导读:本文包含了吗啉反义寡核苷酸抑制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:反义寡核苷酸,慢性感染,生物膜,细菌胞外多糖
吗啉反义寡核苷酸抑制论文文献综述
张雨欣[1]（2019）在《DNA框架核酸递送多重靶向的反义寡核苷酸以抑制生物膜的形成》一文中研究指出生物膜形成导致许多的慢性感染并且成为严重的健康问题。细菌胞外多糖(EPS)的产生使生物膜具有粘附性和毒性,并且会对抗生素产生抗性,因此难以完全去除。抑制细菌合成EPS可以抑制细菌生物膜的形成,降低其稳定性并促进去除。本研究开发了具有四面体构型的框架核酸(tFNA)递送系统,它可以自由进入细菌细胞并将反义寡核苷酸(AOS)运输到靶向基因发挥其功能。我们基于变异链球菌中VicK蛋白结合区域的保守性设计了具有多重靶向性的AOSs序列,并使用FNA将其传递至细菌细胞中。我们观察到EPS的合成显着降低,并且生物膜结构明显破坏。递送系统同时降低了所有靶基因的表达,证明其高效性。本研究展示了一种新型核酸纳米材料在抑制生物膜形成中的应用,证明其在治疗由生物膜引起的慢性感染中的巨大潜力。(本文来源于《2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编》期刊2019-10-11）
刘超[2]（2017）在《核因子Kappa-B p65反义寡核苷酸对人晶状体上皮细胞移行和转分化的影响及其抑制后发性白内障的实验研究》一文中研究指出目的:1、体外培养人晶状体上皮细胞株HLEB-3,观察TGF-β32对晶状体上皮细胞的移行和转分化的影响。2、观察不同浓度的NF-K B p65 ASODN和不同剂量的转染剂HiPerFect对晶状体上皮细胞的影响。3、通过应用NF-K B p65 ASODN在体外转染人晶状体上皮细胞,检测其对由TGF-β32诱导的晶状体上皮细胞的移行和转分化的影响,研究NF-K Bp65AS0DN在体外对晶状体上皮细胞的影响。4、采用眼前房内注射法转移NF-K Bp65AS0DN至新西兰大白兔后发性白内障模型眼内,观察其对后发性白内障的作用,探讨后发性白内障的基因治疗方法。材料和方法:1、体外培养人晶状体上皮细胞株HLEB-3,用不同浓度的TGF-β2处理后,在不同的时间点用细胞划痕法观察细胞的移行能力,ELISA法处理细胞爬片后,检测细胞爬片中的阳性细胞数和吸光度值,检测α-SMA蛋白的变化。2、将NF-K B p65 ASODN行全程硫代磷酸化修饰,不同浓度的NF-K B p65 ASODN和不同剂量的转染剂HiPerFect两两混合,探讨细胞活性不受明显影响的情况下,最佳的转染效率时所需的NF-K B p65 ASODN的浓度和转染剂的剂量。3、细胞同步培养后分五组:(1)空白对照组(单纯FSM培养),(2)阴性对照组(HiPerFect转染试加入到FSM中共同培养),(3)TGF-β 2组(T组)(10ng/ml TGF-β2) , (4)TGF-β2 加 ASODN 组(T+A 组)(TGF-β2、HiPerFect 转染试和AS0DN加入到FSM中共同培养),(5)TGF-β 2加MS0DN组(T+M组)(TGF-β32、HiPerFect转染试和MS0DN加入到FSM中共同培养)。不同组细胞继续培养,6h、12h、24h、48h四个不同时间点收集上清液检测α-SMA的含量,采用RT-PCR检测细胞NF-K B mRNA的表达情况。4、将16只新西兰大白兔进行晶状体囊外摘除术制作后发障活体眼动物模型,手术后随即分为四组,每组4只。A组:空白对照组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射BSS液100ul; B组:阴性对照组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect的BSS液100ul; C组:AS0DN —次注射组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect和10mol / L的NF-K B p65 AS0DN的BSS液100ul; D组:AS0DN两次注射组4只白兔8眼:术毕和术后第2天分别经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect和10mol / L的NF-K Bp65 AS0DN的BSS液100ul。术后第7、14、21、28天用超声角膜测厚仪测量中央角膜厚度,用裂隙灯显微镜观察前房炎症反应和后囊膜的混浊情况,并于实验结束时行HE染色观察后囊膜的病理变化、检测α -SMA的表达和进行RT-PCR检测晶状体上皮细胞中NF-K B p65 mRNA的表达。结果:1、TGF-β 2是晶状体上皮细胞重要的促移行和转分化生长因子,其作用呈现明显的浓度和时间依赖性。不同浓度的TGF-β 2作用48h后,移行距离随着TGF-β2浓度的增加而增加,当浓度为1Ong/ml时作用最强;晶状体上皮细胞在10ng/mlTGF-β2作用下,其移行距离随着作用时间的延长而增加,在48h达到高峰。晶状体上皮细胞在TGF-β2作用下由单层立方形变为长梭形,伸出伪足,逐渐呈现纤维细胞样形态。不同浓度的TGF-β 2作用48h后,细胞爬片中α -SMA的阳性细胞数和吸光度值随着TGF-β 2浓度的增加而增加,当浓度为1Ong/ml时数值最大;晶状体上皮细胞在1Ong/ml TGF-β 2作用下,细胞爬片中α-SMA的阳性细胞数和吸光度值随着作用时间的延长而增加,在48h达到最大值。2、NF-K B p65 AS0DN对HLE B-3细胞的导入率随时间的延长而增加,48h导入率可达60%以上,并且细胞的活性不受影响;随着浓度增加,NF-KBp65AS0DN对HLE B-3细胞的导入率增加,10μ g/ml的转染率最高,再增加浓度转染率增加不明显,对细胞活性影响不明显;当剂量≤3ul时,随着转染剂HiPerFect的增加,对细胞的转染率增加,无明显细胞毒性,当剂量增加为4u时,对细胞的转染率增加不明显,并且表现出细胞毒性。HiPerFect的剂量为3ul,AS0DN的浓度为1Onmol / L对细胞存活率影响小(80. 4%),同时细胞的转染率可高达70. 8%,为最理想转染条件。3、在6h、12h、24h、48h四个不同时间点与空白对照组相比,阴性对照组、T组、T+A组、T+M组上清液α -SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P<0.01);与阴性对照组相比,T组、T+M组上清液α-SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0. 01);与阴性对照组相比,T+A组上清液α -SMA的浓度增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与T+A组相比,T组、T+M组上清液α-SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01) : T组与T+M组上清液α -SMA的浓度之间的差异不明显,差异无统计学意义(P>0. 05)。NF-K B p65 mRNA出现在364 bp处。6h、12h、24h、48h四个不同时间点与空白对照组相比,阴性对照组、T组、T+A组、T+M组NF-K B p65 mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01);与阴性对照组相比,T组、T+M组NF-K B p65 mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01);与阴性对照组相比,T+A组NF-KBp65mRNA的含量增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与T+A组相比,T组、T+M组NF-K Bp65mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0. 01) ; T组与T+M组NF-K B p65 mRNA的含量之间的差异不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。4、眼前节炎症反应均在一周内消失,组间无统计学差异。术后1周左右,A、B组开始出现后囊膜混浊,随时间延长而逐渐加重,C、D组后囊混浊发生时间均迟于A、B组,混浊程度也较A、B组为轻,差异有显着统计学意义(P< 0. 05)。C、D组之间差异无统计学意义。HE染色后观察到A、B组后囊表面可见多层成纤维细胞生长,细胞排列较为紧密,囊袋周边部皮质增生,同时可见明显纤维素样物质沉积,C、D组后囊表面相对干净,仅有少量细胞增殖,细胞排列较为疏松。A、B组后囊膜α-SMA的表达量较C、D组明显增加,差异有显着统计学意义;A组和B组之间,C组和D组之间差异不明显,无统计学意义。RT-PCR分析结果发现A、B组NF-KBp65mRNA的表达量较C、D组明显增加,差异有显着统计学意义;A组和B组之间,C组和D组之间差异不明显,无统计学意义。结论:1、TGF-β 2可促进晶状体上皮细胞的移行,同时反应细胞间质转分化的α -SMA蛋白的表达增加,应用TGF-β 2刺激体外培养的晶状体上皮细胞可成功建立后发障的细胞模型。2、HiPerFect的剂量为3ul, ASODN的浓度为10nmol / L对细胞存活率影响小(80.4%),同时细胞的转染率可高达70. 8%,为最理想转染条件。3、NF-K B p65 AS0DN可特异性阻断NF-K B p65 mRNA的表达,抑制TGF-β 2诱导的α -SMA的表达和晶状体上皮细胞出现移行和间质转分化。4、采用眼前房内注射法转移NF-K Bp65AS0DN可抑制新西兰大白兔后发性白内障模型眼内后囊膜上α -SMA的表达和NF-K B p65 mRNA的表达,抑制后囊膜的混浊,并且不增加炎症反应和对角膜的影响。(本文来源于《山东大学》期刊2017-06-30）
刘霞,刘文楼,吴迪,卓士超[3]（2016）在《COX-2反义寡核苷酸抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的研究》一文中研究指出目的通过研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用并分析其抑制原理,探讨COX-2反义寡核苷酸对乳腺癌的作用意义。方法 MDA-MB-231细胞分为3组培养:对照组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组。MTT实验检测细胞的增殖情况;转染48 h后,Western blot检测COX-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果与对照组、正义寡核苷酸组比较,COX-2反义寡核苷酸转染的细胞增殖受到明显抑制;蛋白表达明显下调;G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞所占比例显着降低(P均<0.05)。结论COX-2反义寡核苷酸可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖;下调COX-2蛋白的表达;并调节细胞周期的分布。(本文来源于《中国临床研究》期刊2016年09期）
于翠革,李连香,朱克修,黄剑峰,李文生[4]（2015）在《Chk1反义寡核苷酸联合顺铂抑制卵巢癌侵袭转移的分子机制》一文中研究指出目的:探究Chk1反义寡核苷酸(CHK1-ASODN)单独或联合顺铂(DDP)对卵巢癌细胞系SKOV-3侵袭转移能力的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV-3,CHK1-ASODN单独或联合DDP处理48 h后,划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;显微镜下观察细胞上皮或间质表型特征;Western blot及实时定量PCR技术分别检测上皮间质转化(EMT)特异性标志物(E-cadherin、N-cadherin)以及EMT关键调控分子ZEB1的蛋白及m RNA的表达水平。结果:与对照组相比较,CHK1-ASODN单独或联合DDP均能显着抑制SKOV-3细胞的迁移及侵袭(P<0.05);细胞表现为间质化表型;E-cadherin的表达显着升高(P<0.05),而N-cadherin的表达则显着降低(P<0.05);ZEB1的表达显着降低(P<0.05)。结论:CHK1-ASODN单独或联合DDP下调ZEB1的表达进而逆转EMT可能是其抑制卵巢癌侵袭转移的重要机制之一。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2015年34期）
周燕琼,张艳美,高分飞,黄展勤,陈一村[5]（2015）在《反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响》一文中研究指出目的:研究反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)抑制早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)表达对内皮细胞缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响。方法:采用新生大鼠进行心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)原代培养,取3~4代的CMECs建立缺氧复氧模型。细胞随机分为6组:对照(Con)组、缺氧复氧组(A/R)、溶剂组(LIP)、反义寡核苷酸转染组(AS)、正义寡核苷酸转染组(S)和错配寡核苷酸转染组(Sc)。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察内皮细胞损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,观察内皮细胞炎症反应水平;Western-blot法检测培养内皮细胞中Egr-1的蛋白表达水平;显微镜下观察细胞形态学改变并计算存活率。结果:A/R造成内皮细胞内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF-α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予AS-ODN可抑制Egr-1蛋白的表达,减轻内皮细胞的损伤及炎症反应程度,提高细胞存活率。结论:AS-ODN抑制培养内皮细胞Egr-1的表达,并降低A/R损伤,提示Egr-1与缺氧复氧所致的心脏微血管内皮细胞损伤密切相关。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2015年01期）
林志鸿,谢良地,吴可贵,李庚山,蔺佩鸿[6]（2014）在《硫代磷酸化修饰的反义TGF-β_1寡核苷酸抑制血管损伤后内膜增殖》一文中研究指出目的:探讨反义转化生长因子β1(TGF-β1)寡核苷酸对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转变的影响及对内膜增殖的作用。方法:在跨过TGF-β1cDNA序列的起始密码区ATG范围内,设计含15个碱基、无修饰或硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸(AS TGF-β1)及对照的正义(与反义寡核苷酸互补)寡核苷酸(S TGF-β1)。球囊导管损伤SD大鼠颈总动脉,术后7 d取出正常或损伤的血管进行VSMCs的培养,RT-PCR及蛋白印迹分别检测VSMCs生物学标志平滑肌22α蛋白(SM22α)、基质Gla蛋白和骨桥蛋白,以及TGF-β1和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)mRNA和蛋白质的表达。采用ALZET泵皮下注射硫代磷酸化修饰AS TGF-β1及S TGF-β1(90μg·kg-1·d-1),连续给药28 d后测定血管内膜与中膜的面积比(I/M)。结果:(1)AS TGF-β1对血管损伤后VSMCs TGF-β1mRNA表达并无明显作用,但呈浓度依赖性抑制TGF-β1蛋白质的表达,而S TGF-β1不影响TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。(2)AS TGF-β1呈浓度依赖性抑制血管损伤后VSMCs DNA的合成,而不管是AS TGF-β1还是S TGF-β1对正常VSMCs DNA的合成均无明显的量效作用;同时AS TGF-β1显着抑制了血管损伤后VSMCs FN的合成。(3)AS TGF-β1显着促进了VSMCs SM22αmRNA的表达,但抑制了基质Gla蛋白和骨桥蛋白mRNA的表达,这种相反的作用在0.01及0.1μmol/L的水平最为明显。(4)硫代磷酸化修饰的AS TGF-β1治疗28 d后,显着抑制了颈动脉损伤后新生内膜的增殖,I/M比对照组下降了68%。结论:AS TGF-β1特异性抑制了VSMCs TGF-β1蛋白的表达,抑制血管损伤后VSMCs增殖及合成、分泌FN,减轻血管损伤后新生内膜的增殖。上述作用可能与逆转血管损伤后VSMCs的表型转变有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2014年08期）
盛嘉元[7]（2014）在《无细胞体系中胞壁酸合成途径的构建及反义寡核苷酸抑制作用的研究》一文中研究指出无细胞蛋白表达体系是一种体外合成蛋白质的开放系统,没有细胞结构的限制,因此,与传统体内蛋白表达系统相比,在蛋白质合成方面具有许多优势,如反应条件容易控制,操作简单方便,容易实现高通量反应等。本文主要开展无细胞体系同时合成多种细胞壁肽聚糖合成酶并用于体外重建胞壁酸合成途径的研究,探索无细胞蛋白质合成技术在体外合成生物学和无细胞生物学方面的应用潜力。细胞壁肽聚糖合成途径的相关酶蛋白在大多数细菌中保守度高,是开发广谱新抗生素的重要靶点。然而,传统胞壁酸合成途径存在于细胞质内,难以用传统方法进行抑制剂的高效筛选。本论文在体外无细胞蛋白合成体系中,通过添加胞壁酸合成酶基因PCR产物作为线性模板,实现了6种关键酶基因(MurA-MurF)的可溶性共表达。进一步加入MurA-MurF所需的各种底物后,采用HPLC检控每一步酶反应的中间产物,并使用HPLC-ESI-MS测定各个中间产物的性质,确证了这一多酶反应终产物(UDP-MurNAc-L-Ala-7-D-Glu-meso-2,6-diaminopimeloyl-D-Ala-D-Ala)。这一研究工作不仅实现了胞壁酸合成途径的体外重构,而且将多靶点抗生素高通量筛选方法从体内向体外方向转变。反义寡核苷酸在细菌的代谢调控和生物医药领域都有重要的应用价值。本课题利用体外构建的胞壁酸合成途径,开展高效筛选能有效抑制MurA-MurF表达的反义寡核苷酸的研究。首先通过计算机辅助识别目标mRNA结构的模拟,针对以上6种目标酶蛋白基因共设计27条反义寡核苷酸,然后检测各种反义寡核苷酸对目标蛋白表达的抑制作用。结果表明,在设计的27条反义寡核苷酸中,有10条寡核苷酸对各自目标基因表达的抑制作用达到了90%以上。然后重点研究了反义寡核苷酸A281和B139分别对MurA和MurB的抑制剂量效应。结果表明,当目标基因线性模板浓度为10 ng/μL条件下,40μM反义寡核苷酸能够完全抑制MurA或MurB的表达,从而在体外实现对胞壁酸合成途径的阻断。这一工作进一步佐证了这一复杂多酶催化途径在无细胞体系中的成功重建,而且这些筛选出的反义寡核苷酸具有成为新抗菌药物的潜力。无细胞体系的合成效率和相应试剂盒的工具性是制约无细胞蛋白质合成技术广泛应用的关键性抑制因素。在实验室长期的无细胞体系制备基础上,通过在无细胞制备宿主中表达肌酸激酶和T7 RNA聚合酶,能够简化无细胞体系的制备和降低成本,可应用于无细胞蛋白质合成试剂盒研制。同时构建了无细胞连续交换连续反应的表达系统,并制作了基于24孔板的CECF无细胞反应器,能够用于多种蛋白质的高效合成。总之,本文工作不仅在无细胞体系中发展了多种酶蛋白同时表达的新技术,而且应用这一新技术构建了一条多酶催化体外合成胞壁酸的代谢途径,并应用于反义寡核苷酸高效筛选方法学的研究。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-06-18）
昝琰璐,田波[8]（2014）在《反义RNA寡核苷酸及其与脂质体的复合物对于乙型肝炎病毒的抑制（英文）》一文中研究指出我们设计合成了特异性靶向乙型肝炎病毒(HBV)mRNA的反义RNA寡核苷酸P-2987、X-60和X-519.在瞬时转染pHBV1.3质粒(含有1.3拷贝的HBV基因组)的HepG2细胞和整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中,转染2μmol/L的反义RNA寡核苷酸,ELISA和实时定量PCR结果表明,这3条寡核苷酸可以明显抑制HBV的复制和抗原表达.在HBV转基因鼠中,尾静脉注射反义RNA寡核苷酸,结果表明,肝脏中HBV的复制得到了抑制,但是血清中抗原含量和HBV DNA拷贝数没有明显变化.反义RNA寡核苷酸X-519与脂质体的复合物可以增强其对于HBV在肝脏中复制的抑制作用.在通过高压尾静脉注射pHBV1.3质粒建立的HBV急性感染模型中,反义RNA寡核苷酸X-519可以显着地抑制HBV在肝脏中的复制以及降低血清中病毒抗原水平和DNA拷贝数.上述实验结果说明,X-519及其与脂质体的复合物对于HBV的复制和抗原表达起到明显的抑制作用,可能作为一种潜在的针对HBV的基因治疗药物.(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2014年04期）
梁超[9]（2014）在《联合运用Survivin和VEGF反义寡核苷酸对裸鼠人肺腺癌A549移植瘤的生长抑制作用》一文中研究指出目的探讨Survivin反义寡核苷酸联合1VEGF反义寡核苷酸在裸鼠（BALB/c-NU全雌）体内对人肺腺癌细胞A549移植瘤的生长抑制作用。方法取一定数量对数期生长正常、活性良好的A549细胞注入裸鼠皮下。待植瘤成功后，将裸鼠随机分为5组：空白对照组、脂质体对照组、VEGF处理组、Survivin处理组，Survivin-VEGF联合处理组，分别予以生理盐水、脂质体、VEGF ASDON-脂质体混合物、 SurvivinASODN-脂质体混合物局部注射，每隔1天注射一次，观察各组肿瘤的生长情况。注射两周后，处死裸鼠，并取下肿瘤。分别以Western blot、荧光定量PCR检测肿瘤组织Survivin及VEGF各自蛋白和RNA的表达情况，用免疫组化法检测Cyclin B1蛋白表达和进行微血管密度计数（CD34染色）。实验结果用x±s表示，数据用SPSS17.0软件处理。结果VEGF反义寡核苷酸和Survivin反义寡核苷酸，无论联合或单独使用，均能有效地降低其靶基因的表达并抑制肿瘤的生长，且联合处理组强于单反义寡核苷酸处理组。 Survivin处理组肿瘤质量为(0.479±0.046)g, VEGF处理组肿瘤质量为(0.476±0.079） g，Survivin-VEGF联合处理组肿瘤质量为（0.265±0.010）g,各组与空白组差异有显着性P<0.05,且联合处理组作用结果优于各单反义组（P<0.05）。Survivin-VEGF联合处理组中Survivin和VEGF蛋白及RNA的表达较Survivin处理组和VEGF处理组更低，P值均<0.05。此外，Survivin-VEGF联合处理组显着降低了肿瘤组织微血管密度计数（MVD），也较各单反义寡核苷酸处理组具有更强的作用效果，Survivin处理组（13.27±2.19），VEGF处理组（11.40±1.18），Survivin-VEGF联合处理组（10.27±1.75），各单反义组与联合组之间差异具有显着性（P<0.05）。Survivin-VEGF联合处理组停滞于G2/M期的细胞也较Survivin处理组和VEGF处理组明显增多（P<0.05）。结论在裸鼠移植瘤A549的治疗中，联合使用VEGF反义寡核苷酸和1Survivin寡核苷酸对肿瘤的生长抑制作用优于单用VEGF反义寡核苷酸或Survivin反义寡核苷酸。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2014-04-01）
褚静英,谢小芳,颜洁,朱雪明,陆玉霞[10]（2014）在《联合应用Survivin和VEGF反义寡核苷酸对肺癌A549细胞的抑制作用》一文中研究指出目的研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞经Survivin和VEGF反义寡核苷酸(ASODN)单独和联合转染后细胞生长、凋亡以及对基因表达的抑制作用。方法针对Survivin和VEGF mRNA序列设计反义寡核苷酸,以脂质体(Lip)为载体,介导Survivin和VEGF ASODN单独和联合转染A549细胞。MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR检测细胞中Survivin和VEGF基因的mRNA含量,流式细胞术检测细胞凋亡以及细胞中Survivin基因的蛋白表达。结果经脂质体转染后200~600 nmol/L Survivin ASODN和5~20μmol/L VEGF ASODN均能抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡;在48 h时,400 nmol/L Survivin ASODN和10μmol/L VEGF ASODN抑制率和凋亡率有统计学意义(P<0.05);两者联合转染A549细胞抑制率和凋亡率分别为(61.37±1.94)%和57.03%,显着高于两基因单独转染(P<0.05);联合组的Survivin mRNA的表达量为(15.26±1.31)%,蛋白表达率为(30.40±1.33)%,VEGF mRNA的表达量为(13.12±1.45)%,均显着低于单独转染组(P<0.05)。结论 Survivin和VEGF ASODN均能抑制A549细胞基因表达,诱导细胞凋亡,两基因反义寡核苷酸联合转染的效果优于单独转染。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2014年08期）
吗啉反义寡核苷酸抑制论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:1、体外培养人晶状体上皮细胞株HLEB-3,观察TGF-β32对晶状体上皮细胞的移行和转分化的影响。2、观察不同浓度的NF-K B p65 ASODN和不同剂量的转染剂HiPerFect对晶状体上皮细胞的影响。3、通过应用NF-K B p65 ASODN在体外转染人晶状体上皮细胞,检测其对由TGF-β32诱导的晶状体上皮细胞的移行和转分化的影响,研究NF-K Bp65AS0DN在体外对晶状体上皮细胞的影响。4、采用眼前房内注射法转移NF-K Bp65AS0DN至新西兰大白兔后发性白内障模型眼内,观察其对后发性白内障的作用,探讨后发性白内障的基因治疗方法。材料和方法:1、体外培养人晶状体上皮细胞株HLEB-3,用不同浓度的TGF-β2处理后,在不同的时间点用细胞划痕法观察细胞的移行能力,ELISA法处理细胞爬片后,检测细胞爬片中的阳性细胞数和吸光度值,检测α-SMA蛋白的变化。2、将NF-K B p65 ASODN行全程硫代磷酸化修饰,不同浓度的NF-K B p65 ASODN和不同剂量的转染剂HiPerFect两两混合,探讨细胞活性不受明显影响的情况下,最佳的转染效率时所需的NF-K B p65 ASODN的浓度和转染剂的剂量。3、细胞同步培养后分五组:(1)空白对照组(单纯FSM培养),(2)阴性对照组(HiPerFect转染试加入到FSM中共同培养),(3)TGF-β 2组(T组)(10ng/ml TGF-β2) , (4)TGF-β2 加 ASODN 组(T+A 组)(TGF-β2、HiPerFect 转染试和AS0DN加入到FSM中共同培养),(5)TGF-β 2加MS0DN组(T+M组)(TGF-β32、HiPerFect转染试和MS0DN加入到FSM中共同培养)。不同组细胞继续培养,6h、12h、24h、48h四个不同时间点收集上清液检测α-SMA的含量,采用RT-PCR检测细胞NF-K B mRNA的表达情况。4、将16只新西兰大白兔进行晶状体囊外摘除术制作后发障活体眼动物模型,手术后随即分为四组,每组4只。A组:空白对照组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射BSS液100ul; B组:阴性对照组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect的BSS液100ul; C组:AS0DN —次注射组4只白兔8眼:术毕经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect和10mol / L的NF-K B p65 AS0DN的BSS液100ul; D组:AS0DN两次注射组4只白兔8眼:术毕和术后第2天分别经侧切口向前房注射含3ul HiPerFect和10mol / L的NF-K Bp65 AS0DN的BSS液100ul。术后第7、14、21、28天用超声角膜测厚仪测量中央角膜厚度,用裂隙灯显微镜观察前房炎症反应和后囊膜的混浊情况,并于实验结束时行HE染色观察后囊膜的病理变化、检测α -SMA的表达和进行RT-PCR检测晶状体上皮细胞中NF-K B p65 mRNA的表达。结果:1、TGF-β 2是晶状体上皮细胞重要的促移行和转分化生长因子,其作用呈现明显的浓度和时间依赖性。不同浓度的TGF-β 2作用48h后,移行距离随着TGF-β2浓度的增加而增加,当浓度为1Ong/ml时作用最强;晶状体上皮细胞在10ng/mlTGF-β2作用下,其移行距离随着作用时间的延长而增加,在48h达到高峰。晶状体上皮细胞在TGF-β2作用下由单层立方形变为长梭形,伸出伪足,逐渐呈现纤维细胞样形态。不同浓度的TGF-β 2作用48h后,细胞爬片中α -SMA的阳性细胞数和吸光度值随着TGF-β 2浓度的增加而增加,当浓度为1Ong/ml时数值最大;晶状体上皮细胞在1Ong/ml TGF-β 2作用下,细胞爬片中α-SMA的阳性细胞数和吸光度值随着作用时间的延长而增加,在48h达到最大值。2、NF-K B p65 AS0DN对HLE B-3细胞的导入率随时间的延长而增加,48h导入率可达60%以上,并且细胞的活性不受影响;随着浓度增加,NF-KBp65AS0DN对HLE B-3细胞的导入率增加,10μ g/ml的转染率最高,再增加浓度转染率增加不明显,对细胞活性影响不明显;当剂量≤3ul时,随着转染剂HiPerFect的增加,对细胞的转染率增加,无明显细胞毒性,当剂量增加为4u时,对细胞的转染率增加不明显,并且表现出细胞毒性。HiPerFect的剂量为3ul,AS0DN的浓度为1Onmol / L对细胞存活率影响小(80. 4%),同时细胞的转染率可高达70. 8%,为最理想转染条件。3、在6h、12h、24h、48h四个不同时间点与空白对照组相比,阴性对照组、T组、T+A组、T+M组上清液α -SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P<0.01);与阴性对照组相比,T组、T+M组上清液α-SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0. 01);与阴性对照组相比,T+A组上清液α -SMA的浓度增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与T+A组相比,T组、T+M组上清液α-SMA的浓度显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01) : T组与T+M组上清液α -SMA的浓度之间的差异不明显,差异无统计学意义(P>0. 05)。NF-K B p65 mRNA出现在364 bp处。6h、12h、24h、48h四个不同时间点与空白对照组相比,阴性对照组、T组、T+A组、T+M组NF-K B p65 mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01);与阴性对照组相比,T组、T+M组NF-K B p65 mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0.01);与阴性对照组相比,T+A组NF-KBp65mRNA的含量增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与T+A组相比,T组、T+M组NF-K Bp65mRNA的含量显着增加,差异有显着统计学意义(P< 0. 01) ; T组与T+M组NF-K B p65 mRNA的含量之间的差异不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。4、眼前节炎症反应均在一周内消失,组间无统计学差异。术后1周左右,A、B组开始出现后囊膜混浊,随时间延长而逐渐加重,C、D组后囊混浊发生时间均迟于A、B组,混浊程度也较A、B组为轻,差异有显着统计学意义(P< 0. 05)。C、D组之间差异无统计学意义。HE染色后观察到A、B组后囊表面可见多层成纤维细胞生长,细胞排列较为紧密,囊袋周边部皮质增生,同时可见明显纤维素样物质沉积,C、D组后囊表面相对干净,仅有少量细胞增殖,细胞排列较为疏松。A、B组后囊膜α-SMA的表达量较C、D组明显增加,差异有显着统计学意义;A组和B组之间,C组和D组之间差异不明显,无统计学意义。RT-PCR分析结果发现A、B组NF-KBp65mRNA的表达量较C、D组明显增加,差异有显着统计学意义;A组和B组之间,C组和D组之间差异不明显,无统计学意义。结论:1、TGF-β 2可促进晶状体上皮细胞的移行,同时反应细胞间质转分化的α -SMA蛋白的表达增加,应用TGF-β 2刺激体外培养的晶状体上皮细胞可成功建立后发障的细胞模型。2、HiPerFect的剂量为3ul, ASODN的浓度为10nmol / L对细胞存活率影响小(80.4%),同时细胞的转染率可高达70. 8%,为最理想转染条件。3、NF-K B p65 AS0DN可特异性阻断NF-K B p65 mRNA的表达,抑制TGF-β 2诱导的α -SMA的表达和晶状体上皮细胞出现移行和间质转分化。4、采用眼前房内注射法转移NF-K Bp65AS0DN可抑制新西兰大白兔后发性白内障模型眼内后囊膜上α -SMA的表达和NF-K B p65 mRNA的表达,抑制后囊膜的混浊,并且不增加炎症反应和对角膜的影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
吗啉反义寡核苷酸抑制论文参考文献
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