本文主要研究内容
作者郭伦爱（2019）在《P-VP8~*IgY抗轮状病毒的药效学评价及诺如病毒小动物模型的初步探索》一文中研究指出：诺如病毒(Norovirus,NoV)和轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致全球病毒性腹泻最主要的病原体,造成了严重的社会公共卫生问题,但迄今为止尚没有特异性抗NoV药物和疫苗,更没有任何一种特异性药物可以同时防治NoV和RV感染。2005年Jiang等人利用大肠杆菌表达系统成功表达出诺如病毒P颗粒。P颗粒具有与NoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)相似的免疫原性及与HBGAs受体结合的能力。P颗粒可在大肠杆菌表达系统中稳定、高效表达,且具有成本低、周期短的特点,可广泛用于NoV发病机制、抗原变异、分子进化及第二代亚单位候选疫苗等研究。研究发现诺如病毒P颗粒具有八面体结构,且每个面均含有3个环形结构(loopl,loop2,loop3),均暴露于P蛋白表面,适合外源表位的插入,且不会影响P颗粒的形成和产量。由于每个P蛋白表面均可插入抗原表位,且把外源片段暴露在最外端,极大的增强了抗原的免疫原性,可作为非常理想的抗原提呈平台。本课题组将轮状病毒的外壳刺突样蛋白VP8*基因片段插入到诺如病毒P颗粒的表面环形区域loop2,在大肠杆菌中稳定表达出嵌合VP8*的P-VP8*蛋白,经免疫来航鸡制备纯化出特异性P-VP8*IgY,研究证实P-VP8*IgY能有效阻断NoV与HBGAs受体结合,并对RV Wa株感染MA104细胞具有抑制作用,表明P-VP8*lgY有望成为一种有前景的抗诺如和轮状病毒的双价抗体药物制剂。本研究在前期工作基础上,利用轮状病毒感染乳鼠疾病动物模型,进一步评价P-VP8*IgY抗轮状病毒的体内保护作用,具体方法与结果如下:48只SPF级乳鼠随机分为对照组、感染组、预防组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,每组8只。利用107PFU体外培养的ZTR-68株RV(GIP[8]型)灌胃攻毒6日龄乳鼠,建立RV感染乳鼠动物模型。低中高剂量组连续3天分别给予不同浓度的P-VP8*IgY(3.3mg·kg-1、10mg·kg-1、30mg·kg-1),预防组于攻毒前2天给予一定量的P-VP8*IgY(20mg·kg-1)观察给药后乳鼠症状和腹泻情况,并用轮状病毒胶体金检测试剂盒检测乳鼠粪便轮状病毒抗原;ELISA法检测粪便RV抗原,RT-qPCR检测小肠组织RV基因拷贝数,Western Blot检测RV蛋白的表达水平,HE染色观察小肠组织病理改变,以及IHC检测小肠组织RV表达。结果显示6日龄昆明乳鼠灌胃攻毒107PFU ZTR-68株轮状病毒后全部出现黄色稀水样便,可成功制备乳鼠RV感染模型:治疗3d后,中剂量治疗组、高剂量治疗组与感染组比较腹泻程度明显缓解,腹泻评分(分别为1.75±0.49,1.50±0.27)与感染组(3.37±0.18)比较显著降低(P<0.05)、粪便RV抗原含量(分别为60.0±26.2、40.0±18.5)与IG(130.0±41.4)相比较明显减少(P<0.05),小肠组织中RV基因拷贝数和RV-VP6蛋白表达显著减少(P<0.05),小肠组织病理显示绒毛空泡样改变减轻,IHC显示RV抗原表达量显著降低。预防组和低剂量治疗组与感染组比较差异无显著性。结论:P-VP8*lgY可中和RV感染乳鼠中肠道及小肠组织中RV抗原,保护小肠绒毛,从而缓解腹泻症状,起到抗RV的作用。诺如病毒P颗粒的抗原性远大于VP8*蛋白,理论上P-VP8*IgY具有较好的抗诺如病毒的作用,前期已经通过国际上公认的HBGAs受体体外替代中和实验证实P-VP8*IgY能阻断诺如病毒与HBGAs受体结合,因此有必要进行P-VP8*IgY体内抗诺如病毒的效果评价。由于诺如病毒缺乏有效的小动物模型,本研究第二部分旨在首次探索建立树驹诺如病毒感染疾病动物模型,具体方法和结果如下:15只6月龄树驹被随机分为A、B、C3组,每组5只,每只树驹灌服500 uL 100mM NaHCO3溶液中和胃酸处理后进行灌胃攻毒:A、B两组分别灌服1ml HuNoVsGII.4型2010和Sydney株的粪便悬液(病毒载量约2X105viral RNA copies),C组灌服1000uLPBS作为对照。攻毒后连续7天观察体征和腹泻症状,每隔24h采集粪便应用RT-PCR法检测HuNoVs RNA,处死树驹后采集小肠组织,HE染色观察病理变化并应用免疫组化法检测病毒抗原,并对树出唾液进行HBGAs鉴定分析。结果显示树驹经HuNoVs灌胃攻毒后未出现明显腹泻等感染症状,粪便标本中未检测到HuNoVs RNA,小肠组织中未检测到HuNoVs抗原,病理变化不明显,树出唾液中HBGAs抗原为阴性。结论:树出对HuNoVs不易感原因可能与其不分泌表达HBGAs和普通级饲养繁殖条件等有关,HuNoVs感染小动物模型仍有待进一步探索。结论:1、P-VP8*lgY可中和RV感染乳鼠粪便及小肠组织中的RV抗原,保护小肠绒毛,从而缓解腹泻症状,起到抗轮状病毒的作用,为P-VP8*IgY的进一步开发提供了基础,也为传统中药鸡子黄的现代应用提供新方向。2、在国内首次进行了诺如病毒树出疾病动物模型的探索,证实树驹对诺如病毒不易感,并可能与其不分泌表达HBGAs和普通级饲养繁殖条件等有关,为今后建立HBGAs遗传成分稳定的诺如病毒小动物模型提供新方向。
Abstract
nuo ru bing du (Norovirus,NoV)he lun zhuang bing du (Rotavirus,RV)shi dao zhi quan qiu bing du xing fu xie zui zhu yao de bing yuan ti ,zao cheng le yan chong de she hui gong gong wei sheng wen ti ,dan qi jin wei zhi shang mei you te yi xing kang NoVyao wu he yi miao ,geng mei you ren he yi chong te yi xing yao wu ke yi tong shi fang zhi NoVhe RVgan ran 。2005nian Jiangdeng ren li yong da chang gan jun biao da ji tong cheng gong biao da chu nuo ru bing du Pke li 。Pke li ju you yu NoVbing du yang ke li (virus-like particles,VLPs)xiang shi de mian yi yuan xing ji yu HBGAsshou ti jie ge de neng li 。Pke li ke zai da chang gan jun biao da ji tong zhong wen ding 、gao xiao biao da ,ju ju you cheng ben di 、zhou ji duan de te dian ,ke an fan yong yu NoVfa bing ji zhi 、kang yuan bian yi 、fen zi jin hua ji di er dai ya chan wei hou shua yi miao deng yan jiu 。yan jiu fa xian nuo ru bing du Pke li ju you ba mian ti jie gou ,ju mei ge mian jun han you 3ge huan xing jie gou (loopl,loop2,loop3),jun bao lou yu Pdan bai biao mian ,kuo ge wai yuan biao wei de cha ru ,ju bu hui ying xiang Pke li de xing cheng he chan liang 。you yu mei ge Pdan bai biao mian jun ke cha ru kang yuan biao wei ,ju ba wai yuan pian duan bao lou zai zui wai duan ,ji da de zeng jiang le kang yuan de mian yi yuan xing ,ke zuo wei fei chang li xiang de kang yuan di cheng ping tai 。ben ke ti zu jiang lun zhuang bing du de wai ke ci tu yang dan bai VP8*ji yin pian duan cha ru dao nuo ru bing du Pke li de biao mian huan xing ou yu loop2,zai da chang gan jun zhong wen ding biao da chu qian ge VP8*de P-VP8*dan bai ,jing mian yi lai hang ji zhi bei chun hua chu te yi xing P-VP8*IgY,yan jiu zheng shi P-VP8*IgYneng you xiao zu duan NoVyu HBGAsshou ti jie ge ,bing dui RV Wazhu gan ran MA104xi bao ju you yi zhi zuo yong ,biao ming P-VP8*lgYyou wang cheng wei yi chong you qian jing de kang nuo ru he lun zhuang bing du de shuang jia kang ti yao wu zhi ji 。ben yan jiu zai qian ji gong zuo ji chu shang ,li yong lun zhuang bing du gan ran ru shu ji bing dong wu mo xing ,jin yi bu ping jia P-VP8*IgYkang lun zhuang bing du de ti nei bao hu zuo yong ,ju ti fang fa yu jie guo ru xia :48zhi SPFji ru shu sui ji fen wei dui zhao zu 、gan ran zu 、yu fang zu 、di ji liang zhi liao zu 、zhong ji liang zhi liao zu 、gao ji liang zhi liao zu ,mei zu 8zhi 。li yong 107PFUti wai pei yang de ZTR-68zhu RV(GIP[8]xing )guan wei gong du 6ri ling ru shu ,jian li RVgan ran ru shu dong wu mo xing 。di zhong gao ji liang zu lian xu 3tian fen bie gei yu bu tong nong du de P-VP8*IgY(3.3mg·kg-1、10mg·kg-1、30mg·kg-1),yu fang zu yu gong du qian 2tian gei yu yi ding liang de P-VP8*IgY(20mg·kg-1)guan cha gei yao hou ru shu zheng zhuang he fu xie qing kuang ,bing yong lun zhuang bing du jiao ti jin jian ce shi ji he jian ce ru shu fen bian lun zhuang bing du kang yuan ;ELISAfa jian ce fen bian RVkang yuan ,RT-qPCRjian ce xiao chang zu zhi RVji yin kao bei shu ,Western Blotjian ce RVdan bai de biao da shui ping ,HEran se guan cha xiao chang zu zhi bing li gai bian ,yi ji IHCjian ce xiao chang zu zhi RVbiao da 。jie guo xian shi 6ri ling kun ming ru shu guan wei gong du 107PFU ZTR-68zhu lun zhuang bing du hou quan bu chu xian huang se xi shui yang bian ,ke cheng gong zhi bei ru shu RVgan ran mo xing :zhi liao 3dhou ,zhong ji liang zhi liao zu 、gao ji liang zhi liao zu yu gan ran zu bi jiao fu xie cheng du ming xian huan jie ,fu xie ping fen (fen bie wei 1.75±0.49,1.50±0.27)yu gan ran zu (3.37±0.18)bi jiao xian zhe jiang di (P<0.05)、fen bian RVkang yuan han liang (fen bie wei 60.0±26.2、40.0±18.5)yu IG(130.0±41.4)xiang bi jiao ming xian jian shao (P<0.05),xiao chang zu zhi zhong RVji yin kao bei shu he RV-VP6dan bai biao da xian zhe jian shao (P<0.05),xiao chang zu zhi bing li xian shi rong mao kong pao yang gai bian jian qing ,IHCxian shi RVkang yuan biao da liang xian zhe jiang di 。yu fang zu he di ji liang zhi liao zu yu gan ran zu bi jiao cha yi mo xian zhe xing 。jie lun :P-VP8*lgYke zhong he RVgan ran ru shu zhong chang dao ji xiao chang zu zhi zhong RVkang yuan ,bao hu xiao chang rong mao ,cong er huan jie fu xie zheng zhuang ,qi dao kang RVde zuo yong 。nuo ru bing du Pke li de kang yuan xing yuan da yu VP8*dan bai ,li lun shang P-VP8*IgYju you jiao hao de kang nuo ru bing du de zuo yong ,qian ji yi jing tong guo guo ji shang gong ren de HBGAsshou ti ti wai ti dai zhong he shi yan zheng shi P-VP8*IgYneng zu duan nuo ru bing du yu HBGAsshou ti jie ge ,yin ci you bi yao jin hang P-VP8*IgYti nei kang nuo ru bing du de xiao guo ping jia 。you yu nuo ru bing du que fa you xiao de xiao dong wu mo xing ,ben yan jiu di er bu fen zhi zai shou ci tan suo jian li shu ju nuo ru bing du gan ran ji bing dong wu mo xing ,ju ti fang fa he jie guo ru xia :15zhi 6yue ling shu ju bei sui ji fen wei A、B、C3zu ,mei zu 5zhi ,mei zhi shu ju guan fu 500 uL 100mM NaHCO3rong ye zhong he wei suan chu li hou jin hang guan wei gong du :A、Bliang zu fen bie guan fu 1ml HuNoVsGII.4xing 2010he Sydneyzhu de fen bian xuan ye (bing du zai liang yao 2X105viral RNA copies),Czu guan fu 1000uLPBSzuo wei dui zhao 。gong du hou lian xu 7tian guan cha ti zheng he fu xie zheng zhuang ,mei ge 24hcai ji fen bian ying yong RT-PCRfa jian ce HuNoVs RNA,chu si shu ju hou cai ji xiao chang zu zhi ,HEran se guan cha bing li bian hua bing ying yong mian yi zu hua fa jian ce bing du kang yuan ,bing dui shu chu tuo ye jin hang HBGAsjian ding fen xi 。jie guo xian shi shu ju jing HuNoVsguan wei gong du hou wei chu xian ming xian fu xie deng gan ran zheng zhuang ,fen bian biao ben zhong wei jian ce dao HuNoVs RNA,xiao chang zu zhi zhong wei jian ce dao HuNoVskang yuan ,bing li bian hua bu ming xian ,shu chu tuo ye zhong HBGAskang yuan wei yin xing 。jie lun :shu chu dui HuNoVsbu yi gan yuan yin ke neng yu ji bu fen bi biao da HBGAshe pu tong ji si yang fan shi tiao jian deng you guan ,HuNoVsgan ran xiao dong wu mo xing reng you dai jin yi bu tan suo 。jie lun :1、P-VP8*lgYke zhong he RVgan ran ru shu fen bian ji xiao chang zu zhi zhong de RVkang yuan ,bao hu xiao chang rong mao ,cong er huan jie fu xie zheng zhuang ,qi dao kang lun zhuang bing du de zuo yong ,wei P-VP8*IgYde jin yi bu kai fa di gong le ji chu ,ye wei chuan tong zhong yao ji zi huang de xian dai ying yong di gong xin fang xiang 。2、zai guo nei shou ci jin hang le nuo ru bing du shu chu ji bing dong wu mo xing de tan suo ,zheng shi shu ju dui nuo ru bing du bu yi gan ,bing ke neng yu ji bu fen bi biao da HBGAshe pu tong ji si yang fan shi tiao jian deng you guan ,wei jin hou jian li HBGAswei chuan cheng fen wen ding de nuo ru bing du xiao dong wu mo xing di gong xin fang xiang 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自南方医科大学的郭伦爱，发表于刊物南方医科大学2019-09-02论文，是一篇关于人源轮状病毒论文,药效学论文,人诺如病毒论文,树鼩论文,南方医科大学2019-09-02论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自南方医科大学2019-09-02论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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