导读:本文包含了干扰质粒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Drp1基因,RNA干扰,慢病毒载体质粒,神经母细胞瘤细胞株
干扰质粒论文文献综述
周梦琪,柴原,冯琬迪,马浩洁,盖聪[1]（2019）在《稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株构建》一文中研究指出目的构建稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株,为进一步探讨Drp1基因在帕金森病(PD)发病过程中的作用提供细胞模型。方法于Gen Bank中检索人Drp1基因的核苷酸序列,设计并筛选最佳动力学参数的干扰序列及阴性对照序列;根据靶序列分别设计并合成干扰RNA(siRNA)的单链DNA寡核苷酸(DNA oligo),与退火缓冲液反应后形成带黏性末端的双链DNA oligo片段。分别用AgeⅠ与EcoRⅠ双酶切双链DNA oligo片段和GV248慢病毒骨架质粒后,加入T4 DNA连接酶连接,得到重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi和阴性对照质粒。将重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi加入到大肠杆菌TOP10感受态细胞中反应后,分别提取质粒DNA并进行DNA测序。将重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi和阴性对照质粒转染至293T细胞中,培养48 h后收集上清液,离心后过滤得到Drp1-RNAi重组慢病毒和阴性对照慢病毒。将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y分为Drp1-RNAi重组慢病毒组(D组,用Drp1-RNAi重组慢病毒感染)、阴性对照组(N组,用阴性对照慢病毒感染)、正常对照组(C组,正常培养),采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞Drp1 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞Drp1蛋白。结果重组慢病毒载体质粒Drp1-RNAi的DNA序列与设计的干扰序列完全一致。D组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为0.47±0.12和0.40±0.04,N组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为1.12±0.33和0.67±0.05,C组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量为1.02±0.23和0.72±0.02;D组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量与N组、C组相比,P均<0.05;N组Drp1 mRNA和蛋白的相对表达量与C组相比,P均>0.05。结论成功构建了稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒,并建立、筛选出了稳定干扰Drp1基因的神经母细胞瘤细胞株,进一步探讨Drp1基因在PD发病过程中的作用提供细胞模型。(本文来源于《山东医药》期刊2019年24期）
邵晓婷,王凯旋[2]（2019）在《波形蛋白干扰质粒shRNA Vim的构建及鉴定》一文中研究指出目的以波形蛋白基因为靶基因,构建波形蛋白干扰质粒shRNA Vim并验证其干扰效果。方法根据GenBank中大鼠波形蛋白的mRNA序列设计shRNA序列,插入至pSilencer 4.1载体,构建重组质粒,转化到Top 10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆并进行测序分析。结果 DNA测序分析显示干扰质粒shRNA Vim构建成功,免疫印迹法显示该干扰质粒能有效地抑制波形蛋白的表达(P<0.001)。结论成功构建波形蛋白干扰质粒shRNA Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础。(本文来源于《黑龙江医学》期刊2019年08期）
王晓娟,张洁,杨惠,刘淑英[3]（2019）在《靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定》一文中研究指出所有哺乳动物的胎盘都是由胚胎滋养层细胞和母体的子宫内膜细胞构成的。从解剖形态上来说,羊为子叶型胎盘。大量研究发现,en JSRV囊膜蛋白(Env)在绵羊绒毛膜滋养层细胞及生殖道上皮(子宫内膜上皮,子宫颈上皮,阴道上皮等)均有表达。而且目前众多学者提出假说认为,绵羊滋养外胚层细胞与子宫内膜上皮细胞在en JSRV囊膜蛋白(Env)及其受体透明质酸酶2(Hyaluronidases 2,Hyal 2)的相互作用下融合形成多核合胞体,最终形成胎盘的子叶。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
王晓娟,刘淑英[4]（2019）在《绵羊绒毛膜滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞最佳共培养体系的建立及enJSRV-env干扰质粒基因沉默效果的测定》一文中研究指出绵羊基因组中含有至少27个拷贝与外源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(Jaagsiektesheep retrovirus,JSRV)相关的内源性逆转录病毒,这些内源性逆转录病毒与其对应的外源性逆转录病毒高度相关,故称其为内源性绵羊肺腺瘤病毒(Endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,en JSRVs)。大量研究发现,en JSRV囊膜蛋白(Env)在绵羊绒毛膜滋养层细胞及生殖道上皮(子宫内膜上皮,子宫颈上皮,阴道上皮等)均有表达。而且目前众多学者提出假说认为,绵羊滋养外胚层细胞与子宫内膜上皮细胞在en JSRV囊膜蛋白(Env)及其受体透明质酸酶2(Hyaluronidases 2,Hyal 2)的相互作用下融合形成多核合胞体,最终形成胎盘的子叶。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
贺欣薇,郑敏,胡安东,杨颖,周碧君[5]（2019）在《NF-κB1基因干扰质粒的构建及其对DEV增殖的影响》一文中研究指出[目的]探究NF-κB对DEV增殖是否有影响。[方法]以NF-κB1基因作为靶基因,设计并构建4个不同p GPU6/GFP/Neo shRNA表达载体,通过荧光显微镜法观察转染后细胞荧光密度和RT-PCR检测转染细胞NF-κB1基因转录水平以筛选最佳干扰质粒,分3种不同组别进行干扰实验后,以荧光定量PCR法检测DEV-NP基因表达变化。[结果]所构建的重组质粒p GPU6/GFP/Neo-NF-κB1-2对细胞NF-κB1基因的干扰效率最高,可达78. 77%;除先感染后干扰组对DEV增殖影响不大外,先干扰后感染组与同时感染和干扰组均对DEV增殖呈现出一定的抑制作用,其中先干扰后感染组在第72 h时的沉默效率最高,可达78%,而同时感染和干扰组于第48 h时的沉默效率最高,可达82%。[结论]RNA干扰下调NF-κB1基因会抑制DEV增殖。(本文来源于《生物技术》期刊2019年02期）
曲雪菲,华佳,吴进,龚爱华,蒋鹏[6]（2019）在《ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定》一文中研究指出目的:构建酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channels 3,ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定。方法:利用Gen Bank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko. 1-Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3-shRNA组和EGFP-shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达。结果:合成的ASIC3干扰序列成功连接至Plko. 1-Puro载体; qRT-PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3-shRNA质粒构建成功; qRT-PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP-shRNA组相比,ASIC3-shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P <0. 05)。病毒滴度约为1×109IU/mL。结论:ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒构建成功。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2019年01期）
罗云,罗钰辉,刘孝东,崔庆鹏[7]（2018）在《大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒,为进一步探究RNA干扰技术对CaSR在肾脏对钙重吸收调控中的作用提供基础准备。方法(1)CaSR基因慢病毒高表达细胞系构建:PCR克隆CaSR目的基因,双酶切CaSR基因和pcDNA3.1载体,连接酶连接,阳性克隆筛选后测序,将pcDNA3.1-CaSR高表达载体和空载体(对照组)经慢病毒包装后转染NRK-52E细胞,Western blot测定CaSR蛋白表达;(2)CaSR基因的RNA干扰质粒构建:设计3对靶向干扰CaSR基因的RNA引物序列,双酶切干扰引物和pLV[shRNA]-EGFP载体,然后经T4连接酶连接,获得重组干扰质粒pLV[shRNA]-EGFP-CaSR,转化至感受态E.coli DH5,阳性克隆筛选后测序,测定干扰效率。结果(1)测序结果与CaSR基因序列一致;(2)测序结果与设计shRNA引物序列一致;(3)Western blot检测获得慢病毒高表达稳定细胞系的CaSR蛋白;(4)干扰质粒干扰高表达细胞系有效。结论成功构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2018年10期）
李坚,周凯,王俊,袁喜红[8]（2017）在《CIP2A靶向干扰质粒对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响》一文中研究指出目的用RNA干扰技术沉默人乳腺癌MCF-7细胞中CIP2A基因的表达,观察细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。方法检测人乳腺癌MCF-7细胞中CIP2A表达水平;将4种不同序列的CIP2A shRNA质粒以及含与CIP2A无关序列的CIP2A shRNA NC分别转染MCF-7细胞,48h后q PCR检测其CIP2A表达水平,筛选CIP2A基因沉默效果最好的shRNA质粒干预MCF-7细胞;通过MTT检测shRNA干扰质粒对MCF-7细胞增殖能力的影响,划痕实验检测其对MCF-7细胞迁移能力的影响、Transwell体外侵袭实验检测沉默CIP2A基因对MCF-7细胞侵袭能力的影响。结果 q PCR检测MCF-7细胞阳性表达CIP2A基因,用lipofiter成功将不同CIP2A shRNA质粒转染入MCF-7细胞;q PCR检测发现CIP2A shRNA2质粒沉默MCF-7细胞CIP2A表达效果最显着,随后用CIP2A shRNA2质粒干扰MCF-7细胞,MTT检测显示转染CIP2A shRNA2质粒组MCF-7细胞增殖能力小于空白对照组;转染CIP2A shRNA2干扰质粒的MCF-7细胞迁移能力和侵袭能力较空白对照组低。结论 CIP2A shRNA质粒能明显降低人乳腺癌MCF-7细胞内的CIP2A基因表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。(本文来源于《江西医药》期刊2017年11期）
于洋,索勇[9]（2017）在《雌激素受体β干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响及ERK1/2信号通路的作用》一文中研究指出目的探讨雌激素受体β(ERβ)干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响,以及ERK1/2信号通路在其中的作用。方法针对ERβ特定靶定位置,构建干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ(sh ERβ),利用Lipofectemine2000作为载体将sh ERβ转染PC3细胞,采用G418筛选稳定低表达ERβ的PC3细胞。Real-time PCR及Western blot检测ERβ的表达。实验分为空白对照组、阴性对照组、sh ERβ组,将3组细胞注射在裸鼠皮下建立移植瘤模型,空白对照组未加入任何处理因素;阴性对照组转染空质粒psilencer-2.1-U6-neo;sh ERβ组转染重组质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ。绘制肿瘤生长曲线和称取瘤重;应用免疫组织化学检测肿瘤组织ERβ的表达及ERK1/2活化;应用Western blot检测肿瘤组织VEGF的表达。结果测序比对分析表明成功完成了干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-sh ERβ的构建,Real-time PCR及Western blot结果显示成功转染并筛选出稳定低表达ERβ的PC3细胞。体内成功建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型,移植瘤生长曲线显示sh ERβ组移植瘤生长速度明显快于其他两组。免疫组化结果显示ERβ阳性表达sh ERβ组最低;ERK1/2阳性表达在3组之间无明显差异,p-ERK1/2阳性表达sh ERβ组最高(P<0.05)。Western blot结果显示sh ERβ组VEGF蛋白表达明显高于其他两组(P<0.05)。结论 ERβ可通过抑制ERK1/2信号通路活化来抑制前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为。(本文来源于《广东医学》期刊2017年18期）
杨梅,陈诺琦,郑舒静,陈锦凤[10]（2017）在《小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响。方法采用RT-PCR和Western blot分别测Ma。fA mRNA和蛋白的表达,筛选最佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性对照组(siβ-actin组)及实验组(即siMafA-1、siMafA-2和siMafA-3组)。按不同葡萄糖浓度分为5.6 mmol/L、10 mmol/L、25 mmol/L。根据不同葡萄糖浓度是否加入siRNA分为未加siRNA的对照组:A_0组5.6 mmol/L、B_0组10 mmol/L、C_0组25 mmol/L;加入siRNA的实验组:A_1组5.6 mmol/L、B_1组10 mmol/L、C_1组25 mmol/L。测MafA基因沉默后MIN6细胞增殖、胰岛素(Insulin)-1和Insulin-2 mRNA表达、MafA蛋白表达及上清液胰岛素浓度的变化。结果siMafA-2组干扰效果最好。C_1组MafA蛋白表达较C_0组下降(P<0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度均降低(P<0.05)。A_1组与A_0组比较,MafA蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同糖浓度各亚组与对照组Insulin-1 mRNA表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论siRNA-2组是理想的siRNA。MafA下调可抑制小鼠胰岛β细胞增殖。MafA下调可抑制小鼠Insulin2 mRNA表达和胰岛素分泌。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2017年06期）
干扰质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的以波形蛋白基因为靶基因,构建波形蛋白干扰质粒shRNA Vim并验证其干扰效果。方法根据GenBank中大鼠波形蛋白的mRNA序列设计shRNA序列,插入至pSilencer 4.1载体,构建重组质粒,转化到Top 10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆并进行测序分析。结果 DNA测序分析显示干扰质粒shRNA Vim构建成功,免疫印迹法显示该干扰质粒能有效地抑制波形蛋白的表达(P<0.001)。结论成功构建波形蛋白干扰质粒shRNA Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
干扰质粒论文参考文献
[1].周梦琪,柴原,冯琬迪,马浩洁,盖聪.稳定干扰Drp1基因的慢病毒载体质粒及神经母细胞瘤细胞株构建[J].山东医药.2019
[2].邵晓婷,王凯旋.波形蛋白干扰质粒shRNAVim的构建及鉴定[J].黑龙江医学.2019
[3].王晓娟,张洁,杨惠,刘淑英.靶向enJSRVenv基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[4].王晓娟,刘淑英.绵羊绒毛膜滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞最佳共培养体系的建立及enJSRV-env干扰质粒基因沉默效果的测定[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[5].贺欣薇,郑敏,胡安东,杨颖,周碧君.NF-κB1基因干扰质粒的构建及其对DEV增殖的影响[J].生物技术.2019
[6].曲雪菲,华佳,吴进,龚爱华,蒋鹏.ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定[J].江苏大学学报(医学版).2019
[7].罗云,罗钰辉,刘孝东,崔庆鹏.大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒的构建及鉴定[J].昆明医科大学学报.2018
[8].李坚,周凯,王俊,袁喜红.CIP2A靶向干扰质粒对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响[J].江西医药.2017
[9].于洋,索勇.雌激素受体β干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响及ERK1/2信号通路的作用[J].广东医学.2017
[10].杨梅,陈诺琦,郑舒静,陈锦凤.小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响[J].中国糖尿病杂志.2017