导读:本文包含了脾细胞裂解液论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:乌骨鸡,黑色素含量测定,H_2O_2氧化-荧光分析方法,乌骨鸡黑色素细胞裂解液
脾细胞裂解液论文文献综述
陈露露[1]（2019）在《乌骨鸡黑色素含量测定及黑色素细胞裂解液活性研究》一文中研究指出乌骨鸡(Black-bone silky fowl,BSF)又称乌鸡、泰和鸡等,是江西特有的药食两用资源。它集药、补、食叁大功能于一体,对人体具有特殊的滋补功能,能够调节身体机能,提高人体免疫力。乌骨鸡黑色素是乌骨鸡最重要的功能成分之一,但由于溶解性差(不溶于水和有机溶剂),化学结构还不清楚,导致目前乌骨鸡黑色素的测定还未有便捷、可靠的方法,因此寻找一种较简单、快速、准确且无需将黑色素完全溶解的新方法显得至关重要。本文成功地建立了一种测定乌骨鸡黑色素含量的H_2O_2氧化-荧光分析法方法,可用于快速、准确地分析乌骨鸡肉以及乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的含量;乌骨鸡及其黑色素均具有良好的抗炎以及抗氧化效果,并且乌骨鸡黑色素是由黑色素细胞生成,乌骨鸡黑色素细胞在乌骨鸡体内广泛分布,本文通过低温超声裂解法获得乌骨鸡黑色素细胞裂解液(BMCL),探究BMCL对LPS诱导的RAW264.7细胞的炎症反应的抗炎作用,BMCL对H_2O_2诱导的HUVEC细胞的氧化损伤的保护作用。本研究为进一步阐明乌骨鸡滋补药用、营养作用以及促进乌骨鸡活性成分的开发和利用提供了实验科学依据。主要研究结论归纳如下:1.建立一种测定乌骨鸡肉中黑色素含量的H_2O_2氧化-荧光分析方法。结果表明:乌骨鸡黑色素标准品(600μg/mL)的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm,乌骨鸡黑色素在浓度范围50-600μg/mL内的回归方程为y=0.0094X+0.6926,r=0.9986,荧光分析法的方法检出限为0.30μg/mL,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg/mL。荧光分析方法测定的黑色素最低浓度为0.5μg/mL,而紫外分光光度法测定的最低浓度为5μg/mL。样品前处理的最佳条件为:NaOH浓度最佳范围为0.1-0.2 M,超声时间为40 min,超声温度为70℃。乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为55℃、氧化时间为2 h,过氧化氢浓度为20%-25%。稳定实验RSD为1.49%、仪器精密度实验RSD值为2.03%。加标回收实验中平均回收率为102.865%,RSD为4.505%,取0.2 g鲜重采用该方法测得腿部肌肉,胸肌和鸡皮肤中的黑色素含量分别为0.879±0.023 mg,0.681±0.012 mg和2.162±0.075 mg,分别占鲜重的0.439%,0.340%,1.081%。以上结果表明该方法准确性较高,且无需从样品中提取黑色素,大大缩短了反应时间,有效地简化了分析操作。2.建立一种测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的H_2O_2氧化-荧光分析方法。结果表明:乌骨鸡黑色素标准品(100μg/mL)的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm。乌骨鸡黑色素在浓度范围10-100μg/mL内的回归方程为y=0.0147X+0.3138,r=0.9974,乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为55℃、氧化时间为2h,过氧化氢浓度为24%-26%。这与上述确认的乌骨鸡黑色素最佳氧化反应条件基本一致,重复性实验RSD值为4.59%,精密度实验RSD值为1.87%。在A375细胞中添加不同浓度的黑色素标准品(25μg/mL、40μg/mL、80μg/mL),测定值与理论值的相对误差分别为2.78%、3.53%、0.25%,在乌骨鸡黑色素细胞样品中添加不同浓度的乌骨鸡黑色素标准品,所得的平均加标回收率为95.57%,RSD值为4.00%,结果表明H_2O_2氧化-荧光分析方法测定准确可靠,并且不受胞内杂蛋白和脂质的影响。3.当IBMX浓度在200-500μM之间时,各浓度能显着抑制黑色素细胞的生长(P<0.01),并且乌骨鸡黑色素细胞存活率随着IBMX的浓度的增加而降低,细胞存活率在40.64%-80.98%之间。浓度为100μM的IBMX对乌骨鸡黑色素细胞的活性并无显着的影响。浓度为100μM和300μM的IBMX相对于空白组能够显着地促进乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的合成量(P<0.01)。当IBMX浓度达到400μM时也能显着提高乌骨鸡黑色素细胞中的黑色素含量(P<0.05)。200μM以及500μM的IBMX对黑色素细胞合成黑色素并无显着的促进作用。综上所述,在所试浓度范围内,IBMX能够显着促进乌骨鸡黑色素细胞中黑色素的合成。4.观察RAW264.7细胞的形态,用MTT法测定细胞活力以及测定RAW264.7细胞的NO生成量,探究促进RAW264.7细胞产生炎症的最佳LPS浓度,结果发现LPS为1μg/mL时对细胞毒性最小、NO生成量最大。因此建立了LPS诱导RAW264.7细胞的炎症模型,在此基础上进一步研究了不同浓(0.2-125μg/mL,以乌骨鸡黑色素细胞胞内蛋白的浓度计为细胞的裂解液浓度)乌骨鸡黑色素细胞裂解液对RAW264.7细胞的生长的影响,以及在不同作用时间和不同作用模式下,乌骨鸡黑色素细胞的裂解液在对RAW264.7的NO生成量的影响。结果表明:乌骨鸡黑色素细胞的裂解液浓度在0.2-25μg/mL内对RAW264.7细胞的生长无显着影响,当BMCL浓度上升至25和125μg/mL时,细胞的存活率分别为115.66%和157.50%,和空白组相比有显着的差异(P<0.01),能够促进RAW264.7细胞的增殖。因此选择1、5、25μg/mL分别作为乌骨鸡黑色素细胞裂解液的低、中和高浓度进行后续实验。在预防模式、共同作用模式以及治疗模式下,浓度为1、5、25μg/mL乌骨鸡细胞的裂解液的对细胞NO生成量有不同程度的影响,相比之下,预防模式下乌骨鸡细胞的裂解液对细胞NO生成的抑制率最大,抗炎效果最明显。当作用不同时间时,高、中和低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液均能显着降低细胞NO生成量(P<0.01)。5.钙、铁元素作用后的高(25μg/mL)、中(5μg/mL)和低浓度(1μg/mL)的乌骨鸡黑色素细胞裂解液相对模型组(1μg/mL)均能显着降低RAW264.7细胞的NO的生成量(P<0.01),这表明钙、铁元素能增强乌骨鸡黑色素细胞裂解液抗炎作用,且氯化钙相对于天门冬氨酸螯合钙更能促进乌骨鸡黑色素细胞裂解液抗炎效果的增强,Fe~(2+)的促进作用强于Fe~(3+)。6.建立H_2O_2诱导HUVEC细胞损伤的模型,观察细胞形态,运用MTT法测定细胞活力,测定不同浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液作用后的细胞培养液中LDH活性、SOD酶活性以及MDA含量。结果表明H_2O_2致HUVEC细胞达半数死亡的浓度为1 mM,且该浓度下细胞培养液中的LDH活性值最高,以此浓度建立HUVEC细胞损伤的模型。在此基础上的研究结果表明,浓度为0.2-25μg/mL的乌骨鸡黑色素细胞裂解液对HUVEC细胞活性无显着影响,当浓度达到25μg/mL以上时,对HUVEC细胞生长的促进作用较显着(P<0.01)。本文选择1、5、25μg/mL作为乌骨鸡黑色素细胞裂解液的低、中和高浓度进行后续实验。1和5μg/mL的VC对HUVEC细胞活性无显着影响,选用5μg/mL的VC作为对照组,比较乌骨鸡黑色素细胞裂解液和VC对氧化损伤保护作用的强弱。进一步研究结果表明,相对于模型组(1mM H_2O_2),高、中浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够显着增加HUVEC细胞的存活率(P<0.01),同浓度的中浓度的VC并未显增加HUVEC细胞的存活率。高、中和低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够显着降低细胞培养液中LDH酶活,增加SOD酶活性(P<0.01)。相对于模型组(1 mM H_2O_2),中浓度的VC对细胞培养液中的LDH酶活和SOD酶活都无显着影响。高、低浓度的乌骨鸡黑色素细胞裂解液能够降低细胞中MDA的含量,相比之下,中浓度的VC也能显着降低MDA含量。综上所述,乌骨鸡黑色素细胞裂解液的对氧化损伤的HUVEC细胞的保护作用强于VC。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-18）
庞雅湘,聂启昊,刘晓宁,王帅,冯琦[2]（2019）在《3种细胞裂解液提取总蛋白在Western blot中的效果分析》一文中研究指出目的寻找一种适用于培养血管平滑肌细胞总蛋白提取的细胞裂解液配方,以更好地应用于Westernblot分析。方法采用3种常用的细胞裂解液(Ⅰ液,Ⅱ液和Ⅲ液),提取总蛋白后Bradford法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离提取的蛋白,Western blot检测PDGFR-β、Akt、GAPDH和SM22α等不同分子量的蛋白表达情况。结果 3种细胞裂解液得到的蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。小分子量蛋白(<50 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);中等分子量蛋白(50 000～80 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);高分子量蛋白(>80 000),细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05)。Western blot结果显示:PDGFR-β,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);Akt,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);GAPDH,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05);SM22α,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05)。结论确定了一种裂解效果更好、能满足对不同分子量蛋白进行Western blot检测的裂解液配方,为以Western blot为主的蛋白检测相关研究提供了一定的参考。(本文来源于《河北医科大学学报》期刊2019年03期）
程莉[3]（2017）在《细胞裂解液芯片（CLICK芯片）技术的建立及系统性发现组蛋白位点修饰调控蛋白的研究》一文中研究指出组蛋白翻译后修饰能够改变染色体的结构,影响基因的转录激活,参与多种重要的细胞生命过程,包括细胞分化、细胞凋亡、X染色体失活、基因转录以及DNA损伤修复等。目前已知的组蛋白标记(histone mark)已达500多种。大量研究阐述了这些组蛋白标记在细胞生命过程中的作用,然而这些组蛋白标记是怎样被严密调控的却知之甚少,尤其是一些新发现的组蛋白标记。传统的发现调控蛋白的方法主要依靠于结构及序列相似性比对和单个基因的突变检测,存在效率低且具有盲目性的问题。目前缺少一种能从蛋白质组水平快速有效地发现组蛋白修饰调控蛋白的手段。在本研究中,基于我所在实验室在蛋白芯片研究方面的长期积淀,我们期望利用反相蛋白芯片的技术思路以酿酒酵母基因敲除/突变库为样本结合特异性组蛋白标记抗体来构建一种快速寻找组蛋白标记相关蛋白的方法。首先,我们对所获得的抗体通过免疫印记的方法进行筛选,获得了6个符合特异性要求的抗体。接着,我们测试了叁种常用的蛋白芯片的点样基片,最终确定了合适的样品裂解条件和点样条件。由此我们构建了包含4,837个酵母敲除菌和322个酵母温度敏感突变菌的裂解液芯片。为了凸显该芯片能够在一次实验中同时检测数以千计的不同的细胞裂解液,我们将该芯片命名为CLICK(cell lysate microarray on kilo-conditions)芯片。为了确认芯片的可靠性,我们选择了两个已被深入研究的组蛋白标记H3K4me3和H3K36me3进行验证。对比已有研究,一次芯片实验能够发现80%以上的已知调控蛋白,尤其是能够正向调控修饰水平的蛋白,证明了CLICK芯片的可靠性。同时,通过对比两次芯片的结果,我们还首次提出Set2依赖的H3K36me3对H3K4me3修饰水平的调控途径,发现了两种组蛋白修饰H3K4me3和H3K36me3可能存在的交互作用。为了进一步证明CLICK芯片能够用于发现新的组蛋白位点修饰的调控蛋白,我们选择了一种目前研究得相对不清楚的组蛋白乙酰化位点修饰——H4K16ac作为例子,期望能找到新的调控其修饰水平的蛋白。通过芯片实验,我们找到了两个相关的蛋白Cab4p和Cab5p。它们参与CoA的合成,分别催化合成通路中的最后两步。由于它们在CoA合成中的重要作用,进一步的研究发现它们不仅对H4K16ac有影响,还对多种酰化都有影响,包括H3K56和H4K8位的乙酰化、H4K12位的丙酰化、H3K9位的丁酰化、H3K14和H4K12位的巴豆酰化以及H4K12位的β-羟基丁酰化。质谱结果进一步确认了组蛋白酰化修饰水平的降低是与胞内CoA及酰化CoA含量的降低相关。由于CoA合成通路在物种间具有高度保守性,我们预测Cab4p和Cab5p的人同源蛋白Coasy对组蛋白的酰化也具有类似的影响。综上所述,本论文以蛋白质芯片为载体、以酿酒酵母作为研究对象结合组蛋白标记特异性抗体,建立了一整套简便通用的检测组蛋白标记调控蛋白的方法。本论文所构建的CLICK芯片是全球第一张酵母全裂解液芯片,其上包含4,837酵母非必需基因敲除菌株和322个酵母必需基因突变菌株的酵母裂解液,覆盖82%的酵母基因组。同时,该方法能够从基因组水平对影响组蛋白特异性修饰的蛋白进行全局性寻找,大大提高了检测速度和检测效率,且能够找到到一些间接影响组蛋白修饰水平的蛋白,弥补了传统依赖于免疫印迹和蛋白相互作用的方法的不足。同时,本方法并不仅仅局限于组蛋白标记领域,还适用于寻找任意酿酒酵母蛋白翻译后修饰的调控蛋白,并且本方法的指导思想也同样适用于其它物种的翻译后修饰调控蛋白的发现。(本文来源于《上海交通大学》期刊2017-12-01）
秦梦菲,孙鸿,宋浩[4]（2017）在《分枝杆菌细胞裂解液催化甾体激素C_(1,2)位脱氢反应的研究》一文中研究指出9β,11β-环氧-17α,21-二羟基-16β-甲基孕-1,4-二烯-3,20-二酮(Ⅳ)是生产9-氟甾体激素的关键前体,以9β,11β-环氧-17α,21-二羟基-16β-甲基孕-4-烯-3,20-二酮-21-醋酸酯(Ⅰ)为底物合成Ⅳ是工业化生产Ⅳ的重要方法。通过比较分枝杆菌全细胞转化法与细胞裂解液转化法,发现分枝杆菌全细胞只能将Ⅰ转化为9β,11β-环氧-17α,21-二羟基-16β-甲基孕-4-烯-3,20-二酮(Ⅱ),而细胞裂解液可以有效地将Ⅰ转化为Ⅳ,其反应机制为底物Ⅰ自发水解为中间体Ⅱ,Ⅱ在C_(1,2)位脱氢酶(KSTD)的催化作用下发生C_(1,2)位脱氢反应生成产物Ⅳ。为进一步提高产物Ⅳ的转化率,利用基因工程手段在分枝杆菌中分别过表达编码KSTD的关键基因:kst D、kst D3和kstD_M,提高脱氢反应效率,结果表明1 g/L底物Ⅰ在pH7.0的重组菌株MS136-kst D_M细胞裂解液中反应45h,Ⅳ的转化率为78.4%,比出发菌株提高了38.9%;并优化缓冲液pH,提高反应速率,结果表明1 g/L底物Ⅰ在pH7.5的重组菌株MS136-kstD_M细胞裂解液中反应45 h,Ⅳ的转化率为92.8%,比出发菌株提高了63.4%。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2017年08期）
王俊怡,金银鹏,李洪超,孟凌玉,李莉[5]（2017）在《超声破碎及反复冻融收集脂肪间充质干细胞裂解液的最优条件（英文）》一文中研究指出背景:旁分泌在间充质干细胞治疗方面起主要作用。提取间充质干细胞裂解液,可以避免直接间充质干细胞本身所致栓塞、肿瘤以及免疫排斥反应等问题,然而目前提取间充质干细胞裂解液的方法存在差异。目的:比较超声破碎及反复冻融方法获得间充质干细胞裂解液的差异。方法:(1)从健康的人腹部皮下脂肪中分离出脂肪间充质干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞,胎牛血清培养基体外培养扩增,并采用流式细胞检测仪鉴定其常用表面标记;(2)采用反复冻融及超声细胞破碎2种破壁方法,将1×10~9 L~-1,2×10~9 L~-1,4×10~9 L~-1 3种不同密度的细胞分别置于生理盐水与双蒸水中进行破碎,比较细胞破碎率及裂解液蛋白含量的差异。结果与结论:(1)通过体外分离人体脂肪组织,可获得脂肪间充质干细胞;(2)细胞裂解时,细胞浓度越高,破壁所需时间越长,而破碎时间越长,则细胞破碎率越大;(3)生理盐水中超声细胞破碎法得到的蛋白含量较其他条件高;(4)结果提示在生理盐水环境下使用超声方法提取脂肪间充质干细胞裂解液尤为有效,且推荐细胞浓度为4×10~9 L~-1以内。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2017年17期）
马雯,徐林楠,李先江,白玉,刘虎威[6]（2017）在《半胱氨酸功能化金属有机框架材料用于Hela细胞裂解液中N端糖基化肽的高效富集》一文中研究指出蛋白质糖基化不仅参与蛋白质折迭,受体激活,免疫应答等一系列生物学过程,糖基化程度的异常还与阿尔兹海默症和各类恶性肿瘤的发生发展息息相关1。然而,由于糖基化不均一,糖蛋白丰度低和受到其他大量非靶标肽段的干扰,对糖基化肽段的高效富集成为后续质谱分析的瓶颈问题。目前,已经开发出多种针对糖基化肽的选择性富集策略2,其中,亲水相互作用法由于具有较好的重现性,非歧视富集能力和与质谱较好的兼容性而受到广泛关注3。但是,绝大多数基于亲水法设计的富集材(本文来源于《第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集》期刊2017-05-19）
杨波[7]（2016）在《组蛋白变异体H2A.X在卵母细胞裂解液逆转化小鼠胎儿成纤维细胞(MEFs)成为诱导性多能干细胞(iPSC)中的作用研究》一文中研究指出卵母细胞通过一定的方法裂解后,细胞内能够维持干细胞多能性的一些关键蛋白和信息分子如细胞因子、转录调控因子等被释放出来。小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)经过渗透化处理后,细胞膜的通透性增加,这些因子就可能进入体细胞,促使其发生内源性的染色质结构重建、DNA去甲基化、组蛋白乙酰化、印记基因表达、维持多能性的必需基因的活化等重编程过程,从而将已分化的体细胞逆转成为诱导性多能干细胞(Induced pleuripotent stem cells,iPSCs)的状态。由于核小体的基本结构是由核心组蛋白八聚体构成的,核小体的紧密程度直接影响了DNA解螺旋及基因的活化,进而影响到了细胞重编程的进行。组蛋白拥有众多变异体,尤其是H2A家族变异体最为丰富,人工替换核小体中的典型组蛋白H2A能够起到调节细胞生理功能的作用。根据以上基因活化原理和核小体组蛋白修饰影响基因表达及活化的研究结果,本研究在运用卵母细胞裂解物诱导已分化体细胞基因组重编程、促使其逆分化为多能干细胞的试验中,通过进一步添加组蛋白变异体H2A.X蛋白、DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)叁种物质组合,研究被诱导体细胞重编程发生的原理,探索其提高重编程效率、缩短重编程时间和简化重编程试验方法的可能途径。研究试验如下:试验一小鼠卵母细胞裂解液逆转化MEFs为iPSCs的研究本研究通过体外获取小鼠卵母细胞,制备卵母细胞裂解液,利用其中含有的重编程因子,将不同浓度的卵母细胞裂解液(20个/20μl、30个/20μl、40个/20μl、50个/20μl和60个/20μl)与经过适宜浓度链球菌溶血素O(streptolysin O,SLO)(25U)渗透化处理的第叁代MEFs共孵育,以研究不同浓度的卵母细胞裂解液对MEFs重编程的影响。然后,通过在卵母细胞裂解液重编程中添加单一的表观遗传修饰因子TSA或5-Aza-dC和同时添加TSA、5-Aza-dC两种因子,观察不同处理之间重编程效率的差异,旨在优化卵母细胞裂解液重编程体细胞的体系,提高重编程效率,减少重编程时间。结果表明:当卵母细胞裂解液浓度为40个/20μl、50个/20μl和60个/20μl时,iPSCs的集落数(分别为24±1.25个、23.88±0.47个和22±1.63个)极显着高于20个/20μl和30个/20μl处理组的集落数(分别为11.33±1.7个和17±0.82个)(P<0.01),而卵母细胞裂解液浓度为40个/20μl、50个/20μl以及60个/20μl时所形成的ipscs集落数差异不显着(p>0.05);当在卵母细胞裂解液重编程基础上同时添加了tsa和5-aza-dc时,ipscs集落数(35.88±0.77个)显着高于只添加一种表观遗传修饰因子tsa或5-aza-dc的集落数(分别为29±1.45个、30±0.98个)(p<0.05)。因此,在卵母细胞裂解液浓度为40个/20μl、50个/20μl和60个/20μl重编程效率差异不大的情况下,宜采用40个/20μl卵母细胞裂解液重编程mefs,同时,为了提高重编程效率,缩短时间,添加表观遗传修饰因子tsa和5-aza-dc能更大程度的提高卵母细胞裂解液重编程的效率。试验二组蛋白变异体h2a.x蛋白的重组表达及分离纯化本试验通过构建小鼠组蛋白变异体h2a.x重组质粒,利用大肠杆菌系统对重组质粒进行扩增,并对重组质粒进行分离及鉴定,以扩大质粒dna量为转染hek-293t提供大量的h2a.x重组质粒。然后,运用抽提的重组质粒dna转染hek-293t细胞,采用含有效浓度为800ng/ml的新霉素(geneticin,g418)筛选阳性克隆细胞,并对阳性克隆进行增殖培养,以获取大量转染质粒的克隆细胞为后续提取大量变异体h2a.x蛋白提供充足的细胞来源。最后,利用ni-agarosehis标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)对变异体蛋白h2a.x进行分离纯化,并采用sds-page对分离的蛋白质进行纯度分析,旨在分离纯化出大量优质的变异体h2a.x蛋白。结果表明:抽提的重组质粒dna浓度为300ng/μl,电泳结果显示两条带,其中4.7kbp为质粒,440bp为目的基因h2a.x;经过g418筛选15天后稳定转染的阳性克隆细胞贴壁率达90%以上;经分离纯化的变异体h2a.x蛋白的浓度为38.96μg/ml,sds-page电泳结果显示蛋白样品纯度高,大小为16.7kd。试验叁不同分化阶段小鼠细胞变异体h2a.x蛋白含量的测定本试验利用酶联免疫技术(enzymelinkedimmunosorbentassay,elisa)对不同分化阶段的细胞,包括小鼠卵母细胞、mefs、受精卵、2-细胞期胚胎、4-细胞期胚胎、8-细胞期胚胎、桑椹胚、囊胚胚胎干细胞(embryonicstemcells,escs)和ipscs进行组蛋白变异体含量的测定,旨在探究出不同分化阶段细胞的变异体含量变化趋势。结果表明:不同阶段的细胞变异体蛋白的含量分别为mefs(40个/20μl)为15.8±0.93ng,卵母细胞裂解液(40个/20μl)为57±1.64ng,受精卵(40个/20μl)为87.2±1.45ng,2-细胞期胚胎(20个/20μl)为73.13±1.24ng,4-细胞期胚胎(10个/20μl)为66.2±1.76ng,8-细胞期胚胎(5个/20μl)为60.5±2.12ng,桑椹胚内的细胞(40个/20μl)为65.2±1.78ng,囊胚内的细胞(40个/20μl)为66.4±1.15ng,escs(40个/20μl)含量为68.23±1.54ng,ipscs(40个/20μl)为60±1.83ng。试验数据表明:mefs在重编程前组蛋白变异体h2a.x蛋白含量低,重编程后形成的ipscs变异体蛋白含量高;早期胚胎阶段,组蛋白变异体h2a.x蛋白总体呈下降趋势。因此,细胞基因组dna的活动性随细胞内组蛋白变异体h2a.x含量的升高而增加。试验四h2a.x对小鼠卵母细胞裂解液逆转化mefs为ipscs效率的影响本研究通过在卵母细胞裂解液重编程mefs的过程中单一添加不同浓度的变异体h2a.x(0ng/20μl、30ng/20μl、60ng/20μl、90ng/20μl和120ng/20μl),探究添加外源性组蛋白变异体H2A.X蛋白是否对卵母细胞裂解液重编程的过程具有促进作用;再通过添加H2A.X蛋白、TSA、5-Aza-dC叁种物质到卵母细胞裂解液中观察重编程MEFs为iPSCs的情况,旨在探讨更快、更安全的卵母细胞裂解液重编程体细胞的方法。最后,通过ELISA检测H2A.X蛋白处理过的MEFs、未经H2A.X蛋白处理的MEFs、H2A.X处理后所得iPSCs、未经H2A.X蛋白处理所得iPSCs中组蛋白变异体H2A.X蛋白水平的变化,进一步探讨组蛋白变异体是如何影响染色质结构继而影响重编程的效率。结果表明:当添加变异体H2A.X蛋白的浓度为60ng/20μl,90ng/20μl和120ng/20μl时,iPSCs集落数(分别为35.67±0.94个、34±0.82个和32.33±1.25个)极显着高于其他处理组(分别为24.63±1.25和28.67±1.70)(P<0.01),添加60ng/20μlH2A.X蛋白所得iPSCs集落数最高;同时加入变异体H2A.X蛋白、TSA和5-Aza-dC,形成的iPSCs集落数(45±0.62个)极显着高于只添加一种或任意两种小分子物质集落数(34.67±0.88个,39±1.10个、41.27±1.4个)(P<0.01);经变异体H2A.X蛋白处理的MEFs的变异体H2A.X蛋白含量为20.8±1.33,极显着高于未经变异体H2A.X蛋白处理MEFs的15.8±0.93(P<0.01),形成的iPSCs的变异体H2A.X蛋白含量差异不明显(P>0.05)。因此,宜采用在卵母细胞裂解液中添加60ng/20μlH2A.X蛋白、50ng/m L TSA和2μg/mL 5-Aza-dC重编程MEFs为iPSCs,经过组蛋白变异体H2A.X蛋白处理后,MEFs的变异体H2A.X蛋白含量明显增加,并且也显着提高了MEFs的重编程效率。结论:宜采用40个/20μl的卵母细胞浓度进行卵母细胞裂解液的重编程,为了提高其重编程的效率,宜添加表观遗传修饰因子:TSA和5-Aza-dC;在重编程逆转化前后,MEFs中组蛋白变异体H2A.X蛋白的含量变化明显,经过变异体H2A.X处理后,其含量明显增加,逆转化效率也得到提高,表明组蛋白H2A.X含量的高低能够影响重编程的效率。组蛋白变异体H2A.X蛋白在早期胚胎发育的过程中变化并不明显,但总体都是高于卵母细胞和MEFs,低于受精卵,表明细胞基因组DNA的活动性随细胞内组蛋白变异体H2A.X含量的升高而增加;组蛋白变异体H2A.X蛋白能够提高卵母细胞裂解液逆转化MEFs形成iPSCs的效率,而且添加DNA甲基化抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂均有助于组蛋白变异体提高卵母细胞裂解物重编程MEFs为iPSCs的能力。(本文来源于《西南大学》期刊2016-05-26）
樊点莲,侯秀英,傅松涛[8]（2015）在《人源干细胞裂解液制备及其对黄褐斑的疗效观察》一文中研究指出目的制备人源干细胞裂解液,考察其对黄褐斑的疗效。方法分离培养脐带间充质干细胞,经液氮超低温反复冻融和微滤制备人源干细胞裂解液,对该液以及其与玉石刮痧联合应用治疗黄褐斑的效果进行临床观察。结果人源干细胞裂解液、玉石刮痧及二者联合应用对黄褐斑均有治疗效果,联合应用的效果优于玉石刮痧(P<0.05)。结论人源干细胞裂解液玉石刮痧是一种对黄褐斑治疗效果明显的新疗法。(本文来源于《世界中西医结合杂志》期刊2015年08期）
闫国旗,李汉臣,齐博,朱德奇,赵宝生[9]（2015）在《人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物和基质金属蛋白酶-2表达的影响》一文中研究指出目的探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)裂解液对食管癌EC9706细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法收集h UCMSCs,采用反复冻融法制备h UCMSCs裂解液;不同浓度h UCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞60 h,对照组加入体积分数10%胎牛血清的培养液。采用Western blot法检测食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达。结果加入h UCMSCs数<食管癌细胞数的裂解液时,食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);加入h UCMSCs数≥食管癌细胞数的裂解液时,食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达较对照组显着降低(P<0.05)。结论 h UCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞的迁移抑制作用可能与u PA、MMP-2有关。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2015年04期）
闫国旗[10]（2015）在《人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的影响》一文中研究指出背景食管癌是消化道常见的恶性肿瘤,发病率高,占世界恶性肿瘤中第八位,在中国居第四位。尽管人们对其进行了长期的研究,包括手术切除、化学治疗及放射治疗等一系列的治疗方案,但其5年生存率仍仅为15%。导致食管癌术后死亡率高的原因很多,术后转移是重要的原因之一。尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator, uPA)能激活纤溶酶及其他多种蛋白溶解酶。它们在肿瘤的侵袭及转移过程中也具有促进作用,因为可以降解阻碍细胞转移的天然屏障细胞外基质(extracellular matrix, ECM)等,给肿瘤细胞清除了转移过程中的阻力。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)具有降解ECM,破坏基膜(basement membranae, BM)完整性的酶系统,在肿瘤细胞侵袭转移中起着非常关键的作用。实验已经证实,人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)裂解液对食管癌细胞EC9706的增殖和迁移均有抑制作用。目的本实验重点是探索hUCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的表达的影响。为进一步研究抑制作用机理奠定理论基础。为临床应用干细胞抑制食管癌肿瘤转移的治疗方法提供理论依据。方法1.培养食管癌EC9706细胞；2.采用组织块培养法培养hUCMSCs,待细胞传至第3代后流式细胞仪检测细胞表型；3.收集hUCMSCs,用反复冻融法制备hUCMSCs裂解液；4.各个组拥有相同数量的食管癌EC9706细胞,向每组加入不同数量的hUCMSCs裂解液,然后培养60h。使用Western-blot法检测食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的表达变化。结果食管癌细胞EC9706在倒置显微镜下观察其呈多边形,形态多样,细胞核质比较大,细胞核形态不规则,细胞群体排列不规则。hUCMSCs组织块培养法原代培养7-12d后,显微镜下可见梭形或多角形成纤维细胞。随后可以发现hUCMSCs呈成纤维状,漩涡状排列。流式细胞仪分析第3代hUCMSCs可检测到实验组各组细胞CD90、CD 166等MSCs标志物高表达,不表达造血细胞表面特异性标志CD34、CD45。当用hUCMSCs裂解液处理过食管癌EC9706细胞后,uPA在对照组中的表达为0.28075±0.00233,在1/2倍组中的表达为0.28790±0.00176,在1倍组中的表达为0.13782±0.00542,在2倍组中的表达为0.12465±0.01277。MMP-2在对照组中的表达为0.27051±0.01956,在1/2倍组中的表达为0.26698±0.00231,在1倍组中的表达为0.13017±0.01529,在2倍组中的表达为0.11755±0.00982。当加入hUCMSCs数小于食管癌细胞数的裂解液时uPA、MMP-2的表达变化不明显(P>0.05),当加入hUCMSCs数大于或等于食管癌细胞数的裂解液时uPA、MMP-2的表达显着降低(P<0.05)。结论人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌细胞EC9706的迁移的抑制作用可能与尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶-2有关。(本文来源于《新乡医学院》期刊2015-03-01）
脾细胞裂解液论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的寻找一种适用于培养血管平滑肌细胞总蛋白提取的细胞裂解液配方,以更好地应用于Westernblot分析。方法采用3种常用的细胞裂解液(Ⅰ液,Ⅱ液和Ⅲ液),提取总蛋白后Bradford法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离提取的蛋白,Western blot检测PDGFR-β、Akt、GAPDH和SM22α等不同分子量的蛋白表达情况。结果 3种细胞裂解液得到的蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。小分子量蛋白(<50 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);中等分子量蛋白(50 000～80 000),细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);高分子量蛋白(>80 000),细胞裂解液Ⅲ得到的光密度值高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05)。Western blot结果显示:PDGFR-β,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ(P<0.05);Akt,细胞裂解液Ⅱ和细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ,细胞裂解液Ⅲ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅱ(P<0.05);GAPDH,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05);SM22α,细胞裂解液Ⅱ所检测到的条带光密度值显着高于细胞裂解液Ⅰ和细胞裂解液Ⅲ(P<0.05)。结论确定了一种裂解效果更好、能满足对不同分子量蛋白进行Western blot检测的裂解液配方,为以Western blot为主的蛋白检测相关研究提供了一定的参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脾细胞裂解液论文参考文献
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[3].程莉.细胞裂解液芯片（CLICK芯片）技术的建立及系统性发现组蛋白位点修饰调控蛋白的研究[D].上海交通大学.2017
[4].秦梦菲,孙鸿,宋浩.分枝杆菌细胞裂解液催化甾体激素C_(1,2)位脱氢反应的研究[J].中国生物工程杂志.2017
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[6].马雯,徐林楠,李先江,白玉,刘虎威.半胱氨酸功能化金属有机框架材料用于Hela细胞裂解液中N端糖基化肽的高效富集[C].第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集.2017
[7].杨波.组蛋白变异体H2A.X在卵母细胞裂解液逆转化小鼠胎儿成纤维细胞(MEFs)成为诱导性多能干细胞(iPSC)中的作用研究[D].西南大学.2016
[8].樊点莲,侯秀英,傅松涛.人源干细胞裂解液制备及其对黄褐斑的疗效观察[J].世界中西医结合杂志.2015
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[10].闫国旗.人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中uPA、MMP-2的影响[D].新乡医学院.2015
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