导读:本文包含了肝细胞色素酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:抑郁症,艾司西酞普兰,细胞色素酶P450,2C19,5-羟色胺转运体
肝细胞色素酶论文文献综述
赵蓓,李国海,章皎洁,李一云,孙雪[1]（2018）在《艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P4502C19基因及5-羟色胺转运体基因多态性关联性分析》一文中研究指出目的:探索艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P450 2C19基因(CYP2C19)及5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性关联性。方法:给予51例抑郁症患者艾司西酞普兰10～20 mg/d单药治疗4周;以治疗前后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)减分率> 50%为有效。应用聚合酶链反应技术检测CYP2C19基因、5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性,并分析其与艾司西酞普兰有效性的关系。结果:CYP2C19及5-HTTLPR各基因型间艾司西酞普兰治疗的有效率比较差异无统计学意义(χ2=0. 166,P=1. 000;χ2=2. 000,P=0. 217); CYP2C19各基因型患者的不良反应发生率比较差异有统计学意义(χ2=16. 115,P <0. 001),低代谢型患者不良反应发生率明显高于其他型; Logistic回归分析显示艾司西酞普兰抗抑郁疗效与年龄(B=-0. 192,P=0. 009)和病程(B=-0. 170,P=0. 011)相关。结论:CYP2C19、5-HTT基因多态性不影响艾司西酞普兰抗抑郁的疗效。(本文来源于《临床精神医学杂志》期刊2018年05期）
黎运呈,曾芳,丁贤君,郑迪,杨喆娟[2]（2018）在《中药辨证干预对非酒精性脂肪性肝病肝细胞色素氧化酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表达的影响》一文中研究指出目的探讨中药辨证干预对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)表达的影响机制。方法取SPF级Wistar大鼠40只,按随机数字表分为5组,即:正常组、模型组、对照药物组、药物A方组、药物B方组。采用高脂饲料诱导大鼠制作NAFLD模型,4周后对照药物组、药物A方组、药物B方组每天分别予相应组方中药1 mL/100 g灌胃给药,第12周时,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各实验组肝细胞COXⅡ、COXⅢmRNA表达,Western blot测定肝细胞COXⅠ蛋白表达。结果各组NAFLD大鼠肝细胞COX表达均降低,经过药物干预后,各药物治疗组COX表达有不同程度的升高。与模型组比较,对照药物组、药物B方组COXⅡmRNA表达增高(P<0.01);且药物B方组COXⅡmRNA表达高于药物A方组及对照药物组(P<0.05)。与模型组比较,对照药物组、药物A方组、药物B方组COXⅠ蛋白表达水平升高(P<0.01);且药物B方组COXⅠ蛋白表达高于药物A方组及对照药物组(P<0.01)。结论在NAFLD病程的后期阶段,运用化痰消瘀、清热利湿、补益肝肾的中药,可提高大鼠肝细胞COX表达水平,并显着优于其他治疗措施。(本文来源于《中国中西医结合杂志》期刊2018年06期）
闫琪[3]（2018）在《一种基于渗透化酵母菌细胞并高效筛选人细胞色素酶底物和抑制剂的方法》一文中研究指出研究背景:细胞色素酶P450在生物研究的很多领域中都能够编码并表达蛋白,到2018年为止,细胞色素酶P450已经拥有了56年的研究历史,超过50,000种不同的细胞色素酶被发现存在于除了大肠杆菌外的其他动物、植物、真菌、细菌和病毒中。细胞色素酶P450名字的来源是因为这种酶有血红素蛋白,并且与一氧化碳的络合物可以在450 nm处有最大吸收。迄今为止,人类基因组计划已经确定了57种细胞色素酶,并基于其氨基酸序列的相似比将其划分成18个科(用阿拉伯数字表示)和43个亚科(用A,B,C,D等大写字母表示)。由于细胞色素酶本身具有强大的催化性和多样性,所以催化反应类型也多种多样,如羟化反应、脱烷基化反应、环氧化反应和氧化还原反应等。在大多数情况下,细胞色素酶作为一种单加氧酶进行催化反应,即在微粒体系统中电子经过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)传递给细胞色素还原酶,再由其还原酶传递给细胞色素酶,与此同时底物被氧化出羟基而氢离子被还原成水分子。这些细胞色素酶作用广泛,它们参与体内内源性底物的代谢,如CYP3A4催化睾酮合成类固醇等;它们主要参与人体内药物的?相代谢使得这些疏水性的药物更加水溶性有利于被??相代谢中的酶利用并排出体外。事实上据调查研究显示,大约75%的药物都是通过细胞色素酶代谢来发挥药效的,而其中超过90%的药物都是被CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4代谢的;同时细胞色素酶还可以降解某些致癌物质和外来化学物质来达到保护人体健康的作用。综合来说,细胞色素酶有很高的研究价值,具体体现在它可以广泛应用于药物设计、药理学研究、预防化学致癌、植物育种和昆虫防治等各个领域。目前为止,很多细胞色素酶都已经有了很深入的研究(如CYP3A4),但是仍然有一部分细胞色素酶的代谢机理和生理作用没有被发现。其中,一种叫做CYP4Z1的细胞色素酶引起了我们的关注。这种酶在正常乳腺组织和乳腺癌组织的表达比在人体其他组织多得多,目前为止仅有两篇文章报道了它的底物,其中之一就是我们课题组在2009年发现这种酶可以代谢月桂酸和肉豆蔻酸,但是羟基化位置在脂肪酸的中间而不是像其他同家族的酶一样进行端位羟基化反应。另一篇文章则发现了这种酶可以代谢二十碳二烯酸和花生四烯酸。与此同时,一些报告表明,人类细胞色素酶CYP4Z1不仅可以在所有亚型乳腺癌中表达,也可在其他恶性肿瘤中被检测出来,如卵巢癌、肺癌和前列腺癌;CYP4Z1的3'-UTR能抑制乳腺癌细胞的迁移;在2017年,我们课题组通过检测正常志愿者和乳腺癌患者的血清发现了CYP4Z1可以作为乳腺癌患者的肿瘤对应抗原。所有这些研究结果都表明,人类CYP4Z1有很大可能作为治疗乳腺癌的药物靶向位点,尤其有利于基于前药设计的治癌药物的发展。然而目前为止,关于这种酶的代谢底物、有效抑制剂和蛋白结构尚不足以进行更进一步的药物设计。正是由于细胞色素酶在人体内代谢的重要作用,才有了那么多应用于检测细胞色素酶活性的方法。这种细胞色素酶活性检测方法可以以酶的来源来划分,主要分为重组酶和非重组酶两类检测系统。非重组酶系统中最为典型的应用就是人肝细胞和人肝微粒体。其中前者由于其细胞的完整性和代谢通路的完备性,广泛适用于研究药物诱导、药物代谢稳定性、药物间的相互作用和药物潜在肝毒性的研究中,但是相对而言酶的表达量较少且来源少、价格昂贵;后者适用于药物体外吸收、分布、代谢、排泄和毒性的研究,是广泛应用于生物领域研究药物代谢的体外模型,但是由于其含有多种细胞色素酶,所以存在多种酶活性交叉的状况以致于无法分辨出究竟是哪一种酶起决定性作用,同时也不利于用该系统大量生产代谢产物。与非重组酶系统相比,重组酶可以通过明确地对反应混合物中存在的单个酶进行反应,从而进行单个酶的代谢水平分析。其中最常使用的宿主就是重组大肠杆菌和重组酵母菌。由于大肠杆菌本身没有内源性细胞色素酶,所以不存在酶反应的交叉性,而且利用大肠杆菌的快速繁殖和廉价操作手段有利于大量生产特定代谢物。但是细菌表达系统常伴有N末端截取修饰使得表达的蛋白不能完全与人细胞色素酶相同;酵母仅含有两至叁个细胞色素酶并且这些内源性细胞色素酶与人类的并不相似,所以不会对人细胞色素酶反应产生很大影响。基于酵母的基因可操作性、低成本和快速繁殖,我们课题组已经成功导入了很多人类细胞色素酶基因,并使用全细胞生物转化的方法成功合成了很多重要的代谢物。不过这种方法也有一个缺点就是底物或抑制剂需要穿过很多生物屏障才能与酶接触并被其催化,尤其当底物或抑制剂是离子型化合物时这种难度就会加大;除了以上两种系统可以检测酶活,还有纯化的重组酶也可以作为一种可靠的酶源。同样这种方法的优点在于没有多余的副反应发生,但是由于其制备时间长和高昂的费用常常不作为一种首选的酶活检测方法。在2016年,我们组利用渗透过的重组酵母菌成功的生产了尿苷二磷酸葡糖醛酸,产率高达100%,整个酶促反应仅在3个小时内完成。这一跨越性的成功让我们衍生了一个新的想法,那就是能否用同样的渗透原理使得底物更好的与细胞色素酶接触,从而产生跟多的代谢产物。研究目的:本文的主要目的是建立一个高效的、快速的、稳定的检测细胞色素酶活性的方法,并基于此方法发现人CYP4Z1更多的底物和潜在的抑制剂,通过对人CYP4Z1蛋白结构建立同源模型,以实验所得数据为基础使用计算机软件进行底物或抑制剂和酶的分子对接实验,从分子和酶学上更好的解释实验现象并通过软件发现酶活位点和关键氨基酸。结合氨基酸点突变实验的结果修正同源模型,为日后基于此模型进行化合物数据库筛选提供基础,最终使得发展前药治疗乳腺癌的策略得以实现。实验方法:1.构建含有重组人细胞色素酶的酵母菌及其突变体;2.用建立的“酶包”方法检测酶活,即经固体培养基培养叁天、液体培养基培养过夜后的酵母菌被0.3%的Triton-X100常温渗透1小时,再用50 mM的NH_4HCO_3洗涤叁次后加入睾酮或发光底物37℃下高速震荡反应3小时。检测抑制剂活性的步骤稍微有所不同,在加入底物之前酶和抑制剂要充分混匀并与37℃下预反应十分钟。反应后的产物在悬浮液里经萃取后由HPLC-MS法鉴定或直接加入LDR缓冲液室温反应20分钟后送去检测发光值;3.比较“酶包”新方法和全细胞生物转化法的产率时,底物睾酮和6-β羟基睾酮的检测是在HPLC-MS下完成的,即在240nM处相对应分子量下的峰面积之比即为两物质的浓度值比;4.生物发光法主要用于检测发光底物能否被指定酶代谢时使用,这一类发光底物再被细胞色素酶代谢后可以生成荧光素,再加入荧光素酶后即可生成光子并被酶标仪检测到,酶活和发光值成线性关系;5.由于缺少CYP4Z1的蛋白结构,所以我们使用与其同源相似比最高的CYP4B1为模板,构建了CYP4Z1蛋白的同源模型,并将实验所得的底物与抑制剂在此模型上与酶进行分子对接,从而找到酶活位点和关键氨基酸;6.根据模型预测将构建好的重组酵母菌及其突变体进行酶活检测,依然使用“酶包”法和发光底物,得到的结果将用于修正CYP4Z1蛋白的同源模型。实验结果:我们已经建立了一个基于渗透裂殖酵母细胞并可以检测重组人细胞色素酶活性的方法。与全细胞生物转化法相比,此方法可以利用更少的细胞在更短的反应时间内生成8倍以上的产物,并且渗透洗涤过的酵母细胞可以长时间冻存并保证一个月内活性不变。之后,我们用此方法筛选了15种发光底物,其中13种可以被CYP4Z1代谢,与此同时除了已知的脂肪酸链中羟基化反应外,我们还发现了两种新反应,即醚基断裂反应和芳环羟基化反应。除此之外,我们还发现了新的CYP4Z1的五个抑制剂:咪康唑、益康唑、氨基苯并叁唑、妥拉苏林和苄基咪唑,而其中IC_(50)仅有180 nM的苄基咪唑的抑制效果要好于目前唯一报道过的抑制剂HET0016。基于以上实验数据和近期发表的CYP4B1的晶体结构,我们构建了CYP4Z1的同源模型并在计算机模拟了分子对接试验,结果表明构建的模型与已知的底物拟合度很高,同时该模型还预测Ser113、Ser222、Asn381和ser383有可能是活性位点形成氢键的关键氨基酸。为了验证模型的预测并更好的修正模型,我们进行了氨基酸点突变实验并比较了野生型菌株和突变体中CYP4Z1的活性大小,目前初步结果显示单点突变对其活性影响不大。结论展望:我们建立了一个基于渗透重组酵母细胞并可以高效、稳定、快速检测人细胞色素酶活性的方法,并以人的CYP4Z1为靶酶,用此方法成功筛选出了13种新的发光底物和5种抑制剂,为人们更进一步的了解CYP4Z1的代谢和功能提供了研究价值。同时,基于底物和抑制剂的数据,我们以CYP4B1为模板成功构建了CYP4Z1的分子蛋白模型,在底物和酶的分子对接试验中我们发现了酶活位点并找到了可能影响氢键结合的关键氨基酸,即Ser113、Ser222、Asn381和ser383。在构建了氨基端单点突变酵母菌后,我们通过上述方法比较了野生型和突变体中CYP4Z1的活性大小,虽然目前初步结果显示单点突变对其活性影响不大,但是并不能说明突变的氨基酸没有作用,日后我们将继续在此基础上构建多点突变,多方位的比较其活性变化,在得到可靠准确的数据之后修正以构建的同源模型,使它成为真正可以预测CYP4Z1相关特性的分子模型。如果这一模型可以在日后的实验中实现,那么就可以在其基础上对接更多的化合物,预测CYP4Z1的底物和抑制剂,通过大量实验数据验证后发现关键的核心骨架,即可通过该骨架设计CYP4Z1的前药,使其能够特异性的被CYP4Z1代谢并释放活性药物或细胞毒素,进而达到治疗乳腺癌的目的。研究意义:细胞色素酶是人体内参与代谢最重要的一种酶,它的研究和发展有很高的应用价值,具体体现在它可以广泛应用于药物设计、药理学研究、预防化学致癌、植物育种和昆虫防治等各个领域。而本文中建立和发展的这样一种高效的、快速的、可靠的检测其酶活的方法就对其研究和发展起到了推进作用。不仅如此,在越来越多的文章报道人CYP4Z1能够促进乳腺癌的发生和转移时,本文新发现的13种底物和5种抑制剂大大的丰富了人们对这种酶代谢的认识,使得发现CYP4Z1的抑制剂并基于其结构设计合成新的药物提供了思路和方法。同时本文构建的CYP4Z1的同源模型有利于计算机模拟化学品库里的化合物和酶进行对接实验,为发现更多的底物和抑制剂提供了坚实的基础,为设计合成前药提供了有力的途径,为治愈乳腺癌提供了崭新的希望。(本文来源于《天津大学》期刊2018-05-01）
都颖[4]（2018）在《细胞色素酶P450 1A2抑制剂的设计、合成及其抑制活性分析》一文中研究指出细胞色素酶P450 1A2是重要的P450氧化酶之一,能够将环境中的芳胺或者杂环胺代谢成有效的致突变或者致癌物。因此,P450 1A2抑制剂的设计、合成对肿瘤的预防以及治疗药物的研发具有非常重要的意义。根据研究,大量的天然以及合成的多环芳烃、蒽醌、香豆素、芪类、黄酮以及生物碱类等具有不同分子结构的化合物已经被鉴定为有效的P450 1A2抑制剂。对这几类抑制剂的结构骨架以及抑制活性进行分析,从中筛选出对P450 1A2具有抑制潜力的化合物结构。结果发现,平面性结构好且含有疏水性基团的分子能够高效的抑制P450 1A2。以抑制效果较好的化合物苯并(a)芘骨架为模板,该化合物拥有良好的平面结构。在设计的化合物骨架中引入疏水性基团(酰胺、氨基),有利于化合物形成分子内氢键,维持较好平面性的同时减小了化合物稠合度,以降低设计化合物的毒性。研究表明平面叁角形分子对P450 1A2具有选择性抑制作用,因此,设计的化合物为平面叁角形分子。对于设计的化合物,利用分子对接和分子动力学模拟的方法,进一步优化分子结构,对已知的化合物骨架进行合理的修饰。根据资料显示,当配体与酶活性中心位点的距离为4?时,化合物的抑制效果较好。通过Auto Dock软件进行目标分子与P450 1A2的对接,将设计的小分子docking进入P450 1A2的活性空腔,计算设计的化合物与P450 1A2的活性中心位点的距离,通过对接结果,对设计的化合物进行进一步的结构优化,确定设计的化合物结构。调研文献,筛选出成本低且效率高的合成路线。该合成路线以2-溴吡啶和2-萘硼酸作为初始原料,经过催化、酰化、取代反应,合成含有Boc保护基团化合物,进一步的脱保护得到目标化合物。合成的化合物通过~1H NMR(氢谱)、~(13)C NMR(碳谱)以及HR-ESI-MS(高分辨质谱)进行表征,确定化合物结构。设计、合成的小分子酶抑制剂,通过体外诱导实验,评价其生物活性。在体外测试中,以reserpine为内标,建立LC-MS/MS的测试方法,采用“鸡尾酒(cocktail)法”的孵育体系,利用ESI正离子选择反应检测,在不同浓度抑制剂分子存在下,通过LC-MS/MS技术测定P450酶代谢特定药物的生成量。绘制抑制曲线求算小分子的半数抑制浓度(IC_(50))值和时间依赖性抑制的IC_(50)偏移值,进而评价化合物的抑制作用。八种化合物的测试结果显示,七种化合物对P450 1A2均具有一定程度的抑制作用,IC_(50)值分别为0.56、0.94、1.68、4.07、4.67、6.23、33.52μM,对P450 2A6、P450 2C9的抑制作用不明显。通过实验结果,发现设计的此类化合物对P450 1A2的抑制作用较好,为P450 1A2抑制剂的进一步的研究提供了重要的依据。(本文来源于《鲁东大学》期刊2018-05-01）
刘亭,刘香香,陆定艳,杨健,吴琼[5]（2018）在《灯盏细辛和赤芍配伍组方对小鼠部分肝细胞色素P450亚型活性的影响及其机制分析》一文中研究指出目的:探讨灯盏细辛和赤芍配伍组方(辛芍组方)对小鼠细胞色素P450酶(CYP450s)主要亚型CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11代谢活性的影响以及相关机制。方法:小鼠分为5组,分别为正常组、苯巴比妥组(70 mg·kg-1)和辛芍组方低、中、高剂量组(0.31,0.62,1.25 g·kg-1)。给药结束后,取各组小鼠肝脏制备微粒体,考察CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11的代谢活性;并提取肝组织总RNA和蛋白,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)考察辛芍组方对CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1,CYP3a11和孕烷X受体(PXR)mRNA及蛋白表达的影响;利用报告基因法考察辛芍组方对PXR的激活作用。结果:与正常组比较,辛芍组方可诱导CYP3a11酶活性,上调CYP3a11,PXR mRNA和蛋白水平,并具有PXR激活作用(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,辛芍中、高剂量组方能抑制CYP1a2酶活性(P<0.05),但对CYP1a2的mRNA水平和蛋白水平无明显影响;而辛芍组方对CYP2e1,CYP2d22的酶活性,mRNA水平和蛋白水平无明显影响。结论:辛芍组方具有CYP3a11活性诱导作用,该作用很可能与辛芍组方上调PXR表达并激活PXR从而促进CYP3a11表达有关;而其CYP1a2活性抑制作用机制与CYP1a2的表达调控无关,需要进一步研究。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2018年13期）
相福生,徐革锋,谷伟,黄天晴,刘晨斌[6]（2017）在《雌性叁倍体虹鳟性腺分化期间细胞色素酶相关基因的表达》一文中研究指出Cyp19a1b、Cyp11a1、Cyp11b2、Cyp17a1、Hsd3b1等基因在硬骨鱼类性别决定和性腺分化中具有重要的调控作用。因此,本研究通过比较31-68dpf期间二倍体和叁倍体雌性虹鳟脑组织中特异性候选基因的表达差异及芳香化酶(CYP19A1B)活性的变化,以探究其对性腺分化的影响。q RT-PCR结果显示,Cyp19a1b和Cyp11b2在叁倍体脑组织中的表达量显着低于同期雌性二倍体。Cyp11a1和Hsd3b1在叁倍体脑组织中的表达量接近二倍体,但表达量的高峰期晚于二倍体。Cyp17a1在二倍体脑组织中的表达量呈先上升后下降趋势,但在相同实验条件下未检测到叁倍体脑组织中Cyp17a1的表达。酶联免疫结果显示,在40 dpf-60 dpf时期,二倍体虹鳟脑组织中的芳香化酶活性显着高于叁倍体虹鳟,尤其在45-50 dpf时,该酶活性分别较叁倍体的高1.15倍和1.12倍。研究结果表明叁倍体虹鳟早期性腺发育迟缓的原因之一是Cyp19a1b、Cyp11a1、Cyp11b2、Cyp17a1、Hsd3b1等基因的表达晚于二倍体,且表达量低于二倍体,造成雌二醇不能正常合成,最终导致性腺发育迟缓。(本文来源于《2017年中国水产学会学术年会论文摘要集》期刊2017-11-08）
邵贤坤[7]（2016）在《短小芽孢杆菌GBSW19全基因组测序分析及其p450细胞色素酶基因的克隆和表达》一文中研究指出芽孢杆菌属(Bacillus spp.)是一种革兰氏阳性菌,好氧或兼性厌氧,可以产生多种次生代谢产物,具有抗病和促生的作用,是一类重要的植物根围促生细菌(plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)。本研究表明短小芽孢杆菌GBSW19能够在低温条件下高效降解秸秆;GBSW19处理组秸秆还田后,对土壤的pH,全氮、速效氮、全钾、速效钾、速效磷的含量进行了检测,还探究了 GBSW19在逆境下的生长特性。完成了 GBSW19全基因组测序和生物信息学分析,从GBSW19基因组中成功克隆和表达2个p450细胞色素酶基因。为后续研究奠定了基础,主要研究结果如下:为探究GBSW19菌株在大田中对秸秆的降解效果,于2013年12月进行了田间实验,调查施用菌株GBSW19对秸秆的降解情况,以及对田间土壤的影响;在冬季小麦实验田中,施用菌株GBSW19后作物秸秆在30 d的相对降解率为39.7%,而对照菌为24.4%;表明菌株GBSW19在田间降解效果要显着优于对照。另一方面,通过对土壤pH和土壤养分检测分析发现,喷施GBSW19的土壤pH会逐渐由酸性变至中性,且土壤中全氮、速效氮、速效磷的含量均高于对照,因此,该菌不仅能够加速田间作物秸秆降解,还能有效调控土壤pH,增加土壤养分含量。为探究GBSW19菌株在逆境下的生长特性,分别在初始pH为4.0-10.0的培养基中、4℃和10℃培养温度下培养GBSW19以及用0.5%的过氧化氢处理GBSW19。当初始pH为4.0时,培养72h后,GBSW19发酵液中的活菌数可以达到109CFU/ml,明显高于对照菌株,发酵液的pH明显上升。当初始pH为10.0时,培养12h后,GBSW19发酵液的pH值变化显着并趋于中性。综合来看,GBSW19在酸碱培养液具有更强的生长能力。无论是在4 ℃还是在10 ℃培养条件下,GBSW19的活菌数都高于对照菌株,表明该菌株在低温条件下具有更好的生长能力。GBSW19还具有抵御过氧化氢胁迫的能力,因此具有很好的应用潜力。通过对GBSW19全基因组测序和生物信息学分析发现,全基因组大小为3643817bp,共有3835个ORF,对短小芽孢杆菌GBSW19全基因组数据进行KEGG、COG、GO功能的注释。通过生物信息学分析,短小芽孢杆菌GBSW19有340个特有基因,2个特有基因家族,9个次生代谢物质基因簇。在短小芽孢杆菌GBSW19中,存在14个基因与GBSW19抗酸碱有关,17基因参与编码应激蛋白,41个开放阅读框与Spore coats的形成有关。这些基因与短小杆菌GBSW19抗酸碱和低温胁迫都有着一定的关联,可作为极其重要的后续研究内容。此外,存在着21个基因片段与GBSW19抗氧化胁迫有关,GBSW19有9个基因与纤维素酶、半纤维素酶合成有关。对全基因组数据分析发现,基因组中存在3个P450细胞色素酶基因,分别设计引物进行常规PCR扩增,克隆至pMD18-T载体片段测序正确后,连接到表达载体pET30a(+),转化至大肠杆菌BL21并验证,得到正确的表达载体,经0.2mM的IPTG诱导表达后,超声波破碎得到蛋白,SDS-PAGE电泳检测只有2个蛋白被诱导表达,大小与理论值符合。用镍柱亲和层析方法纯化粗蛋白,电泳结果表明纯单一条带与理论值大小符合,并进一步检测了 p450细胞色素酶对DON毒素的降解作用。(本文来源于《南京农业大学》期刊2016-06-01）
范秋玉,马玲玲,肖德强,黄东萍,贾亮[8]（2016）在《原花青素B2及黄曲霉毒素B_1对人胚胎肝细胞细胞色素P450亚酶1A2、3A4活力及基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨原花青素B2(PC-B2)与黄曲霉毒素B_1(AFB_1)对人胚胎肝细胞L-02细胞色素P450(CYP)亚酶1A2、3A4活力及其基因表达的影响。方法 L-02细胞体外培养后分空白对照、溶剂对照、AFB_1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共5组,其中PC-B2处理分为3个亚组,分别采用3、10、30μg/ml PC-B2干预,PC-B2干预分为3各亚组,分别采用3、10、30μg/ml PC-B2预处理12 h后,再加不同浓度PC-B2与AFB_1干预24 h。测定各组细胞的CYP1A2、CYP3A4酶活力以及CYP1A2、CYP3A4基因的mRNA表达水平;测定细胞存活率,倒置荧光显微镜观察细胞形态。结果与空白对照组相比,AFB_1染毒组细胞存活率降低(P<0.05),胞膜结构不清,漂浮细胞增多,CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与空白对照组相比,3、10μg/ml PC-B2处理组细胞相关指标无明显变化,但30μg/ml PC-B2处理组的细胞存活率升高,CYP1A2、CYP3A4酶活力下降(P<0.05)。与AFB_1染毒比较,30μg/ml PC-B2干预组的细胞存活率升高(P<0.05),各浓度PC-B2干预组的细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达均降低(P<0.05),且干预浓度越高,CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达越低(P<0.05)。结论 AFB_1能明显诱导肝细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达,促使肝细胞凋亡,PC-B2干预可促进肝细胞生长并抑制上述CYP二个亚酶的活力及其基因表达,提示PC-B2可能通过抑制I相代谢酶CYP对AFB_1的活化而对肝细胞有良好保护作用。(本文来源于《广西医学》期刊2016年05期）
王文华,刘亭,龚菲,吴林霖,谢婷[9]（2016）在《参芎葡萄糖注射液对小鼠肝细胞色素P450酶活性及表达的影响》一文中研究指出目的:研究参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对小鼠肝脏细胞色素P450 2_(E1)(CYP2_(E1)),2_(A11)(CYP2_(A11)),1_(A2)(CYP1_(A2))和2_(D22)(CYP2_(D22))酶活性以及mRNA表达水平的影响。方法:将昆明小鼠随机分为正常组,苯巴比妥组(0.70 g·kg~(-1)),以及SGI低、中、高剂量组(13.0,19.5,26.0 g·kg~(-1))。各组小鼠每天尾静脉注射药物1次,连续注射7 d后处死。取其肝脏制备肝微粒体进行体外代谢实验,测定CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP3A的酶活性。并用实时荧光定量聚合酶链式反应q PCR技术定量分析小鼠肝组织中CYP2_(E1),CYP2_(D22),CYP1_(A2)和CYP2_(A11)的mRNA表达水平。结果:与正常组比较,各给药组小鼠肝指数没有显着差异。体外代谢实验表明,相较正常组,高剂量SGI能下调CYP2_(E1)酶活性0.45倍(P<0.05);中剂量和高剂量的SGI可上调CYP1_(A2)酶活性1.2~1.23倍(P<0.05);而SGI对CYP3A和CYP2_(D22)的活性无显着影响。q PCR分析发现,相较正常组,高剂量SGI组CYP2_(E1)mRNA的表达下调了0.6倍(P<0.01);SGI中剂量和高剂量组的CYP1_(A2)mRNA的表达分别上调了1.7倍和2.6倍(P<0.05)。SGI组和正常组之间的CYP2_(A11)和CYP2_(D22)mRNA表达量无显着性差异。结论:中高剂量的SGI能上调小鼠肝CYP1_(A2)的表达,并诱导小鼠肝CYP1_(A2)的酶活性。而高剂量的SGI能下调小鼠肝CYP2_(E1)的表达,并抑制小鼠肝CYP2_(E1)的酶活性。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2016年09期）
王平[10]（2016）在《人肝细胞色素b5对10种细胞色素P450亚型活性的影响》一文中研究指出细胞色素b5(cytochrome b5,Cyt b5)是内质网膜上含血红素的小分子蛋白,在胆汁酸去饱和、高铁血红素蛋白还原、类固醇生成及药物代谢过程中通过向多种酶传递电子发挥作用。细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)在人体内主要分布于肝脏,参与75%以上药物代谢,主要包括CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1、CYP2D6、CYP3A4、CYP3A5等10种亚型。CYP活性的不同是临床药物个体差异的主要原因,最新的研究表明,Cyt b5能为CYP的催化反应提供电子,增强CYP的催化反应效率。Cyt b5在大样本正常人肝中的表达水平目前尚无报道,Cyt b5在人肝微粒体(Human liver microsomes,HLM)水平对CYP活性个体差异的影响也很少有人报道。用人肝微粒体作为研究对象更能准确反应自然状态下Cyt b5对CYP代谢的影响,但是目前很少有关于人肝微粒体中Cyt b5对CYP催化反应影响的研究。故此我们首次系统研究了在正常人肝微粒体中Cyt b5含量对CYP催化反应的影响。本研究采用大样本正常人肝作为实验对象,首先用q PCR的方法测定107例人肝中Cyt b5 m RNA表达水平,然后用光谱法考察测定123例人肝微粒体中Cyt b5的蛋白含量,分析Cyt b5含量对10种CYP亚型酶动力学参数的影响,探讨CYP活性个体差异的原因。1方法1.1肝脏标本的收集收集肝功能正常的肝病患者肝标本123例,标本来自郑州大学第一附属医院、河南省人民医院及河南省肿瘤医院。其中男性40例,女性83例,年龄在20-75岁,用药史显示近期未使用能够显着影响CYP酶活性的药物。此次实验方案经郑州大学医学伦理委员会批准,受试者已签署知情同意书。1.2人肝微粒体的制备使用差速离心法制备人肝微粒体。1.3 Cyt b5蛋白含量测定使用光谱法测定Cyt b5蛋白含量。1.4 Cyt b5 m RNA含量的测定用Trizol法提取肝组织总RNA,然后将1μg的总RNA逆转录成c DNA,两步法在7500 Fast Real-Time PCR System进行PCR扩增,用GAPDH作为内参基因定量m RNA,用2-△CT计算相对表达水平。1.5 CYP基因分型提取全基因组DNA,根据文献报道在中国汉族人群中发生频率大于1%的基因多态性位点共25个,由华大基因用SNP Mass ARRAY进行分型检测。1.6 CYP活性测定以非那西汀作为CYP1A2,香豆素作为CYP2A6,安非他酮作为CYP2B6,紫杉醇作为CYP2C8,甲苯磺丁脲作为CYP2C9,奥美拉唑作为CYP2C19,右美沙芬作为CYP2D6,氯唑沙宗作为CYP2E1,咪达唑仑作为CYP3A4/5的底物分别配制孵育体系,然后HPLC法检测孵育体系的代谢产物浓度。1.7统计方法使用SPSS17.0统计软件进行数据的统计,Prism 5.0软件作图,所有数据均进行正态性检验,其中大部分数据属于非正态分布,采用非参数检验的方法进行分析。检验水准设为P<0.05。2结果2.1 Cyt b5含量2.1.1 Cyt b5 m RNA 107例人肝标本中Cyt b5 m RNA表达水平最小值0.61,最大值7.44,中位数1.59,差异倍数12倍。2.1.2 Cyt b5蛋白123例人肝标本中Cyt b5蛋白含量最小值为33.75 pmol/mg,最大值为641.27 pmol/mg,中位数270.01 pmol/mg,蛋白含量也有较大的个体差异性,差异倍数为19。2.2人口学因素对Cyt b5 m RNA表达水平和蛋白含量的影响2.2.1人口学因素对Cyt b5 m RNA表达水平的影响根据性别、年龄(以45岁为界)、吸烟和饮酒对Cyt b5 m RNA进行分组,分析这些原因对Cyt b5 m RNA的影响,发现性别、年龄、吸烟和饮酒均对Cyt b5 m RNA无显着性影响。2.2.2人口学因素对Cyt b5蛋白含量的影响根据性别、年龄(以45岁为界)、吸烟和饮酒对Cyt b5蛋白含量进行分组,分析这些原因对Cyt b5蛋白含量的影响,结果显示,男性中Cyt b5蛋白含量显着高于女性(P=0.002),吸烟组中Cyt b5蛋白含量显着高于不吸烟组(P=0.006),年龄和饮酒对Cyt b5蛋白含量没有影响。2.3 10种CYP基因分型结果25个SNP位点等位基因的突变频率从1.1%(CYP3A4*18A)到69.4%(CYP3A5*3),与文献报道的中国人的频率一致。2.4 Cyt b5对10种CYP总体活性的影响2.4.1 Cyt b5 m RNA表达水平对10种CYP总体活性的影响Cyt b5 m RNA表达水平对5种CYP的酶动力学参数Vmax有显着影响(P<0.05),它们分别是CYP2B6(r=0.619)、CYP2D6(r=0.269)和CYP3A4/5(r=0.439)。Cyt b5的m RNA对3种CYP的酶动力学参数Km有显着影响P<0.05),分别是CYP2C8(r=0.236)和CYP3A4/5(r=0.223)。Cyt b5的m RNA对2种CYP的酶动力学参数Clint有显着影响(P<0.05),分别是CYP2B6(r=0.452)和CYP2D6(r=0.438)。其中,CYP2B6和CYP2D6的酶动力学参数Vmax、Clint同时受到Cyt b5 m RNA的影响,CYP3A4/5的酶动力学参数Vmax、Km同时受到Cyt b5 m RNA的影响。2.4.2 Cyt b5蛋白含量对10种CYP总体活性的影响Cyt b5的蛋白含量对7种CYP酶的动力学参数Vmax有显着影响(P<0.05),分别是CYP1A2(r=0.377)、CYP2B6(r=0.416)、CYP2C19(r=0.282)、CYP2D6(r=0.467)、CYP2E1(r=0.316)和CYP3A4/5(r=0.322)。Cyt b5的蛋白含量对8种CYP的酶动力学参数Clint有显着影响(P<0.05),分别是CYP1A2(r=0.343)、CYP2B6(r=0.391)、CYP2C9(r=0.240)、CYP2C19(r=0.283)、CYP2D6(r=0.375)、CYP2E1(r=0.352)和CYP3A4/5(r=0.197)。Cyt b5的蛋白含量对10种CYP的酶动力学参数Km均没有影响。2.5 Cyt b5对10种不同基因型的CYP活性的影响2.5.1 Cyt b5 m RNA表达水平对不同基因型的CYP活性的影响Cyt b5 m RNA对CYP1A2 5347C>T、-3113A>G,CYP2A6*4,CYP2B6 516G>T、785A>G,CYP2C8*1B、*1C,CYP2D6 100C>T、1661G>C、2850C>T,CYP3A4 20070T>C、20230G>A及CYP3A5*3突变活性有显着影响(P<0.05)。2.5.2 Cyt b5蛋白含量对不同基因型的CYP活性的影响Cyt b5蛋白含量对CYP1A2-3860G>A、-163C>A、5347C>T、-3113A>G、2159G>A,CYP2A6*1B,CYP2B6 516G>T、785A>G,CYP2C9*3,CYP2C19*2、*3,CYP2D6 100C>T、1661G>C、2850C>T,CYP2E1-1293G>C、7632T>A、-333T>A、-352A>G,CYP3A420070T>C、20230G>A及CYP3A5*3突变活性有显着影响(P<0.05)。3结论1.Cyt b5表达水平在正常人肝中存在大的个体差异。2.性别和吸烟对Cyt b5蛋白含量有显着影响。3.Cyt b5 m RNA和Cyt b5蛋白对人肝微粒体中CYP总体活性有显着影响。4.Cyt b5 m RNA和Cyt b5蛋白对不同基因型CYP活性影响具有SNPs依赖性。(本文来源于《郑州大学》期刊2016-05-01）
肝细胞色素酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨中药辨证干预对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)表达的影响机制。方法取SPF级Wistar大鼠40只,按随机数字表分为5组,即:正常组、模型组、对照药物组、药物A方组、药物B方组。采用高脂饲料诱导大鼠制作NAFLD模型,4周后对照药物组、药物A方组、药物B方组每天分别予相应组方中药1 mL/100 g灌胃给药,第12周时,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各实验组肝细胞COXⅡ、COXⅢmRNA表达,Western blot测定肝细胞COXⅠ蛋白表达。结果各组NAFLD大鼠肝细胞COX表达均降低,经过药物干预后,各药物治疗组COX表达有不同程度的升高。与模型组比较,对照药物组、药物B方组COXⅡmRNA表达增高(P<0.01);且药物B方组COXⅡmRNA表达高于药物A方组及对照药物组(P<0.05)。与模型组比较,对照药物组、药物A方组、药物B方组COXⅠ蛋白表达水平升高(P<0.01);且药物B方组COXⅠ蛋白表达高于药物A方组及对照药物组(P<0.01)。结论在NAFLD病程的后期阶段,运用化痰消瘀、清热利湿、补益肝肾的中药,可提高大鼠肝细胞COX表达水平,并显着优于其他治疗措施。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝细胞色素酶论文参考文献
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