王艳梅荣小灵李辉（通讯作者）
新疆医科大学第二附属医院检验中心新疆乌鲁木齐830063
【摘要】目的评价头孢哌酮／舒巴坦分别与莫西沙星、米诺环素联合用药对临床分离获得的碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌菌（Carbapenem-resistantAcinetobacterbaumannii，CRAB）的体外抑菌作用。方法采用棋盘法设计，琼脂平板稀释法测定抗菌药物对42株临床分离的CRAB的最低抑菌浓度（MIC），并计算抑菌指数（FIC指数）判断联合抑菌效应。结果头孢哌酮／舒巴坦与莫西沙星联用后，19.04％为协同作用，64.29％为相加作用，16.67％为无关作用，没有拮抗作用；头孢哌酮／舒巴坦与米诺环素联用后，16.67为协同作用，71.42％为相加作用，11.91％为无关作用，没有拮抗作用。上述药物联用后，各药MIC均明显降低。结论头孢哌酮／舒巴坦分别与莫西沙星、米诺环素联用对CRAB体外联合抗菌效应主要表现为协同和相加作用。
【关键词】头孢哌酮／舒巴坦；莫西沙星；米诺环素；碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）；联合用药；药物敏感试验
[中图分类号]R05[文献标识码]A[文章编号]1672-5018（2016）02-202-01
鲍曼不动杆菌是常见的院内感染菌之一，近年来分离率大幅度升高。碳青霉烯类抗菌药物曾是治疗鲍曼不动杆菌感染的最有效抗菌药物之一，但随着该类药物应用增多，其耐药性也在不断增强，导致了难治性感染，特别是对免疫力低下的患者，CRAB所致感染的抗菌药物治疗是临床上的一个难点[1]。本研究对临床分离的CRAB菌株进行体外联合药敏实验，以期为治疗CRAB所致感染提供试验依据。
1材料和方法
1．1菌株来源
2014年1月至2015年6月分离的来自本院ICU不同病人CRAB共42株，全部菌株均使用法国生物梅里埃公司VlTEK2Compact细菌鉴定仪鉴定。药敏质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。
1．2仪器和试剂
比浊仪（法国生物梅里埃公司）；96孔平板（天津金章公司）；无菌瓶（浙江拱东医疗科技有限公司）；半自动多点接种仪（日本株式会社）；MH琼脂干粉（OXOID公司）；一次性使用培养皿（浙江拱东医疗科技有限公司）：头孢哌酮／舒巴坦（2：1）购自辉瑞制药公司，莫西沙星购自拜耳制药公司，米诺环素购自成都药友药业有限公司。
1．3菌悬液配制
从已经分纯并过夜培养的MH琼脂平板上挑取3~5个菌落，接种于灭菌生理盐水中。菌液用比浊仪校正至O.5MacFarland，再用灭菌生理盐水稀释100倍。
1．4琼脂平板稀释法
将头孢哌酮／舒巴坦（SCF）、莫西沙星（MXF）、米诺环素（MH）以灭菌生理盐水分别倍比稀释成12个浓度（ug／mL），SCF为1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2．5、1．25、0．63；MXF浓度为5120、2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2．5；MH浓度为10240、5120、2560、1280、640、320、160、80、40、20、lO、5。将SCF别与MXF及MH按棋盘法设计两两组合加入无菌瓶中，每种抗菌药物lmL，再将联合药物加入融化并冷却至50℃左右的18mLMH琼脂中制成药平板。将配置好的菌液取200uL加入96孔板中，用半自动多点接种仪接种至药平板。37℃过夜培养。观察结果，记录单独应用各药的最低抑菌浓度（MIC甲药单用和MIC乙药单用），并选择最佳组合效应时两药联用时各自的MIC（MIC甲药联用和MIC乙药联用），以计算FIC指数。
1．5FIC指数计算和判读标准[1]
FIC指数=MIC甲药联用／MIC甲药单用+MIC乙药联用／MIC乙药单用。FIC指数≤0.5，协同作用；O.5<FIC≤1，相加作用；I<FIC≤2，无关作用；FIC>2，拮抗作用。
2结果
2.1药物单用和联用对CRAB的MIC比较
SCF与MXF联用后，二者的MIC50与MIC90明显下降；SCF与MXF联用后，SCF的MIC50与MIC90分别为单药的1／4和l／2，MXF的MIC50与MIC90分别为单药的1／8和1／2；SCF与MH联用后，SCF的MIC50与MIC90均为单药的1／2；MH的MIC50与MIC90均为单药的1／4；表明各药物组合联用后有联合效应。
2.2药物联用对CRAB的FIC分布
SCF与MXF联用时，有19.04％表现为协同作用、64.29％表现为相加作用；SCF与MH联用时有16.67％表现为协同作用、71.42％表现为相加作用。表明了上述两种组合均有一定的联合效应。各组药物联用对CRAB的抑菌指数（FIC指数）分布见表1。
3讨论
鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制主要有5个方面：产生钝化酶、灭活酶、进化的整合子、外膜通透性改变以及泵出系统改变[2]。鲍曼不动杆菌同时具有固有性耐药及获得性耐药，其耐药机制复杂。鲍曼不动杆菌是一种极易产生诱导耐药的细菌，特别是单药应用时能迅速产生对该药的耐药[3]。
SCF属于复合制剂，头孢哌酮为半合成的第三代头孢菌素类广谱抗生素，通过与青霉素结合蛋白（PBPS）结合抑制细菌分裂细胞的细胞壁合成使细菌胞壁缺损，菌体膨胀致使细菌胞浆渗透压改变和细胞溶解而杀灭细菌，舒巴坦可保护头孢哌酮不受β-内酰胺酶水解，并明显增强了头孢哌酮的抗菌活性[4]。MXF是新一代喹诺酮类抗菌药物。MH（二甲胺四环素、二甲胺四环素）是半合成的四环素类抗生素。
以往，临床上大多数感染应用单一抗生素即可控制，但是随着细菌耐药率的逐年递增，单一抗生素并不能对许多严重的感染进行良好的控制。选择不同种类的抗生素联合应用可增强对耐药细菌杀菌作用，达到有效控制感染的目的，同时可减少单一药物大剂量应用时的毒副作用，以及减少和延缓耐药菌株的产生。本研究将SCF分别与MXF、MH联合对临床分离的CRAB进行体外药敏实验发现，SCF分别与二者联合用药后主要表现为协同及相加作用，各药的MIC50与MIC90也有明显下降，表明上述药物组合对CRAB具有很好的体外抗菌活性。本研究为临床应用提供了基础试验依据。
参考文献
[1]李永丽.鲍曼不动杆菌多重耐药机制及耐药基因检测研究进展[Ｊ].检验医学，2012，27（11）：963-968.
[2]应春妹，翁文浩.鲍曼不动杆菌多重耐药机制研究进展[Ｊ].检验医学，2007，22（2）：208-211.
[3]袁红萍，周文俊，高卫亚，等.重症监护病房鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌的耐药性监测[J].检验医学，2014，29（1）91-92.
[4]王文丁，胡龙华，熊建球，等.头孢哌酮／舒巴坦对临床常见革兰阴性菌体外抗菌活性的分析[J].中华医院感染学杂志，2009，19（20）：2772-2773.