导读:本文包含了肉碱脱水酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:奇异变形杆菌,L-肉碱,L-肉碱脱水酶,培养基优化
肉碱脱水酶论文文献综述
张钟元,王强,田金强[1]（2009）在《奇异变形杆菌产L-肉碱脱水酶的培养基优化》一文中研究指出为了提高L-肉碱脱水酶的活力,通过单因素实验对影响奇异变形杆菌产L-肉碱脱水酶的碳源、氮源及酶的诱导物等培养基组分进行研究,在此基础上采用二次正交旋转组合设计进行培养基组分优化实验。经二次多项式回归建立模型以及对响应面的优化分析,确定了培养基组分最佳含量为:蛋白胨0.678g/100mL、酵母膏0.961g/100mL、巴豆甜菜碱0.335g/100mL、富马酸盐2.093g/100mL。使用优化后培养基发酵得到的L-肉碱脱水酶活力由最初的1.90U/mL提高到5.32U/mL,且与模型预测值较为接近,进一步证明预测模型的合理性。(本文来源于《食品工业科技》期刊2009年07期）
张钟元[2]（2009）在《产L-肉碱脱水酶菌株发酵及酶催化条件的研究》一文中研究指出L-肉碱的主要生理功能是作为载体将长链脂肪酸从线粒体膜外转运到膜内,为脂肪降解和代谢提供能量。目前,酶催化底物生物转化L-肉碱是国际上公认的高效制备方法,但国内对L-肉碱生物转化的研究起步较晚,且技术不全面。本论文主要对影响L-肉碱脱水酶生成的发酵条件进行研究,对酶催化合成L-肉碱的条件进行优化,为L-肉碱的高效生物转化提供理论依据。建立了一种L-肉碱脱水酶活力定量测定的方法。通过底物巴豆甜菜碱的消耗量来表达酶活,采用紫外法(UV)和酶法(DTNB)相结合的方法测定酶活力。对两种方法测得的酶活力进行拟合,得到最佳拟合方程为: (其中X为紫外法测定的L-肉碱脱水酶活力,y为DTNB法测定的L-肉碱脱水酶活力)。结果表明UV法经拟合后用于测定L-肉碱脱水酶活力快速、准确、成本低廉。优化了L-肉碱脱水酶的发酵条件。首先对碳源、氮源、诱导物等单因素实验,在此基础上,设计二次正交旋转组合实验,经二次多项式逐步回归分析,得到培养基模型方程为: Y=5.222+0.197X_1-0.068X_2+0.022X_3+0.016X_4-0.176X_1~2-0.111X_2~2-0.086X_3~2-0.127X_4~2+0.090X_1X_2+0.048X_1X_3+0.040X_1X_4。响应面分析确定了最佳培养基组分(g/100 ml)为:蛋白胨0.678、酵母膏0.961、巴豆甜菜碱0.335、富马酸2.093。培养基优化后,L-肉碱脱水酶活力由原来的1.90U增加到5.32U。适宜的发酵条件通过单因素及正交实验确定为:起始pH7.0、接种量1 ml/100ml、温度30℃、转速120 r/min、装液量100 ml/瓶,主次影响因素为转速>接种量>装液量>温度>起始pH,此条件下L-肉碱脱水酶活力达到5.78±0.12 U。研究了菌体5L发酵罐的分批发酵条件和发酵动力学。较好的菌体生长和产酶pH为7.5,相比于未调pH的发酵过程,菌体生物量增加显着,产酶效率明显提高,且产酶活力提高幅度较大。一定范围内搅拌转速有利于细菌的生长,随着转速的提高菌体生物量增加,当搅拌转速400r/min时,整个发酵过程菌体产酶活力较高。采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和Luedeking-Piret-Like方程描述了菌体发酵动力学规律,得到方程如下:菌体生长动力学方程为L-肉碱脱水酶的生成动力学方程为p = 1.4697 A( t ) + 0.001506 B (t ),式中;巴豆甜菜碱消耗动力学方程为,式中研究了肉碱脱水酶催化合成L-肉碱的条件。适宜的反应条件为:温度40℃,pH7.0,巴豆甜菜碱浓度2%,酶添加量2%,富马酸作为电子受体,酶反应时间5-8 h。Mg~(2+)作为酶抑制剂降低酶活力,Zn~(2+)、K~+、Cu~(2+)、Li~+、Ba~(2+)、Fe~(2+)作为酶激活剂均能提高酶活力,其中以Fe~(2+)对酶活力的激活作用最为明显。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2009-06-01）
范立强,施惠娟,贺华君,袁勤生,杨冠珍[3]（2002）在《大肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序及高效表达》一文中研究指出［摘 要］目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB，测定其DNA序列，将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET－28a（＋）中，构建表达质粒pETCaiB，转化大肠杆菌BL21（DE3），用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp，与文献报道值相比,DNA序列有26个不同，氨基酸序列只有一个不同，即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导，可高效表达，SDS－PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000，表达产物含量占菌体总蛋白45％以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌，为制备L-肉碱创造了条件。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2002年03期）
范立强,袁勤生,吴祥甫[4]（2002）在《不相容双质粒共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅因子合成酶基因caiE》一文中研究指出基因 cai B和基因 cai E分别编码肉碱脱水酶及其辅因子合成酶 ,携带这两个基因的重组菌可以共表达两个外源蛋白 ,得到高活性肉碱脱水酶。分别构建这两个基因的表达质粒 p ET2 8cai B和 p ET2 2 cai E,利用双抗生素筛选法 ,获得能稳定遗传的双质粒转化子。经 IPTG诱导 ,两个基因共表达 ,表达量分别占菌体总蛋白的 39%和 2 0 % ,共转化菌的酶活力比 p ET2 8cai B单转化菌提高了 2 .3倍 ,并由此建立了不相容双质粒共表达外源基因的新方法(本文来源于《中国医药工业杂志》期刊2002年03期）
范立强,袁勤生,吴祥甫[5]（2002）在《双质粒系统共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅酶合成基因caiE》一文中研究指出caiB基因和caiE基因分别编码肉碱脱水酶及其辅因子合成酶 ,两者的共表达可以获得高活性肉碱脱水酶的重组菌。分别用两相容性质粒和不相容质粒共表达肉碱脱水酶及其辅酶合成基因 ,并对两种方法进行了比较。经IPTG诱导 ,相容性双质粒系统中两基因表达量分别占菌体总蛋白质的 17%和 10 % ;不相容性双质粒系统中两基因表达量分别占菌体总蛋白质的 39%和 2 0 %。共转化菌的酶活力比pET2 8caiB单质粒转化菌均提高 2 .3倍左右。两种双质粒转化系统相似 ,都需在外界抗生素选择压力下保持质粒稳定性(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊2002年01期）
王玉萍,谭训刚,陈师勇,王勇,王静[6]（2000）在《肉碱脱水酶突变株的获得及其休止细胞反应条件的优化》一文中研究指出对一株产肉碱脱水酶的菌株用溴化乙锭进行诱变 ,并经肉碱选择性培养基进行筛选 ,获得了一株高活性酶活的菌株 ,并进行了休止细胞转化巴豆甜菜碱为L 肉碱的反应条件的研究。实验确定休止细胞的最适反应温度为 30℃～ 32℃ ,pH8.1、0 .0 1mol L磷酸缓冲液 ,时间 8.5～ 10h。最适底物浓度为 6 0mg ml,最适休止细胞浓度为 6 0mg ml(湿重 ) ,产率 4 0 % (摩尔比 )。建立了休止细胞酶反应的表观米氏方程 ,其中Vm =0 .0 0 12 2 5mol (min·15mg菌体 ) ,Km =0 .0 4 0 114mol L。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2000年04期）
肉碱脱水酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
L-肉碱的主要生理功能是作为载体将长链脂肪酸从线粒体膜外转运到膜内,为脂肪降解和代谢提供能量。目前,酶催化底物生物转化L-肉碱是国际上公认的高效制备方法,但国内对L-肉碱生物转化的研究起步较晚,且技术不全面。本论文主要对影响L-肉碱脱水酶生成的发酵条件进行研究,对酶催化合成L-肉碱的条件进行优化,为L-肉碱的高效生物转化提供理论依据。建立了一种L-肉碱脱水酶活力定量测定的方法。通过底物巴豆甜菜碱的消耗量来表达酶活,采用紫外法(UV)和酶法(DTNB)相结合的方法测定酶活力。对两种方法测得的酶活力进行拟合,得到最佳拟合方程为: (其中X为紫外法测定的L-肉碱脱水酶活力,y为DTNB法测定的L-肉碱脱水酶活力)。结果表明UV法经拟合后用于测定L-肉碱脱水酶活力快速、准确、成本低廉。优化了L-肉碱脱水酶的发酵条件。首先对碳源、氮源、诱导物等单因素实验,在此基础上,设计二次正交旋转组合实验,经二次多项式逐步回归分析,得到培养基模型方程为: Y=5.222+0.197X_1-0.068X_2+0.022X_3+0.016X_4-0.176X_1~2-0.111X_2~2-0.086X_3~2-0.127X_4~2+0.090X_1X_2+0.048X_1X_3+0.040X_1X_4。响应面分析确定了最佳培养基组分(g/100 ml)为:蛋白胨0.678、酵母膏0.961、巴豆甜菜碱0.335、富马酸2.093。培养基优化后,L-肉碱脱水酶活力由原来的1.90U增加到5.32U。适宜的发酵条件通过单因素及正交实验确定为:起始pH7.0、接种量1 ml/100ml、温度30℃、转速120 r/min、装液量100 ml/瓶,主次影响因素为转速>接种量>装液量>温度>起始pH,此条件下L-肉碱脱水酶活力达到5.78±0.12 U。研究了菌体5L发酵罐的分批发酵条件和发酵动力学。较好的菌体生长和产酶pH为7.5,相比于未调pH的发酵过程,菌体生物量增加显着,产酶效率明显提高,且产酶活力提高幅度较大。一定范围内搅拌转速有利于细菌的生长,随着转速的提高菌体生物量增加,当搅拌转速400r/min时,整个发酵过程菌体产酶活力较高。采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和Luedeking-Piret-Like方程描述了菌体发酵动力学规律,得到方程如下:菌体生长动力学方程为L-肉碱脱水酶的生成动力学方程为p = 1.4697 A( t ) + 0.001506 B (t ),式中;巴豆甜菜碱消耗动力学方程为,式中研究了肉碱脱水酶催化合成L-肉碱的条件。适宜的反应条件为:温度40℃,pH7.0,巴豆甜菜碱浓度2%,酶添加量2%,富马酸作为电子受体,酶反应时间5-8 h。Mg~(2+)作为酶抑制剂降低酶活力,Zn~(2+)、K~+、Cu~(2+)、Li~+、Ba~(2+)、Fe~(2+)作为酶激活剂均能提高酶活力,其中以Fe~(2+)对酶活力的激活作用最为明显。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肉碱脱水酶论文参考文献
[1].张钟元,王强,田金强.奇异变形杆菌产L-肉碱脱水酶的培养基优化[J].食品工业科技.2009
[2].张钟元.产L-肉碱脱水酶菌株发酵及酶催化条件的研究[D].中国农业科学院.2009
[3].范立强,施惠娟,贺华君,袁勤生,杨冠珍.大肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序及高效表达[J].中国生物制品学杂志.2002
[4].范立强,袁勤生,吴祥甫.不相容双质粒共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅因子合成酶基因caiE[J].中国医药工业杂志.2002
[5].范立强,袁勤生,吴祥甫.双质粒系统共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅酶合成基因caiE[J].生物化学与生物物理学报.2002
[6].王玉萍,谭训刚,陈师勇,王勇,王静.肉碱脱水酶突变株的获得及其休止细胞反应条件的优化[J].生物技术通讯.2000