本文主要研究内容
作者薄秀梅,于露,贺玲（2019）在《丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶突变体MEKK3KI的构建及功能鉴定》一文中研究指出：有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶MEKK3（mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase3）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于MAP3K（mitogen-activated protein kinase kinase kinase）家族,其在细胞增殖、凋亡、炎症反应、肿瘤的发生中发挥了重要的作用。利用分子克隆手段构建激酶功能失活（kinase inactive）型突变体MEKK3KI（391位赖氨酸突变为甲硫氨酸,K391→M391）的真核表达载体,并通过检测MEKK3KI蛋白对NudC的磷酸化作用及对细胞周期的影响以鉴定其生物活性。根据GenBank提供的人源MEKK3的cNA序列（NM203351）,扩增出野生型MEKK3(MEKK3WT)的目的基因,用重叠延伸PCR定点突变技术扩增激酶功能失活型MEKK3KI目的基因,并将其分别克隆至带有FLAG标签的真核表达载体p CMV-tag-2c和带有GFP标签的真核表达载体pEGFP-C1中。DNA序列分析结果显示,MEKK3KI基因序列成功将391位点的赖氨酸（K）突变为甲硫氨酸（M）,表明突变体构建成功;免疫印迹分析显示,MEKK3WT、MEKK3KI重组体均在He La细胞中高效表达;体外模拟磷酸化实验结果显示,野生型MEKK3WT在体外可以磷酸化NudC,而激酶功能失活型突变体MEKK3KI无法将其磷酸化;激光共聚焦显微镜观察发现,野生型MEKK3在HeLa细胞中过表达,细胞核形态异常,与凋亡细胞核形态相似,而失活型MEKK3过表达不会导致细胞核明显变化。总之,本实验成功构建了野生型、失活型MEKK3的真核表达载体,同时发现其可以磷酸化NudC,促进细胞凋亡,为进一步揭示MEKK3生物学功能奠定了基础。
Abstract
you si fen lie yuan huo hua dan bai ji mei ji mei ji mei MEKK3（mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase3）shi yi chong si an suan /su an suan dan bai ji mei ,shu yu MAP3K（mitogen-activated protein kinase kinase kinase）jia zu ,ji zai xi bao zeng shi 、diao wang 、yan zheng fan ying 、zhong liu de fa sheng zhong fa hui le chong yao de zuo yong 。li yong fen zi ke long shou duan gou jian ji mei gong neng shi huo （kinase inactive）xing tu bian ti MEKK3KI（391wei lai an suan tu bian wei jia liu an suan ,K391→M391）de zhen he biao da zai ti ,bing tong guo jian ce MEKK3KIdan bai dui NudCde lin suan hua zuo yong ji dui xi bao zhou ji de ying xiang yi jian ding ji sheng wu huo xing 。gen ju GenBankdi gong de ren yuan MEKK3de cNAxu lie （NM203351）,kuo zeng chu ye sheng xing MEKK3(MEKK3WT)de mu de ji yin ,yong chong die yan shen PCRding dian tu bian ji shu kuo zeng ji mei gong neng shi huo xing MEKK3KImu de ji yin ,bing jiang ji fen bie ke long zhi dai you FLAGbiao qian de zhen he biao da zai ti p CMV-tag-2che dai you GFPbiao qian de zhen he biao da zai ti pEGFP-C1zhong 。DNAxu lie fen xi jie guo xian shi ,MEKK3KIji yin xu lie cheng gong jiang 391wei dian de lai an suan （K）tu bian wei jia liu an suan （M）,biao ming tu bian ti gou jian cheng gong ;mian yi yin ji fen xi xian shi ,MEKK3WT、MEKK3KIchong zu ti jun zai He Laxi bao zhong gao xiao biao da ;ti wai mo ni lin suan hua shi yan jie guo xian shi ,ye sheng xing MEKK3WTzai ti wai ke yi lin suan hua NudC,er ji mei gong neng shi huo xing tu bian ti MEKK3KImo fa jiang ji lin suan hua ;ji guang gong ju jiao xian wei jing guan cha fa xian ,ye sheng xing MEKK3zai HeLaxi bao zhong guo biao da ,xi bao he xing tai yi chang ,yu diao wang xi bao he xing tai xiang shi ,er shi huo xing MEKK3guo biao da bu hui dao zhi xi bao he ming xian bian hua 。zong zhi ,ben shi yan cheng gong gou jian le ye sheng xing 、shi huo xing MEKK3de zhen he biao da zai ti ,tong shi fa xian ji ke yi lin suan hua NudC,cu jin xi bao diao wang ,wei jin yi bu jie shi MEKK3sheng wu xue gong neng dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自科学技术与工程的薄秀梅,于露,贺玲，发表于刊物科学技术与工程2019年17期论文，是一篇关于突变体论文,重叠延伸论文,细胞凋亡论文,科学技术与工程2019年17期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自科学技术与工程2019年17期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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