哈药集团三精制药150000
【摘要】目的：阿奇霉素是阿奇霉素片中最重要的有效成分，所以建立一套有效的含量检测方法非常重要。方法：采用C18柱,以pH值4.0的磷酸二氢钾-乙腈(73B27)为流动相,流速1.0mL#min-1,柱温40℃，检测波长210nm。结果在20~1000μg·mL-1范围内,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9999),阿奇霉素的平均回收率100.7%,精密度RSD0.50%(n=6)。结论：该方式比较准确，并且操作比较简便，数据灵敏度较好，并且具有很好的重现性。
【关键词】阿奇霉素;含量测定;高效液相色谱法
随着时代的发展，医疗事业也得到了很大的进步，抗生素的使用范围也越来越广，阿奇霉素是具有15员氮杂内脂环的抗生素，其作为新一代的抗生素，经过了化学结构修饰，所以具有很多优势。举例来说，其抗菌谱更为广泛，在酸性环境中稳定性更强，吸收效果更为出色，所以具有很高的生物利用度。该药品成分具有较强的半衰期，由于感染部位细胞浓度较高，所以可以向病灶进行定向转运，毒性较低，并且具有较强的耐受性。关于这种药物含量分析的方法，在美国药典和我国的官修药典中都已经有所收录，在美国药典中，其采用的方式为反向氧化铝柱以及安培电检测，但是该方法所需的设备对于当前国内的水平来说仍然十分复杂，条件是非常苛刻的，这给推广带来了很大的难度，推广十分困难，我国官修药典中，其含量分析的方式为微生物法。本文结合安曲霉素自身的特点，建立了C18柱的高效液相色谱法的测定方式。
一、仪器与试剂
（一）仪器
日本岛津LC-10A高效液相色谱系列:LC-10AD泵,SPD-10A紫外检测器,CTO-10A柱温箱,南京千谱HW-2000色谱工作站;KQ-50DE超声波清洗器。
（二）试药与试剂阿奇霉素标准品(946U#mg-1,130352-200304,中国药品生物制品检定所);阿奇霉素片(商品名:希舒美,辉瑞制药有限公司生产,批号:35864024,35864026,35864030);阿奇霉素片(商品名:明齐欣,四川明欣药业有限责任公司生产,批号:030901);甲醇和乙腈为色谱纯,其余均为分析纯,水为重蒸馏水(武汉大学中南医院制剂室提供)。
二、实验方法
（一）色谱条件
色谱柱:DiamonsilC18柱(4.6mm@150mm,5μm);流动相:pH值4.0的0.067mol#L-1磷酸二氢钾-乙腈(73B27),临用前超声脱气15min;检测波长:210nm;流速:1.0mL#min-1;柱温:40e;进样量:20μL。
（二）标准品溶液的制备
精密称取阿奇霉素标准品50mg,置50mL的容量瓶中,加入乙腈5mL溶解,再加流动相至刻度,摇匀,得浓度为1000μg·mL-1的标准品贮备液。分别精密量取标准品贮备液0.2,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL至10mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作标准品溶液。
（三）供试品溶液的制备
精密称取相当于阿奇霉素80mg的片剂,置100mL的容量瓶中,加入乙腈5mL溶解,超声振荡15min,加流动相至刻度,摇匀,滤过。用滤孔直径0.45μm的有机滤膜过滤,作供试品溶液。
三、结果
（一）线性关系考察
将上述各浓度的标准品溶液,分别进样20μL,记录峰面积。以阿奇霉素溶液的浓度对峰面积作线性回归,得回归方程(n=6):Y=215.03+63.05X,r=0.9999。结果表明,阿奇霉素在20~1000μg·mL-1范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系。
（二）精密度实验
精密吸取标准品溶液20LL,重复进样6次,测量峰面积,Y=52476?261,RSD=0.50%(n=6)。3.3重复性实验取同一批号样品,按/2.30项下方法平行制备6份,分别进样,测量峰面积,Y=54140±1524,RSD=2.81%(n=6)。
（三）重复性实验
取同一批号样品,按/2.30项下方法平行制备6份,分别进样,测量峰面积,Y=54140?1524,RSD=2.81%(n=6)。
（四）回收率实验
本次实验取阿奇霉素样本5mg、10mg、15mg分别进行精密称重，之后将其置于25毫升的容量瓶之中，加入乙腈溶液5毫升，之后再加入样品溶液5毫升，其密度为每升0.82毫克，加入流动相到刻度之中摇晃均匀之后进样，测定其中的阿奇霉素的含量，之后计算回收率。结果平均回收率100.7%,RSD=0.57%(n=3)。见表1
表1阿奇霉素回收率测定结果（g）
（五）样品含量测定
（1）不同批次阿奇霉素片剂的含量测定取不同批次的阿奇霉素片剂(希舒美),分别碾碎,研细,按/2.30项下方法制备,进样测定。3批样品批号:35864024,35864026,35864030;含量分别为99.2%,98.9%,100.5%;RSD分别为0.87%,1.26%,1.03%。
（2）不同厂家阿奇霉素片剂的含量测定
取不同厂家的阿奇霉素片剂,分别碾碎,研细,按/2.30项下方法制备,进样测定。结果希舒美中含阿奇霉素(标示量%)103.81%,RSD=0.5%(n=6);明齐欣中含阿奇霉素(标示量%)104.76%,RSD=2.83%(n=6)。
四、讨论
支原体是介于细菌与病毒之间的能独立生活的最小微生物，没有细胞壁。这一特点决定了其对作用于细胞壁的β内酰胺类药物不敏感，而抑制蛋白合成类的抗生素则对其有效，但由于四环素类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素在儿科的限制应用，使大环内酯类成为治疗MP首选。因MPP病程较长，一般至少3周或更长，采用红霉素治疗很难完成所需疗程，长时间静脉输注治疗，患儿依从性差，停药后易复发，胃肠道反应严重，且常出现皮疹、穿刺部位疼痛以及静脉炎等不良反应。而阿奇霉素胃肠道反应小，长期应用肝损伤发生率较红霉素低，使阿奇霉素成为抗MP治疗首选，其耐酸、口服吸收迅速，肾毒性小。
就物理性质来说，阿奇霉素和红霉素具有很高的相似度，在结构中没有共轭体系，并且紫外吸收非常微弱，按照190-350纳米的波长进行紫外扫描，仅仅在280纳米处吸收量较大，但即便这样，响应值也仍然较小，所以在检测波长的选择上，定位120纳米。在试验中我们分别配备了从25%到40%之间，共5种含量乙腈浓度来作为流动相，并且针对其色谱分离情况来进行考察，经过观察和计算我们发现，乙腈浓度的提高会缩短保留时间，如果乙腈的比例大于30%，就无法完全分离主峰和溶剂峰，如果乙腈的比例小于25%，就会导致主峰变钝，出现一定情况的拖尾，所以我们最终选定了比例为27%的已经。
按照我国官修药典中的规定，阿奇霉素成分含量的检测方法为微生物法，其采用的方式虽然对技术水平要求不高，并且能够体现出阿奇霉素对于细菌所产生的作用，但是操作过程比较繁琐，所以有很多因素可以影响到结果，所以经常会造成很大误差。本文采用HPLC这种方式来进行成分检定，这种方式效率较高，并且结果准确，所以有时非常明显。本文根据C18柱的方式来采用高效液色相谱，检定条件简单，并且具有很好的线性和可重复性，应用在检定工作中会起到较为准确的结果，值得推广。
参考文献
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