本文主要研究内容
作者李莎莎,贺虹,崔冠一,欧丽娜,邓博,王梅林（2019）在《人Smurf1基因真核表达质粒的构建和表达》一文中研究指出：[目的]构建人Smurf1基因的真核表达载体并检测其表达和细胞亚定位。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增Smurf1基因的ORF序列,将其插入到带Flag标签的p CMV5真核表达载体,插入位点为限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间。酶切并测序鉴定该质粒的正确性。将成功构建的质粒Flag-Smurf1转染HEK-293T细胞和Hela细胞,Western Blotting检测Smurf1蛋白的表达情况;转染Mv. 1. Lu细胞,免疫荧光检测Smurf1蛋白在细胞中的亚定位。[结果]成功扩增出Smurf1基因的ORF序列;连入p CMV5中获得了质粒Flag-Smurf1;酶切鉴定得到2. 2 kb大小的片段,测序结果显示连入的是Smurf1基因的c DNA序列正确。Western Blotting结果显示该质粒可在HEK-293T细胞和Hela细胞中表达,表达大小约为80 k Da,符合预期。免疫荧光实验结果显示过表达的Smurf1主要定位在细胞膜上。[结论]成功构建了带Flag标签的人Smurf1基因的真核表达质粒,该质粒可在细胞中顺利表达。
Abstract
[mu de ]gou jian ren Smurf1ji yin de zhen he biao da zai ti bing jian ce ji biao da he xi bao ya ding wei 。[fang fa ]PCRfa cong ren pei shen xi bao HEK-293Tzhong kuo zeng Smurf1ji yin de ORFxu lie ,jiang ji cha ru dao dai Flagbiao qian de p CMV5zhen he biao da zai ti ,cha ru wei dian wei xian zhi xing nei qie mei SalⅠhe XbaⅠzhi jian 。mei qie bing ce xu jian ding gai zhi li de zheng que xing 。jiang cheng gong gou jian de zhi li Flag-Smurf1zhuai ran HEK-293Txi bao he Helaxi bao ,Western Blottingjian ce Smurf1dan bai de biao da qing kuang ;zhuai ran Mv. 1. Luxi bao ,mian yi ying guang jian ce Smurf1dan bai zai xi bao zhong de ya ding wei 。[jie guo ]cheng gong kuo zeng chu Smurf1ji yin de ORFxu lie ;lian ru p CMV5zhong huo de le zhi li Flag-Smurf1;mei qie jian ding de dao 2. 2 kbda xiao de pian duan ,ce xu jie guo xian shi lian ru de shi Smurf1ji yin de c DNAxu lie zheng que 。Western Blottingjie guo xian shi gai zhi li ke zai HEK-293Txi bao he Helaxi bao zhong biao da ,biao da da xiao yao wei 80 k Da,fu ge yu ji 。mian yi ying guang shi yan jie guo xian shi guo biao da de Smurf1zhu yao ding wei zai xi bao mo shang 。[jie lun ]cheng gong gou jian le dai Flagbiao qian de ren Smurf1ji yin de zhen he biao da zhi li ,gai zhi li ke zai xi bao zhong shun li biao da 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物技术的李莎莎,贺虹,崔冠一,欧丽娜,邓博,王梅林，发表于刊物生物技术2019年03期论文，是一篇关于分子克隆论文,转染论文,免疫荧光论文,生物技术2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物技术2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：分子克隆论文; 转染论文; 免疫荧光论文; 生物技术2019年03期论文;