长沙医学院基础医学院湖南长沙410219
【摘要】目的研究联合应用钙和生物类黄酮对降低高脂血症大鼠血清中总胆固醇（T-CHO）和甘油三酯（TG）水平的作用。方法SD大鼠随机分为正常对照组、高脂对照组、钙组、生物类黄酮组、加钙生物类黄酮组，其中后四组为高脂血症建模组，以高脂饲料喂养建模组SD大鼠40天后建立高脂血症大鼠模型，正常对照组和高脂对照组以等体积生理盐水灌胃，生物类黄酮组（0.18g/kg）、钙组（1g/kg）、加钙（1g/kg）生物类黄酮（0.18g/kg）组均为等体积相对应的药物灌胃，25天后用酶法测定血清中总胆固醇（T-CHO）和甘油三酯（TG）的水平，对比钙、生物类黄酮、加钙生物类黄酮的降血脂功能。结果以高脂饲料喂养建模组大鼠40d后，与正常对照组相比，高脂模型组血清T-CHO、TG均升高且具有显著统计学意义（P<0．01），从而表明成功建立了高脂血症大鼠模型。以等体积的生物类黄酮、钙、加钙生物类黄酮灌胃25天后，各组大鼠血清T-CHO水平与高脂模型组比较，具有统计学意义（P<0．05）。钙组、生物类黄酮组大鼠血清TG水平与高脂模型组比较，具有统计学意义（P<0．05），加钙生物类黄酮组血清中TG与高脂模型组比较，具有显著统计学意义（P<0.01）；且与钙组、生物类黄酮组比较，加钙生物类黄酮组血清中的TG水平下降且有统计学意义（P<0.05），但是三组血清中的T-CHO无明显差异（P>0.05）。结论联合应用钙和生物类黄酮对降低高脂血症大鼠血清中的TG有协同作用。
【关键词】加钙生物类黄酮；高脂血症；大鼠
高脂血症是导致动脉粥样硬化的重要因素，与冠心病的发病率密切相关[1]。T-CHO和TG水平的升高可加大患冠心病的风险。因此研究T-CHO和TG的代谢异常在冠心病的发病中有重要的意义。钙是人体必需的营养素，具有多种生理调节功能，有报道称，增加膳食钙的摄人可降低高脂膳食大鼠体重、血脂水平及改善血脂紊乱状态[2，3]。生物类黄酮泛指两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列C6-C3-C6化合物，亦称为维生素P，常与维生素C伴存，在自然界分布广泛，属植物次级代谢产物，是一组存在于蔬菜、水果、花和谷物中的天然色素，因多呈黄色而称生物类黄酮。生物类黄酮能降低毛细血管通透性，改善微循环，有利于改善脂质代谢，从而达到降血脂作用[4]。为了研究联合应用钙与生物类黄酮是否比单用钙或者单用生物类黄酮降血脂作用更加明显，我们观察了增加钙、生物类黄酮、加钙生物类黄酮的摄入对高脂血症模型大鼠血清中T-CHO和TG的影响。
1材料
1.1动物
健康清洁级雌性4周龄SD大鼠50只，体重（100±10）g。购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
1.2仪器与设备
血样自动分析仪（7600—020，日本HI—TACHI公司）、台式离心机（TGL一16G，上海菲恰尔分析仪器有限公司）、电子天平（YPl0001，上海光正医疗仪器有限公司）。
1.3药物与试剂
钙片、生物类黄酮、高脂饲料、大鼠高脂饲料（配方：基础饲料粉68．3％，猪油10％，蛋黄粉10％，蔗糖10％，胆固醇1％，胆酸钠0．5％，丙基硫氧嘧啶0．2％）。
胆固醇试剂盒（TCH，20150401）、甘油三酯试剂盒（TG，20150401）均购于南京建成生化技术有限公司。
2.方法
2.1动物分组
SD大鼠于长沙医学院动物实验中心饲养，饲料饲养SD大鼠1周以适应环境。随机分组，龙胆紫标记，10只／组。分为正常对照组、高脂对照组、钙组、生物类黄酮组、加钙生物类黄酮组。自由饮水（室温23℃，相对湿度60％）。
2．2模型制备方法
高脂饲料喂养建模组大鼠，观察并记录大鼠体重变化，40天后全身麻醉，尾静脉取血，离心分离血清后马上进行血脂测定。建模组大鼠血脂水平与正常对照组相比明显升高且有意义，即为造模成功。
2．3给药方法
各组大鼠均采用等体积灌胃给药，容积均为4mL／kg。在检测血脂达标后停止高脂饲料喂养，开始分别灌胃给药治疗，持续25天。正常对照组、高脂对照组灌胃等体积生理盐水。
2．4观察指标：大鼠血清中的T-CHO、TG。
大鼠血清中的T-CHO、TG水平的检测：取血前12h大鼠禁食，（乙醚）进行全身麻醉，再进行尾静脉取血，4℃静置后以3000r／m离心10min，取出血清，立即采用全自动生化分析仪以酶法测量血清中总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）水平。具体方法参照试剂盒说明书及生化分析仪操作指南。
2．5统计学分析
所有数据都以均数±标准差（x±s）表示，用统计软件GraphPadPrism5进行统计学分析，采用方差分析（one-wayANOVA）进行多个样本均数比较，以P<0．05或P<0.01为具有统计学差异。
3结果
3.1成功建立高脂血症大鼠模型
实验40天后建模组大鼠的血清T-CHO、TG与正常对照组比较，建模组大鼠血清TG、T-CHO均高于对照组且有显著性差异（P<0．01），从而显示成功建立了高脂血症大鼠模型（图一，图二）。
3.2联合应用钙与生物类黄酮对降低高脂血症大鼠TG具有协同作用
建模成功后对钙组、生物类黄酮组、加钙生物类黄酮组进行药物灌胃25天后，把各干预组血清中的TG与高脂对照组血清中的TG进行比较，显示各干预组血清中的TG均低于高脂对照组，且加钙生物类黄酮组血清中的TG与钙组、生物类黄酮组血清中的TG相比，加钙生物类黄酮组血清中的TG水平明显下降（P<0.05），因此表明钙和生物类黄酮可协同降低高脂血症大鼠的TG水平（图三）。
3.3联合应用钙与生物类黄酮对高脂血症大鼠的T-CHO降低不具有协同作用
建模成功后对钙组、生物类黄酮组、加钙生物类黄酮组进行药物灌胃25天后，把各干预组血清的T-CHO与高脂对照组血清中的T-CHO进行比较，显示各干预组的T-CHO均低于高脂对照组且有明显差异（P<0.05），但是各干预组的血清T-CHO的降低并无明显差异（P>0.05），因此表明钙与生物类黄酮合用对高脂血症大鼠的T-CHO降低不具有协同作用（图四）。
4讨论
高脂血症是心血管疾病发病的一种重要危险因素【5】。钙膳食可能通过降低血清总胆固醇和甘油三脂，改善高脂血症。胞浆中高浓度的Ca2+可促使微管收缩，加速B颗粒的移动，有利于胰岛素的释放【6】。胰岛素需与受体结合后才可产生作用，而受体变构时也需要钙锌等离子的协同。胰岛素能促进脂肪的合成与储存，同时抑制其氧化分解，使游离脂肪酸减少。生物类黄酮能降低毛细血管通透性，改善微循环，加强维生素C的作用，并促进维生素C在体内蓄积，有利于改善脂质代谢，从而达到降血脂作用【7】，生物类黄酮还具有防止低密度脂蛋白（LDL）被氧化，并对主动脉内皮细胞腺苷脱氨酶有抑制作用，因此还可以用于防治动脉粥样硬化和各种心血管疾病。
目前临床有许多降脂药，其中主要降血脂药可分为降总胆固醇、主要降总胆固醇兼降甘油三酯、降甘油三酯、主要降甘油三酯兼降总胆固醇四大类。但是这些药物治疗高脂血症存在毒性太大，价格昂贵的问题。而钙、生物类黄酮在生活中来源广泛，经济，对人体危害小。大量实验也证实了钙、生物类黄酮分别具有降低血脂的作用，但是单独应用钙，或者单独应用生物类黄酮对降低TG的效果比联合应用两种物质的效果差，要达到相同的效果就必须加大剂量，就会承受不断增大的副反应。联合应用钙与生物类黄酮增强了降脂作用，还可以相互抵消副作用。
实验后，我们得出结论：联合应用钙和生物类黄酮对降低高脂血症大鼠血清中的TG有协同作用。但是实验结果同时显示加钙生物类黄酮组TG比正常对照组TG还要低，且具有统计学意义，P<0.05（图三），这样高幅度地降低血脂会不会对大鼠有负面影响，有待进一步证实。本课题还存在一些问题尚未探讨。我们尚未讨论出钙和生物类黄酮的何种协同比例能够达到最大药理效应。我们推测钙和生物类黄酮对VLDL、LDL及HDL的作用也是存在的，只是这种作用的大小或者存在剂量反应关系需要进一步研究。此外，联合应用钙和生物类黄酮使高脂血症大鼠的血清中的TG降低后，如果同时停止使用钙和生物类黄酮，会不会出现反弹甚至出现更高的血脂，有待进一步证实。
参考文献：
[1]赵季红，张利华，薛玉生，等。冠心病C反应蛋白及甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇比值变化的研究[J].心脏杂志，2001，13（2）：130.132
[2]孙长颢，于新凤，李颖，等．膳食钙对高脂膳食大鼠血糖、血脂及激素的影响[J]．卫生研究，2004，33（2）：164—166．
[3]张卓，徐超，郭连营，等．钙摄入量对大鼠血浆胆固醇水平影响[J]．中国公共卫生，2009，25（9）：1118—1120．
[4]李洁，梁月琴，郝一彬．苦荞类黄酮降血脂作用的实验研究[J]山西医科大学学报，2004，12，35（6）
[5]TarrideJE，LimM，DesMeulesM，etal.Areviewofthecostofcardio-vasculardisease[J].CanJCardiol，2009；25（6）：195-202.
[6]池芝盛编译．内分泌学基础与临床．北京：北京科学技术出版社，1092：566
[7]李洁，梁月琴，郝一彬．苦荞类黄酮降血脂作用的实验研究[J]山西医科大学学报，2004，12，35（6）
作者简介：
陈翠芬（1993），女，广东人，2012级临床医学本科在读生
通讯作者简介：
卞艳慧，助教，病理生理学教研室
课题基金：2014年长沙医学院校级课题。