任建航滕俊唐维黄瑞平（通讯作者）（浙江台州市中心医院318000）
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）28-0104-03
【摘要】目的考察干热对何首乌饮片与配方颗粒中二苯乙烯苷的含量的影响。方法用高效液相色谱仪测定经各种温度下烘烤后的何首乌饮片与配方颗粒中二苯乙烯苷的含量。结果检测方法可靠、简便、灵敏。结论何首乌饮片与配方颗粒中二苯乙烯苷的热稳定性良好。
【关键词】何首乌二苯乙烯苷稳定性
何首乌,为蓼科植物何首乌(PolygonummultiflorumThunb)的干燥块根。何首乌具有增强免疫，抗氧化作用，延缓大脑衰老，提高DNA修复功能，降低胆固醇，改善脂肪代谢等多项功能。何首乌的主要成分有羟基蒽醌类化合物(主要为大黄素、大黄氛、大黄酸等葡萄糖苷,均为二苯代乙烯化合物)，醌类化合物，二苯乙烯苷类化合物等[1]。
二苯乙烯苷是何首乌中特有的生物活性成分，它具有良好的水溶性,同时具有抗氧化清除自由基的功能[2]。,二苯乙烯苷是何首乌药效发挥的主要成分。何首乌在加工炮制、有效成分提取过程中二苯乙烯苷的含量变化规律已有很多相关报道[3]，但何首乌饮片与配方颗粒的热稳定性方面研究尚未见到有关报道。本文通过对首乌饮片与配方颗粒中二苯乙烯苷在不同温度下的含量变化来考察其稳定性。
1仪器与试剂
1.1仪器
Agilent1100型高效液相色谱仪（四元泵、自外检测器及配套色谱工作站）。
1.2试剂
水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯；稀乙醇为分析纯（取无水乙醇529ml，加水稀释至1000ml，在20℃时含C2H5OH为49.5%-50.5%ml/ml），标准品二苯乙烯苷标准品购自中国药品生物制品检定所（110844-200404）。
何首乌饮片（批号：100707）经台州市中心医院药剂科鉴定为寥科植物何首乌。何首乌配方颗粒由天江制药公司生产（批号：1004804）。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性实验
色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18(4.6×250mm,5μm)；检测波长：320nm；流动相：乙睛-水（20：80）；流速：1.0ml/min；柱温：20℃；进样量：10μl。理论塔板数按二苯乙烯苷峰计算应不低于2000，与其他组分能达到较好的分离。
2.2对照品溶液的制备
精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品10mg，置50ml棕色容量瓶中加稀乙醇定容至刻度，摇匀，制成每1ml含0.2mg的溶液，即得浓度为200μg/ml的二苯乙烯苷对照品溶液，冰箱内保存，备用。
2.3供试品溶液的制备
取何首乌饮片与何首乌配方颗粒适量，分别在110℃，100℃，90℃，80℃，70℃，60℃，50℃，恒温烘0hr，6hr，7hr，8hr，9hr，10hr，11hr，12hr，取出何首乌饮片与何首乌配方颗粒，捣成粉末，过四号筛，再分别精密称取0.2g，置圆底烧瓶中,精密加入稀乙醇25ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过,取续滤液即得。
2.4线形关系考察
精密称取称取二苯乙烯苷20mg置50ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，制成每1ml含有0.4mg的对照品储备液，再分别精密吸取对照品储备液1ml，3ml,5ml，,7ml，9ml置10ml容量瓶中，分别稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以二苯乙烯苷质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为：Y=37526x-235.29（r=0.9997）。结果表明二苯乙烯苷在40-360μg/ml范围与峰面积的线形关系良好。结果见表2-1及图2-1。
表2-1线形关系测定结果
图2-1线性关系图
2.5稳定性试验
分别精密吸取室温下放置同一供试品溶液10μl，在0，0.5，1，1.5，2，4，8h分别进样，测定起二苯乙烯苷峰面积，结果RSD=0.27%(n=7)，表明供试品溶液室温放置，至少在8h内稳定性良好。
2.6精密度试验
精密吸取对照品溶液10μl，按“2.1”项下色谱条件，连续进样5次，其峰面积RSD=0.06%（n=5）。表明本法精密度良好。
2.7重复性试验
按“2.3”项下制备方法平行配制同一批供试品溶液5份，分别进样测定二苯乙烯苷的含量，结果RSD=0.38%（n=5）。结果表明本法重复性良好。
2.8加样回收率试验
取已知含量的的供试品约0.2g（含量：mg/g）×5份，精密称定，分别精密加入二苯乙烯苷对照品溶液（mg/ml）1ml，按“2.3”项下方法制备同法操作，测定二苯乙烯苷的含量，结果见表2-2。
表2-2二苯乙烯苷回收率测定结果（n=5）
2.9样品测定
取不同温度下何首乌饮片与何首乌配方颗粒细粉，按“2.3”项下方法制成供试品溶液，按上述条件和方法测定含量，按外标（峰面积法）计算，结果见表2-3。
表2-3不同温度下何首乌饮片与何首乌配方颗粒中二苯乙烯苷含量
实验表明，二苯乙烯苷在干热的情况下非常稳定，甚至在110℃的高温下烘烤6hr，其含量没有降低的迹象。见图2-3.
图2-3不同温度下何首乌饮片与何首乌配方颗粒中二苯乙烯苷含量
3讨论
从实验的结果看，何首乌饮片与配方颗粒中的二苯乙烯苷十分稳定。
二苯乙烯苷为白色无定形粉末,易溶于水、甲醇、乙醇,分子量为406.39。从苷元的结构分析可知，在苯环的二、三位有两个邻位酚羟基，邻位酚羟基易于脱氢，自身之间可形成稳定的氢键，二苯乙烯苷以糖苷的形式存在，提高了其稳定性。但是糖苷在酸、酶等作用下极易水解[2]。
据报道生品中二苯乙烯苷的含量最高，而蒸煮后的炮制品中二苯乙烯苷的含量随着炮制时间的增加而逐渐减少。将何首乌制成口服液在灭菌前后,二苯乙烯苷的含量大约相差15%左右。制剂稳定性加速试验3个月，结果含量和PH值均出现一定程度的降低[3，4]。
何首乌配方颗粒中二苯乙烯苷的含量明显低于饮片，说明用水提取、浓缩、干燥过程中二苯乙烯苷损失严重。二苯乙烯苷的的主要降解方式是水解反应，在何首乌饮片的加工炮制，二苯乙烯苷提取浓缩、干燥等操作过程中减少与水分的接触时间，控制PH值，降低操作温度等可以减少二苯乙烯苷的水解破坏。另外，应避免将含有何首乌的中成药做成水溶液型的制剂。
参考文献
［1］张志国,吕泰省,姚庆强.何首乌的研究进展［J］.解放军药学学报,2008,24（1）：62.
［2］徐杰,周文聪,张媛英.何首乌活性成分-二苯乙烯苷的研究进展［J］.泰山医学院学报,2008,29(1):78-80.
［3］宋海新,梁建强,王传斌等.何首乌中二苯乙烯苷成分的研究［J］.中医学报,2009,24(6):41-43.
［4］周庆华,张蕾,吕鑫等.何首乌炮制前后二苯乙烯苷含量测定［J］.中医药信息,2009,26(1):30-31.