导读:本文包含了海洋双病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:海洋双RNA病毒,VP2e基因,克隆,表达
海洋双病毒论文文献综述
林建国,胡瑛,王常高,蔡俊[1]（2009）在《海洋双RNA病毒VP2e基因的克隆和表达》一文中研究指出从海洋双RNA病毒(MABV)Y-6毒株基因组中克隆到VP2 e基因,将其连接到GST融合表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。通过温度和诱导物浓度优化试验,经SDS-PAGE和Western-Blot检测表明,在温度为37℃、IPTG浓度为0.1mmol/L时,表达的融合蛋白含量最高,占细菌总蛋白的28.6%。(本文来源于《河南农业科学》期刊2009年07期）
林建国,胡瑛,王常高,蔡俊[2]（2009）在《海洋双RNA病毒(MABV)VP3基因的克隆与表达》一文中研究指出海洋双RNA病毒(MABV)可引起多种海洋生物的腹水病等病症。从MABV基因组中克隆到VP3基因,将其连接到GST融合表达载体pGEX-4T-2上,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。结果表明,在温度为30℃、IPTG浓度为0.8 mmol.L-1时,表达的融合蛋白相对最高,占细菌总蛋白的20.7%。试验结果为该病毒结构蛋白和MABV病毒疫苗研究提供了基础。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2009年06期）
李琼[3]（2009）在《快速检测鱼类淋巴囊肿病毒和海洋双RNA病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用》一文中研究指出淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)广泛分布于世界各地的淡水、半咸水和海水中,可感染9目34科共计140种以上鱼类,是对鱼类危害较为严重的病毒病之一,其感染率可高达80%,死亡率可达30%。本研究根据GenBank登录的淋巴囊肿病毒的主要衣壳蛋白(MCP)基因序列(AB212999),选择其高度保守区域,利用Primer Explorer V3软件进行引物设计,建立了用于检测淋巴囊肿病毒的环介导恒温扩增方法,对LCDV-LAMP反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度并用建立的方法对109尾牙鲆进行了检测。特异性试验证实,该方法只能检测LCDV核酸,与流行性造血器官坏死病毒、虎纹蛙病毒、蛙虹彩病毒、新加坡石斑虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒及对虾白斑综合症病毒都无交叉反应,具有高度的特异性。将LAMP与常规PCR及实时定量PCR的检测限进行比较分析,结果表明LAMP与实时定量PCR的检测限一致约为15龟,比常规PCR灵敏度高10倍。用建立的LCDV-LAMP与常规PCR检测109尾牙鲆样品,结果显示,两者对健康和发病严重的样品检测结果一致,但对无临床症状的样品存在8尾差异;经2次实时定量PCR复检差异样品,均与LAMP一致,表明LAMP较常规PCR的检测灵敏度更高,而且从样品的制备到获得结果仅需2 h,具有检测周期短的优势。以上结果表明,采用LAMP法检测淋巴囊肿病毒具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短等特点,比较适合养殖场、出入境口岸进行淋巴囊肿病毒的现场、即时检测。海洋双RNA病毒(Marine birnavirus,MABV)广泛分布于世界各地的海水中,可感染30科11种软体、4种甲壳动物和10多种鱼类,特别是对鲫幼鱼危害严重的病毒病之一,其感染率可高达85%,死亡率可达62%。本研究根据GenBank提供的海洋双RNA病毒聚合蛋白(polyprotein)的VP2基因序列(D61384),利用PrimerExplorer V3软件进行引物设计,建立了海洋双RNA病毒的反转录环介导恒温扩增方法。对MABV RT-LAMP反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性和灵敏度,并采用优化了的方法对养殖场送检的鲈鱼、真鲷、大菱鲆和牙鲆各30尾进行MABV的检测。结果显示,该方法对MABV核酸有高度的特异性,与染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、鲤春血症病毒、病毒性出血败血症病毒及病毒性神经坏死病毒都无交叉反应。灵敏性试验发现,该方法最低检测限为16.6fg总RNA,与实时定量RT-PCR的检测限一致,但比常规PCR灵敏度高10倍。对养殖场送检的120份样品进行RT-LAMP和实时定量PCR海洋双RNA病毒检测,结果显示两种方法的检测结果完全一致,表明RT-LAMP具有更高的灵敏度。以上结果表明,本研究所建立的MABV RT-LAMP能对海洋双RNA病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高、检测成本低廉等优点,可用于基层实验室和出入境检疫对海洋双RNA病毒属的疫情监测。(本文来源于《华中农业大学》期刊2009-06-01）
林建国,胡瑛,王常高,蔡俊[4]（2009）在《海洋双RNA病毒(MABV)VP5基因的克隆与表达》一文中研究指出从海洋双RNA病毒(MABV)基因组中克隆到VP5基因,将其连接到6×His融合表达载体pET-28a(+)上,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。研究结果表明,在温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol.L-1时,表达的融合蛋白相对最高,占细菌总蛋白的7.3%。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2009年05期）
徐海君,杨章女,林建国,张传溪[5]（2006）在《海洋双RNA病毒(MABV)vp2e和vp3基因在昆虫细胞中的高效表达》一文中研究指出海洋双RNA病毒(Marinebirnavirus,MABV)可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABVY-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中对VP2e和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明,VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8%和8.2%。用HisTag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Westernblot检测,结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样,用HisTag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Westernblot检测,证明融合蛋白表达正确,并且表达产物可溶,易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2006年04期）
海洋双病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
海洋双RNA病毒(MABV)可引起多种海洋生物的腹水病等病症。从MABV基因组中克隆到VP3基因,将其连接到GST融合表达载体pGEX-4T-2上,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。结果表明,在温度为30℃、IPTG浓度为0.8 mmol.L-1时,表达的融合蛋白相对最高,占细菌总蛋白的20.7%。试验结果为该病毒结构蛋白和MABV病毒疫苗研究提供了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
海洋双病毒论文参考文献
[1].林建国,胡瑛,王常高,蔡俊.海洋双RNA病毒VP2e基因的克隆和表达[J].河南农业科学.2009
[2].林建国,胡瑛,王常高,蔡俊.海洋双RNA病毒(MABV)VP3基因的克隆与表达[J].湖北农业科学.2009
[3].李琼.快速检测鱼类淋巴囊肿病毒和海洋双RNA病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用[D].华中农业大学.2009
[4].林建国,胡瑛,王常高,蔡俊.海洋双RNA病毒(MABV)VP5基因的克隆与表达[J].湖北农业科学.2009
[5].徐海君,杨章女,林建国,张传溪.海洋双RNA病毒(MABV)vp2e和vp3基因在昆虫细胞中的高效表达[J].农业生物技术学报.2006