导读:本文包含了坏死样程序性死亡论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蟾蜍灵,人胃癌细胞,程序性坏死
坏死样程序性死亡论文文献综述
宫鹏超,李艳兰,孔翠翠,田昕[1]（2019）在《蟾蜍灵通过程序性坏死途径诱导人胃癌细胞SGC-7901死亡》一文中研究指出目的探讨蟾蜍灵(Bufalin)诱导人胃癌SGC-7901细胞死亡过程中程序性坏死途径的发生机制。方法体外培养SGC-7901细胞,于对照组加入RPMI 1640培养液,实验组加入不同浓度的蟾蜍灵(50、100、150、200 nmol/L),对照组与实验组细胞继续培养48 h。MTT法检测细胞活性,DAPI染色法观察细胞核形态改变,透射电镜观察细胞膜及细胞核改变,流式细胞术检测细胞坏死率,Western blotting法检测程序性坏死关键蛋白受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIP1)的表达。结果 MTT实验结果表明,蟾蜍灵对SGC-7901细胞的生长具有显着的抑制作用(P <0. 05)。通过透射电镜可以观察到细胞坏死时的特征性改变,如细胞膜破裂、细胞内空泡的产生以及细胞器的崩解。DAPI染色显示,蟾蜍灵(100 nmol/L)处理细胞48 h后,无明显细胞凋亡特征性改变,如细胞核固缩、核碎裂、凋亡小体形成。与对照组相比细胞坏死率升高(P <0. 05)。蟾蜍灵对程序性坏死途径关键蛋白RIP1的表达有促进作用(P <0. 05)。结论蟾蜍灵通过程序性坏死途径诱导SGC-7901细胞死亡。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2019年02期）
磨洁琳[2]（2018）在《程序性坏死参与锰致神经元死亡机制的研究》一文中研究指出锰是公认的急、慢性蓄积性神经毒素,锰中毒可产生类似于帕金森样中枢神经损伤的症状且脱毒后症状持续存在,原因在于锰在大脑聚积诱发特定区域的神经细胞死亡和功能丧失,进而使中枢神经发生退行性变。锰中毒诱发的神经细胞死亡方式包括凋亡、自噬及坏死叁种形式,目前锰中毒的神经元死亡机制研究主要集中于神经元凋亡。近年的研究表明,细胞的坏死也具有细胞内特定的信号转导系统,与受体相互作用蛋白3(Receptor interacting protein 3,RIP3)密切相关,RIP3被认为是调节依赖于RIP1介导的细胞凋亡与坏死间发生转换的关键因子。这一RIP3和混合系列激酶样结构域蛋白((Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)的顺序激活诱导的可调控性细胞死亡称为程序性坏死(Necroptosis)。我们前期的实验证实锰中毒可诱发神经元的坏死,坏死细胞的超微结构表现为趋向于凋亡细胞的形态特征,提示锰中毒诱导的神经元坏死可能具有程序性坏死的调节机制,而锰诱导的细胞坏死是否与Necroptosis有关,目前尚无报道。本研究拟通过体内、外实验,运用细胞凋亡Caspase抑制剂zVAD-fmk和程序性坏死信号通路的特异性阻滞剂necrostatin-1(Nec-1)、RNA干扰等研究策略,探讨RIP3介导的程序性坏死信号通路在锰致神经元死亡中的作用。方法(一)zVAD-fmk、Nec-1对染锰SK-N-SH细胞的影响(1)以400 uM MnCL_2.2H_2O建立SK-N-SH细胞染锰模型,然后应用不同浓度zVAD-fmk、Nec-1进行干预。取对数生长期SK-N-SH细胞进行干预,分为Control group、400μmol/L Mn、0.5μmol/L zVAD-fmk、2μmol/L zVAD-fmk、60μmol/L Nec-1、120μmol/L Nec-1、Mn+0.5μmol/L zVAD-fmk、Mn+2μmol/L z VAD-fmk、Mn+60μmol/L Nec-1、Mn+120μmol/L Nec-1共10组,通过观察细胞形态、MTT法及流式细胞术观察染锰与药物干预对SK-N-SH细胞存活、凋亡及坏死的影响;(2)取对数生长期细胞分成5组,分别为Control group、200μmol/L Mn、400μmol/L Mn、400μmol/L Mn+0.5μmol/L zVAD-fmk、400μmol/L Mn+120μmol/L Nec-1,通过Western blot检测RIP3的蛋白表达量变化、DCFH-DA探针检测各组细胞ROS的生成情况。(二)慢病毒介导RIP3 RNAi对染锰SK-N-SH细胞的影响(1)构建慢病毒介导的RIP3 RNAi SK-N-SH细胞株;(2)降低(Knock down,KD)SK-N-SH细胞的RIP3基因表达后,进行染锰实验,并进行Nec-1干预。具体分组为:空白SK-N-SH细胞组(Control group),SK-N-SH细胞染400μmol/L Mn组,RIP3 Scrambled细胞组(NC),RIP3 RNAi细胞组,RIP3 RNAi细胞+Mn组,RIP3 RNAi细胞+Mn+120μmol/L Nec-1组。通过MTT法、流式细胞术检测RIP3表达降低后染锰及Nec-1干预对SK-N-SH细胞存活、凋亡及坏死的影响;Western blot检测各组RIP3和磷酸化MLKL的蛋白表达变化。(叁)Nec-1对亚急性锰暴露大鼠黑质和海马的影响(1)Sprague Dawley(SD)大鼠60只分为对照组、Nec-1对照组、锰中毒组和Nec-1干预锰中毒组。所有动物均先通过手术作侧脑室埋管,然后通过腹腔注射锰溶液建立亚急性锰中毒模型(15 mg/kg,5天/w,共4w),同时对药物干预组给予侧脑室内注射Nec-1(19.28 mmol/L,5μL/次,3次/w,共4w),染锰及干预结束后拔除侧脑室置管,连续饲养动物两周;(2)大鼠经灌注固定后,免疫组织化学法观察黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞和海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞表达的变化,透射电镜观察海马神经元细胞的超微结构变化;(3)大鼠经颈椎脱臼法处死动物,取黑质组织,PCR荧光定量法检测RIP3、Bcl-2、Caspase3、NOX2和NOX4基因的表达。结果(一)程序性坏死抑制剂Nec-1可减少染锰SK-N-SH细胞的死亡(1)与对照组相比较,人SK-N-SH细胞染锰24h后,细胞胞体皱缩变圆、突起回缩变短、胞浆内可见大量泡沬状改变;0.5μmol/L zVAD-fmk及Nec-1干预染锰细胞后,细胞密度较染锰组有所增高,胞体病理变化程度减轻,突起重新形成丰富网络,泡沬状改变的细胞减少。(2)细胞存活率随染锰浓度升高而降低;400μmol/L Mn组及Mn+2μmol/L zVAD-fmk组的细胞存活率较对照组低(P<0.05),而0.5μmol/L zVAD-fmk及Nec-1干预后可提高染锰细胞存活率(P<0.05)。(3)与对照组比较,染锰细胞凋亡及坏死率均明显升高(P<0.05);0.5μmol/L zVAD-fmk干预染锰细胞可降低细胞凋亡率(P<0.05),但坏死率较对照组升高(P<0.05);Nec-1干预可降低染锰细胞坏死率(P<0.05),但凋亡率较对照组有所提升(P<0.05)。(4)与对照组比较,染锰组RIP3蛋白表达量上调,zVAD-fmk及Nec-1干预后RIP3蛋白表达稍降低,但与染锰组无显着性差异。(5)与对照组比较,染锰细胞强荧光细胞数目多(P<0.05),说明ROS产生增多,zVAD-fmk干预组与染锰组无明显差异,而Nec-1干预组强荧光细胞数目减少(P<0.05)。(二)慢病毒介导RIP3 RNAi可降低染锰SK-N-SH细胞的死亡率(1)成功建立慢病毒介导的RIP3 RNAi SK-N-SH细胞株。(2)与染锰SK-N-SH细胞组比较,RIP3-KD SK-N-SH细胞染锰后细胞存活率升高(P<0.05)。染锰RIP3-KD细胞的坏死率较染锰SK-N-SH细胞组显着下降(P<0.05),与nec-1干预染锰RIP3-KD细胞组无明显差异。(3)与对照组比较,SK-N-SH细胞染锰后RIP3蛋白表达及MLKL磷酸化水平升高(P<0.05),而RIP3-KD细胞RIP3蛋白表达及MLKL磷酸化降低(P<0.05),蛋白表达量在染锰前后无明显差异。(叁)Nec-1可保护亚急性锰暴露大鼠神经元(1)与对照组比较,锰中毒组大鼠黑质TH阳性细胞数无明显下降,与其余各组比较无显着性差异;锰中毒组大鼠海马CA1区GFAP阳性细胞明显增多(P<0.05);Nec-1可以减少锰中毒大鼠海马GFAP阳性细胞数,两组比较有统计学差异(P<0.05)。(2)与对照组比较,亚急性锰暴露组大鼠海马电镜下可观察到坏死神经元(胞体肿胀透亮,细胞器稀疏,胞核染色质浓聚、边集,核膜溶解)和凋亡神经元(胞体皱缩且电子密度增高,核膜不规则,核质浓缩边聚,胞质呈泡沫状改变),线粒体嵴间隙变宽、崩解,神经突起水肿,突触间隙模糊。Nec-1干预可减轻细胞肿胀程度和神经突起水肿程度,坏死神经元胞内残存的细胞器增多,形态表现不典型,线粒体完整但嵴间隙稍有扩大。(3)与对照组比较,染锰大鼠Caspase-3基因呈高表达且Bcl-2基因表达显着降(P<0.05),NOX4基因表达升高(P<0.05);与染锰组比较,Nec-1干预组NOX4基因表达显着降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)程序性坏死参与了染锰的SK-N-SH细胞死亡;由RIP3介导的信号转导机制与染锰SK-N-SH细胞的程序性坏死有密切关系;(2)Nec-1的干扰能在一定程度上保护亚急性锰暴露的大鼠神经元,减少海马神经元的死亡,机制可能与其拮抗神经元程序性坏死的发生、抑制星形胶质细胞增生及降低中枢神经的炎症反应等机制有关。(本文来源于《广西医科大学》期刊2018-06-01）
赵磊[3]（2018）在《程序性坏死在氧化应激诱导髓核细胞死亡中的作用及机制研究》一文中研究指出第一部分程序性坏死参与氧化应激诱导髓核细胞死亡的研究目的:研究氧化应激条件下的髓核细胞是否发生程序性坏死,并探讨其可能机制。方法:选取第2代大鼠胸腰段椎间盘髓核细胞,分别用不同浓度H_2O_2处理不同时间,采用cell counting kit-8(CCK-8)评估细胞活性,选择适宜的浓度和时间用于后续实验。通过倒置相差光学显微镜观察细胞形态学变化,Annexin V/propidium dide(PI)染色和Hoechst 33258/PI染色分别检测PI阳性率,透射电镜观察细胞超微结构变化,RT-PCR及Western Blot检测RIP1、RIP3的基因及蛋白表达变化。此外,使用Nec-1、基因沉默进一步评估坏死性凋亡对细胞活性及死亡率的影响,免疫组化检测正常及退变椎间盘中RIP1,RIP3蛋白表达差异。结果:H_2O_2呈剂量和时间依懒性降低髓核细胞活性。随着H_2O_2浓度升高,呈现死亡形态的细胞明显增多,PI阳性率逐渐升高,细胞超微结构呈现坏死样改变。RIP1和RIP3基因及蛋白表达均明显增高。而Nec-1预处理能够明显抑制H_2O_2诱导的细胞活性下降、死亡增多、PI阳性率升高及坏死样超微结构改变。转染SiRNA-RIP3能够降低H_2O_2诱导的细胞死亡,而SiRNA-RIP1效果则相反。人体标本免疫组化结果证实,与正常髓核组织相比,退变髓核内RIP1、RIP3蛋白表达水平明显较高。结论:RIP1/RIP3介导的程序性坏死参与H_2O_2诱导的髓核细胞死亡,而RIP1的作用可能具有两面性,适度表达则可能促进细胞存活,过度表达促进程序性坏死发生。调控程序性坏死有望为降低氧化应激诱导的髓核细胞死亡,进而为椎间盘退行性变的防治提供全新的策略。第二部分氧化应激诱导髓核细胞发生程序性坏死的机制研究目的:探讨RIP1/RIP3介导的髓核细胞程序性坏死与PARP-AIF信号通路相互关系。方法:选取第2代大鼠胸腰段椎间盘髓核细胞,在H_2O_2(250μM)处理24 h后,荧光探针JC-1染色后流式及激光共聚焦检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化情况,荧光探针H2DCF-DA染色后流式及激光共聚焦检测细胞活性氧(ROS)水平改变。Western Blot检测PARP、PAR、线粒体和细胞核AIF蛋白表达情况,酶标仪检测PARP酶活性变化,AIF免疫荧光染色后激光共聚焦观察AIF转位,CCK-8检测细胞活性,PI染色检测细胞死亡率。此外,利用RIP1特异性抑制剂Nec-1,PARP特异性抑制剂DPQ,以及基因沉默进一步评估程序性坏死对细胞活性及死亡率的影响。结果:H_2O_2作用24h后,氧化应激指标ROS明显升高,线粒体膜电位明显下降,提示H_2O_2条件下氧化应激水平升高,线粒体功能严重受损。而Nec-1明显抑制H_2O_2诱导的ROS升高,线粒体膜电位下降,表明Nec-1能够降低H_2O_2诱导的氧化应激水平升高,减轻线粒体功能紊乱。随着H_2O_2浓度增加,PARP蛋白表达逐渐下降,裂解的PARP(C leaved-PARP)蛋白表达逐渐升高,PARP酶活性及PAR蛋白表达水平明显升高,线粒体AIF蛋白表达水平逐渐下降,细胞核AIF蛋白表达水平逐渐升高。而Nec-1、SiRNA-RIP3能明显抑制PARP活性及蛋白表达变化,SiRNA-RIP1则相反。DPQ明显抑制线粒体AIF下降和细胞核AIF升高,SiRNA-AIF能够明显减轻细胞死亡,提高细胞活性。结论:PARP-AIF途径作为RIP1/RIP3的下游途径,在H_2O_2诱导髓核细胞程序性坏死过程中可能发挥关键性作用。调控氧化应激条件下髓核细胞RIP1/RIP3-PARP-AIF信号通路有望为降低氧化应激诱导的髓核细胞死亡,进而为延缓甚至逆转IVDD提供新的策略与思路。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
李崧[4]（2018）在《程序性坏死在辐射诱导的细胞死亡中的作用与肿瘤异质性对放射敏感性的影响》一文中研究指出放射治疗是盆腹腔肿瘤重要的治疗手段,放射治疗在快速发展的同时,仍面临着一些挑战。一方面,肿瘤周围健康组织不可避免地暴露于放射线下从而引起早期炎症反应,最终引起后期结构和功能的改变。另一方面,由于肿瘤异质性的存在,导致肿瘤对于放疗的敏感性存在异质性,在肿瘤放疗过程中,仍存在固有或获得性的放疗抵抗。电离辐射通过损伤细胞DNA引起细胞以多种形式死亡,其中辐射诱导的细胞程序性死亡机制当中,细胞凋亡被广泛研究。而细胞坏死长期以来被认为是一种细胞被动死亡的方式,最近的研究进展显示细胞中存在着控制坏死的专用分子通路而使得这一观点被重新审视。程序性细胞坏死(Necroptosis)是一种主动调节细胞坏死的机制,主要通过受体蛋白互作的两个蛋白激酶RIP1(receptor interacting protein kinase 1)和 RIP3 传递死亡信号,募集并磷酸化 MLKL(mixed lineage kinase domain-likeprotein)从而执行程序性细胞坏死。程序性坏死发生时细胞膜发生破裂,细胞内容物会释放到周围组织中,作为损伤相关分子模式被免疫系统识别从而产生炎症反应。然而程序性坏死是否参与辐射诱导的细胞死亡仍不清楚,进一步阐明辐射诱导的细胞程序性死亡机制能够为减轻放疗带来的副作用以及为肿瘤放疗增敏提供新的思路。本实验对程序性坏死是否参与辐射诱导的细胞死亡进行了探索。首先,我们将MLKL基因敲除的小鼠进行7Gy全身照射,观察MLKL的敲除对小鼠照射后生存率的影响,发现MLKL的敲除会使小鼠对照射更加敏感。观察记录照射后小鼠体重变化,检测脏器系数、血常规、组织病理和免疫组织化学等指标,我们发现MLKL敲除小鼠的脾脏、胸腺和肾脏在照射后损伤更加严重。其次,我们利用CRISPR-Cas9系统构建了 RIP1与MLKL敲除的小鼠黑色素瘤B16细胞系以及MLKL敲除的小鼠结肠癌MC38细胞系,进行照射后克隆形成的检测;以及在敲除MLKL的细胞系中加入zVAD-FMK联合照射,然而MLKL的敲除对于细胞的克隆形成率未产生显着影响。我们进行了体内实验的验证,发现MLKL基因对移植瘤的生长以及放射敏感性没有影响。最后,我们利用基因表达谱芯片(Microarray)的方法检测MLKL敲除后细胞差异化表达基因。我们筛选出了 Peli1基因,在B16细胞中敲除MLKL后Peli1的转录水平受到下调,并对该结果进行了 RT-qPCR和Western blot的验证。综合以上实验,我们推断,程序性坏死执行蛋白MLKL参与辐射诱导的细胞死亡,但其具体的作用机制仍需进一步探究。乳腺癌的异质性对其有效治疗提出了挑战,解决乳腺癌异质性的问题需要更加深入理解肿瘤发生和发展的机制。目前用于解释肿瘤内异质性的模型有肿瘤干细胞,克隆演进和肿瘤细胞去分化重编程。在本研究中,我们提出了一种新的模型用来解释肿瘤内异质性的形成,即癌症传播模型。我们发现被癌基因转化的乳腺癌细胞(MCF10A.NeuT)当与正常的乳腺上皮细胞(MCF10A)共培养时,能够将后者转化。转化后的MCF10A细胞表现出癌细胞的特性,包括增殖和迁移能力增强,顶端—基底极性的丧失以及形成紊乱的腺泡结构。与亲代细胞相比,转化的MCF10A细胞显示出不同的EMT特征。来自癌细胞的条件培养基也足以诱导正常细胞的癌性转化,癌细胞分泌的细胞因子可能参与该过程。我们使用细胞因子芯片进一步筛选并确定了 MCF10A.NeuT细胞与MCF10A细胞差异表达的细胞因子。此外,与MCF10A.NeuT细胞相比,转化的癌细胞对于放射治疗更加耐受。这些结果拓展了我们对癌症进展过程中异质性发展机制的理解,并且使用这种新的模型分析临床样本有助于我们在癌症干预过程中设计新的治疗方法。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-01）
邓祥发,刘丹丹,磨洁琳,陆彩玲,何莲瑜[5]（2017）在《锰暴露诱导SK-N-SH细胞发生程序性坏死和凋亡两种死亡方式的比较研究》一文中研究指出目的比较研究程序性坏死和凋亡的两种方式在锰暴露诱导SK-N-SH细胞死亡中的作用。方法体外培养人SK-N-SH细胞,将对数生长期细胞予以400μmol/L剂量的MnCL_2.4H_2O染毒,半小时后予以不同剂量的zVADfmk和Nec-1干预作用24小时,观察细胞形态变化,MTT法和流式细胞法分别检测两种药物干预后细胞存活度、细胞凋亡率及坏死率的变化。结果与对照组比较,SK-N-SH细胞染锰24小时后,细胞胞体皱缩变圆、突起回缩变短、可见大量泡沬状改变,细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡及坏死率均明显升高(P<0.05);与染锰组比较,zVAD-fmk 0.5μmol/L及Nec-1干预组细胞的病理形态均有改善,Nec-1干预可提高染锰细胞的存活率并降低其坏死率(P<0.05),高剂量Nec-1干预的效果最明显。结论在本试验条件下,细胞凋亡与程序性坏死的作用方式均参与了锰暴露诱导SK-N-SH神经的死亡;相比于细胞凋亡,抑制程序性细胞坏死的作用方式对拮抗锰对SK-NSH细胞的毒性作用效果更佳。(本文来源于《现代预防医学》期刊2017年23期）
李健,范铮,张立亚,王勇强,王兵[6]（2017）在《死亡受体家族调控程序性坏死的分子机制研究进展》一文中研究指出细胞死亡一直都是疾病进展的核心环节,通常包括凋亡和坏死两种方式。凋亡是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞死亡方式;是主动的、有序的、由基因调控的。而坏死是由损伤因子引起的退行性(自溶)的病理现象;是被动的、无序的、不可逆的过程。2005年,Degterev(本文来源于《岭南急诊医学杂志》期刊2017年05期）
宋必卫,王璐[7]（2013）在《细胞程序性坏死——一种细胞死亡新方式》一文中研究指出细胞死亡是生命的基本过程之一。细胞程序性坏死(necroptosis,Nec)是近年发现的一种新型细胞死亡的方式,研究活跃。Nec有着与通常的细胞坏死类似的形态学特征,但受到特别的死亡信号通路调控。受体相互作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)1和3是Nec信号通路中极为重要的调节蛋白。RIP1是决定细胞生存和死亡的交叉点;RIP3则是决定细胞死亡方式(凋亡或Nec)的转换器。本文介绍Nec的信号机制,并简略地探讨其在器官缺血坏死、炎症反应和肿瘤发病机理中的意义。(本文来源于《生理科学进展》期刊2013年04期）
张勤丽,牛侨,张玲,王亮[8]（2008）在《程序性坏死参与铝致神经母细胞瘤细胞死亡机制》一文中研究指出目的探讨程序性坏死(necroptosis)在铝致神经细胞死亡中的作用,以完善铝致神经细胞死亡的机制研究。方法用4mmol·L-1AlCl3·6H2O染毒神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y制作铝致神经细胞死亡模型,用RNA干扰技术(RNAi)抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3基因的表达;用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1)抑制程序性坏死的产生。检测不同处理、处理后不同时间点细胞的活力变化,荧光定量PCR法检测RNAi效率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率及坏死率改变,免疫组织化学法检测蛋白表达量的差异。结果通过细胞活力在不同小干扰RNA(siRNA)序列、不同转染剂量、不同作用时间点的变化,找到其最适转染浓度为10nmol·L-1,最适作用时间为转染后48h。通过RNAi抑制caspase 3基因表达的差异,筛选出最有效序列为caspase 3 siRNA1序列;荧光染色并观察计数表明caspase 3 siRNA的转染效率为93.0%,其干扰效率为63.0%,对caspase3蛋白表达有显着的阻抑效应。Caspase 3 siRNA单独作用于染铝SH-SY5Y细胞,可以显着提高细胞活力,降低其凋亡率;Nec-1单独作用于染铝SH-SY5Y细胞可以显着提高其细胞活力,降低细胞坏死率;共同作用在染铝SH-SY5Y细胞时两者有增强作用,可以显着提高细胞活力,并同时降低SH-SY5Y细胞的凋亡率及坏死率。结论在铝致神经细胞死亡的机制中,除了传统上认为的凋亡和坏死途径外,还有程序性坏死的存在。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2008年05期）
安仁哲,尹永日,金春姬,金政,李根焕[9]（2003）在《癫癎发作诱发的程序性细胞死亡机制与神经细胞坏死的关系》一文中研究指出目的 探讨癫发作激发的程序性细胞死亡机制是否参与癫发作所致的神经细胞坏死过程。方法 利用Sprague Dawley大鼠 ,经腹腔内注射毛果云香碱 (pilocarpine)制作癫发作模型。在实验 2 4h和 72h ,脑灌流固定后 ,取脑进行检测。经HE和TUNEL染色 ,在光镜下 ,观察神经细胞死亡 ,并采用免疫组织化学方法检测Bax和Bcl 2基因表达。结果 癫发作 2 4h和 72h,在大鼠海马CA1 区 ,细胞损伤形态上是细胞坏死。但癫发作 72h ,在海马CA1 区 ,TUNEL阳性的坏死细胞数明显增多 ,与对照组比较差异有显着性 (P <0 .0 0 1 ) .癫发作后 72h ,Bax表达显着增高 ,与对照组比较差异有显着性 (P <0 .0 0 1 ) ,而Bcl 2表达无增高 ,Bcl 2 /Bax比值降低。结论 癫发作所致的迟发性神经细胞坏死伴有程序性细胞死亡机制(本文来源于《中华儿科杂志》期刊2003年04期）
徐吉山[10]（1998）在《细胞坏死及细胞程序性死亡和细胞凋亡》一文中研究指出细胞死亡是细胞生物学研究的基本问题,细胞死亡机理的研究对多种疾病的治疗及探索衰老原因等方面有很重要的意义。本文简要综述了当前对细胞死亡方式的基本认识及研究细胞死亡的意义和前景。(本文来源于《大理师专学报(综合版)》期刊1998年02期）
坏死样程序性死亡论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
锰是公认的急、慢性蓄积性神经毒素,锰中毒可产生类似于帕金森样中枢神经损伤的症状且脱毒后症状持续存在,原因在于锰在大脑聚积诱发特定区域的神经细胞死亡和功能丧失,进而使中枢神经发生退行性变。锰中毒诱发的神经细胞死亡方式包括凋亡、自噬及坏死叁种形式,目前锰中毒的神经元死亡机制研究主要集中于神经元凋亡。近年的研究表明,细胞的坏死也具有细胞内特定的信号转导系统,与受体相互作用蛋白3(Receptor interacting protein 3,RIP3)密切相关,RIP3被认为是调节依赖于RIP1介导的细胞凋亡与坏死间发生转换的关键因子。这一RIP3和混合系列激酶样结构域蛋白((Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)的顺序激活诱导的可调控性细胞死亡称为程序性坏死(Necroptosis)。我们前期的实验证实锰中毒可诱发神经元的坏死,坏死细胞的超微结构表现为趋向于凋亡细胞的形态特征,提示锰中毒诱导的神经元坏死可能具有程序性坏死的调节机制,而锰诱导的细胞坏死是否与Necroptosis有关,目前尚无报道。本研究拟通过体内、外实验,运用细胞凋亡Caspase抑制剂zVAD-fmk和程序性坏死信号通路的特异性阻滞剂necrostatin-1(Nec-1)、RNA干扰等研究策略,探讨RIP3介导的程序性坏死信号通路在锰致神经元死亡中的作用。方法(一)zVAD-fmk、Nec-1对染锰SK-N-SH细胞的影响(1)以400 uM MnCL_2.2H_2O建立SK-N-SH细胞染锰模型,然后应用不同浓度zVAD-fmk、Nec-1进行干预。取对数生长期SK-N-SH细胞进行干预,分为Control group、400μmol/L Mn、0.5μmol/L zVAD-fmk、2μmol/L zVAD-fmk、60μmol/L Nec-1、120μmol/L Nec-1、Mn+0.5μmol/L zVAD-fmk、Mn+2μmol/L z VAD-fmk、Mn+60μmol/L Nec-1、Mn+120μmol/L Nec-1共10组,通过观察细胞形态、MTT法及流式细胞术观察染锰与药物干预对SK-N-SH细胞存活、凋亡及坏死的影响;(2)取对数生长期细胞分成5组,分别为Control group、200μmol/L Mn、400μmol/L Mn、400μmol/L Mn+0.5μmol/L zVAD-fmk、400μmol/L Mn+120μmol/L Nec-1,通过Western blot检测RIP3的蛋白表达量变化、DCFH-DA探针检测各组细胞ROS的生成情况。(二)慢病毒介导RIP3 RNAi对染锰SK-N-SH细胞的影响(1)构建慢病毒介导的RIP3 RNAi SK-N-SH细胞株;(2)降低(Knock down,KD)SK-N-SH细胞的RIP3基因表达后,进行染锰实验,并进行Nec-1干预。具体分组为:空白SK-N-SH细胞组(Control group),SK-N-SH细胞染400μmol/L Mn组,RIP3 Scrambled细胞组(NC),RIP3 RNAi细胞组,RIP3 RNAi细胞+Mn组,RIP3 RNAi细胞+Mn+120μmol/L Nec-1组。通过MTT法、流式细胞术检测RIP3表达降低后染锰及Nec-1干预对SK-N-SH细胞存活、凋亡及坏死的影响;Western blot检测各组RIP3和磷酸化MLKL的蛋白表达变化。(叁)Nec-1对亚急性锰暴露大鼠黑质和海马的影响(1)Sprague Dawley(SD)大鼠60只分为对照组、Nec-1对照组、锰中毒组和Nec-1干预锰中毒组。所有动物均先通过手术作侧脑室埋管,然后通过腹腔注射锰溶液建立亚急性锰中毒模型(15 mg/kg,5天/w,共4w),同时对药物干预组给予侧脑室内注射Nec-1(19.28 mmol/L,5μL/次,3次/w,共4w),染锰及干预结束后拔除侧脑室置管,连续饲养动物两周;(2)大鼠经灌注固定后,免疫组织化学法观察黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞和海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞表达的变化,透射电镜观察海马神经元细胞的超微结构变化;(3)大鼠经颈椎脱臼法处死动物,取黑质组织,PCR荧光定量法检测RIP3、Bcl-2、Caspase3、NOX2和NOX4基因的表达。结果(一)程序性坏死抑制剂Nec-1可减少染锰SK-N-SH细胞的死亡(1)与对照组相比较,人SK-N-SH细胞染锰24h后,细胞胞体皱缩变圆、突起回缩变短、胞浆内可见大量泡沬状改变;0.5μmol/L zVAD-fmk及Nec-1干预染锰细胞后,细胞密度较染锰组有所增高,胞体病理变化程度减轻,突起重新形成丰富网络,泡沬状改变的细胞减少。(2)细胞存活率随染锰浓度升高而降低;400μmol/L Mn组及Mn+2μmol/L zVAD-fmk组的细胞存活率较对照组低(P<0.05),而0.5μmol/L zVAD-fmk及Nec-1干预后可提高染锰细胞存活率(P<0.05)。(3)与对照组比较,染锰细胞凋亡及坏死率均明显升高(P<0.05);0.5μmol/L zVAD-fmk干预染锰细胞可降低细胞凋亡率(P<0.05),但坏死率较对照组升高(P<0.05);Nec-1干预可降低染锰细胞坏死率(P<0.05),但凋亡率较对照组有所提升(P<0.05)。(4)与对照组比较,染锰组RIP3蛋白表达量上调,zVAD-fmk及Nec-1干预后RIP3蛋白表达稍降低,但与染锰组无显着性差异。(5)与对照组比较,染锰细胞强荧光细胞数目多(P<0.05),说明ROS产生增多,zVAD-fmk干预组与染锰组无明显差异,而Nec-1干预组强荧光细胞数目减少(P<0.05)。(二)慢病毒介导RIP3 RNAi可降低染锰SK-N-SH细胞的死亡率(1)成功建立慢病毒介导的RIP3 RNAi SK-N-SH细胞株。(2)与染锰SK-N-SH细胞组比较,RIP3-KD SK-N-SH细胞染锰后细胞存活率升高(P<0.05)。染锰RIP3-KD细胞的坏死率较染锰SK-N-SH细胞组显着下降(P<0.05),与nec-1干预染锰RIP3-KD细胞组无明显差异。(3)与对照组比较,SK-N-SH细胞染锰后RIP3蛋白表达及MLKL磷酸化水平升高(P<0.05),而RIP3-KD细胞RIP3蛋白表达及MLKL磷酸化降低(P<0.05),蛋白表达量在染锰前后无明显差异。(叁)Nec-1可保护亚急性锰暴露大鼠神经元(1)与对照组比较,锰中毒组大鼠黑质TH阳性细胞数无明显下降,与其余各组比较无显着性差异;锰中毒组大鼠海马CA1区GFAP阳性细胞明显增多(P<0.05);Nec-1可以减少锰中毒大鼠海马GFAP阳性细胞数,两组比较有统计学差异(P<0.05)。(2)与对照组比较,亚急性锰暴露组大鼠海马电镜下可观察到坏死神经元(胞体肿胀透亮,细胞器稀疏,胞核染色质浓聚、边集,核膜溶解)和凋亡神经元(胞体皱缩且电子密度增高,核膜不规则,核质浓缩边聚,胞质呈泡沫状改变),线粒体嵴间隙变宽、崩解,神经突起水肿,突触间隙模糊。Nec-1干预可减轻细胞肿胀程度和神经突起水肿程度,坏死神经元胞内残存的细胞器增多,形态表现不典型,线粒体完整但嵴间隙稍有扩大。(3)与对照组比较,染锰大鼠Caspase-3基因呈高表达且Bcl-2基因表达显着降(P<0.05),NOX4基因表达升高(P<0.05);与染锰组比较,Nec-1干预组NOX4基因表达显着降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)程序性坏死参与了染锰的SK-N-SH细胞死亡;由RIP3介导的信号转导机制与染锰SK-N-SH细胞的程序性坏死有密切关系;(2)Nec-1的干扰能在一定程度上保护亚急性锰暴露的大鼠神经元,减少海马神经元的死亡,机制可能与其拮抗神经元程序性坏死的发生、抑制星形胶质细胞增生及降低中枢神经的炎症反应等机制有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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