本文主要研究内容
作者贾银海（2019）在《基于唾液蛋白组学开发鉴定水牛发情方法的研究》一文中研究指出：发情鉴定的准确性是影响水牛的繁殖性能的重要因素。生产中大约有50%左右的水牛发情现象不能被准确监测,导致错过了最佳配种时间,造成经济损失。因此,筛选一种简单可行的鉴定水牛发情的方法,对水牛生产和繁育具有重要意义。本研究以非侵入性的体液(唾液)作为试验材料,对成年母水牛整个发情周期的血液和唾液激素变化,发情期唾液结晶变化与卵巢卵泡发育进行关联分析;以蛋白定量技术(iTRAQ,isobaric tags for relative and absolute quantitation)分析了不同发情期的差异蛋白并进行验证。主要研究结果如下:1.水牛唾液和血液发情周期生殖激素的变化规律。本研究采用酶联免疫分析方法(ELISA)分别对水牛整个发情周期的唾液和血液的生殖激素水平变化规律进行测定:水牛血液和唾液中的E2和P4呈波动性变化,发情前期,唾液中P4浓度一直维持在6.5～7.1ng/mL,第13天达到峰值,随后快速下降。唾液中E2浓度在发情前期第3～5天出现一个峰值,在14～17d唾液中E2浓度显著升高,出现第二个峰值。唾液E2和P4浓度的变化趋势和血清E2和P4浓度的变化趋势基本一致。母水牛唾液E2和P4浓度相关性极显著相关(R=0.7754,P<0.01),母水牛唾液和血清标本的FSH浓度相关性显著(R=0.3471,P<0.05)。2.发情周期唾液结晶几何结构分析。水牛发情周期唾液表现为蕨类植物形态,树枝样形态,松针样形态,圆点型,树枝型-蕨类植物结合型等多种形态;发情当天可见典型的蕨类植物形态和树枝样形态。经B超同步检测卵巢上卵泡的发育情况发现,典型的唾液结晶形态与发情当天卵巢上优势卵泡的发育相一致,且唾液结晶的分形几何分析得出,发情当天分形维值最低。3.水牛唾液生殖激素、唾液结晶和卵泡变化进行关联分析。水牛发情当天唾液雌激素的水平为240.16±32.92pg/mL,达到一个峰值,随后开始缓慢的降低。水牛唾液中孕激素水平在发情前48小时达到了 16.50±5.82ng/mL,发情当天降低到8.95±7.50ng/mL。水牛发情阶段LH在发情前24小时逐渐下降,激素水平从6.05 ±0.81 ng/mL到3.95士2.06ng/mL;但在发情后12小时后逐渐升高,达到6.22±1.68ng/mL。FSH激素水平基本比较平稳,变化不大。B超监测卵巢卵泡卵泡从发情前2天迅速生长,到发情当天达到20mm左右,卵泡的大小直到破裂排卵变化不显著。排卵后形成的黄体,黄体期一直维持到下次发情前四天左右,期间在发情后14～17天黄体的最大,与前面得出的水牛唾液中促黄体激素分泌峰一致。并对并对唾液结晶方法、直肠检查法、唾液结晶+B超、直肠检查+B超四种方法进行了生产中的验证,得出唾液结晶+B超的发情率最高,妊娠率比其他组高,但差异不显著。4.选取发情周期水牛的唾液作为试验材料,采用iTRAQ蛋白质组定量技术鉴定水牛发情周期的差异蛋白表达。共鉴定1160个蛋白质,VENN图对发情周期的不同阶段的组别(间情期:发情前期;间情期:发情期;间情期:发情后期;间情期:发情前期+发情期+发情后期)进行分析发现,这四个组有105个共有蛋白,发情期与间情期组有87特有差异蛋白。所有鉴定到的蛋白分别参与到了 7个代谢通路中,参与蛋白数量最多的通路是唾液分泌,应用生物学信息分析软件进行了差异蛋白的网络互作分析。发情期与间情期组的差异蛋白质之间的互作关系网络图分析发现共有297个点,形成的两两互作关系有1272个,显示最高的基因是“ENO1”。5.采用免疫印迹法对水牛发情周期筛选的差异蛋白SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70、ENDOU 进行了验证。验证的蛋白中 SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70 蛋白在发情期唾液中的表达量的比间情期、发情前期和发情后期这三个发情阶段的变化明显提高。ENDOU(PP11)蛋白的表达量在发情前期升高,发情期降低。验证蛋白的变化趋势和蛋白组学研究结果相一致。不同水牛的SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70三个蛋白验证结果与上述结果也一致,ANNEXIN、HSP-70可能作为后续试剂盒开发的候选蛋白用于后续的研究。
Abstract
fa qing jian ding de zhun que xing shi ying xiang shui niu de fan shi xing neng de chong yao yin su 。sheng chan zhong da yao you 50%zuo you de shui niu fa qing xian xiang bu neng bei zhun que jian ce ,dao zhi cuo guo le zui jia pei chong shi jian ,zao cheng jing ji sun shi 。yin ci ,shai shua yi chong jian chan ke hang de jian ding shui niu fa qing de fang fa ,dui shui niu sheng chan he fan yo ju you chong yao yi yi 。ben yan jiu yi fei qin ru xing de ti ye (tuo ye )zuo wei shi yan cai liao ,dui cheng nian mu shui niu zheng ge fa qing zhou ji de xie ye he tuo ye ji su bian hua ,fa qing ji tuo ye jie jing bian hua yu luan chao luan pao fa yo jin hang guan lian fen xi ;yi dan bai ding liang ji shu (iTRAQ,isobaric tags for relative and absolute quantitation)fen xi le bu tong fa qing ji de cha yi dan bai bing jin hang yan zheng 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :1.shui niu tuo ye he xie ye fa qing zhou ji sheng shi ji su de bian hua gui lv 。ben yan jiu cai yong mei lian mian yi fen xi fang fa (ELISA)fen bie dui shui niu zheng ge fa qing zhou ji de tuo ye he xie ye de sheng shi ji su shui ping bian hua gui lv jin hang ce ding :shui niu xie ye he tuo ye zhong de E2he P4cheng bo dong xing bian hua ,fa qing qian ji ,tuo ye zhong P4nong du yi zhi wei chi zai 6.5～7.1ng/mL,di 13tian da dao feng zhi ,sui hou kuai su xia jiang 。tuo ye zhong E2nong du zai fa qing qian ji di 3～5tian chu xian yi ge feng zhi ,zai 14～17dtuo ye zhong E2nong du xian zhe sheng gao ,chu xian di er ge feng zhi 。tuo ye E2he P4nong du de bian hua qu shi he xie qing E2he P4nong du de bian hua qu shi ji ben yi zhi 。mu shui niu tuo ye E2he P4nong du xiang guan xing ji xian zhe xiang guan (R=0.7754,P<0.01),mu shui niu tuo ye he xie qing biao ben de FSHnong du xiang guan xing xian zhe (R=0.3471,P<0.05)。2.fa qing zhou ji tuo ye jie jing ji he jie gou fen xi 。shui niu fa qing zhou ji tuo ye biao xian wei jue lei zhi wu xing tai ,shu zhi yang xing tai ,song zhen yang xing tai ,yuan dian xing ,shu zhi xing -jue lei zhi wu jie ge xing deng duo chong xing tai ;fa qing dang tian ke jian dian xing de jue lei zhi wu xing tai he shu zhi yang xing tai 。jing Bchao tong bu jian ce luan chao shang luan pao de fa yo qing kuang fa xian ,dian xing de tuo ye jie jing xing tai yu fa qing dang tian luan chao shang you shi luan pao de fa yo xiang yi zhi ,ju tuo ye jie jing de fen xing ji he fen xi de chu ,fa qing dang tian fen xing wei zhi zui di 。3.shui niu tuo ye sheng shi ji su 、tuo ye jie jing he luan pao bian hua jin hang guan lian fen xi 。shui niu fa qing dang tian tuo ye ci ji su de shui ping wei 240.16±32.92pg/mL,da dao yi ge feng zhi ,sui hou kai shi huan man de jiang di 。shui niu tuo ye zhong yun ji su shui ping zai fa qing qian 48xiao shi da dao le 16.50±5.82ng/mL,fa qing dang tian jiang di dao 8.95±7.50ng/mL。shui niu fa qing jie duan LHzai fa qing qian 24xiao shi zhu jian xia jiang ,ji su shui ping cong 6.05 ±0.81 ng/mLdao 3.95shi 2.06ng/mL;dan zai fa qing hou 12xiao shi hou zhu jian sheng gao ,da dao 6.22±1.68ng/mL。FSHji su shui ping ji ben bi jiao ping wen ,bian hua bu da 。Bchao jian ce luan chao luan pao luan pao cong fa qing qian 2tian xun su sheng chang ,dao fa qing dang tian da dao 20mmzuo you ,luan pao de da xiao zhi dao po lie pai luan bian hua bu xian zhe 。pai luan hou xing cheng de huang ti ,huang ti ji yi zhi wei chi dao xia ci fa qing qian si tian zuo you ,ji jian zai fa qing hou 14～17tian huang ti de zui da ,yu qian mian de chu de shui niu tuo ye zhong cu huang ti ji su fen bi feng yi zhi 。bing dui bing dui tuo ye jie jing fang fa 、zhi chang jian cha fa 、tuo ye jie jing +Bchao 、zhi chang jian cha +Bchao si chong fang fa jin hang le sheng chan zhong de yan zheng ,de chu tuo ye jie jing +Bchao de fa qing lv zui gao ,ren shen lv bi ji ta zu gao ,dan cha yi bu xian zhe 。4.shua qu fa qing zhou ji shui niu de tuo ye zuo wei shi yan cai liao ,cai yong iTRAQdan bai zhi zu ding liang ji shu jian ding shui niu fa qing zhou ji de cha yi dan bai biao da 。gong jian ding 1160ge dan bai zhi ,VENNtu dui fa qing zhou ji de bu tong jie duan de zu bie (jian qing ji :fa qing qian ji ;jian qing ji :fa qing ji ;jian qing ji :fa qing hou ji ;jian qing ji :fa qing qian ji +fa qing ji +fa qing hou ji )jin hang fen xi fa xian ,zhe si ge zu you 105ge gong you dan bai ,fa qing ji yu jian qing ji zu you 87te you cha yi dan bai 。suo you jian ding dao de dan bai fen bie can yu dao le 7ge dai xie tong lu zhong ,can yu dan bai shu liang zui duo de tong lu shi tuo ye fen bi ,ying yong sheng wu xue xin xi fen xi ruan jian jin hang le cha yi dan bai de wang lao hu zuo fen xi 。fa qing ji yu jian qing ji zu de cha yi dan bai zhi zhi jian de hu zuo guan ji wang lao tu fen xi fa xian gong you 297ge dian ,xing cheng de liang liang hu zuo guan ji you 1272ge ,xian shi zui gao de ji yin shi “ENO1”。5.cai yong mian yi yin ji fa dui shui niu fa qing zhou ji shai shua de cha yi dan bai SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70、ENDOU jin hang le yan zheng 。yan zheng de dan bai zhong SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70 dan bai zai fa qing ji tuo ye zhong de biao da liang de bi jian qing ji 、fa qing qian ji he fa qing hou ji zhe san ge fa qing jie duan de bian hua ming xian di gao 。ENDOU(PP11)dan bai de biao da liang zai fa qing qian ji sheng gao ,fa qing ji jiang di 。yan zheng dan bai de bian hua qu shi he dan bai zu xue yan jiu jie guo xiang yi zhi 。bu tong shui niu de SERPRINA1、ANNEXIN、HSP-70san ge dan bai yan zheng jie guo yu shang shu jie guo ye yi zhi ,ANNEXIN、HSP-70ke neng zuo wei hou xu shi ji he kai fa de hou shua dan bai yong yu hou xu de yan jiu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的贾银海，发表于刊物广西大学2019-05-23论文，是一篇关于唾液蛋白组学论文,发情鉴定论文,生殖激素论文,唾液结晶论文,水牛论文,广西大学2019-05-23论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-05-23论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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