导读:本文包含了轴突损伤论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:2-（α-羟基戊基）苯甲酸钾盐,APP,PS1转基因小鼠,神经元,突触
轴突损伤论文文献综述
黄龙舰,张泳,王晓良,彭英[1]（2019）在《2-（α-羟基戊基）苯甲酸钾盐（PHPB）对APP/PS1转基因小鼠海马神经元、突触和轴突损伤的保护作用》一文中研究指出目的利用10月龄APP/PS1转基因小鼠考察2-(α-羟基戊基)苯甲酸钾盐(PHPB)对海马神经元、突触及轴突损伤的保护作用。方法 10月龄APP/PS1转基因小鼠及同龄野生型对照小鼠被随机分为3组:野生对照组(n=10),APP/PS1转基因组(n=10),PHPB治疗组(n=10)。PHPB治疗组每天灌胃给予30 mg·kg~(-1)PHPB,其余两组给予相同体积的生理盐水。连续给药3个月后,进行活体1H-MRS检测,之后取海马组织进行电镜观察,高尔基染色,免疫组化染色及Western蛋白印迹实验检测,考察病理改变及药物的改善作用。结果电镜结果显示,野生对照组小鼠海马CA1及CA3区神经元饱满,双层核膜清晰完整,核内染色质分布均匀。核周线粒体丰富,高尔基体和核糖体等细胞器形态基本正常。APP/PS1小鼠海马神经元呈现细胞皱缩,染色质聚集,线粒体肿胀,脊断裂,高尔基体变性扩张等病理改变,此外在轴突可见大量聚集的未成熟自噬囊泡。经PHPB给药后,上述病理改变均呈现不同程度的改善。此外,相比于野生对照组小鼠,APP/PS1小鼠CA1及CA3区的突触密度明显降低(P<0.01),突触后致密区厚度明显变薄(P<0.05),经PHPB给药后,该区域突触密度及PSD厚度显着提升(P<0.05)。高尔基染色结果显示,相比于同龄野生型小鼠,APP/PS1小鼠CA1区及DG区海马神经元二级和叁级树突分枝上的树突棘密度明显降低(P<0.01),经PHPB治疗后可见明显提升(CA1:P=0.070;DG:P<0.05)。Sholl分析显示相比于同龄野生型小鼠,APP/PS1转基因小鼠海马DG区神经元分枝数目明显降低(P<0.05),PHPB治疗能够明显提升其树突分枝数量(P<0.05)。Western蛋白印迹实验结果显示,相比于同龄野生型小鼠,APP/PS1小鼠海马组织中PSD-95,SYP等突触相关蛋白的含量明显降低(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显提升,而PHPB能够显着提升APP/PS1转基因小鼠海马组织中PSD-95的含量(P<0.05),并下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(P<0.01),提示其对突触丢失及自噬异常的改善作用。免疫组化结果显示,相比于同龄野生型小鼠,APP/PS1小鼠海马区LC3-Ⅱ阳性染色面积显着增加,而经PHPB治疗后,阳性区域面积呈降低趋势(P=0.055),提示PHPB可以对LC3-Ⅱ阳性自噬囊泡聚集造成的轴突变性起到一定缓解作用。在体1H-MRS结果显示,相比于同龄野生型小鼠,APP/PS1小鼠海马NAA及Glu等代谢物含量明显降低(P<0.05),而经PHPB治疗后2种代谢物含量均呈上调趋势(NAA:P=0.077;Glu:P=0.066)。由于NAA主要存在于成熟神经元及轴突,而Glu作为兴奋性神经元的神经递质主要储存于突触,该结果进一步表明APP/PS1转基因小鼠海马的退行性病变,及PHPB对该区域神经元和突触的改善作用。结论 PHPB能够明显改善APP/PS1转基因小鼠海马神经元及细胞器微观结构,提升突触数量,PSD厚度,增加树突棘密度,上调突触相关蛋白含量,改善海马神经元自噬障碍及代谢异常,表现出对海马神经元、突触及轴突损伤的保护作用。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年06期）
柯彩旗[2]（2019）在《淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠皮层神经元低氧性轴突损伤的保护作用及其机制的初步研究》一文中研究指出目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ(icarisidⅡ,ICSⅡ)对大鼠皮层神经元低氧性轴突损伤的保护作用及其机制,为临床低氧性轴突损伤的治疗提供实验依据。方法:原代培养的新生SD大鼠皮层神经元。为探索氧浓度和缺氧时间对神经元轴突损伤的影响,将神经元随机分为正常组、5%低氧组、10%低氧组、15%低氧组。为探究ICSⅡ对低氧性轴突损伤的保护作用及机制,将神经元随机分为正常组、10%低氧组、10%低氧+ICSⅡ3μM组、10%低氧+ICSⅡ6μM组、10%低氧+ICSⅡ9μM组、10%低氧+PI3K抑制剂组、10%低氧+ICSⅡ9μM+PI3K抑制剂组。于5%CO_2、37℃环境下进行神经元培养,正常组为自然环境氧浓度,各低氧组使用N_2调节氧浓度,无菌密闭低氧箱中持续培养。除LY294002作用48h外,其余各组均分别培养24h、48h和72h。各PI3K抑制剂组均先予以PI3K抑制剂LY294002 20μM预处理1h后加入维持培养基或ICSⅡ。分别在各观察时间点进行相应指标测定:噻唑蓝(MTT)法测定神经元细胞活力,微量酶标法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力,β-ⅢTubulin免疫荧光染色观察轴突网络形态学变化,并测量轴突变性指数(DI)及最长突起长度进行量化分析。结果:(1)与正常组比较,低氧条件下培养的SD大鼠皮层神经元折光性下降,胞体肿胀,轴突网络逐渐崩解,轴突断裂、缩短甚至消失。随着氧浓度的降低,轴突损伤逐渐加重。与正常组比较,15%氧浓度时轴突网络部分崩解,串珠形成,轴突断裂、缩短,细胞存活率及培养上清液中LDH活力无显着性改变(P>0.05,P>0.05);10%氧浓度时,24h、48h其轴突缩短明显而神经元存活率无明显变化(P<0.05,P>0.05);72h其轴突网络崩解,细胞存活率下降且培养上清液中LDH活力升高(P<0.05,P<0.05);5%氧浓度时轴突网络完全崩解、甚至消失,细胞存活率下降且培养液上清中LDH活力升高(P<0.05,P<0.05)。(2)在10%氧浓度培养72h,与10%低氧组比较,ICSⅡ(3μM)组未见明显的保护作用,中高ICSⅡ(6μM、9μM)组轴突明显延长,细胞存活率上升,但仍低于正常组。PI3K抑制剂预处理后,与10%低氧组比较,ICSⅡ各组轴突无明显改变(P>0.05)。结论:(1)低氧状态下,体外培养SD大鼠皮层神经元发生轴突损伤,随着缺氧时间延长及缺氧程度加重,逐渐出现胞体损伤,表明低氧条件下的轴突损伤早于细胞损伤。(2)在10%低氧条件ICSⅡ对轴突损伤有保护作用,这可能是通过激活PI3K信号通路发挥作用。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-06-01）
贾炜姣[3]（2018）在《轴突损伤对单个海马神经元的生物物理性能影响的研究》一文中研究指出单个海马神经元的轴突损伤模型可用于研究神经细胞的损伤和再生机制。目前,已有利用该模型研究关于神经再生的分子机制的报道。若要发展新的损伤神经的修复治疗方案,仍需要更全面的研究来揭示神经再生的机制。大量研究揭示了神经再生过程中细胞的生物化学性质的变化,然而在神经科学方面的工作中对于细胞物理学变化的研究相对较少。细胞的结构和机械性质对于神经的生长和再生也具有重要作用,研究神经细胞的力学和电生理学等物理性质的变化机制有助于了解神经的再生功能。本文中利用基于原子力显微镜(AFM)的生物力学检测技术和膜片钳技术分析了轴突损伤对神经细胞的影响。首先,利用光学显微镜和AFM观察了轴突损伤对体外培养的单个海马神经元形态的影响;然后利用AFM分别测定了正常和轴突损伤的神经元的力学变化谱图,并用相应的理论模型分析了细胞的力学参数;最后又利用膜片钳技术分析了轴突损伤对神经元的电压依赖型钙电流的影响。结果显示,与正常的神经元相比,损伤后神经元的胞体变小了,突起明显消失,膜表面的超微结构发生变化,膜的硬度变大了,最大黏滞力变小了,电压依赖型钙电流减小了;并且细胞损伤后,随着时间的推移,细胞的损伤位点有新的轴突生长出来,同时力学和电生理学性质也有恢复到正常水平的趋势。基于以上结果,本研究揭示了对体外培养的单个海马神经元进行机械损伤,会影响神经元的机械力学性质和电生理性质,从而改变神经元的生理状态;而机械力学性质和电生理性质的变化又可以反馈调节神经元信号的传输,促进损伤神经元的再生。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
买吾拉尼江·依孜布拉,祖丽菲亚·吾斯曼,塔依尔·吐尔松,管金,毛吾丽旦木·迪力夏提[4]（2017）在《异常黑胆质成熟剂对APP/PS1转基因AD模型小鼠神经轴突损伤的修复作用》一文中研究指出目的探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对APP/PS1转基因AD模型小鼠神经轴突损伤的修复作用。方法将50只APP/PS1转基因AD模型小鼠随机分为模型组和异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(异常黑胆质成熟剂给药剂量分别为2.53、5.06、10.12g/kg体质量)及阳性对照组(多奈哌齐为0.92mg/kg体质量),各组10只动物;相同月龄10只C57BL/6J小鼠作为正常组。异常黑胆质成熟剂不同剂量组和阳性对照组连续灌胃4个月,1次/d,末次给药1h后颈椎脱臼处死动物,取出脑组织并固定,制作常规病理切片,用免疫组织化学和Western blot检测脑组织Doublecortin、GAP43蛋白表达。结果模型组小鼠海马CA1区Doublecortin表达的平均密度低于正常组、阳性对照组及异常黑胆质成熟剂中、高剂量组(P<0.05~0.01)。模型组小鼠海马CA1区GAP43表达的平均数目和平均密度明显低于正常组及异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(P<0.05~0.01)。Western blot结果显示:异常黑胆质成熟剂不同剂量组的Doublecortin和GAP43条带颜色均变深,表明蛋白表达增加。结论APP/PS1转基因AD模型小鼠脑内存在Doublecortin和GAP43的含量和表达改变,异常黑胆质成熟剂通过调整Doublecortin和GAP43的表达来改善小鼠学习记忆能力。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2017年06期）
陈易斯[5]（2017）在《自噬相关基因Atg7敲除对叁邻甲苯磷酸酯诱导的Neuro-2a细胞轴突损伤的影响》一文中研究指出目的叁邻甲苯磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)是工业生产中广泛使用的有机磷化合物。人类暴露TOCP可导致一种迟发性神经病(organophosphate-induced delayed neuropathy,OPIDN)的发生,到目前为止其确切发生机制尚不清楚。以前的研究显示OPIDN中神经轴突的病理变化与物理截断引起的轴突wallerian变性相似,即神经轴突自末端向胞体进行性地变性、解体。自噬是真核细胞中负责蛋白质和细胞器清除的主要机制,对于神经元维持自身稳态具有重要作用。众多研究证明神经元自噬异常和轴突变性有关。在本研究中,我们利用自噬相关基因Atg7敲除的自噬缺陷N2a细胞建立中毒模型,研究自噬在TOCP诱导的Neuro-2a(N2a)轴突损伤中的作用,探索TOCP诱导迟发性神经病的发生机制。方法1.细胞毒性实验:CCK8方法测试不同浓度TOCP对N2a细胞增殖的影响,确定OPIDN细胞模型中TOCP染毒剂量。2.细胞分化实验:培养野生型和Atg7基因敲除的自噬缺陷型N2a细胞,分别使用低血清和视黄酸(Retinoic acid,RA)两种方法诱导野生型N2a细胞(Atg7+/+N2a)和自噬缺陷N2a细胞(Atg7-/-N2a),分化24h、48h,直至呈现典型的神经元形态。3.细胞分化能力和轴突损伤情况检测实验:利用0、1.25、2.5、5、10、20μM TOCP处理Atg7+/++N2a细胞,观察毒物对细胞分化能力的影响。在此基础上,以0、5、10μM浓度的TOCP染毒低血清和视黄酸两种方法诱导分化的Atg7+/+N2a细胞和Atg7-/-N2a细胞,观察比较两种N2a细胞轴突变化情况。4.细胞免疫荧光实验:使用免疫荧光法检测0、5、10μM TOCP处理后的Atg7+/+N2a细胞和Atg7-/-N2a细胞中轴突转运蛋白dynaction和自噬标志蛋白LC3B的变化水平。5.蛋白免疫印迹实验:Western blotting检测Atg7+/+N2a细胞和Atg7-/-N2a细胞中 LC3、p62、p-p62、beclin-1、Ub、k48-Ub、k63-Ub 等自噬相关蛋白,kinesin、dynactin等轴浆运输马达蛋白,以及促进轴突损伤相关蛋白SARM1的表达和MAPK信号通路关键分子的磷酸化水平的变化。6.实时荧光 PCR(Quantitative Real-time PCR,Q-PCR)实验：使用 Q-PCR 检测细胞自噬相关基因LC3B、beclin1和转录因子EB的mRNA表达情况,以及轴突变性相关的关键分子 calpain-1、calpain-2、nmnat-2、sarm1、DLK 和 scg10 等基因的mRNA表达水平。结果1.CCK8法检测结果显示,TOCP染毒剂量超过20μM后,随着剂量的增加,对细胞增殖抑制作用越来越明显,直至超过1OO0μM后细胞活性为零。2.低血清和RA两种方法诱导48h之后均可使两种N2a细胞分化成功,即突起长度超过胞体两倍。其中,RA诱导分化的细胞轴突分化长度更明显。3.①Atg7+/+N2a细胞染毒TOCP之后,明显影响了其分化能力,且随着剂量的增加,抑制分化能力越明显。②使用TOCP染毒后,两种细胞轴突长度明显缩短,且随着TOCP染毒剂量增加,轴突损伤逐渐加重。同一剂量下,Atg7-/-N2a细胞轴突缩短程度相较于野生型的小。4.免疫荧光结果显示,随着TOCP染毒剂量的增加,两种细胞中轴突微管马达蛋白Dynactin表达下降,标记自噬泡绿色荧光亮点增多。两种细胞间无显着性差异。5.Western blotting 实验结果显示:Atg7+/+N2a 细胞中 beclin-1 含量减少,LC3-Ⅱ含量明显增加,Atg7-/-N2a细胞中beclin-1同样呈现下降趋势,LC3-Ⅱ不表达。两种细胞中p-p62水平上调,Atg7-/-N2a细胞中p-p62表达量更高。高剂量组两种细胞中轴突运输马达蛋白dynactin和kinesin表达均减少。两种细胞中K48-位点泛素蛋白水平增加,Atg7-/-N2a细胞表达量更高。Atg7+/+N2a细胞中对轴突损伤具有促进性作用的激酶p-p38、p-p42/p44磷酸化水平上升,p-jnk表达下调,蛋白SARM1表达增加,而Atg7-/-N2a细胞中除激酶p-p38呈现上升趋势外,其余均无显着性差异,p-p42/p44在两种细胞间变化具有统计学差异,Atg7+/+N2a细胞磷酸化水平更高。6.荧光定量PCR检测发现:自噬相关基因LC3B、beclin1、转录因子EB的mRNA水平在两种细胞中随着药物剂量的增加而逐步上升。calpain-1在高剂量染毒的Atg7+/+N2a细胞中激活,而在Atg7-/-N2a细胞中calpain-1、calpain-2均被激活。对轴突损伤起保护作用nmnat2基因表达情况是:Atg7+/+N2a细胞逐步上升,而Atg7-/-N2a细胞呈下降趋势,0、5μMTOCP处理组中Atg7-/-N2a细胞表达量更高。同轴突损伤相关的sarm1在高剂量染毒的两种细胞中显着性增加。高剂量组Atg7+/+N2a细胞中DLK含量上升,而Atg7-/-N2a细胞却呈现相反趋势。结论1.TOCP染毒影响了 Atg7+/+N2a和Atg7-/-N2a细胞的分化能力,并能引起已分化的N2a细胞的轴突损伤,其中Atg7+/+N2a细胞的损伤程度比Atg7-/-N2a细胞更加严重。2.TOCP染毒引起N2a细胞自噬激活,而Atg7-/-N2a基因敲除导致细胞自噬活性丧失,同时影响了细胞中促轴突存活和促细胞死亡信号关键因子NMNAT2、Sarm1、DLK 和 MAPK 激酶等。3.自噬基因Atg7敲除能减轻叁邻甲苯磷酸酯对Neuro-2a细胞轴突的损伤。(本文来源于《山东大学》期刊2017-05-28）
师一民[6]（2017）在《补肾益髓方及其拆方对多发性硬化模型小鼠轴突损伤修复和神经营养信号的作用》一文中研究指出目的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘的自身免疫性疾病。前期研究表明,具有补肾化痰活血作用的补肾益髓方能减缓MS的小鼠模型实验性自身免疫反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的轴突损伤,并促进其再生修复,但其作用机制还不明确。因此,在前期研究的基础上,结合目前国内外有关轴突再生机制及信号转导领域的研究,应用免疫组化、实时荧光定量PCR(quantitative RT-PCR,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(western blot,WB)等技术,以轴突再生神经营养因子为研究重点,探讨补肾益髓方及其拆方对EAE小鼠轴突损伤和修复的作用及分子机制,以揭示中医补肾化痰活血法的现代内涵,为中医药辨证论治MS及相关疑难重症提供科学依据。方法140只C57BL/6雌性小鼠,随机分为正常对照(normal control,NC)、模型(model,MO)、醋酸泼尼松(prednisone acetate,PA,5mg/kg)、梓醇(catapol,CA,40mg/kg)、补肾益髓方(BSYS,3.02g生药/kg)、补肾方(BS,1.44g生药/kg)、化痰活血方(HTHX,1.57g生药/kg)组,每组20只。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)35-55免疫小鼠制备EAE模型。各治疗组予相应药物灌胃,NC和模型组灌服生理盐水,每日1次,共40天。每日记录小鼠体重和神经功能评分,统计小鼠发病率和死亡率。在EAE小鼠发病第20天(急性期)和第40天(缓解期)取脑和脊髓。苏木素伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察其病理变化;透射电镜观察轴突和髓鞘变化;免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测P-tau与beta-tubulin的表达;应用qRT-PCR、WB法测定BDNF/TrkB/PI3K/AKT mRNA及蛋白的表达。结果1补肾益髓方及其拆方补肾方和化痰活血方对EAE小鼠神经保护的作用1.1补肾益髓方及其拆方对EAE小鼠发病情况的影响造模前各组小鼠体重无统计学差异(P>0.05)。造模后各小鼠体重缓慢上升,于第11天开始,与正常组比较,其他各造模组小鼠体重开始出现明显下降(P<0.05)。于第19天降至最低,后缓慢回升。但第19天到第40天各造模组动物体重均较正常组显着降低(P<0.01)。在第23天到40天,补肾益髓方和补肾组小鼠体重与激素组比较,回升明显(P<0.05或P<0.01)。1.2补肾益髓方及其拆方对EAE小鼠病理改变的影响模型组脑白质血管周围有炎细胞浸润,核固缩明显。激素、梓醇、补肾、化痰活血和补肾一岁组脑白质血管周围有炎细胞浸润,部分核固缩。病理程度较模型组低。脊髓病理变化与脑相似。1.3补肾益髓方及其拆方对EAE小鼠轴突损伤及修复的影响各组小鼠发病第20天和第40天,模型组中p-Tau表达明显上调,beta-tubulin表达明显下调,补肾益髓、补肾和化痰活血方均可明显下调p-Tau表达(P<0.05,P<0.01),上调beta-tubulin蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。2 BSYS及其拆方对EAE小鼠轴突修复的作用机制研究综合qRT-PCR、WB检测结果发现,发病第20天和40天,补肾益髓方及其拆方补肾方与化痰活血方均可明显上调EAE小鼠脑和脊髓BDNF、TrkB、PI3K与AKT mRNA的表达,与模型组相比,均有统计学差异(P<0.05)。补肾益髓方对上述各指标的作用趋势优于拆方补肾与化痰活血方,但无明显统计学意义(P>0.05)。结论补肾益髓方及其拆方补肾方与化痰活血方均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以补肾益髓全方更为显着。其作用机制可能与与增强BDNF/TrkB及其信号通路PI3K/AKT表达有关。补肾方的作用与补肾益髓方作用相似,但化痰活血方作用不及前二者。这些结果为补肾益髓方治疗MS提供了部分科学依据。(本文来源于《首都医科大学》期刊2017-04-01）
刘清[7]（2017）在《弥漫性轴突损伤治疗研究进展》一文中研究指出弥漫性轴突损伤(DAI)作为创伤性脑损伤的重要损伤类型,是当头部受到加速性的旋转暴力时,因剪刀动力造成的神经轴突损伤。由于现在的常规CT检查不完善,在临床上DAI常被忽视,造成预后不良。近几年研究发现,由于磁共振成像(MRI)弥散成像技术的开展,DAI的诊断率显着提高,这对DAI的早期诊断是有很大帮助的。但是,治疗DAI的效果却不好,因为DAI的损伤不仅包括剪切力导致轴突损伤,还包括多种继发机制引起的轴突断裂,也就是继发性轴突断裂或迟发性轴突断裂。随着医疗水平的发展,对于DAI损伤机制及临床治疗的研究已经有一定的进展,本文就有关DAI治疗的临床及实验研究进展进行综述。(本文来源于《中国城乡企业卫生》期刊2017年03期）
J.Li,L.Gao,K.Xie,J.Zhan,X.Luo[8]（2017）在《创伤性轴突损伤中功能等位性的检测》一文中研究指出摘要目的本研究目的是探索创伤性轴索损伤(TAI)病人中大脑半球间内在的连接性。方法收集了21例TAI病人[男14例,女7例;平均年龄(38.71±15.25)岁]和22例匹配良(本文来源于《国际医学放射学杂志》期刊2017年02期）
周磊,江宾,马晓涵[9]（2017）在《SWI在诊断弥漫性轴突损伤中的应用价值》一文中研究指出目的:探讨磁敏感加权成像在急性期脑弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)中的诊断价值。方法:我院在2016年1月一至今,根据来自脑外科40例患有弥漫性轴突损伤的患者,对由于头部受到外伤后引起弥漫性轴索损伤进行研究,随机分为两组,实验组在常规扫描基础上进行磁敏感加权成像扫描头部,对照组在常规基础上进行液体衰减反转恢复(FLAITR)扫描头部,通过分析比较两组DRI检出率得出结果。结果:首先用统计软件统计记录完数据,通过运用磁共振各检测序列检测出病灶共378个,SWI检测出阳性数明显多于其他序列检测,检出率高达90.2%,对比统计显示不存在差异性(P<0.05),FLAIR检测出197个检出率超过了50%(P<0.05)。结论:SWI序列检测相比其他检测序列更容易、更敏感检测出弥漫性轴突损伤病灶,值得临床推广使用。(本文来源于《中国农村卫生》期刊2017年03期）
陈易斯,宋福永,谢克勤[10]（2016）在《自噬相关基因Atg7敲除对叁邻甲苯磷酸酯诱导的Neuro-2a细胞轴突损伤的影响》一文中研究指出目的:叁邻甲苯磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)在工业生产中广泛运用,可导致迟发性神经病的发生,但其确切机制尚不清楚。自噬是真核细胞中蛋白质降解的主要机制,对于细胞维持自身稳态具有重要作用。本课题通过研究自噬在TOCP诱导的Neuro-2a(N2a)轴突损伤中的作用,探索TOCP诱导迟发性神经病(organophosphate-induced delayed neuropathy,OPIDN)的发生机制。方法:1.利用CRISPR/Cas9技术,将靶向Atg7基因的Cas9和sgRNA修饰系统导入野生型N2a细胞中,经单细胞筛选、HMA试验和基因测序,制备自噬缺陷型N2a细胞。2.培养野生型和Atg7基因敲除的自噬缺陷型N2a细胞,当两种细胞分化48h后分别以0、5、10μM浓度的TOCP染毒,观察比较两种N2a细胞轴突变化情况。3.细胞免疫荧光法检测自噬的缺失对N2a细胞中轴突转运蛋白dynaction和自噬活性蛋白LC3B的水平影响。4.Western blotting检测Atg7以细胞和野生型细胞中LC3、p62、p-p62、beclin-1、k48-Ub、k63-Ub、kinesin以及dynactin等自噬相关蛋白以及促进轴突损伤相关蛋白SARM1、p38、p42、jnk的变化情况。结果:1.利用CRISPR/Cas9技术成功制备出Atg7~(-/-)N2a细胞,经EBSS饥饿诱导试验,鉴定为自噬缺陷型细胞。2.使用TOCP染毒后,两种细胞轴突长度明显缩短,且随着TOCP染毒剂量的增加,轴突损伤逐渐加重。同一剂量下,基因敲除的细胞轴突缩短程度相较于野生型的小。3.随着TOCP染毒剂量的增加,两种细胞中轴突微管马达蛋白Dynactin表达下降,自噬泡荧光亮点增多。4.野生型N2a细胞中beclin-1、LC3-Ⅰ含量减少,而LC3-Ⅱ含量明显增加。自噬缺陷细胞LC3-Ⅱ不表达,LC3-Ⅰ没有明显变化,而beclin-1同样呈现下降趋势。两种细胞中P62和p-p62水平上调,轴突运输马达蛋白dynatin和kinesin表达减少。而K48-位点泛素蛋白水平增加,K63-位点连接的泛素蛋白水平无明显变化。对轴突损伤具有促进性作用的激酶和蛋白p38、p42以及SARM1表达增加,jnk表达减少。结论:自噬基因Atg7敲除对叁邻甲苯磷酸酯引起的Neuro-2a细胞轴突损伤具有保护性的作用,抑制自噬有可能成为OPIDN的干预措施。(本文来源于《2016中国毒理学会神经毒理专业委员会学术年会论文集》期刊2016-12-03）
轴突损伤论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ(icarisidⅡ,ICSⅡ)对大鼠皮层神经元低氧性轴突损伤的保护作用及其机制,为临床低氧性轴突损伤的治疗提供实验依据。方法:原代培养的新生SD大鼠皮层神经元。为探索氧浓度和缺氧时间对神经元轴突损伤的影响,将神经元随机分为正常组、5%低氧组、10%低氧组、15%低氧组。为探究ICSⅡ对低氧性轴突损伤的保护作用及机制,将神经元随机分为正常组、10%低氧组、10%低氧+ICSⅡ3μM组、10%低氧+ICSⅡ6μM组、10%低氧+ICSⅡ9μM组、10%低氧+PI3K抑制剂组、10%低氧+ICSⅡ9μM+PI3K抑制剂组。于5%CO_2、37℃环境下进行神经元培养,正常组为自然环境氧浓度,各低氧组使用N_2调节氧浓度,无菌密闭低氧箱中持续培养。除LY294002作用48h外,其余各组均分别培养24h、48h和72h。各PI3K抑制剂组均先予以PI3K抑制剂LY294002 20μM预处理1h后加入维持培养基或ICSⅡ。分别在各观察时间点进行相应指标测定:噻唑蓝(MTT)法测定神经元细胞活力,微量酶标法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力,β-ⅢTubulin免疫荧光染色观察轴突网络形态学变化,并测量轴突变性指数(DI)及最长突起长度进行量化分析。结果:(1)与正常组比较,低氧条件下培养的SD大鼠皮层神经元折光性下降,胞体肿胀,轴突网络逐渐崩解,轴突断裂、缩短甚至消失。随着氧浓度的降低,轴突损伤逐渐加重。与正常组比较,15%氧浓度时轴突网络部分崩解,串珠形成,轴突断裂、缩短,细胞存活率及培养上清液中LDH活力无显着性改变(P>0.05,P>0.05);10%氧浓度时,24h、48h其轴突缩短明显而神经元存活率无明显变化(P<0.05,P>0.05);72h其轴突网络崩解,细胞存活率下降且培养上清液中LDH活力升高(P<0.05,P<0.05);5%氧浓度时轴突网络完全崩解、甚至消失,细胞存活率下降且培养液上清中LDH活力升高(P<0.05,P<0.05)。(2)在10%氧浓度培养72h,与10%低氧组比较,ICSⅡ(3μM)组未见明显的保护作用,中高ICSⅡ(6μM、9μM)组轴突明显延长,细胞存活率上升,但仍低于正常组。PI3K抑制剂预处理后,与10%低氧组比较,ICSⅡ各组轴突无明显改变(P>0.05)。结论:(1)低氧状态下,体外培养SD大鼠皮层神经元发生轴突损伤,随着缺氧时间延长及缺氧程度加重,逐渐出现胞体损伤,表明低氧条件下的轴突损伤早于细胞损伤。(2)在10%低氧条件ICSⅡ对轴突损伤有保护作用,这可能是通过激活PI3K信号通路发挥作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
轴突损伤论文参考文献
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标签：2-（α-羟基戊基）苯甲酸钾盐; APP; PS1转基因小鼠; 神经元; 突触;