导读:本文包含了反向重复论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:MITEs,来源,转座机理,基因调控
反向重复论文文献综述
侯锦娜,刘永娟,安素妨,常丽,李保全[1]（2017）在《植物中微型反向重复转座元件(MITEs)在作物遗传研究中的应用进展》一文中研究指出MITEs(Miniature Inverted-repeat Transposable Elements),是最近发现的几乎在所有生物基因组中广泛分布的一类非自主型DNA转座元件,对基因组的结构和基因表达都有重要的影响。研究发现MTIEs的插入影响了许多重要农艺性状,在作物遗传研究中的应用价值也逐渐显现。为了更好地将这一转座元件利用于作物遗传研究和改良过程,文章概述了MITEs的发现及结构特点,对根据其特点进行预测的分析软件和数据库进行了总结;对MITEs在基因组中的分布特点进行了归纳,发现其在基因组中拷贝数众多,并多在近基因区分布;总结了MITEs同其来源的自主型转座子间的对应关系及转座活性的激活和在基因组中的扩增模式;MITEs对基因表达调控主要通过两种途径:即通过插入改变基因的结构从而影响基因表达和表观遗传水平的调控途径。同时对目前已有的MITEs在作物遗传分析,如开发分子标记,改良性状,构建突变体库等方面进行了总结归纳。(本文来源于《中国农学通报》期刊2017年26期）
李春川,潘孝明,王静,董平,李敬[2]（2016）在《反向重复序列DNA的PCR扩增特性研究》一文中研究指出旨在研究反向重复序列形成的发卡结构对模板扩增的影响。研究DNA发卡结构中环部大小、茎部长度、引物相对于茎部位置等对PCR扩增效率的影响,探讨如何通过引物设计及改变退火温度等条件来实现发卡结构DNA的有效扩增的方法。结果显示,如果引物的位置同发卡结构茎部5'序列相同或部分相同,则由于发卡结构的形成阻碍引物与模板结合而对PCR产生抑制作用,并且抑制作用随着茎部长度的增加而增强;当环部的长度达到50 nt以上时,抑制作用明显减弱。较高的退火温度和引物浓度都有助于引物同分子内形成发卡结构的竞争,使PCR扩增更容易进行。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年12期）
孙海悦,张志宏[3]（2014）在《苹果微型反向重复转座元件(MITE)的分离与鉴定》一文中研究指出【目的】从苹果基因组中分离微型反向重复转座元件(MITE),研究其对苹果基因组进化的作用。【方法】利用PIF转座酶简并引物扩增苹果PIF转座酶基因,采用染色体步移技术获得PIF转座酶基因的未知侧翼序列,使用EMBOSS的Eiverted软件查找靶位点重复(target site duplication,TSD)和末端反向重复(terminal inverted repeat,TIR)序列。【结果】苹果MITEs拥有MITEs的典型特征,包括长度短,不具有潜在的编码能力,富含A+T,易插入非编码区,有TIRs和TSDs,有形成二级结构的可能。【结论】苹果MITEs属于Tourist家族,与苹果PIF DNA转座子相关;苹果MITEs与基因相连,在基因调节上起重要作用;苹果MITEs具有潜在的转座能力,对苹果遗传多样性、进化及育种有重要作用。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2014年08期）
朱娉婷[4]（2013）在《转染登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列的BHK-21细胞沉默病毒复制研究》一文中研究指出登革病毒(dengue rivus, DENV)属于黄病毒科(Flavivirade)黄病毒属(Flavi virus),由其感染所引起的疾病包括：登革热(dengue fever, DF),登革出血热(dengue hemorrhagic fever, DHF)和登革休克综合症(dengue shock syndrome, DSS)。严重的登革出血热(登革出血热和登革休克综合症),20世纪50年代在菲律宾和泰国登革热流行期间被首次确认。截止至2012年11月WHO报告,近几十年来,世界各地的登革热发病率大幅增长。世界上二分之一的人口,非洲,美洲,东地中海,东南亚和西太平洋地区超过100个国家处于登革热流行的威胁中,2008年,美洲、东南亚和西太平洋地区的国家登革热病毒感染报告病例数120万,而到2010年,报告病例数上升至230万,最近报告病例仍在持续增加[2]。登革热不仅发病率和病死率呈上升趋势,而且暴发疫情的地区也呈扩大化的趋势,以前从未发现过登革热疫情的国家遭受登革病毒的威胁。登革热在2012年被WHO列为传播速度最快的媒介传播病毒性疾病,它具有在世界上出现流行的可能性。全世界需要改变应对方式,并实施可持续性预防措施。登革热成为全球关注的热点。目前控制登革热的方法主要是用化学方法控制传播媒介,这种方法对登革病毒的预防和控制发挥了举足轻重的作用。然而,随着杀虫剂等化学制剂的广泛应用,这种方法亦产生许多的负面影响：蚊虫产生抗药基因,破坏环境—化学制剂残留于环境中。同时,由于热带和亚热带地区城市化进程加快以及国际间交流的增加导致白纹伊蚊活动范围扩大[5-7],登革病毒的疫区产生扩大化趋势。因而,有学者指出,应对登革病毒传播需要有效的新策略。如加紧致力于新型有效疫苗的研发,通过基因修饰或操纵传播媒介等。通过基因修饰传播媒介,改变病毒感染的宿主易感性,从而达到媒介中病毒复制的降低或消除,这种方法称为源于病原体的抵抗(pathogen-derived resistance, DPR)[8-9]。 DPR最早在植物中发现,合成的烟草花叶病毒外壳蛋白在转基因植物中的表达有效地保护了植物来自同源病毒的攻击。这种现象后来被命名为RNA干扰效应。RNA干扰是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象,RNAi被发现广泛存在于生物界,从低等原核生物、真菌、无脊椎动物、哺乳动物中也发现了此种现象。RNAi抗病毒的效应已在多种媒介昆虫中发现,Ronald P. van Rij[10]等发现,黑腹果蝇中RNAi途径中关键酶Ago-2缺陷株体内病毒RNA呈高水平累积；Vargas[11]等通过敲除RNAi途径中的AGO-2、Dcr-2和R2D2的表达后,能增加登革Ⅱ型病毒在埃及伊蚊体内的复制。有研究者已开始利用RNAi干扰的技术修饰或改造媒介,使得媒介减少携带或者不携带病毒。Anthony KG等通过引入dsRNA已成功用于抑制西尼罗河病毒(WNV)、日本脑炎病毒(JEV)和黄热病毒(YFV)的复制；Franz AW等经短片段RNA (short interfering RNA, siRNA)改造的转基因蚊有效地阻止病毒的感染和传播；Zhang等通过腺病毒载体转染短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)至哺乳动物细胞内,对DENV-2复制产生干扰效应,抑制病毒的复制。RNAi有望成防控登革病毒感染的新策略。登革病毒的基因组为单股正链RNA分子,约含11000个碱基,具有单一的可读框,编码叁种结构蛋白和七种非结构蛋白,其编码基因顺序为：5'-C-prM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5-3'。其中prM蛋白的切割被认为是未成熟病毒颗粒向成熟病毒颗粒转变的关键步骤,与病毒的装配、成熟和维持病毒的感染性有关。因而,prM被许多研究者选为触发RNAi的效应基因。成功介导RNAi还需稳定高效的表达系统。质粒作为载体导入效应基因有以下优点：可以使用不同的选择性标志；通过构建可诱导的表达系统,可长期稳定进行基因表达；进行大规模基因筛选的成本低。本研究利用能在多种哺乳动物细胞中高效表达的真核表达载pcDNA3.1(+),把登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重复序列克隆到该表达载体,瞬时转染至登革病毒易感性高的BHK-21中初步探讨干扰病毒复制的效果,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评价其抑制病毒复制的效果,为防控登革病毒感染的新策略提供一定的理论基础。目的：1.构建RNAi表达载体：将登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重复序列克隆至能在多种哺乳动物细胞中高效表达的真核表达载体pcDNA3.1(＋)中。2.构建重组质粒pcDNA-eGFP,转染BHK-21细胞,测定转染效率。3.转染登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列至BHK-21细胞,半定量PCR和实时荧光定量PCR评价重组质粒抑制病毒复制的效果。方法：1.乳鼠内接种登革Ⅱ型病毒,提取病毒total RNA。2.正义和反义引物两端分别加上Xho I和EcoR I的识别位点,以提取的totalRNA为模板,经RT-PCR扩增的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM。3.于另一对正义和反义引物两端引入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR扩增prM全长基因片段插入pMD18-T-vector中,形成含有正向序列的重组质粒pMD18-T-prM。4.限制性内切酶NheⅠ和Kpn I分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。5.扩增增强型荧光蛋白基因片段(eGFP),克隆至pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA-eGFP。6.重组质粒pcDNA-eGFP转染BHK-21细胞,观察转染效率。7.BHK-21细胞繁殖登革Ⅱ型病毒,收集病毒液。8.免疫荧光检测登革病毒感染BHK-21细胞。9. TCID50方法测定收集的病毒液滴度。10.筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA和空质粒pcDNA3.1(+)用脂质体法转染至BHK-21细胞中。11.登革Ⅱ型病毒攻击细胞,染毒后不同时间收集细胞total RNA。12.半定量PCR检测NS3基因的表达,以评估病毒复制水平。13.实时荧光定量PCR检测细胞内病毒载量,评估细胞内病毒复制水平。14.实时荧光定量PCR检测NS1基因表达,评估病毒复制水平。结果：1.收集接种登革Ⅱ型病毒乳鼠鼠脑病毒液并提取病毒RNA。2. RT-PCR反应扩增前膜蛋白全长基因,扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可见单一条带,扩增效果较好,其大小约600bp,与理论值基本相符,测序结果提交至NCBI进行比对,同源性达97%。3.构建的重组载体pMD18-T-prM, pcDNA-asprM和含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA,经限制性内切酶进行酶切均可见特异的酶切条带。4.成功扩增增强型荧光蛋白基因eGFP序列,经测序证实重组质粒pcDNA-eGFP中的eGFP cDNA序列与质粒pEGFP-N质粒(Gene blank accession:#U55762)中的EGFP cDNA序列一致,成功构建了重组质粒pcDNA-eGFP。5.成功在本室建立登革Ⅱ型病毒感染BHK-21细胞模型,收集病毒液经TCID50测得的滴度为106.48TCID50/0.1ml。6.重组质粒pcDNA-eGFP转染BHK-21后,在细胞内有增强型荧光蛋白表达,并初步测定转染率：在24h、48h、72h和96h转染率分别为36.3%、45.0%、31.6%和31.3%。7.在不同时间点收集经DENV-2攻击的实验组、空白对照组和阳性对照组细胞中的RNA,半定量PCR检测NS3mRNA的表达。扩增的NS3基因电泳带存在明显差异。Glyko BandScan分析NS3和内参GAPDH灰度的比值,结果显示,48hpi和60hpi,实验组、空白对照组和阳性对照组的NS3mRNA表达量基本相同,在96hpi,实验组和阳性对照组间mRNA表达量存在差异,实验对照组的NS3表达水平比阳性对照组降低28%。8.建立荧光定量PCR检测DENV2的方法：扩增NS1基因和内参GAPDH,阳性扩增曲线整体平行性好,基线平坦,曲线光滑,拐点清楚,呈S形,重复性好；收集的溶解曲线峰型单一,只有一个主峰。表明所采用的反应体系和引物的扩增效率、特异性和模板的量都是合适的；利用登革Ⅱ型病毒的非结构蛋白NS1基因,构建了检测登革Ⅱ型病毒的标准品,在标准曲线的基础上,可以检测出待测标本中病毒的拷贝数。9.在不同时间点收集经DENV-2攻击的实验组和阳性对照组BHK-21细胞中的RNA,应用FQ-PCR检测细胞内病毒载量的变化。结果显示,在48hpi内,实验组和对照组细胞内病毒载量变化不大,在72hpi,两组细胞内病毒载量达到峰值,但实验组病毒量与对照组相比,病毒拷贝数少1.44倍。在96hpi,实验组病毒载量比阳性对照组病毒载量降低26.7%。10.在不同时间点收集经DENV-2攻击的实验组和阳性对照组BHK-21细胞中的RNA,应用FQ-PCR检测细胞内NS1表达水平的差异。归一化值结果显示病毒感染96h后,实验组中NS1表达量与阳性对照组比较显着降低(P<0.05),其余两个时间点(48h、60h)NS1表达量的组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：成功克隆登革Ⅱ型病毒前膜蛋白反向重复序列的重组质粒；登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的效果；为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。(本文来源于《南方医科大学》期刊2013-06-30）
陶现明[5]（2013）在《四核苷酸重复序列恒温扩增特性及基因组中反向重复序列特点的研究》一文中研究指出简单重复序列广泛存在于多种生物基因组中，同分子进化、基因调控和某些遗传疾病密切相关，广泛用作遗传标记和遗传作图，其生物学意义越来越受到人们的重视。研究显示，许多简单重复序列（包括四重复序列）易于扩增变长，某些重复序列的异常延伸是造成一些遗传疾病的直接原因。然而，对四重复序列扩增特性和机理的研究报道很少。为系统研究其扩增特点，本研究首先选取了有代表性20nt的60种四重复和6种二重复单链，综合探究了它们在嗜热DNA聚合酶作用下等温扩增的特点。探讨了反应温度、对应双链模板的Tm、时间、序列、浓度、酶种类等因素对扩增特点和产物长度的影响。此外，还对非回文单链中部分回文序列对扩增的影响和某些五、六、七、八重复单链序列的扩增特点进行了简单分析。接下来，以互补非回文四重复单链混合成的双链和回文序列为对象，简单分析了重复双链扩增的特点。最后，受反向重复序列(Inverted Repeat，IR；Inverrted Repeats，IRs)极大提高重复单链扩增能力的启示，利用Matlab编写IR搜索程序然后，搜索了某些病毒、大肠杆菌和酿酒酵母基因组序列和人部分染色体片段中的IR，对其特点进行了分析。四重复单链扩增结果显示：多数单链模板能扩增变长，即使链内没有互补碱基的序列也可被扩增，如(AGGA)5；非回文单链产物呈弥散条带，回文单链在某些条件下产物分子量比较集中；回文单链扩增强于非回文单链，前者初始扩增就很快，后者先慢后快；二重复单链比相同碱基组成的四重复单链有更宽的适于扩增的温度范围；G和C含量多的单链较G和C含量少的序列更易扩增，而且G和C含量越多越适于在较高的温度下扩增；重复单位含两相同嘧啶的链多数比其互补链更易扩增；70℃下产物浓度与时间基本呈线性关系。非回文四重复单链在10nM以上才会在16h内有明显扩增，而回文序列在低至10pM时仍能在短时间内明显扩增；常温聚合酶Klenow片段不能有效扩增四重复序列，而嗜热聚合酶的扩增活性具有序列偏好性；四重复单链的有效扩增需要在一定的酶浓度之上，回文序列的必须酶浓度更低。互补序列加入非回文四重复单链后扩增能力得到极大提高，在3’端易生成小分子，在5’端则易生成大分子。五、六、七、八重复单链的扩增结果显示：回文单链的扩增能力依然很强，非回文单链的扩增普遍较弱；重复单位与回文序列仅差1个碱基的非回文序列扩增能力极大减弱；重复单位中相同的碱基变化对不同序列的影响不同。限制性酶切产物结果显示，扩增产物与模板具有相同的重复单位，是重复序列的简单延伸。最后，根据实验结果和相关文献，提出了链内滑动扩增和发卡DNA介导扩增两阶段的重复序列单链扩增模型，以对重复序列非特异扩增和相关疾病发生机制的研究提供参考。四重复双链的扩增结果显示：二重复非回文双链比绝大多数四重复非回文双链扩增更强，且产物长度随时间增加的趋势更明显；重复序列双链比相应的单链在短时间（3h）内的扩增更快；四重复双链产物也呈弥散条带，某些产物长度随时间递增；双链模板的最适扩增温度与其Tm相近，故含GC多的最适扩增温度更高；G-C在双链中的分布影响序列的扩增能力；相同碱基组成的模板具有相似的扩增特点，如产物浓度随时间的变化趋势。聚合酶对序列也有偏好性，且嗜热聚合酶比常温聚合酶(Klenow)对模板的扩增活性更高。扩增产物是与双链模板具有相同重复单位的串联重复序列。最后，用编写的程序对某些病毒、大肠杆菌和酵母基因组及人部分染色体片段序列中的IR进行了搜索，具体以序列长度（L）、IR数目（N）及密度（pN）、完配IR数目（mN）及比例（rmN）、IR两端间隔（G）、IR臂长（A）、臂长中互补部分比例（rmA）及互补碱基对中的A-T比例（mrAT）等为指标进行统计分析。病毒组各项指标变化较大：IR密度0.003-0.017、完配IR比例0.17-0.64、两端间隔22.0-42.2、臂长8.8-18.8、匹配碱基对中A-T比例0.16-0.81。这从侧面反映了不同病毒为了适应各自环境而获得了显着不同的基因组序列。不同大肠杆菌菌株染色体的各项IR指标具有一致性：IR密度相对较小（0.008），臂长较短（11.0）、配对碱基对中A-T相对较少（0.51）。而其质粒比染色体具有相对较大的IR密度（0.01）、完配IR比例（0.48）和匹配碱基对中的A-T比例（0.55）。酵母各染色体指标几乎相同，如间隔略大（37.0）、配对碱基对中A-T更多（0.72）。酵母线粒体的具有鲜明的特点：IR密度很大（0.04），平均每25个碱基就会有一个IR；完配IR的比例（0.14）和两端间隔较小（25.0）但臂长更长（33.1），臂的匹配部分更小（0.84），匹配碱基对中A-T更多（0.94）。由于选取的随机性，人的各染色体片段的各指标具有一定的跨度，平均来看：IR密度略大（0.01）、完配IR相对略少（0.42）、IR两端间隔较小（34.7）、IR臂偏长（多数在12以上），臂的匹配碱基对中A-T较多（0.63）。特别的，第4、8、12、13尤其22号染色体片段中含有很多臂长在200bp以上的IR。多数实验序列比同碱基组成的随机序列含有更多的IR，而某些病毒倾向于含有更少的IR。多数序列IR随间隔的分布与随机序列具有显着的差异，这应该受到了总IR数差别的影响，同时也是生物序列中IR特点的突出表现。前两部分实验希望为重复序列的体外扩增特性和机理的研究提供材料。通过搜索某些基因组中的IRs，希望能为生物基因组中序列组成和IR存在状态的研究有所帮助，进一步揭开某些序列体内异常扩增的秘密。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2013-06-08）
朱娉婷,潘京,郑学礼[6]（2013）在《登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用》一文中研究指出目的构建含有登革Ⅱ型病毒(DENV-2)前膜蛋白(prM)基因反向重复序列(irRNA)的重组质粒,评价其抑制病毒复制的效果。方法 DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR扩增的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR扩增prM全长基因片段插入pMD18-T-vector中,形成含有正向序列的重组质粒pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组(P<0.05)。结论 DENV-2 prM反向重复序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2013年05期）
胡恒[7]（2011）在《番木瓜环斑病毒（PRSV）ci和nib反向重复结构表达载体的转化研究》一文中研究指出番木瓜环斑病毒病是番木瓜的第一大病毒性病害,在世界范围内造成较大危害,目前还没有十分有效的化学药剂能控制PRSV病害,只能采取以栽培措施为主的综合防治措施。植物基因工程的快速发展为植物抗病提供了一条崭新而有效的方法,尤其是近年来RNAi领域研究的快速发展,利用反向重复表达载体对植物进行遗传转化成为研究植物抗病毒研究的一大热点。本研究以番木瓜胚状体、黄瓜子叶节作为转化材料,利用农杆菌介导法将反向重复表达载体pHellsgate-CIIR、pHellsgate-NIbIR导入到受体材料中,期望得到转基因植株。同时利用原生质体瞬时表达体系初步研究了反向重复表达载体对目标基因的沉默效果。主要研究结果如下：(1)对番木瓜下胚轴、叶柄、幼胚以及番木瓜愈伤组织进行胚状体诱导,仅从幼胚和愈伤组织上得到了番木瓜胚状体,其中以幼胚诱导产生的胚状体数量多,耗时短,40d左右即能从幼胚中诱导出胚状体,诱导率为20%。(2)以黄瓜子叶节为外植体建立了黄瓜再生体系,使用含有表达载体pHellsgate-CIIR、pHellsgate-NibIR的农杆菌侵染黄瓜子叶节,通过抗生素筛选,得到了黄瓜转化苗。(3)用PRSV病毒粒子与反向重复表达载体pHellsgate-CIIR共转化番木瓜原生质体,12、24、36、48h分别取样,经原生质体总RNA提取、RT-PCR检测,结果显示,对于只转化PRSV的原生质体,24h开始能够检测到病毒ci基因的表达,且随着时间延长,ci基因的表达量逐渐增多；对于PRSV与反向重复表达载体pHellsgate-CIIR共转化的番木瓜原生质体,没有检测到病毒ci基因的表达,说明重复表达载体pHellsgate-CIIR的产物能够抑制ci基因的表达。(本文来源于《华中农业大学》期刊2011-06-01）
公娇芬[8]（2011）在《利用反向重复结构转基因及其侧翼序列转化获得双抗病毒转基因烟草》一文中研究指出RNA沉默在植物上称为转录后基因沉默,是植物固有的一种抵御病毒侵染的机制,它可以使侵染植物的病毒的RNA发生序列特异性的降解,从而使植物获得抗性。为提高植物对病毒的抗性,人们用来源于病毒本身的基因作为转基因材料创造转基因植物。研究证明反向重复结构转基因在植物中有更多机会可以转录形成发夹结构的dsRNA,而dsRNA引发的RNA沉默在RdRp的作用下可以使沉默从双链区向连接在双链上的单链侧翼序列延伸,使双链及其连接在侧翼的单链RNA序列一起发生沉默。本研究通过分别在植物表达载体pRIR202反向重复结构的上游侧翼插入马铃薯X病毒(Potato virus X, PVX)CP基因全长序列构建重组表达载体pRIR202XCP、下游侧翼插入马铃薯X病毒基因组约2kb的单片段基因(包括CP基因至NIB基因的部分序列)构建植物表达载体pRIR202-P2kII,通过农杆菌介导方法转化烟草;研究由反向重复结构引起的RNA沉默能否影响到反向重复转基因结构的侧翼而获得多抗的转基因植物。研究的主要结果和结论如下:1,构建反向重复结构侧翼序列植物表达载体成功构建了植物表达载体pRIR202XCP和pRIR202-P2kII,将所构建的重组植物表达载体pRIR202XCP和pRIR202-P2kII利用液氮冻融法直接导入农杆菌LBA4404和GV3101,转化烟草,获得转基因植株。2,抗病毒转基因烟草的获得及抗病性鉴定转基因pRIR202XCP的植株获得较高抗病行的转基因烟草植株,分子杂交结果证明转基因植株的抗病性是由RNA沉默引起的,证明了由反向重复结构引发的RNA沉默可以有效的影响该重复结构上游侧翼区域而同样引发基因沉默,使转基因植株获得高度抗病性,从而获得了高抗两种病毒病的双抗转基因烟草植株。转pRIR202-P2kII基因也成功获得转基因植株,初步的检测证明外源基因已经转入烟草基因组。而针对第一批移栽苗的初步抗病性测定结果表明有76%的转基因植株表现出对病毒的抗性。初步说明RNA沉默向反向重复结构下游侧翼延伸的有效性。3,通过利用反向重复结构及其侧翼序列共沉默的效应,使所获得的转基因植物具有高抗多种病毒病的特性,更有效的抵抗田间多种病毒病混合侵染造成的经济损失。(本文来源于《山东农业大学》期刊2011-05-01）
胡琼[9]（2010）在《反向重复结构在抗植物病毒上的研究进展》一文中研究指出双链RNA(dsRNA)的形成是启动RNA沉默的关键因子,而插入了反向重复结构的表达载体能有效地转录产生hpRNA,从而能高效启动RNA沉默。分析了反向重复结构构建的特点,综述了近些年利用该结构启动RNA沉默后在抗植物病毒上的研究进展。(本文来源于《生物技术通报》期刊2010年10期）
孔令广,景茂峰,公娇芬,李向东,竺晓平[10]（2010）在《反向重复转基因不同位置侧翼序列诱导的基因沉默差异比较》一文中研究指出RNA介导抗病毒转基因工程被证明是成功的抗病毒转基因工程策略,常用病毒来源的一段序列构建反向重复结构作为转基因材料转化植株,在转基因植株中该结构转录成的dsRNA可以作为激活RNA沉默的起始序列,研究表明RNA沉默在RdRp(本文来源于《中国植物病理学会2010年学术年会论文集》期刊2010-07-03）
反向重复论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
旨在研究反向重复序列形成的发卡结构对模板扩增的影响。研究DNA发卡结构中环部大小、茎部长度、引物相对于茎部位置等对PCR扩增效率的影响,探讨如何通过引物设计及改变退火温度等条件来实现发卡结构DNA的有效扩增的方法。结果显示,如果引物的位置同发卡结构茎部5'序列相同或部分相同,则由于发卡结构的形成阻碍引物与模板结合而对PCR产生抑制作用,并且抑制作用随着茎部长度的增加而增强;当环部的长度达到50 nt以上时,抑制作用明显减弱。较高的退火温度和引物浓度都有助于引物同分子内形成发卡结构的竞争,使PCR扩增更容易进行。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反向重复论文参考文献
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