导读:本文包含了干扰载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:内质网氧化还原酶1α,慢病毒载体,shRNA
干扰载体论文文献综述
陈风雷,胡佳慧,戴安娜,刘婉洋,屈玉杏[1]（2019）在《小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定》一文中研究指出针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10~7 TU/mL～10×10~7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显着抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%～90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
郭莉群,程艺,袁银莉,孔祥[2]（2019）在《小鼠NLRP3基因腺病毒干扰载体的构建及功能鉴定》一文中研究指出目的构建针对小鼠NLRP3基因的腺病毒干扰载体(Ad-NLRP3-shRNA),并在Min6和RAW264.7细胞中验证其基因沉默效率。方法针对小鼠NLRP3基因设计、合成3对NLRP3 shRNA 1-3干扰序列,重组至pHBAd-U6-CMV质粒载体。在HEK293T细胞内包装Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7细胞后,采用实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测NLRP3基因表达。结果 Ad-NLRP3-shRNA 1-3在Min6和RAW264.7细胞的干扰效率分别达到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。结论成功构建出Ad-NLRP3-shRNA载体,为研究NLRP3基因的功能提供有效工具。(本文来源于《右江民族医学院学报》期刊2019年05期）
卓严玲,颜秋,邓启霞,邓家华,吕其壮[3]（2019）在《猪热休克蛋白40(Hsp40)基因的克隆及过表达和RNA干扰载体的构建》一文中研究指出热休克蛋白(Hsp)是在各种生物体内广泛分布的一类具有高度保守性、短时性、多样性等特点的热应激蛋白质,参与细胞的多种生理生化活动。已有研究表明,Hsp40在多种病毒感染细胞的过程中发挥重要作用,但其对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的影响及机制尚不清楚。为了探究Hsp40在PCV2感染中的生物学功能,在克隆猪Hsp40基因CDS区全基因序列的基础上,采用双酶切位点法分别构建猪Hsp40基因的过表达载体和RNA干扰载体。该研究为猪Hsp40转基因细胞株的构建搭建好平台,同时也为挖掘猪Hsp40对PCV2感染的响应机制提供极大的便利。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年17期）
周梦琪,柴原,冯琬迪,马浩洁,盖聪[4]（2019）在《稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株构建》一文中研究指出目的构建稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株,为进一步探讨Drp1基因在帕金森病(PD)发病过程中的作用提供细胞模型。方法于Gen Bank中检索人Drp1基因的核苷酸序列,设计并筛选最佳动力学参数的干扰序列及阴性对照序列;根据靶序列分别设计并合成干扰RNA(siRNA)的单链DNA寡核苷酸(DNA oligo),与退火缓冲液反应后形成带黏性末端的双链DNA oligo片段。分别用AgeⅠ与EcoRⅠ双酶切双链DNA oligo片段和GV248慢病毒骨架质粒后,加入T4 DNA连接酶连接,得到重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi和阴性对照质粒。将重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi加入到大肠杆菌TOP10感受态细胞中反应后,分别提取质粒DNA并进行DNA测序。将重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi和阴性对照质粒转染至293T细胞中,培养48 h后收集上清液,离心后过滤得到Drp1-RNAi重组慢病毒和阴性对照慢病毒。将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y分为Drp1-RNAi重组慢病毒组(D组,用Drp1-RNAi重组慢病毒感染)、阴性对照组(N组,用阴性对照慢病毒感染)、正常对照组(C组,正常培养),采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞Drp1 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞Drp1蛋白。结果重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi的DNA序列与设计的干扰序列完全一致。D组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为0.47±0.12和0.40±0.04,N组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为1.12±0.33和0.67±0.05,C组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为1.02±0.23和0.72±0.02;D组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量与N组、C组相比,P均<0.05;N组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量与C组相比,P均>0.05。结论成功构建了稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒,并建立、筛选出了稳定干扰Drp1基因的神经母细胞瘤细胞株,进一步探讨Drp1基因在PD发病过程中的作用提供细胞模型。(本文来源于《山东医药》期刊2019年24期）
赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮[5]（2019）在《一种具有G418抗性筛选标记的慢病毒RNA干扰表达载体的构建及应用》一文中研究指出目的:构建具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,并检测它对乙型肝炎病毒x基因(HBx mRNA表达的抑制作用。方法:从pcDNA3.0载体中扩增新霉素抗性基因并插入删除嘌呤霉素编码序列的pLKO载体中;将改构的RNA干扰载体包装成慢病毒后感染肝癌细胞HepG2,并检测感染细胞对G418的抵抗作用;为验证改构RNA干扰载体的有效性,设计了2条针对HBx的RNA干扰序列以及针对编码萤光素酶cDNA的干扰序列并插入该载体,将含新霉素筛选标记的HBx的RNA干扰载体与辅助质粒在293T细胞中包装成慢病毒并感染过表达HBx的HepG2(嘌呤霉素抗性)细胞,运用G418筛选出稳定混合克隆,提取细胞总RNA,运用RT-qPCR检测其在HepG2细胞中对HBx RNA表达的抑制作用。结果:构建的载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,细胞获得G418抗性;HBx RNA干扰序列克隆入该载体可有效抑制肝癌细胞中过量表达的HBx mRNA。结论:构建了具有新霉素抗性筛选标记的RNA干扰慢病毒表达载体,运用该载体可有效筛选出抑制目的基因表达的G418抗性的稳定细胞株。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年04期）
梁春梅,许旭叁,余华军,周霞,温霞[6]（2019）在《含心脏阿霉素反应蛋白基因的重组慢病毒过表达和RNA干扰载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建心脏阿霉素反应蛋白(CARP)基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步包装慢病毒,为研究CARP在阿霉素(ADR)心肌病中的作用及机制奠定基础。方法:将PCR扩增的大鼠CARP基因序列和设计合成的短发夹RNA (shRNA)序列分别插入GV-358和GV-248表达载体,行DNA测序鉴定。采用重组CARP过表达和shRNA表达穿梭载体与Helper 1.0和Helper 2.0辅助包装质粒共转染人胚肾细胞HEK293T,进行病毒包装和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。采用重组慢病毒感染HEK293T细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度。采用重组慢病毒感染H9C2细胞,分为对照组、Scramble RNA组、CARP过表达组和shRNA CARP组,Western blotting法检测各组细胞中CARP蛋白表达水平。结果:基因测序,CARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符。载体转染HEK293T细胞后,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。包装的CARP过表达及shRNA病毒感染H9C2细胞后,与对照组比较,CARP过表达组细胞中CARP蛋白表达水平升高5.3倍(P=0.01),shRNA CARP组细胞中CARP蛋白表达水平降低53%(P=0.02)。结论:成功构建了CARP过表达和特异性shRNA慢病毒表达载体并获得高感染效率的过表达和RNA干扰慢病毒,后者在H9C2细胞中能够干预CARP表达。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
王美玲,吴巧玲,张喜春[7]（2019）在《番茄再生体系优化以及ProDH干扰载体的遗传转化》一文中研究指出为了进一步对番茄再生体系进行优化,筛出最优体系,同时将ProDH干扰表达载体遗传转化,抗生素筛选获得再生植株。以‘耐运2000'和‘O-33-1'番茄品种的下胚轴和子叶为试验材料,以MS为基本培养基,分别加入1.0、2.0、3.0 mg/L的6-BA和0.1、0.2、0.3 mg/L的IAA,筛选合适的浓度组合。结果表明:最适的愈伤培养基为MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA,最适分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA,最适生根培养基为MS+0.2 mg/L IAA;最适培养基浓度下,子叶的出愈率、分化率和生根率较下胚轴分别高25%、42%和20%,所以外植体选择子叶为宜。而在2个品种间也有差异,‘O-33-1'总体比‘耐运2000'再生率高。利用筛选出的最优再生体系,将脯氨酸脱氢酶的干扰表达载体对‘O-33-1'遗传转化,获得抗性植株。(本文来源于《中国农学通报》期刊2019年21期）
宋景春,徐瑾,刘慧强,曾庆波,钟林翠[8]（2019）在《TERT过表达及RNA干扰慢病毒载体对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖影响》一文中研究指出目的探讨端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)过表达及RNA干扰慢病毒载体对缺氧肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响。方法分别构建Plvx-IRES-ZsGreen1-TERT过表达载体和Plvx-shRNA2-TERT干扰载体,培养PASMCs后分为正常对照组、缺氧对照组、空白载体组、TERT过表达组和TERT干扰组,采用CCK-8法进行细胞增殖能力检测,采用流式细胞仪法进行细胞凋亡和细胞周期检测。结果 Plvx-IRES-ZsGreen1-TERT过表达载体和Plvx-shRNA2-TERT干扰载体构建成功后均经测序验证序列正确。缺氧对照组在24 h和48 h时吸光度值较正常对照组明显增加,低氧48 h时G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显升高,细胞凋亡比例减少(P<0.05);TERT过表达组在低氧24 h和48 h时的吸光度值较缺氧对照组明显升高,低氧48 h时G1期细胞比例较缺氧对照组明显减少,S期细胞比例明显升高(P<0.05);TERT干扰组在低氧24 h和48 h时的吸光度值较缺氧对照组明显减少,低氧48 h时G1期细胞比例较缺氧对照组明显升高,S期细胞比例明显下降,细胞凋亡比率明显升高(P<0.05)。结论低氧时TERT RNA干扰能促进细胞凋亡,减少PASMCs核酸合成,从而抑制PASMCs增殖。(本文来源于《心脏杂志》期刊2019年04期）
张慧娟,胡蓉,江丽霞[9]（2019）在《K562白血病细胞中Musashi2干扰慢病毒载体的构建和鉴定》一文中研究指出目的:构建干扰Musashi 2 (Msi2)的慢病毒载体,并探究其在K562白血病细胞株中的干扰效率。方法:将两个Msi2干扰片段分别连接入GV418慢病毒载体,与pHelper1. 0、pHelper2. 0辅助载体共转染入293T细胞进行慢病毒包装。提取细胞上清感染白血病K562细胞,并用嘌呤霉素药物稳筛,获取稳定感染细胞株。定量PCR和western blot分别检测K562细胞内Msi2的干扰效率。结果:与对照组比较,干扰组shMsi2-1和shMsi2-2的Msi2 mRNA水平分别降为3%和28%(P <0. 05);与对照组相比,优选出的shMsi2-1组中Msi2蛋白水平也显着下降(P <0. 05)。结论:成功构建Msi2干扰慢病毒载体并显着沉默白血病K562细胞中Msi2的表达,为后续研究Msi2在白血病中的功能和机制奠定实验基础。(本文来源于《赣南医学院学报》期刊2019年05期）
刘芳,柳玉红,李晓鸣,邹桂华,周来勇[10]（2019）在《SLUG基因可调控性干扰载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达》一文中研究指出目的探讨鼻咽癌细胞中基因表达,构建可调控性相关基因干扰载体,并验证其干扰作用。方法将高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞进行培养,实时荧光定量RT-PCR检测5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG、CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因的表达水平。应用酶切、连接技术构建pSUPERIOR-SLUG干扰载体,采用脂质体转染方法转染5-8F-H3细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效果。结果5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG基因表达水平均明显高于CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因(均P<0.05),相对倍数分别为(11.23±1.78)倍、(1.23±0.17)倍、(1.57±0.27)倍、(6.36±0.38)倍、(3.66±1.14)倍,以SLUG基因倍数最高。所构建的pSUPERIOR-SLUG重组质粒,经酶切鉴定及序列分析证实为所需的目标序列,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞。阳性克隆S2-18基因表达水平高于阳性克隆S1-7、S1-9、S2-22基因(P<0.05),干扰率分别为67.42%、72.45%、84.20%、75.61%。结论 SLUG基因在鼻咽癌5-8F-H3中高表达。成功构建了重组质粒——pSUPERIOR-SLUG,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞,为后续进一步研究SLUG在鼻咽癌的作用奠定了基础。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2019年03期）
干扰载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建针对小鼠NLRP3基因的腺病毒干扰载体(Ad-NLRP3-shRNA),并在Min6和RAW264.7细胞中验证其基因沉默效率。方法针对小鼠NLRP3基因设计、合成3对NLRP3 shRNA 1-3干扰序列,重组至pHBAd-U6-CMV质粒载体。在HEK293T细胞内包装Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7细胞后,采用实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测NLRP3基因表达。结果 Ad-NLRP3-shRNA 1-3在Min6和RAW264.7细胞的干扰效率分别达到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。结论成功构建出Ad-NLRP3-shRNA载体,为研究NLRP3基因的功能提供有效工具。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
干扰载体论文参考文献
[1].陈风雷,胡佳慧,戴安娜,刘婉洋,屈玉杏.小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定[J].动物医学进展.2019
[2].郭莉群,程艺,袁银莉,孔祥.小鼠NLRP3基因腺病毒干扰载体的构建及功能鉴定[J].右江民族医学院学报.2019
[3].卓严玲,颜秋,邓启霞,邓家华,吕其壮.猪热休克蛋白40(Hsp40)基因的克隆及过表达和RNA干扰载体的构建[J].江苏农业科学.2019
[4].周梦琪,柴原,冯琬迪,马浩洁,盖聪.稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株构建[J].山东医药.2019
[5].赵思捷,朱文琦,孙杰,侯俊,王友亮.一种具有G418抗性筛选标记的慢病毒RNA干扰表达载体的构建及应用[J].生物技术通讯.2019
[6].梁春梅,许旭叁,余华军,周霞,温霞.含心脏阿霉素反应蛋白基因的重组慢病毒过表达和RNA干扰载体的构建及鉴定[J].吉林大学学报(医学版).2019
[7].王美玲,吴巧玲,张喜春.番茄再生体系优化以及ProDH干扰载体的遗传转化[J].中国农学通报.2019
[8].宋景春,徐瑾,刘慧强,曾庆波,钟林翠.TERT过表达及RNA干扰慢病毒载体对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖影响[J].心脏杂志.2019
[9].张慧娟,胡蓉,江丽霞.K562白血病细胞中Musashi2干扰慢病毒载体的构建和鉴定[J].赣南医学院学报.2019
[10].刘芳,柳玉红,李晓鸣,邹桂华,周来勇.SLUG基因可调控性干扰载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达[J].南昌大学学报(医学版).2019
标签：内质网氧化还原酶1α; 慢病毒载体; shRNA;