘤细胞诱导炎症反应和促进肿瘤转移的影响。结果:(1)循环肿瘤细胞通过促进播散肿瘤细胞(B16F1)的转移克隆形成进而促进肿瘤转移;(2)循环肿瘤细胞可以诱导IL-6,IL-1β等促炎因子的表达,进而诱导系统性炎症反应;(3)循环肿瘤细胞促进肺组织中中性粒细胞的浸润;(4)体内清除中性粒细胞导致循环肿瘤细胞不能促进B16F1细胞肺转移;(5)循环肿瘤细胞促进中性粒细胞中Mmp9,Bv8,Arg1和Nos2基因的表达,而抑制TRAIL和Rab27a的表达;(6)循环肿瘤细胞上调中性粒细胞对肿瘤微环境刺激物的反应性;(7)循环肿瘤细胞减弱中性粒细胞的脱颗粒能力及p38MAPK和PI3K细胞信号通路的激活;(8)体内转染表达IL-37能有效抑制循环肿瘤细胞诱导的系统性炎症反应及其对中性粒细胞功能的调控作用,但IL-37并不能直接作用于B16F1细胞,同时也不能直接影响循环肿瘤细胞对中性粒细胞的功能及反应性的调控作用;(9)cir-B 16F0小鼠肺脏和脾脏中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平上调,同时,其血清中G-CSF和IL-6的水平也上调;(10)cir-B16F0小鼠中和IL-1β后,其肺和脾中Csf3(g-csf)和Il6的mRNA水平均显着降低;(11)cir-B16F0小鼠血清中TLR2/4配体--HMGB1和HSP70水平上升。同时,上调的TLR2/4配体进一步促进小鼠肺组织中内源性TLR2/4配体--S100A8,S100A9和SAA3的表达。这些TLR2/4配体共同促进G-CSF,IL-6和IL-1β的表达;(12)体内转染表达可溶性TLR2(sTLR2)和TLR4(sTLR4),可以有效抑制由循环肿瘤细胞诱导的G-CSF,IL-6和IL-1β浓度的上调,同时也能有效抑制循环肿瘤细胞对肿瘤转移的促进作用。结论:循环肿瘤细胞通过诱导系统性炎症反应,并促进中性粒细胞向转移前病灶浸润,及调控中性粒细胞向促瘤功能转变,进而促进播散肿瘤肿瘤细胞的转移克隆形成,最终促进肿瘤的远处转移。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
播散肿瘤细胞论文参考文献
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