溶血机制论文-王艳,苏峰,李园园,李舒

导读:本文包含了溶血机制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝脂肪变,蜂毒溶血肽,核转录因子E2相关因子2,血红素加氧酶-1

溶血机制论文文献综述

王艳,苏峰,李园园,李舒^[1]（2019）在《蜂毒溶血肽改善非酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂肪沉积作用及其机制研究》一文中研究指出目的探讨蜂毒溶血肽对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脂肪变性的保护作用及其机制。方法随机将40只SD大鼠分成对照组、模型组、小剂量蜂毒溶血肽处理组和大剂量蜂毒溶血肽处理组。采用高脂饲料喂养建立NAFLD模型,再分别给予蜂毒溶血肽10μg·kg-1·d-1和100μg·kg-1·d-1或生理盐水皮下注射,连续12w。采用Western blot法检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达。结果大剂量蜂毒溶血肽处理组大鼠体质量和肝质量分别为(380.2±20.8) g和(10.4±1.3) g,显着低于模型组【分别为(435.2±22.1) g和(14.3±1.4) g,P<0.05】,血清AST和ALT水平分别为(88.0±10.4) U/L和(49.3±6.2) U/L,显着低于模型组【分别为(159.7±18.9) U/L和(77.7±6.8)U/L,P<0.05】,血糖、TC、TG和LDL-C水平分别为(8.7±1.8) mmol/L、(1.6±0.2) mmol/L、(0.8±0.1)mmol/L和(0.3±0.1) mmol/L,显着低于模型组【分别为(18.3±2.4)mmol/L、(2.8±0.3) mmol/L、(1.5±0.2) mmol/L和(0.5±0.1)mmol/L,P<0.05】,血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平分别为(82.1±6.6) U/L、(6.3±0.8) nmol/mL和(8.7±0.9) mmol/L,与模型组的(30.4±5.3)U/L、(13.1±1.6) nmol/mL和(2.3±0.5) mmol/L比,差异显着(P<0.05),肝组织Nrf2和HO-1表达分别为(1.4±0.2)和(1.2±0.1),显着高于模型组【分别为(0.3±0.1)和(0.3±0.1),P<0.05】。结论蜂毒溶血肽可以调节NAFLD大鼠血糖和血脂代谢,减轻肝脂肪变程度,改善肝功能,其机制可能与调控Nrf2和HO-1表达,缓解氧化应激损伤有关。(本文来源于《实用肝脏病杂志》期刊2019年04期）

张杰,李易易,张兆辉^[2]（2019）在《溶血磷脂酸诱导PC12细胞凋亡的机制研究》一文中研究指出目的 探究溶血磷脂酸诱导PC12细胞凋亡的机制并提出干预措施。方法 实验1:不同浓度LPA(0μM、10μM、20μM、40μM)处理PC12细胞24 h;实验2:LPA(40μM)分别处理PC12细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h);实验3:正常组(0μM LPA)、LPA组(40μM LPA)和干预组(5μM SP600125预处理2 h+40μM LPA)培养24 h;CCK-8检测细胞活力;TUNEL染色检测细胞凋亡比例;WesternBlot检测Bcl2、caspase 3、磷酸化JNK水平。结果 LPA以时间依赖和浓度依赖的方式使PC12细胞的细胞活力和Bcl2水平降低,而使PC12细胞的凋亡指数和caspase 3水平增高;SP600125(5μM)预处理不仅明显阻断LPA诱导的PC12细胞活力下降、细胞凋亡,并且极大地抑制了LPA诱导的JNK通路的激活、Bcl2水平的下调和caspase 3水平的上调。结论 JNK特异性抑制剂SP600125预处理能够明显阻断LPA诱导的PC12细胞损伤。(本文来源于《卒中与神经疾病》期刊2019年03期）

Meng,Fan-dan,Tong,Jie,V?tsch,Désirée^[3]（2019）在《猪链球菌与猪流感病毒混合感染促进溶血素基因缺失型链球菌侵入呼吸道分子机制的研究》一文中研究指出猪链球菌在世界范围内广泛存在,是危害养猪业发展的重要传染源之一,能够引起猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎、流产以及仔猪的突然死亡。溶血素(SLY)是猪链球菌分泌的唯一能够引起细胞毒性的可溶性蛋白,它能在宿主细胞膜上打孔引起细胞崩解。然而,不是所有的猪链球菌致病株均分泌SLY蛋白。因此,研究猪链球菌感染不同阶段SLY的作用,以及是否存在替代SLY蛋白功能的毒力因子,将有助于更好地阐明不分泌SLY蛋白(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年06期）

马天天^[4]（2019）在《单增李斯特菌感染依赖溶血素LLO触发ERK1/2磷酸化机制研究》一文中研究指出单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种革兰氏阳性胞内菌。该菌含有溶血素O(Listeriolysin O,LLO),可引起宿主细胞膜结构穿孔,对于单增李斯特菌在细胞内复制至关重要。前期有研究发现,单增李斯特菌感染宿主细胞后,LLO能引起丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白ERK1/2磷酸化,但机制未知。本研究以单增李斯特菌感染Caco-2细胞为模型解析ERK1/2被磷酸化的分子机制。我们分别利用单增李斯特菌和纯化的重组LLO蛋白(5nM)感染或处理Caco-2细胞,检测ERK1/2的表达及磷酸化水平变化。我们发现,单增李斯特菌感染Caco-2细胞后能显着增加ERK1/2的磷酸化水平,并在感染或处理半个小时后达到高峰且呈LLO依赖性。该ERK1/2的磷酸化水平与细胞内LLO的浓度呈正相关,当用胆固醇封闭LLO对宿主细胞的膜结合位点后,LLO丧失启动ERK1/2磷酸化的能力。我们也发现,LLO缺失活性位点PEST序列并不影响其激活ERK1/2磷酸化,这说明LLO启动ERK1/2的磷酸化与LLO与宿主细胞的膜结合位点有关而与活性位点无关。进一步研究表明,当LLO与宿主细胞的膜结合位点关键氨基酸突变(LLO_(T515AL516A))后,即使在高浓度LLO(>20nM)的情况下也无法触发胞内ERK1/2磷酸化,这说明LLO进入宿主细胞是启动ERK1/2磷酸化的关键步骤。为此,我们利用可以控制进入细胞的LLO突变体LLO_(N478AV479A)处理Caco-2细胞,我们发现LLO突变体LLO_(N478AV479A)启动ERK1/2磷酸化完全取决于细胞膜的完整性。为此,我们借助碘化丙啶追踪细胞膜的完整性,我们发现当LLO_(N478AV479A)的浓度(5nM)不足以破坏细胞膜的完整性时,ERK1/2不发生磷酸化,但当LLO_(N478AV479A)的浓度(20nM)达到破坏细胞膜的完整性时,ERK1/2磷酸化被启动。这说明LLO蛋白触发ERK1/2磷酸化是在宿主细胞浆完成的,而不是在细胞膜上完成的。此外,我们还发现缺失LLO或者表达LLO_(T515AL516A)的单增李斯特菌在小鼠巨噬细胞内丧失增殖能力,但噬斑实验表明表达LLO_(T515AL516A)的单增李斯特菌依然具有细胞毒性并能够进行胞间扩散,这说明单增李斯特菌感染宿主细胞与细菌数量和LLO的膜结合能力有关。综上,本研究发现单增李斯特菌感染宿主细胞通过LLO诱导ERK1/2磷酸化高度依赖于宿主细胞膜的完整性,其中T515L516为LLO触发ERK1/2的磷酸化的关键氨基酸位点。本研究结果对于深入阐明单增李斯特菌感染与宿主信号通路之间的内在机制以及革兰氏阳性食源性胞内菌的污染防控和公共卫生具有重要意义。(本文来源于《浙江农林大学》期刊2019-06-10）

王冰^[5]（2019）在《化脓隐秘杆菌溶血素激活巨噬细胞NF-κB系统机制的研究》一文中研究指出化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,T.pyogenes)是一种常见于动物呼吸道、消化道黏膜和乳房的共生性细菌。同时,T.pyogenes也是一种条件性致病菌。当动物处于应激性状态下时,T.pyogenes能引起动物发生多种炎症疾病。化脓隐秘杆菌溶血素(Pyolysin,PLO)是T.pyogenes分泌的唯一一种溶血素,是一种胆固醇依赖性溶细胞素(Cholesterol-dependent cytolysin,CDCs),也是一种成孔毒素(Pore-forming toxin,PFT)。已有研究表明,PLO接种小鼠可以引发炎症。但是,PLO导致炎症的机制仍不明确,而阐明其引发炎症的机制对于全面揭示T.pyogenes的致病机制有一定的积极意义。本研究表达纯化了重组PLO(Recombinant PLO,rPLO)、突变体蛋白rPLO W497F和rPLO D238R,以及截短蛋白rPLO D123、rPLO D4和rPLO D4 W497F,并对它们的溶血活性进行分析。结果表明rPLO的溶血活性最强,其次为rPLO D238R,rPLO W497F及截短蛋白rPLO D123、rPLO D4和rPLO D4 W497F几乎没有溶血活性。用不同浓度的重组蛋白处理J774A.1细胞检测细胞毒性结果表明,rPLO蛋白在30-60 ng/mL浓度范围内细胞毒性较低,而随着浓度的增加细胞毒性逐渐增强;突变体蛋白rPLO W497F及rPLO D238R几乎不表现细胞毒性。重组蛋白处理与钙离子(Calcium,Ca~(2+))荧光探针孵育的J774A.1细胞,结果表明亚裂解剂量rPLO处理的细胞内Ca~(2+)浓度下降,rPLO D238R和rPLO W497F处理的细胞中Ca~(2+)浓度显着高于rPLO处理的细胞。用含有不同浓度Ca~(2+)的细胞外液与rPLO共处理细胞,结果表明当细胞外液中含有1 mmol/L Ca~(2+)时,rPLO处理可以导致细胞中的Ca~(2+)浓度下降;当细胞外液中Ca~(2+)浓度低于正常浓度时,rPLO作用可以导致细胞中的Ca~(2+)浓度上调。用不同浓度的rPLO处理J774A.1细胞0.5 h,检测表明30-60 ng/mL的rPLO对细胞钙蛋白酶(Calpain,CAPN)的活性没有明显的影响,当时间延长至2 h时,细胞内CAPN活性被显着地抑制。用亚裂解剂量的rPLO处理J774A.1细胞,western-blot检测表明rPLO可以显着抑制NF-κB p65的磷酸化及NFATc1的表达,并且处理细胞0.5 h就能表现显着的抑制效果;rPLO D238R和rPLO W497F处理组的细胞中NF-κB p65的磷酸化水平及NFATc1的表达有所上调。用亚裂解剂量的rPLO与不同浓度Ca~(2+)外液共同处理J774A.1细胞,结果表明在含有1 mmol/L CaCl_2的RPMI1640培养基中,由rPLO导致的细胞中NF-κB p65磷酸化水平降低的现象有所缓解,NFATc1的表达水平上调。用亚裂解剂量的rPLO处理J774A.1细胞,检测细胞中非经典NF-κB信号通路中几个关键性蛋白,结果表明在0.5 h时NIK及p52的含量增加,p100与IKKα/β的磷酸化水平提高。用不同重组蛋白处理小鼠骨髓源性巨噬细胞(Bone marrow derived macrophages,BMDMs),检测细胞中钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CN)的活性,结果表明所有重组蛋白均不会显着影响细胞中CN活性。用不同蛋白处理BMDMs,结果表明rPLO可以刺激细胞产生大量的IL-1β;rPLO W497F及rPLO D123可以刺激细胞产生大量的IL-10。然后用重组蛋白刺激tlr4基因缺失的BMDMs(BMDMs~(tlr4-)),结果表明rPLO仍可刺激细胞产生大量的IL-1β;而rPLO W497F和rPLO D123对IL-10诱导能力由于tlr4基因的缺失受到完全抑制。用PLO蛋白D123结构域的截短多肽处理BMDMs,结果表明rPLO 95-156可以上调BMDMs中IL-10的大量表达。综上所述,本实验证明了PLO作用巨噬细胞(Macrophages,Mφ)可以通过两种方式影响NF-κB信号通路。当PLO维持完整的结构和功能时,可以通过“成孔活性”激活非经典NF-κB信号通路;而在细胞膜结合功能受损的情况下,PLO表现“PAMPs样活性”通过刺激MφTLR4活化经典NF-κB信号通路,介导细胞因子的表达。本研究为全面理解T.pyogenes导致感染性炎症的机制提供部分理论依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）

包良^[6]（2018）在《溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究》一文中研究指出由低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)经氧化修饰形成的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是引起动脉粥样硬化的独立因子。ox-LDL主要通过促进血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖和迁移,诱导血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的凋亡,促进VECs的黏附因子表达使单核细胞黏附和聚集而形成泡沫细胞等过程促进动脉硬化进程,而目前对其详细的分子机理还很不清楚。所以,在本研究中将探索溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)作为ox-LDL的主要生理活性脂质参与ox-LDL的促进动脉硬化作用及其分子机理。研究中分别用人大动脉平滑肌细胞(HASMCs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)做模型,研究LPC对平滑肌细胞和内皮细胞的增殖、迁移以及细胞凋亡的影响而证明其促进动脉硬化作用,并在模型动物水平的实验中进一步寻找依据。分别用CCK-8试剂和Neuro Probe AA12趋化小室检测细胞增殖和迁移活性;用实时荧光定量PCR法检测受体及细胞内信号分子的表达;Western blot和免疫组化用于检测蛋白磷酸化和蛋白因子;用siRNA干扰、抑制剂和拮抗剂用于确定相关基因的功能。研究发现,(1)LPC能促进HASMCs的增殖和迁移,而用拮抗剂阻断LPA1或siRNA干扰LPA1后能抑制LPC的作用。Gi蛋白的抑制剂百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)也抑制了LPC诱导的HASMCs增殖和迁移。LPC可以促进ERK和p38的磷酸化,它们的抑制剂PD98059和SB203580抑制分别抑制了LPC诱导的细胞增殖和迁移。Rho相关激酶(ROCK)的抑制剂Y-27632也能抑制LPA诱导的HASMCs迁移。在HASMCs中ATX高表达,并在HASMCs的上清液中和动脉粥样模型动物血清中存在高活性的lyso-PLD。在模型动物血清中LPC含量提高,其血管组织中LPA1和ATX的表达上调。(2)还发现LPC能诱导HUVECs的凋亡,而siRNA干扰LPC受体GPR4后这个作用被减弱。LPC能提高细胞Bax表达和降低Bcl-2的表达。然而,LPA能抑制HUVECs的凋亡。干扰LPA1的表达或PTX处理能抑制LPA诱导的HUVEC增殖,ERK的抑制剂(PD98059)和核受体PPAR的抑制剂(GW9662)也能抑制该过程。另外,EGF受体的抑制剂(AG1478)也抑制了LPA的作用。实时荧光定量PCR结果显示,LPA的刺激提高Bcl-2的表达,同时降低Bax的表达。结论:(1)LPC通过ATX-LPA轴诱导HASMCs的增殖和迁移,显示出促动脉硬化作用。LPA1-Gi-ERK途径和LPA1-Gi-RhoA-p38 MAPK途径分别介导HASMCs的增殖和迁移。(2)LPC通过激活GPR4,上调Bax的表达并下调Bcl-2的表达,促进VECs凋亡,这也是典型的促动脉粥样硬化作用。而LPA通过激活LPA1-Gi-PPAR信号通路提高Bcl-2的表达,降低Bax表达,从而提高VECs的存活能力,这一过程被高含量的LPC所抑制。(4)LPC还通过抑制HUVECs的迁移表现出促动脉粥样硬化作用。可见LPC对HASMCs和VECs的生物学作用属于促动脉硬化作用,并与ox-LDL的作用相互对应,可视为LPC参与ox-LDL促动脉硬化作用。阻断上述LPC信号通路是预防和治疗动脉粥样硬化过程的一种新的思维;LPA1和GPR4是预防或治疗动脉硬化的潜在的药物靶点,该受体拮抗剂具有潜在的应用前景。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-12-08）

马天天,程昌勇,宋厚辉^[7]（2018）在《单核细胞增多性李斯特菌溶血素LLO激活ERK1/2磷酸化机制研究》一文中研究指出背景:单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM,简称单增李斯特菌)属于食源性胞内寄生菌,感染后会引发败血症、脑膜炎和流产等,致死率高达30%,其感染宿主过程中主要依赖毒力因子溶血素(Listeriolysin O,LLO)裂解细胞吞噬体膜。LLO在细菌感染过程中能够与宿主发生多种"交流",本研究发现LLO能够激活细胞内ERK1/2分子的磷酸化,但具体分子机制尚待解析。目的:深入解析李斯特菌感染细胞过程中依赖LLO激活ERK1/2的主要机制;探索李斯特菌利用ERK1/2 MAPK通路协助其进行胞内侵染、增殖和生存的功能和作用,并揭示李斯特菌依赖相关毒力因子介导激酶通路活化并发挥致病力的分子机制。材料和方法:本研究以单增李斯特菌感染Caco-2细胞激活p-ERK1/2为研究对象,分别在细菌感染和重组LLO蛋白激活水平,利用Western blotting检测ERK1/2的表达及磷酸化水平变化;通过感染生物学手段分析ERK1/2在激活和抑制状态下,研究李斯特菌对细胞的黏附、侵袭、吞噬体逃逸、以及胞内增殖等变化。结果与讨论:单增李斯特菌EGD-e体外感染Caco-2细胞后不影响ERK1/2的表达,但却能显着激活该分子的磷酸化,缺失编码LLO蛋白的hly基因后该激活效应消失,表明李斯特菌感染能够依赖LLO迅速激活ERK1/2分子的磷酸化。体外表达具有溶血活性的重组LLO蛋白直接刺激Caco-2细胞,同样发现LLO能够透过细胞膜并在短时间内迅速激活ERK/2磷酸化。将LLO的膜结合位点突变后,ERK1/2通路却不能被激活,说明LLO依赖的ERK活化与该蛋白的膜穿孔能力密切相关。此外,细胞内感染试验发现抑制ERK1/2 MAPK通路后李斯特菌在细胞内的侵染和生存力显着降低。综上,该研究证实李斯特菌在感染宿主过程中能够依赖LLO的膜穿孔活性激活ERK1/2磷酸化并介导该MAPK通路活化,且该过程有助于李斯特菌在胞内成功建立感染。研究结果对于深入阐明李斯特菌感染与宿主信号通路之间的内在联系机制具有重要意义。(本文来源于《浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会论文汇编》期刊2018-11-16）

GEORGE,OSEI-ADJEI^[8]（2018）在《ToxR和CalR对副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统1（T3SS1）的转录调控机制研究》一文中研究指出背景副溶血弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐菌,是引起人类海鲜相关性腹泻和胃肠炎以及引起虾急性肝胰腺坏死综合征的主要原因。食用被副溶血弧菌污染的未烹制的或烹调不当的海鲜导致人类感染并出现腹泻、呕吐、恶心和腹部绞痛等临床症状。副溶血性弧菌的致病依赖于多种毒力因子,如热稳定性直接溶血素(tdh)、TDH相关溶血素(trh)和两个III型分泌系统(T3SS1和T3SS2)。III型分泌系统1(T3SS1)是该细菌表达的一个主要毒力决定簇。T3SS1促进副溶血弧菌对大多数哺乳动物细胞系的细胞毒作用和对体内小鼠感染模型的致死作用。T3SS1的表达受ToxR和CalR的严格调控。ToxR通过激活T3SS1基因的转录抑制因子CalR来抑制T3SS1基因的转录。然而,这一转录调控机制尚未阐明。阐明毒力相关基因在严格调控下的表达情况将能增加对副溶血性弧菌致病机制的认识。目的本研究将通过表型和分子生物学实验,揭示CalR和ToxR对自身基因和T3SS1基因的转录调控机制,以增加对副溶血弧菌的致病机制认识。方法1.菌株构建利用PCR定向诱变技术构建基因缺失变异株ΔcalR和ΔtoxR。将重组用DNA片段插入到自杀质粒的pDS132 Pst I和Sph I位点之间。以野生株基因组DNA为模板,利用质粒pBAD33构建回补菌株ΔcalR/pBAD33-calR和ΔtoxR/pBAD33-toxR以及带His标签标记的蛋白表达菌株pBAD33-calR和pBAD33-toxR。2.RNA提取和荧光定量RT-PCR用Trizol法提取野生株、ΔcalR和ΔtoxR的总RNA,并逆转录成cDNA。采用实时定量PCR方法,检测并分析各菌株中靶基因的mRNA相对水平。3.His6融合蛋白株CalRhis6和ToxRhis6的制备PCR扩增calR的整个编码区和截短的toxR序列并通过BamH I和Hind III位点克隆至质粒pet28a。将重组质粒转入大肠杆菌BL21lDE3中,在不同条件下用1mM IPTG诱导蛋白表达。用镍柱亲和层析法纯化蛋白,用SDS-PAGE鉴定各蛋白纯度,并保存于-80℃。4.凝胶阻滞分析用[γ-~(32)P]ATP分别标记calR、toxR、exsB、vp1687和vp1667基因启动子区的5’端。以纯化的CalR_(his6)或ToxR_(his6)蛋白进行凝胶阻滞分析,用4%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析,最后通过放射自显影法检测结果。5.LacZ融合和b半乳糖苷酶活性测定通过两个限制性内切酶位点将每个靶基因的启动子近端DNA序列克隆至pHRP309质粒中无启动子的lacZ报告基因和庆大霉素耐药基因之间。重组质粒被分别转化至野生株、ΔtoxR和ΔcalR中,测定其β-半乳糖苷酶活性。将经重组pHRP309质粒转化的副溶血弧菌进行培养并裂解,用酶法分析细胞提取物中的β-半乳糖苷酶活性。6.引物延伸实验用[γ-~(32)P]标记正义引物或反义引物的5'端,在反转录AMV酶的作用下,引物延伸至mRNA链的互补区,合成cDNA。用相同的标记引物对相应的DNA片段进行测序。引物延伸产物和测序材料经浓缩后用8M尿素-6%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳进行分析,并用放射自显影检测。7.DNA酶I足迹分析PCR扩增各靶基因的启动子近端区域并在其末端标记~(32)P。PCR产物经纯化后与CalR_(his6)或ToxR_(his6)蛋白混合,在室温下孵育30分钟。加入10ml Ca~(2+)/Mg~(2+)溶液并在室温下孵育1分钟后,加入无RQ1 RNA酶的DNA酶I,室温下孵育40~90s后加入9ml终止液以终止反应。用苯酚/氯仿-乙醇法抽提未完全消化的DNA,用8M尿素-6%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳分析,最后用放射自显影分析相应的蛋白结合保护区。8.小鼠感染模型用PBS缓冲液(pH 7.2)将野生株和?toxR的过夜培养物洗涤两次并进行十倍梯度稀释。将选取的合适稀释度的稀释液涂布在HI平板上,以计数集落形成单位(CFU)。每种菌株分别取0.1ml 10~8 CFU/ml的菌液腹腔内接种到15只25~28天龄的雌性BALB/c小鼠中,每天监测并记录小鼠死亡数,以计算其生存率。9.细胞培养和细胞毒活性实验用含10%胎牛血清的DMEM于无菌96孔板中培养HeLa细胞(37℃、5.0%CO_2)16小时,按MOI 2.5:1向细胞中加入10~6 CFU的细菌,继续培养3小时。用CytoTox96试剂盒检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。将未接种的DMEM加入未感染HeLa细胞的孔中并以最大LDH释放条件作为对照,计算相应的细胞毒活性。结果1.ToxR直接激活calR的转录qRT-PCR和引物延伸实验结果表明,(35)toxR中calR的mRNA水平与野生株相比有所下降。为了检测ToxR对calR启动子活性的影响,我们将含有toxR启动子近端区和无启动子lacZ基因的重组lacZ融合pHRP309质粒分别转化至野生株和(35)toxR。结果表明,(35)toxR中calR启动子活性相比野生株中显着降低,表明ToxR正向调控calR。EMSA实验结果显示,ToxR_(his6)能够与calR启动子的上游DNA片段结合;而DNA酶I足迹分析显示,ToxR_(his6)只保护calR上游286~257bp的DNA区域免受DNA酶I消化,故这一区域被认为是ToxR的结合位点。2.CalR抑制toxR的转录qRT-PCR和LacZ融合分析结果显示,(35)calR中toxR的mRNA水平较野生株显着降低,表明toxR与CalR的转录呈负相关。引物延伸试验结果发现,在toxR上游101bp处检测到一个转录起始位点,其转录活性受CalR负向调控。EMSA实验结果显示,CalRhis6可以呈剂量依赖方式与toxR的上游DNA片段结合,但不能与16S rRNA片段结合。DNA酶I足迹分析结果显示,CalRhis6保护了toxR上游的两个不同的DNA区域免受DNA酶I的消化,显示与可CalR直接结合,提示CalR可直接抑制toxR的转录。3.CalR的自调控引物延伸实验结果显示,calR上游156bp处有一个转录起始位点,其受CalR负向调控。lacZ融合检测结果表明,与野生株相比,(35)calR中calR基因的启动子活性显着增强,表明CalR与其自身基因转录呈负相关。EMSA实验和DNA酶I足迹分析结果表明,CalRhis6可结合calR上游121~182bp的DNA区域免受DNA酶I的消化,提示CalR有直接结合的负向自调控。4.ToxR的自调控引物延伸试验结果显示,toxR上游101bp处有一个转录起始位点,其受ToxR负向调控。lacZ融合检测结果显示,与野生株相比,(35)toxR中toxR的启动子活性显着增强,提示ToxR与其自身基因转录呈负相关。EMSA实验表明,ToxRhis6能够以剂量依赖的方式结合到其自身DNA的上游DNA片段,但不能与16S rRNA片段结合。DNA酶I足迹研究表明,ToxRhis6保护了toxR上游两个不同的DNA区域免受DNA酶I消化,表明ToxR可直接抑制其自身基因的转录。5.ToxR抑制对HeLa细胞的杀伤作用为细菌毒力所必需用小鼠感染模型评价副溶血弧菌ToxR的毒力。注射PBS和感染(35)toxR的小鼠没有死亡,而感染野生株的小鼠第1天起生存率显着降低15%,表明小鼠的致死需要ToxR。此外,(35)toxR/pBAD33对HeLa细胞的杀伤作用显着高于WT/pBAD33或(35)toxR/pBAD33-toxR。(35)toxR/pBAD33-toxR与WT/pBAD33对HeLa细胞的细胞毒作用无明显差异,表明ToxR是副溶血弧菌杀伤HeLa细胞的一个抑制因子。6.CalR抑制对HeLa细胞的杀伤作用通过检测培养细胞所释放的LDH的量来评价副溶血弧菌对HeLa细胞的杀伤作用。(35)calR/pBDA33对HeLa细胞的杀伤作用显着高于WT/pBAD33或(35)calR/pBAD33-calR,而(35)calR/pBAD33-calR与WT/pBAD33对HeLa细胞的杀伤作用无明显差异,表明CalR也是副溶血弧菌杀伤HeLa细胞的一个抑制因子。7.CalR直接抑制T3SS1基因的转录从副溶血弧菌T3SS1选取3个操纵子:vp1700-1688(exsBAD-vscBCD)、vp1667-1655和vp1687-1686,并对每个操纵子的第一个基因(exsB、vp1667和vp1687)进行qRT-PCR、引物延伸、LacZ融合、EMSA和DNA酶I足迹实验。qRT-PCR结果表明,(35)calR中各靶基因的mRNA水平相对于野生株均显着升高。引物延伸试验结果显示,叁个操纵子均有一个独立的转录起始位点,且它们的转录活性均受CalR负向调控。lacZ融合检测结果表明,CalR抑制上述靶基因的启动子活性。EMSA实验结果表明,CalRhis6能够与上述靶基因结合,提示CalR负向调控上述靶基因。DNA酶I足迹实验结果显示,CalRhis6保护vp1667上游的两个不同的DNA区域免受DNA酶I消化,故这两个区域被认为是CalR的结合位点,但是在exsB和vp1687上游均只有一个DNA区域被保护免受DNA酶消化。8.ToxR直接抑制T3SS1基因的转录选取T3SS1相关基因exsB、vp1667和vp1687进行qPCR、引物延伸、LacZ融合、EMSA和DNA酶I足迹分析。qRT-PCR结果显示,(35)toxR中各靶基因的mRNA水平相对于野生株均显着升高。引物延伸试验显示,叁个操纵子都有一个独立的转录起始位点,其转录活性受ToxR负向调控。LacZ融合实验结果表明,(35)toxR中叁个操纵子的启动子活性均明显高于野生株。EMSA试验结果显示,ToxRhis6能够以剂量依赖的方式与vp1667和vp1687的基因片段结合,但不能与exsB结合。DNA酶I足迹分析结果显示,ToxRhis6分别保护vp1687上游112~159bp和vp1667上游85~109bp的DNA区域免受DNA酶I消化,这两个区域被认为是ToxR的结合位点。结论1.ToxR结合calR启动子区激活calR的转录。2.CalR通过与toxR的上游DNA片段结合,抑制toxR的转录。3.CalR和ToxR都能够通过结合自身启动子区而抑制自身基因转录。4.ToxR调节副溶血弧菌对小鼠的致死活性,而CalR抑制其对HeLa的细胞毒活性。5.CalR能直接抑制T3SS1相关基因exsB、vp1667和vp1687的转录。6.CalR可直接抑制T3SS1相关基因exsB、vp1667和vp1687的转录。7.ToxR可直接抑制T3SS1相关基因exsB、vp1667和vp1687的转录。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-10-22）

钦可为,付凯飞,刘剑飞,吴成林,王欲晓^[9]（2018）在《创伤弧菌溶血素诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用与机制研究》一文中研究指出目的:创伤弧菌感染进展迅速、死亡率高,其引起的天然免疫应答反应仍未研究清楚。创伤弧菌溶血素(VvhA)是创伤弧菌重要的毒力因子。为进一步了解VvhA对巨噬细胞的影响,本研究用重组表达的溶血素蛋白(r VvhA)体外作用小鼠RAW264.7巨噬细胞系,探究了r VvhA对促炎症因子产生的诱导作用与机制。方法:(1)r VvhA经去内毒素试剂盒处理后检测内毒素水平;(2)r VvhA处理RAW264.7细胞,应用CCK-8法检测RAW264.7存活率,显微镜观察细胞形态。(3)定量-PCR检测RAW264.7细胞中IL-6,TNF-α和IL-1β等促炎症因子mRNA转录水平表达情况。(4)ELISA检测细胞培养上清中促炎症因子蛋白水平。(5)Western Blot检测r VvhA处理RAW264.7细胞中AKT,ERK,p38和NF-KB等炎症信号通路蛋白的磷酸化水平。(6)用ROS抑制剂Acetylcysteine与选择透过性膜calcium螯合剂BAPTA-AM预处理RAW264.7细胞,检测抑制剂作用下r VvhA对RAW264.7促炎症因子表达的影响情况。(7) Western Blot检测BAPTA-AM预处理RAW264.7细胞中r VvhA诱导的炎症信号通路蛋白的磷酸化水平。结果:(1)超过一定浓度(>10μg/ml)的r VvhA处理的会导致RAW264.7细胞生存率均明显下降,呈剂量依赖效应。低剂量(<5μg/ml)的r VvhA对RAW264.7细胞活性无明显作用。(2)低剂量的r Vvh能诱导RAW264.7细胞中IL-6,TNF-α和IL-1β等促炎症因子mRNA的表达与相应蛋白的分泌,且呈剂量依赖性。(3)r VvhA处理能诱导RAW264.7细胞中AKT,ERK,p38和NF-KB的磷酸化。(4)BAPTA-AM预处理能显着降低r VvhA对RAW264.7细胞促炎症因子表达的诱导作用。而Acetylcysteine对此没有明显作用。(5)BAPTA-AM预处理RAW264.7细胞中r VvhA诱导的炎症信号通路蛋白的磷酸化比对照组降低。结论:r VvhA对RAW264.7细胞有一定杀伤作用,低浓度r VvhA自身能诱导RAW264.7巨噬细胞促炎症因子产生,有致炎作用。r VvhA能引起细胞Ca2+内流增加,进而活化PI3K-AKT,ERK以及下游炎症信号通路。本课题研究了r VvhA致炎症效应,拓展了创伤弧菌感染致病的分子机制。(本文来源于《中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要》期刊2018-10-19）

汪洪菊,韩飞^[10]（2018）在《甘油二酯酰激酶ε相关的非典型溶血尿毒综合征发病机制研究进展》一文中研究指出非典型溶血尿毒综合征(aHUS)是一种罕见的疾病,其特点是血管内皮细胞受损、血栓堵塞靶器官的小血管腔而致血栓性微血管病。遗传性或自身免疫缺陷致补体旁路途径过度激活是aHUS的主要发病机制。新近研究发现,编码甘油二酯酰激酶ε(DGKE)基因的功能丧失型突变是一特殊类型aHUS的致病原因,其特点是患者多在1岁之前发病,伴有蛋白尿甚至肾病范围蛋白尿。DGKE在甘油二酯(DAG)-蛋白激酶C(PKC)信号通路中发挥重要作用。本文就DGKE基因突变、补体过度激活在aHUS发生、发展中的作用机制研究进展作一综述。(本文来源于《浙江医学》期刊2018年19期）

溶血机制论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的 探究溶血磷脂酸诱导PC12细胞凋亡的机制并提出干预措施。方法 实验1:不同浓度LPA(0μM、10μM、20μM、40μM)处理PC12细胞24 h;实验2:LPA(40μM)分别处理PC12细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h);实验3:正常组(0μM LPA)、LPA组(40μM LPA)和干预组(5μM SP600125预处理2 h+40μM LPA)培养24 h;CCK-8检测细胞活力;TUNEL染色检测细胞凋亡比例;WesternBlot检测Bcl2、caspase 3、磷酸化JNK水平。结果 LPA以时间依赖和浓度依赖的方式使PC12细胞的细胞活力和Bcl2水平降低,而使PC12细胞的凋亡指数和caspase 3水平增高;SP600125(5μM)预处理不仅明显阻断LPA诱导的PC12细胞活力下降、细胞凋亡,并且极大地抑制了LPA诱导的JNK通路的激活、Bcl2水平的下调和caspase 3水平的上调。结论 JNK特异性抑制剂SP600125预处理能够明显阻断LPA诱导的PC12细胞损伤。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

溶血机制论文参考文献

[1].王艳,苏峰,李园园,李舒.蜂毒溶血肽改善非酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂肪沉积作用及其机制研究[J].实用肝脏病杂志.2019

[2].张杰,李易易,张兆辉.溶血磷脂酸诱导PC12细胞凋亡的机制研究[J].卒中与神经疾病.2019

[3].Meng,Fan-dan,Tong,Jie,V?tsch,Désirée.猪链球菌与猪流感病毒混合感染促进溶血素基因缺失型链球菌侵入呼吸道分子机制的研究[J].中国预防兽医学报.2019

[4].马天天.单增李斯特菌感染依赖溶血素LLO触发ERK1/2磷酸化机制研究[D].浙江农林大学.2019

[5].王冰.化脓隐秘杆菌溶血素激活巨噬细胞NF-κB系统机制的研究[D].东北农业大学.2019

[6].包良.溶血磷脂酰胆碱的促动脉粥样硬化作用及其机制研究[D].内蒙古大学.2018

[7].马天天,程昌勇,宋厚辉.单核细胞增多性李斯特菌溶血素LLO激活ERK1/2磷酸化机制研究[C].浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会论文汇编.2018

[8].GEORGE,OSEI-ADJEI.ToxR和CalR对副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统1（T3SS1）的转录调控机制研究[D].江苏大学.2018

[9].钦可为,付凯飞,刘剑飞,吴成林,王欲晓.创伤弧菌溶血素诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用与机制研究[C].中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要.2018

[10].汪洪菊,韩飞.甘油二酯酰激酶ε相关的非典型溶血尿毒综合征发病机制研究进展[J].浙江医学.2018

标签：肝脂肪变;  蜂毒溶血肽;  核转录因子E2相关因子2;  血红素加氧酶-1;