导读:本文包含了牛视网膜内皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:杜仲绿原酸,脂多糖,增殖,凋亡
牛视网膜内皮细胞论文文献综述
刘娴,姜玉珍,田聘,梁莉[1]（2019）在《杜仲绿原酸对LPS诱导的视网膜内皮细胞凋亡和免疫反应的调控作用》一文中研究指出目的:糖尿病性视网膜病变是糖尿病最常见的并发症之一。本文旨在研究杜仲绿原酸(CA)对脂多糖(LPS)诱导的视网膜内皮细胞(HRECs)凋亡和炎症反应的影响。方法:CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡; ELISA检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10水平。蛋白印迹检测Ki67、Bcl-2、Caspase-3、Bax、NF-κB P65和P-NF-κB P65蛋白水平。结果:低浓度(<50μmol/L)的杜仲绿原酸对HRECs细胞活力无明显影响,高浓度(>50μmol/L)的杜仲绿原酸会减低HRECs细胞活力。与对照组相比,LPS组细胞增殖明显降低,细胞凋亡明显上升(P<0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组细胞增殖升高,细胞凋亡下降(P<0. 05)。LPS组Ki67和Bcl-2表达明显低于对照组,Caspase-3和Bax表达明显高于对照组(P<0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组Ki67和Bcl-2表达明显升高; Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0. 05)。而且,LPS组IL-6和TNF-α水平高于对照组,IL-10水平低于对照组(P<0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平上升(P<0. 05)。另外,LPS组p-P65/P65比值高于对照组(P<0. 05)。杜仲绿原酸(10,20,50μmol/L)组p-P65/P65比值低于LPS组(P<0. 05)。结论:杜仲绿原酸通过抑制NF-κB P65活化减弱LPS诱导的HRECs细胞凋亡和炎症反应的增强。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年02期）
刁婷婷,田骋,王洪亮,姜玉珍[2]（2018）在《淫羊藿苷通过VEGF通路对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞系RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的调节作用》一文中研究指出目的:探索淫羊藿苷对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;蛋白印迹检测VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平。结果:与对照组相比,缺氧组细胞增殖明显升高,侵袭和迁移能力明显增强(P<0. 05)。淫羊藿苷处理缺氧组细胞后,细胞增殖能力明显下降,侵袭和迁移能力明显减弱(P<0. 05)。而且,缺氧组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平显着高于正常组(P<0. 01)。与缺氧组相比,缺氧加药组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平明显降低(P<0. 01)。结论:淫羊藿苷通过VEGF通路抑制缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年12期）
邱峰[3]（2018）在《miR-21-5p调控高糖诱导的视网膜内皮细胞增殖、迁移以及血管形成的实验研究》一文中研究指出背景:糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病的主要合并症之一,随着糖尿病病程的进展越多患者的视力会因DR受到损伤。视网膜异常新生血管是DR的主要病理特征,新生血管可致网膜反复出血从而加重网膜机化,机化牵拉最终导致视网膜脱离,造成视力丧失。抑制视网膜血管内皮细胞异常的增殖和抗血管生成成为治疗DR的主要的研究方向。miRNA(microRNA)是一类长度在20-24bp的内源性的非编码RNA,可作用于其靶基因信使RNA(mRNA)3'端的非编码区碱基,引起mRNA降解或抑制mRNA翻译,参与到细胞进化、细胞增生、细胞凋亡、肿瘤和免疫反应等生物学过程中。研究发现在DR中多种miRNA异常表达,预计miRNA在DR发病机制中起到重要作用。miRNA在各种癌中有高表达,并且部分miRNA与疾病的纤维化有者密切关系。miRNA与细胞的增殖,凋亡,迁移,成管过程有重要的关系。更重要的是国外有研究报道miR-21在增生性玻璃体视网膜病变患者的玻璃体体液中高表达。然而miR-21对人视网膜微血管内皮细胞新生血管形成的作用及机制尚不明确。本研究采用高糖处理人视网膜微血管内皮细胞(Human Retinal Microvascular Endothelial Cells,HRMECs)模拟PDR的发病过程,结合Real-time PCR、Western blot、免疫荧光、Transwell、流式细胞术等多种生物学技术,探讨mi R-21-5p在PDR中的作用效果及潜在的分子机制。为miR-21将来用于DR的诊断及治疗提供理论基础。目的:明确miR-21-5p在高糖诱导的HRMECs中存在异常表达;明确miR-21-5p沉默对高糖诱导的HRMECs增殖、迁移以及成管的影响;探讨ERK和Akt信号通路参与miR-21-5p对HRMECs的调节过程。为miR-21将来用于DR的诊断及治疗提供理论基础。方法:采用高糖处理HRMECs模拟PDR的发病过程,Real-time PCR、Western blot检测miR-21-5p、VEGF、VEGF-R2的表达,明确高糖对HRMECs的上述指标表达的影响;合成miR-21-5p inhibitor并设置相应阴性对照,转染HRMECs12h后采用高糖诱导,MTT检测HRMECs的增殖,免疫荧光观察Ki67,划痕实验检测HRMECs的迁移能力,用成管实验分析HRMECs的管腔形成能力,Westernblot检测HRMECs迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9,血管生成相关蛋白VEGF、HIF-1α及ERK、AKT信号通路相关蛋白及可能性靶基因maspin的表达;加入通路抑制剂LY294002或U0126进行干扰,分析HRMECs迁移以及管腔形成能力,Western blot检测VEGF、HIF-1α、MMP-2、MMP-9的表达。结果:1.MTT检测对照组,高糖组,甘露醇对照组HRMECs24 h、48 h和72 h增殖情况,24h高糖组及48h、72h高糖组HRMECs增殖活性较对照组明显增加,p<0.05,p<0.01。2.Real-time PCR检测对照组,高糖组,甘露醇对照组HRMECs24 h、48 h和72 h细胞VEGF、VEGF-R2、miR-21-5p的表达。24小时高糖组HRMECs的VEGF的表达与对照组,甘露醇对照组明显增加p<0.01,随时间推移48小时高糖组HRMECs及72小时高糖组HRMECsVEGF表达又明显增高p<0.01。24小时高糖组HRMECs的VEGF-R2的表达与对照组,甘露醇对照组明显增加p<0.05,随时间推移48小时高糖组HRMECs及72小时高糖组细胞与对照组,甘露醇比较VEGF-R2表达又明显增高p<0.01。24小时高糖组HRMECs的miR-21-5p的表达与对照组,甘露醇对照组明显增加p<0.05,随时间推移48小时高糖组HRMECs及72小时高糖组HRMECs与对照组,甘露醇对照组比较miR-21-5p表达又明显增高p<0.013.Western blot检测对照组,高糖组,甘露醇对照组各组HRMECs的VEGF、VEGF-R2蛋白的表达。24小时高糖组细胞的VEGF蛋白的表达与对照组,甘露醇对照组明显增加p<0.01。24小时高糖组细胞的VEGF蛋白的表达与对照组,甘露醇对照组明显增加p<0.01,随时间推移48小时高糖组细胞及72小时高糖组细胞VEGF-R2表达与24h高糖组比较又明显增高p<0.01。4.MTT检测对照组、高糖组、高糖+inhibitor NC组、高糖+miR-21-5p inhibitor组各组HRMECs细胞增殖情况。高糖组HRMECs增殖情况比对照组明显增强p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组HRMECs增殖活性较高糖+inhibitor NC组及高糖组明显减弱p<0.01。5.免疫荧光观察对照组、高糖组、高糖+inhibitor NC组、高糖+miR-21-5p inhibitor组各组HRMECs增殖标记物Ki67,并对阳性细胞进行计数。高糖组阳性HRMECs比对照组明显增多p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组阳性HRMECs较高糖+inhibitor NC组及高糖组阳性HRMECs明显减少p<0.05。6.划痕实验检测对照组、高糖组、高糖+inhibitor NC组、高糖+miR-21-5p inhibitor组各组HRMECs的迁移能力。24 h高糖组HRMECs迁移率比对照组明显增加p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组HRMECs迁移率较高糖+inhibitor NC组明显减小p<0.05。7.成管实验检测对照组、高糖组、高糖+inhibitor NC组、高糖+miR-21-5p inhibitor组HRMECs管腔形成能力。高糖组HRMECs交叉点比对照组明显增多p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组HRMECs交叉点较高糖+inhibitor NC组及高糖组细胞交叉点明显减少p<0.05。8.Western blot检测高糖处理24 h后对照组、高糖组、高糖+inhibitor NC组、高糖+miR-21-5p inhibitor组细胞MMP-2、MMP-9、VEGF、HIF-1α、maspin、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK蛋白的表达。高糖组细胞MMP-2、MMP-9、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK蛋白的表达较对照组明显增多p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组细胞MMP-2、MMP-9、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK蛋白的表达较高糖+inhibitor NC组及高糖组细胞明显减少p<0.01。高糖组细胞VEGF、HIF-1α、maspin蛋白的表达较对照组明显增多p<0.01,高糖+miR-21-5p inhibitor组细胞VEGF、HIF-1α、maspin蛋白的表达较高糖+inhibitor NC组及高糖组细胞明显减少p<0.05。9.划痕实验检测12小时高糖+LY294002组,高糖+U0126组细胞迁移率明显低于高糖组p<0.05,p<0.01。24小时高糖+LY294002组,高糖+U0126组HRMECs迁移率也明显低于高糖组p<0.05。10.成管实验分析高糖+LY294002组,高糖+U0126组细胞交叉点明显低于高糖组p<0.01。11.Western blot检测高糖处理24 h后VEGF、HIF-1α、MMP-2、MMP-9蛋白的表达.高糖+LY294002组,高糖+U0126组细胞VEGF、HIF-1α蛋白的表达明显低于高糖组p<0.01,高糖+LY294002组,高糖+U0126组细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达明显低于高糖组p<0.01。结论:高糖促进HRMECs的增殖活性,上调了miR-21-5p,VEGF和VEGFR2及蛋白在HRMECs中的表达,抑制miR-21-5p能抑制高糖诱导的HRMECs的增殖,抑制miR-21-5p可以抑制高糖诱导的新生血管的生成,miR-21-5p可能通过maspin的靶向调控参与HRMECs血管生成,miR-21-5p影响高糖处理HRMECs的PI3K/AKT和ERK通路活性,PI3K/AKT和ERK通路与高糖诱导HRMECs的血管生成有关,miR-21-5p可能通过调控PI3K/AKT和ERK通路影响HRMECs的血管生成。为miR-21将来用于DR的诊断及治疗提供理论基础。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-03-01）
陈泰弘,李荣[4]（2018）在《银杏内酯B对高糖低氧诱导视网膜内皮细胞损伤的保护作用及其机制》一文中研究指出目的:探讨银杏内酯B(Ginkgolide B,GKB)对高糖低氧所致人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cel ls,HREC)损伤的保护作用。方法:建立高糖低氧诱导HREC损伤模型,然后经CCK-8法筛选GKB的最佳作用时间与浓度。ELISA检测TNF-α,ICAM-1,IL-6的水平来评估炎症反应;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western印迹检测PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。结果:与正常对照组相比,高糖低氧模型组细胞活力显着降低,GKB处理可逆转高糖低氧所致的内皮细胞活力降低。高糖低氧模型组细胞的凋亡率显着增加,且细胞内炎症因子TNF-α,ICAM-1,IL-6的表达明显升高;而给予GKB处理后,细胞的凋亡率降低,TNF-α,ICAM-1,IL-6的水平部分回落。此外,高糖低氧模型组细胞中p-AKT,p-PI3K和p-mTOR表达降低;经GKB处理后细胞中p-PI3K,p-AKT和p-mTOR表达升高与蛋白的表达部分下降;给予AKT信号通路激动剂胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)可促进GKB的保护作用,并增加细胞活力。结论:GKB可显着对抗高糖低氧所致的视网膜内皮细胞凋亡损伤与炎症反应,其损伤保护作用可能与活化PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。(本文来源于《临床与病理杂志》期刊2018年02期）
禹倩倩[5]（2017）在《COPB2 siRNA抑制视网膜内皮细胞增殖和迁移及其机制研究》一文中研究指出目的:研究衣被蛋白复合物β亚基2(COPB2)对脉络膜视网膜内皮细胞增殖和迁移的影响及其机制研究方法:本实验分3组:慢病毒转染siRNA-COPB2组、慢病毒阴性对照组和正常组。首先细胞转染72h后,采用qRT-PCR和Western blot法验证siRNA-COPB2的干扰效率。进而采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法,测定COPB2对体外培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)于铺板后各组细胞活性并绘制细胞生长曲线;于转染后采用流式细胞术检测各组培养细胞的增生和凋亡情况;于转染48h后铺板,采用平板克隆观察14d后各组克隆形成的数量;于转染72h后,采用Transwell小室迁移实验,观察各组细胞迁移能力的变化。最后利用Western blot法验证COPB2促进RF/6A细胞增殖的作用机制。结果:结论:COPB2 siRNA转染后能在体外抑制脉络膜视网膜内皮细胞增殖和迁移,COPB2 siRNA可能是通过下调Cyclin D1、P27KiP1、P21Waf1/Cip1、CDK4和P18INK4C蛋白的表达水平参与抑制增殖的作用,有望为解决增殖性视网膜病变提供新思路。(本文来源于《2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（上册）》期刊2017-12-06）
谢坤鹏,刘平,王新,杜军辉[6]（2017）在《内皮抑素对缺氧条件下脉络膜视网膜内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的作用》一文中研究指出目的内皮抑素是一种重要的血管生成抑制剂,本研究旨在研究内皮抑素对缺氧条件下培养的猴脉络膜、视网膜内皮细胞(RF/6A)增殖、迁移和管腔形成的作用。方法取生长状况良好的RF/6A细胞用于用于实验,将细胞随机分为缺氧组、缺氧+不同浓度重组人内皮抑素组、对照组。培养24 h后采用MTT法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,基质胶法检测管腔形成。结果缺氧24 h,细胞增殖活力、迁移和管腔形成均明显增加,使用0.5~10μg/ml重组人内皮抑素预处理可明显抑制缺氧诱导的细胞增殖、迁移和管腔形成(P<0.05)。内皮抑素的上述抑制作用均随其浓度的升高而增强。结论内皮抑素能够明显抑制缺氧诱导的RF/6A细胞的增殖、迁移和管腔形成,提示内皮抑素对脉络膜和视网膜新生血管具有一定的抑制作用。(本文来源于《临床眼科杂志》期刊2017年05期）
唐睆[7]（2017）在《载脂蛋白M在高糖环境下对人视网膜内皮细胞的保护作用》一文中研究指出背景与目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最严重的并发症之一,其发病率与DM的病程长短密切相关。DR是工作人群首要致盲原因,严重影响病人的生存质量,近年来随着人们生活水平的提高以及生活方式的改变,DR的发病率呈现逐年上升的趋势,由此增加的医疗护理成本也带来了严重的社会问题。但DR的发病机制至今尚未完全阐明,经典的DR发病机制包括:炎症和免疫因素,氧自由基和氧化应激,聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶激活,多元醇通路,蛋白激酶C激活等。近年来,越来越多的研究提出了慢性炎症和统一通路学说,为DR发病机制提出了新的方向。载脂蛋白M(apolipoprotein M,apoM)是由Xu和Dahlb?ck发现并从血浆富甘油叁酯中分离及克隆的人类载脂蛋白,主要存在于人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)。目前的研究显示apoM可能和心脑血管性疾病如糖尿病、冠心病、肥胖症等相关。本文旨在探讨高糖环境下人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells,hRECs)中apoM和炎症因子表达的变化,以及apoM在高糖环境下是否对hRECs有保护作用。方法:1.将hRECs在正常糖浓度(5.5m M)和高糖(30mM)环境下干预24 h后抽提细胞RNA,运用RT-PCR技术检测apoM、MCP-1、TNF-αmRNA的表达。2.将空载慢病毒及载有apoM序列的慢病毒分别感染hRECs,运用RT-PCR技术和Western blot技术检测正常糖浓度(5.5mM)和高糖(30mM)环境下apoM mRNA和蛋白表达。3.将空载组及apoM过表达组细胞在高糖(30mM)环境下干预24 h后抽提细胞RNA,运用RT-PCR技术检测MCP-1、TNF-αmRNA的表达。结果:1.与正常糖浓度比较,高糖组apoM、MCP-1、TNF-α的mRNA表达明显增加(P<0.05)。2.过表达apo M后,hRECs中apoM的mRNA及蛋白水平显着升高(P<0.05)。与正常糖浓度比较,apoM过表达组在高糖环境下apoM蛋白表达显着上升(P<0.05)。3.在高糖环境下,apoM过表达组较空载组MCP-1、TNF-αmRNA的表达显着降低(P<0.05)。结论:1.早期高糖环境在mRNA水平促进了hRECs中apoM、MCP-1、TNF-α的表达。2.hRECs被载有apoM的慢病毒感染后,apoM的mRNA及蛋白水平高表达,提示病毒感染成功。同时,高糖在蛋白水平促进了hRECs中apoM的表达。3.在高糖环境下,过表达apoM可能通过抑制MCP-1和TNF-α的表达,从而保护视网膜内皮细胞,参与糖尿病视网膜病变的发生和发展。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-05-01）
李思佳[8]（2016）在《1,25(OH)2D3对高糖诱导的牛视网膜血管内皮细胞中表达水平变化及对细胞凋亡水平的影响VEGF》一文中研究指出目的观察1,25(OH)2D3对高糖诱导牛视网膜血管内皮细胞(BRECs)中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平变化及对细胞凋亡水平的影响。方法将分离培养的BRECs分为叁组,分别为正常糖组、高糖组和高糖处理组。正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖,高糖处理组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖和50n M,1,25(OH)2D3。培养48 h后收集细胞蛋白。蛋白免疫印迹法检测细胞VEGF及细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达水平;PI/Hoechst双染色法检测细胞凋亡。结果相比于正常糖组,高糖组中VEFG水平和Bax/Bcl-2比值显着增加;而在高糖处理组中表达水平远远低于高糖组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高糖的细胞凋亡水平高于正常糖组,而经过1,25(OH)2D3处理后,其细胞凋亡水平则有所下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可以抑制高糖诱导BRECs中VEGF表达增加及细胞凋亡。(本文来源于《实用防盲技术》期刊2016年03期）
喻日成,罗建华,范元硕[9]（2015）在《溶血卵磷脂对人视网膜内皮细胞表达糖基化终产物受体的影响》一文中研究指出目的:探讨不同浓度的溶血卵磷脂(LPC)对人视网膜微血管内皮细胞表达糖基化终产物受体的影响。方法:人视网膜内皮细胞加入不同浓度的LPC:(20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L)和糖基化终产物,培养24 h,Real-time(RT)-PCR检测糖基化终末产物受体(RAGE)m RNA表达水平,Western blot检测RAGE蛋白表达水平。结果:Realtime(RT)-PCR及Western blot结果表明,LPC的溶度为60 umol/L作用24 h后,RAGE的m RNA及蛋白表达水平明显高于溶度为20μmol/L、40μmol/L。结论:LPC能促进人视网膜内皮细胞RAGE的表达,并且呈剂量依赖性。(本文来源于《深圳中西医结合杂志》期刊2015年12期）
吴炀[10]（2015）在《FoxO1在糖尿病大鼠视网膜和视网膜内皮细胞IL-1β诱导的自刺激中的作用及其机制》一文中研究指出背景与目的糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的微血管并发症,也被认为是一种慢性低度炎症性疾病。在糖尿病的早期阶段,DR的特征是视网膜屏障(the blood-retinal barrier,BRB)的破坏,而组成内层视网膜屏障的主要部分是内皮细胞,并且随着糖尿病病程的延长,内皮细胞死亡数目增加。除内皮细胞死亡外,炎症介质也会通过激活细胞内信号增加血管通透性。炎症因子白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平在糖尿病患者和动物模型的视网膜、玻璃体和血清中升高,还能以旁分泌和自分泌的方式诱导自身的合成,加速并扩大糖尿病视网膜中的炎症级联反应。叉头状转录因子O1(Forkhead transcription factor,Fox O1)是叉头状转录因子O亚家族中重要的一员,在调控增殖凋亡、氧化应激、调节自噬和分化等方面发挥重要作用。研究发现,在1型和2型糖尿病大鼠模型的视网膜中,Fox O1的活性增加,并伴随着炎症反应和凋亡增加。因此推测DR状态下Fox O1活性增加可能与炎症有一定的联系,但Fox O1调节内皮细胞功能的具体机制尚不清楚。研究发现,在原代大鼠肝细胞和HEK293细胞中,IL-1β通过刺激IL-1受体过表达导致胞质和核内Fox O1蛋白量增加。而在巨噬细胞中,Fox O1直接结合到IL-1β启动子上,促进IL-1β的表达增加。因此推测,IL-1β在视网膜内皮细胞中可刺激Fox O1表达增加,从而促进IL-1β的表达增加。本实验以Fox O1特异性小干扰RNA(si RNA)慢病毒载体下调内皮细胞和STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜中的Fox O1的表达及活性,观察Fox O1在IL-1β诱导的自刺激中的作用,并探讨其机制。方法原代人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)培养于不同糖浓度(5.6、15、25、35mmol/L)24h后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blotting法检测Fox O1、IL-1β的表达。HRMECs培养于重组人白介素-1β(r IL-1β)的不同浓度(0、1、2.5、10、25、100ng/m L)24h后,Real-time PCR、Western blotting检测处理后细胞的Fox O1、IL-1β、Caspase-8表达,细胞免疫荧光检测处理后细胞中Fox O1的表达分布,流式细胞仪检测不同浓度r IL-1β处理后HRMECs的凋亡率。HRMECs培养于IL-1受体阻断剂(IL-1RA)、MAPK阻断剂(U0126、SB203580、SP600125)中伴或不伴r IL-1β(10ng/m L),Western blotting法检测Fox O1、p-ERK、p-P38、p-JNK的表达。将构建的Fox O1特异性小干扰RNA(si RNA)慢病毒载体及空慢病毒载体(LV-NC)转染于正常培养的HRMECs,转染后的细胞经或不经过r IL-1β(10ng/m L)刺激24h后,Real-time PCR、Western blotting法检测Fox O1、IL-1β的表达。40只SPF级雄性SD大鼠,随机选取其中30只构建糖尿病大鼠模型,10只作为正常对照组(NC组)。糖尿病造模成功后,将成模糖尿病大鼠随机分为3组:糖尿病组(DM组),糖尿病Fox O1干扰转染组(LV-si-Fox O1组)和糖尿病空病毒转染组(LV-NC组)。大鼠麻醉后,在解剖显微镜下玻璃体注射Fox O1特异性小干扰RNA(si RNA)慢病毒载体及空慢病毒载体(LV-NC)10μl,涂抹抗生素软膏以保护角膜。于病毒注射后4周、8周、12周末,称体重(Body Weight,BW),尾静脉取血测血糖。12周末水合氯醛麻醉大鼠,迅速剥离出眼球,置于4%多聚甲醛中固定用于HE染色和免疫组化检查,于4%预冷戊二醛固定用于电子显微镜检查。新鲜眼球,去除眼前节,分离出视网膜,迅速于液氮中冷冻,荧光定量PCR和Western bloting检测Fox O1、IL-1β表达。结果1.高糖诱导HRMECs的Fox O1和IL-1β表达增加:Fox O1和IL-1β蛋白和m RNA的表达水平随着葡萄糖浓度的增加而增加,特别是糖浓度在35mmol/L时候显着升高(P<0.05)。2.r IL-1β诱导HRMECs的早期凋亡是浓度依赖性,但并不依赖Caspase-8的表达:正常培养的HRMECs早期凋亡率是0.5%,而培养于不同浓度(1、2.5、10、25、100ng/m L)的r IL-1β后,凋亡率分别增加为5.3%,6.6%,8.1%,8.3%,12.6%。不同浓度的r IL-1β对HRMECs的Caspase-8蛋白表达水平无明显影响(P>0.05)。3.不同浓度r IL-1β诱导HRMECs的Fox O1和IL-1β表达增加:与对照组相比,Fox O1和IL-1βm RNA及蛋白的表达水平随着r IL-1β浓度的增加而明显增加(均P<0.05);细胞免疫荧光化学提示随着r IL-1β浓度的增加,Fox O1在细胞核内和胞质内的表达增加,在r IL-1β浓度为25和100ng/m L时,表达显着增加(P<0.05)。4.IL-1受体阻断剂(IL-1RA)、MAPK阻断剂(U0126、SB203580、SP600125)减少r IL-1β诱导HRMECs的Fox O1表达:IL-1RA可减少r IL-1β诱导HRMECs的Fox O1和IL-1β表达。r IL-1β可激活细胞的磷酸化MAPK(p-ERK、p-P38、p-JNK),而IL-1RA可以阻断r IL-1β诱导的MAPK的磷酸化。另外,MAPK阻断剂也可抑制r IL-1β诱导的Fox O1蛋白表达。5.LV si-Fox O1慢病毒转染细胞后,r IL-1β诱导转染细胞的Fox O1和IL-1β表达减弱:HRMECs为原代细胞,流式检测转染组和空载组的转染效率分别是68.1%和58.5%。与正常组相比,IL-1β组和LV-NC+IL-1β组Fox O1和IL-1β表达都明显增加(P<0.001);与10ng/ml r IL-1β组相比,r IL-1β+LV si-Fox O1组Fox O1的m RNA表达水平降低,但仍有统计学意义(P<0.05),而r IL-1β+LV si-Fox O1组IL-1β的m RNA水平则显着降低(P<0.001)6.在大鼠视网膜中,慢病毒转染可下调Fox O1和IL-1β表达:与NC组相比,DM组Fox O1和IL-1β蛋白和m RNA表达水平显着增加(P<0.05),而LV-si-Fox O1组Fox O1和IL-1β表达无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示,DM组Fox O1和IL-1β免疫染色较NC组显着增加,LV-si-Fox O1组免疫染色则不显着,Fox O1免疫染色主要分布外网状层、内核层、内网状层和神经节细胞层,IL-1β免疫染色在视网膜全层表达增加。电镜结果显示正常组内皮细胞线粒体形态正常,官腔未变形。DM组和LV-NC组内皮细胞线粒体明显肿胀,可见空泡变性,管腔明显狭窄。LV-si-Fox O1组内皮细胞线粒体轻度肿胀,官腔未见明显变形。结论1.在HRMECs中IL-1β通过IL-1受体激活MAPK,并促进Fox O1表达,进而上调IL-1β。2.在糖尿病大鼠视网膜中,下调Fox O1的表达可降低视网膜IL-1β的表达,减轻视网膜炎症。(本文来源于《郑州大学》期刊2015-05-01）
牛视网膜内皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探索淫羊藿苷对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;蛋白印迹检测VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平。结果:与对照组相比,缺氧组细胞增殖明显升高,侵袭和迁移能力明显增强(P<0. 05)。淫羊藿苷处理缺氧组细胞后,细胞增殖能力明显下降,侵袭和迁移能力明显减弱(P<0. 05)。而且,缺氧组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平显着高于正常组(P<0. 01)。与缺氧组相比,缺氧加药组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平明显降低(P<0. 01)。结论:淫羊藿苷通过VEGF通路抑制缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛视网膜内皮细胞论文参考文献
[1].刘娴,姜玉珍,田聘,梁莉.杜仲绿原酸对LPS诱导的视网膜内皮细胞凋亡和免疫反应的调控作用[J].中国免疫学杂志.2019
[2].刁婷婷,田骋,王洪亮,姜玉珍.淫羊藿苷通过VEGF通路对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞系RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的调节作用[J].中国免疫学杂志.2018
[3].邱峰.miR-21-5p调控高糖诱导的视网膜内皮细胞增殖、迁移以及血管形成的实验研究[D].中国医科大学.2018
[4].陈泰弘,李荣.银杏内酯B对高糖低氧诱导视网膜内皮细胞损伤的保护作用及其机制[J].临床与病理杂志.2018
[5].禹倩倩.COPB2siRNA抑制视网膜内皮细胞增殖和迁移及其机制研究[C].2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（上册）.2017
[6].谢坤鹏,刘平,王新,杜军辉.内皮抑素对缺氧条件下脉络膜视网膜内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的作用[J].临床眼科杂志.2017
[7].唐睆.载脂蛋白M在高糖环境下对人视网膜内皮细胞的保护作用[D].苏州大学.2017
[8].李思佳.1,25(OH)2D3对高糖诱导的牛视网膜血管内皮细胞中表达水平变化及对细胞凋亡水平的影响VEGF[J].实用防盲技术.2016
[9].喻日成,罗建华,范元硕.溶血卵磷脂对人视网膜内皮细胞表达糖基化终产物受体的影响[J].深圳中西医结合杂志.2015
[10].吴炀.FoxO1在糖尿病大鼠视网膜和视网膜内皮细胞IL-1β诱导的自刺激中的作用及其机制[D].郑州大学.2015