刘鸿雁1，2岳保红1（通讯作者）
1.郑州大学基础医学院河南郑州450000；2.河南省人民医院输血科河南郑州450003
【摘要】目的探究血小板输注无效的患者抗-HLA及HLA的表达关系。方法选取2013年4月-2015年4月收治的需要进行血小板输注且无效的患者130例，对患者的HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型；用抗-HLA特异性检测试剂盒对PRA表达阳性的患者进行抗-HLA特异性分析。结果在130例患者中HLA-A抗原的基因频率从高到低依次为A*02、A*11、A*24、A*33；HLA-B抗原基因频率表达从高到低依次为B*46、，B*13、B*38。抗-HLA单独表达阳性的有82例，抗-HLA特异性分析，HLA-A特异性抗体中所占比例由高到低依次为抗-A9、抗-A2、抗-A19，HLA-B特异性抗体中，抗-B40比例高于抗-B7。结论在血小板输注无效中抗-HLA占主要地位，血液输注无效与患者的HLA-A、B抗原及其抗体有较大的关系，探讨它们之间的关系可为血小板的输注提供参考依据。
【关键词】血小板输注；抗-HLA；表达；相关性
血小板在临床中发挥着重要的作用，用来预防和治疗血小板减少和血小板功能减退引发的出血问题，是支持疗法中的不可缺少的。而在具体的输注中，由于患者多方面的原因，常会对血小板产生相关的抗体作用，导致血小板输注无效（PTR），而血小板输注无效大多数与抗-HLA的产生有重要关系，临床上接受随机血小板输注的患者，尤其是多次输注大剂量浓缩血小板和/或单采血小板后，其血液内Plt增高值明显低于临床预期，甚至部分患者的出血倾向又重复出现，致使临床对患者的治疗出现困难，目前没有特异性的解决方法，是临床输血面临的最棘手问题之一，目前我国部分地区相应建立了献血者HLA/HPA基因库，以助于PTR患者寻找相合的血小板供者。为了探究血小板输注无效患者抗-HLA及HLA的表达，现选取130例患者进行详细的分析，总结如下：
1研究对象与方法
1.1研究对象将2013年4月-2015年4月进行血小板输注无效的患者作为本次的研究对象，其中包括男性患者70例，女性患者60例，患者的平均年龄为42岁。在所有患者中血小板输注后Plt下降或者不上升的患者，采用校正血小板计数增值（CCI）和血小板回收率作为判别依据，当输注后1hCCI＜7.5和24hCCI＜4.5或1h回收率＜30%和24h回收率＜20%，同时排除非免疫相关因素的影响，判断为血小板输注无效。疾病分布：血液系统疾病100例，其他疾病30例。所有患者均不是首次输血。
1.2标本收集及检测所有患者均抽取静脉血，以3ml为宜，并分别放于ACD抗凝试管及干燥试管中，等待检测。标本进行检测后则将其置于-20℃保存。
1.3HLA抗原检测PCR-SSO-HLA-Ⅰ类基因检测试剂盒（美国ONELAMBDA公司），DNA提取试剂盒（德国QIAGEN公司），Taq酶（美国Promega公司）。具体操作规程参照试剂厂商提供的说明书，以上试剂均为中国药品生物鉴定所批检合格产品。
1.4抗-HLA检测检测试剂盒（美国ONELAMBDA公司，批号：LAT1240），具体操作规程参照试剂厂商提供的说明书。应用酶标仪在630nm处读取各孔吸光度，当测定孔吸光度≥阴性孔读数的2倍即判为阳性结果，然后根据每孔已知的抗原特异性，判断抗-HLA的特异性。
2结果
2.1HLA-Ⅰ类抗原基因及频率分析患者HLA-A抗原的基因频率表达由高到低依次为A*02（0.319），A*11（0.260），A*24（0.087），A*33（0.072）；HLA-B抗原基因频率表达由高到低依次为B*46（0.172），B*13（0.090），B*38（0.069）。
2.2患者抗-HLA的特异性分析130名患者中有82例呈现群体反应性抗体（PRA）阳性。利用Onelambda1240板对82名PRA阳性的患者进行抗-HLA特
异性分析。HLA-A特异性抗体中所占比例由高到低依次为抗-A9、抗-A2、抗-A19；HLA-B特异性抗体中所占比例由高到低依次为抗-B40、抗-B7。
3讨论
血小板输注是临床中重要的支持疗法，在实际为患者的输注中，尤其是多次输注全血、红细胞、白细胞、血小板后患者会出现无效。而探究血小板输注无效的相关因素是非常重要的[1]。有研究显示，血小板输注无效与抗-HLA的产生有重要关系，由于HLA的分布具有遗传性和地域性的特点，而且HLA基因频率在不同种族、不同地域中的分布有明显差别。研究不同地区、不同遗传背景的患者HLA的基因多态性，抗-HLA的分布特异性，不仅对群体遗传学的研究提供重要数据，而且对于临床输血实践，解决PTR具有重要意义HLA位于人类第6号染色体短臂6p21.3区域，具有高度的遗传多态性，不同地域和种族多态性差异较大。我们用ELISA方法对130名确诊为PTR的患者进行血清血小板相关抗体检测，结果显示有82例表达HLA特异性抗体，与文献报道结果相符合。对抗-HLA特异性进行分析，发现抗-A9出现频率较大，其次是抗-B40、抗-A19、抗-A2、抗-B7。由于抗-HLA分布的特异性与HLA-A、B抗原频率密切相关，并有一定的区域、种族特性，与免疫性血小板输注无效的发生具有一定相关性。临床输血过程是1个复杂的过程，输血医学是临床医师需要密切关注的学科，如何依据患者的病情和实验室数据进行血小板输注无效的科学诊断是解决血小板输注无效的基础，进而采取相对应的措施防治血小板输注无效。
综上所述，在为患者输注血小板时应考虑到HLA、HPA，以和患者的血型相匹配。探讨血小板输注无效与抗HLA及HLA间的表达关系十分重要[2]，以为患者选择出可使用的血小板，从而满足输注需要。
参考文献：
[1]贺雪花，张强.血小板输注无效原因分析及解决方案探讨[J].中国药物与临床，2015（08）.
[2]刘景兰，杨秀丽.血小板输注无效患者HLA及抗-HLA表达[J].临床研究，2012（09）.