导读:本文包含了肝祖细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝细胞,肝祖细胞,肝星状细胞,层粘连蛋白
肝祖细胞论文文献综述
徐婷[1]（2019）在《肝星状细胞通过层粘连蛋白-整合素ɑvβ6途径参与肝细胞向肝祖细胞转化》一文中研究指出【目的】在体外细胞水平证明肝硬化/慢性肝损伤时肝星状细胞促进肝细胞向肝祖细胞转化,并通过第二代高通量测序分析、ELISA、免疫组化、免疫荧光、转染等实验技术,在细胞水平探究肝星状细胞参与肝细胞向肝祖细胞转化的机制。【方法】第一,建立6WTAA、12WCCl_4两种肝硬化小鼠模型,通过天狼星红及HE染色评估肝硬化成模情况;第二,采用二步胶原酶灌注的方法提取肝硬化小鼠肝细胞及肝星状细胞,通过免疫荧光的方法对细胞纯度进行鉴定后,使用transwell共培养体系将肝细胞与活化肝星状细胞共培养,48小时后用免疫荧光技术检测肝细胞及肝祖细胞标志物的表达情况;第叁,对肝星状细胞共培养组与对照组肝细胞进行第二代高通量测序分析,采用Poly A富集的方法在mRNA水平比较两组肝细胞中基因表达差异,并通过差异基因的KEGG富集分析,对各信号通路上的差异基因数目进行统计,提供可能在肝细胞向肝祖细胞转化过程中产生影响的信号通路。在所提供的前20个信号通路中,考虑到活化肝星状细胞分泌细胞外基质导致肝脏组织细胞外基质聚集,并结合前沿文献,我们选择ECM-receptor interaction信号通路用于后续实验机制的研究;第四,利用ELISA法检测肝星状细胞培养液及对照组中层粘连蛋白(即laminin)含量,通过加入层粘连蛋白的方法进行肝细胞培养,用免疫荧光方法检测肝细胞及肝祖细胞标志物的表达情况;最后利用siRNA干扰技术干扰层粘连蛋白受体(整合素integrinβ6)表达,检测肝细胞及肝祖细胞标志物的表达情况。【结果】1、天狼星红及HE染色显示,6WTAA、12WCCl_4成功诱导出肝硬化小鼠模型;2、活化肝星状细胞与肝细胞共培养组(即HSC+组)与对照组(即HSC-组)相比,肝细胞标志物(HNF4ɑ)表达稍下降,肝祖细胞标志物(CK19、SOX9、OPN)表达增加,表明部分肝细胞向肝祖细胞转化;3、第二代高通量测序分析技术热图显示HSC+组与HSC-组肝细胞中基因表达存在差异,KEGG富集分析散点图,提供此过程中可能起作用的前20个信号通路;4、ELISA检测显示活化肝星状细胞培养液与DMEM对照组相比,层粘连蛋白表达显着增加;5、laminin培养肝细胞组(即laminin组)与对照组相比,肝细胞标志物(HNF4ɑ)表达稍下降,肝祖细胞标志物(CK19、SOX9、OPN)表达增加,表明部分肝细胞向肝祖细胞转化;6、免疫组化结果显示肝硬化时肝脏组织中整合素(integrinβ6)表达增加,免疫荧光结果显示肝祖细胞(即CK19+细胞)表达integrinβ6;7、细胞荧光、qRT-PCR、WB结果显示siRNA显着干扰肝细胞中整合素integrinβ6表达;siRNA干扰组(即siRNA组)与对照组(ncRNA组)相比,肝细胞标志物(HNF4ɑ)表达稍增加,肝祖细胞标志物(CK19、SOX9、OPN)表达下降,表明肝细胞向肝祖细胞转化过程受到抑制。【结论】肝硬化/慢性肝损伤时,肝星状细胞通过分泌细胞外基质层粘连蛋白,作用于汇管区肝细胞表面的整合素ɑvβ6受体,促进肝细胞向肝祖细胞转化。(本文来源于《华中科技大学》期刊2019-05-01）
张维玉,辜钦娅,曾德峰[2]（2018）在《低浓度血清促进胚胎肝祖细胞诱导分化》一文中研究指出为了探讨不同血清浓度诱导培养条件下对体外诱导胚胎肝祖细胞成熟分化的影响。本研究选用含有10%FBS、5%FBS、2%FBS的DMEM/HGF/FGF4肝细胞培养基体外诱导胚胎肝祖细胞的成熟分化,分别于诱导后0d、3d、6d、9d、12dALB-GLuc检测细胞白蛋白的合成水平,细胞计数检测细胞的成长曲线。RT-PCR检测肝细胞相关标志DLK、AFP、CK18,免疫荧光检测ALB、UGT1A的表达情况。ICG摄取和尿素氮检测肝细胞成熟功能。诱导后第叁天,ALB-GLuc开始增高,于第9天达高峰,2%FBS组ALB-GLuc读数最高。生长曲线显示低血清浓度下细胞的增殖速度明显慢于高血清浓度。RT-PCR和免疫荧光结果显示诱导后第9天,3个诱导组DLK、AFP表达低于无诱导组,CK18、ALB、UGT1A均高于无诱导组,2%FBS组差异最显着。3个诱导组的肝细胞ICG摄取能力明显增高,2%FBS组ICG阳性细胞数为(60.2±9.0)%,明显高于5%FBS(45.0±3.6)%及10%FBS组(35.2±2.9)%,诱导后肝细胞的尿素合成功能增强,尤其是2%FBS组。低浓度血清培养条件能更好的诱导胚胎肝祖细胞的体外成熟分化。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2018年07期）
崔洁洁,方姝煜,龚梦嘉,何昀,毕杨[3]（2018）在《全反式维甲酸调控自噬促进肝祖细胞成熟分化的作用研究》一文中研究指出该研究探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)体外诱导小鼠胚胎肝祖细胞HP14-19细胞成熟分化及ATRA对细胞自噬水平的调控作用。应用1μmol/L ATRA处理小鼠胚胎肝祖细胞HP14-19细胞,不同时间点进行荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc活性,Real-time PCR检测肝细胞相关标志基因的表达,吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)及过碘酸–希夫(periodicacid-schiff,PAS)染色检测细胞的成熟功能;透射电镜观察自噬体及细胞连接,ptf LC3质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜观察自噬流,Western blot检测自噬相关标志蛋白质水平等综合分析自噬的变化情况。结果显示,与对照组相比,ATRA可显着增强HP14-19细胞ALB-Gluc活性,抑制肝前体细胞标志DLK和AFP的表达,促进成熟肝细胞标志ALB、CK18、TAT和Apo B的表达,ICG及PAS染色阳性细胞数显着增多(P<0.05);透射电镜结果可见ATRA诱导组出现大量自噬体和自噬溶酶体,同时细胞间紧密连接增多,并且自噬相关标志蛋白质Beclin1、LC3-II、RAB7水平增高,P62水平无显着变化,LC3-II/LC3-I的比值明显增加(P<0.05);激光共聚焦显微镜可见ATRA组细胞质内黄色斑点的自噬体及红色斑点的自噬溶酶体均较对照组明显增多,自噬抑制剂3-MA和Baflomycin可抑制ATRA诱导的HP14-19细胞的ICG摄取和糖原合成功能。综上所述,ATRA可能通过调节细胞自噬水平有效诱导小鼠胚胎肝祖细胞的分化成熟。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年05期）
颜洁心[4]（2018）在《细胞外基质蛋白Lumican通过ITGα2促进肝祖细胞的增殖》一文中研究指出细胞命运由细胞微环境决定,多种细胞命运相互协调决定组织器官的生命活动,体外添加阶段性的细胞外基质蛋白,模拟细胞在体内的生长环境,有望促进细胞的增殖作用以及功能维持。Lumican作为富含亮氨酸小分子蛋白聚糖家族的一员,是细胞外基质重要的构成部分,可以调控细胞生命活动。本文分析Lumican蛋白在肝脏发育不同阶段的表达水平,发现胎肝中Lumican表达水平更高,显示出作为细胞外环境重要组成成分,Lumican蛋白在肝祖细胞的细胞增殖与功能维持过程中具有更为重要的作用。在第一部分中,通过分离获得胚胎12-14天胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系。我们成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系,并可促进小鼠胎肝细胞肝细胞功能进一步成熟。在第二、叁部分中,通过对胎鼠与成年鼠肝脏组织行Q-PCR,发现Lumican在幼年肝脏组织中的表达高于成年肝组织中。再对其行免疫荧光染色,发现Lumican在肝脏内各亚型细胞广谱表达,包括肝实质细胞、内皮细胞和星状细胞,主要为实质细胞表达,并分泌到细胞间隙。PCNA是细胞增殖标志,在增殖旺盛的细胞中表达,胎肝组织表达高于成年肝组织。同时,与成年肝组织相比,胎肝组织表达更高水平的Lumican,Lumican~+细胞PCNA~+比例更高,显示Lumican~+的肝细胞具有更强的增殖活性。我们还分别探讨了重组Lumican蛋白对原代肝祖细胞以及肝祖细胞系HepaRG细胞的促增值作用及对其功能的影响。对从孕12-14日小鼠胚胎中分离的胎肝细胞用KM培养基进行筛选培养,获得具有大量纯化呈克隆状生长的肝祖细胞,并用Lumican进行处理,发现Lumican处理组CK19~+Ki67~±阳性率(31.50%±1.00%)高于对照组(15.78%±0.99%),具有统计学意义(P<0.05)。通过Q-PCR发现,在Lumican浓度的增加的同时,干性基因如AFP、CK19、EpCAM等相关表达增强,功能基因如ALB、CPS1、CYP3A41a等表达减弱,与细胞免疫荧光结果相符。结果显示Lumican可促进胎肝细胞的增殖,同时增强肝细胞干性基因的表达。以Lumican重组蛋白2D培养HepaRG细胞,用Ed U染色法测定各组S期的比例,发现随着蛋白浓度的增加,增殖期细胞数亦同步增长,具有浓度依赖效应,各组之间增殖期细胞比例具有统计学意义(P<0.05),与CCK8法测定所得单日细胞增殖速率结果相符。经Q-PCR检测肝祖细胞增殖相关基因如p53、p21、p27、CDC20、CDC25A、CDC25B等及干性基因如AFP、CK19、EpCAM等表达增强,具有浓度依赖效应,而功能基因如ALB、CPS1、CYP3A4等则与之相反,随浓度增加表达减弱,与细胞免疫荧光结果相符。将Lumican加入HepaRG 3D培养体系,发现Lumican处理组增殖基因及干性基因表达增强,而功能基因表达减弱,同时对CYP3A4酶活性及ALB合成检测,发现HepaRG 3D培养体系中Lumican处理组对两者的检测结果低于对照组,具有统计学意义。故Lumican可延缓HepaRG的肝向成熟,维持细胞干性,促进细胞增殖。整合素信号途径是Lumican作用得以实现至关重要的一环。通过Co-IP,发现整合素α2(Integrinα2,ITGα2)与Lumican之间具有相互作用,ITGα2是Lumican结合的配基。对细胞增殖信号通路关键蛋白的抑制,筛选出Lumican促进HepaRG细胞增殖的作用通路——ERK和mTOR信号通路。以蛋白免疫印迹法验证ERK和mTOR信号途径下游关键蛋白的存在,结果显示ERK通路下游的P21、CCND1以及mTOR信号途径下游蛋白如P70 S6 kinaseα等的表达随Lumican浓度的增高而上升,pERK是ERK信号通路的标志,在Lumican处理的第60分钟出现瞬时表达。Lumican可通过与ITGα2的相互作用,激活ERK信号途径以及mTOR信号途径促进细胞的增殖作用。我们进一步探讨了Lumican的缺失对HepaRG细胞以及在体内对肝细胞再生的影响。siRNA沉默HepaRG细胞系Lumican基因后,细胞增殖水平降低,Lumican表达水平降低。通过水动力法经尾静脉注入siRNA,降低Lumican在BALB/C小鼠肝脏的表达水平。24小时后,行肝大切手术,收取肝切后24小时及48小时肝脏,发现正常小鼠肝内PCNA及Lumican都处于低表达状态,而在肝大切后24小时及48小时,PCNA及Lumican在肝脏组织中广泛表达。而经siRNA沉默的BALB/C小鼠,肝切前其肝组织内PCNA及Lumican的表达特性与正常BALB/C小鼠无异,但在肝切后24小时及48小时,siRNA处理的BALB/C小鼠PCNA及Lumican在肝组织中的表达远不如正常小鼠肝切后。Lumican基因表达的可延缓肝细胞的再生。综上所述,我们通过Lumican通过与ITGα2的相互作用,激活ERK和mTOR信号通路促进细胞增殖,维持细胞干性,延缓细胞成熟,它的缺失可延缓或抑制肝组织的再生。(本文来源于《广西医科大学》期刊2018-05-01）
艾麦提·牙森[5]（2018）在《TGF-β1信号介导的肝星状细胞促进胚胎肝祖细胞向胆管细胞分化》一文中研究指出目的探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)激活的小鼠肝星状细胞(mouse hepatic stellate cells,mHSCs)对小鼠胚胎肝祖细胞(mouse hepatic progenitor cells,mHPCs)分化的影响。方法第一部分:建立慢病毒介导稳定过表达TGF-β1基因的小鼠肝星状细胞株(mHSCs-TGF-β1)、敲低TGF-βR1基因的小鼠肝星状细胞株(mHSCs-TGF-βR1sih3)、各自相应的对照组(mHSCs-GFP、mHSCs-RFP);通过细胞免疫荧光检测α-SMA表达并观察mHSCs形态变化;通过 qRT-PCR 法检测 TGF-β1、α-SMA、TGF-βR1、Smad2、Smad3、Jagged1、VEGF、HGF、Wnt3α等 mRNA 表达;通过 western blotting 法检测 TGF-β1、α-SMA、TGF-βR1、Smad2/3、p-Smad2/3、Jagged1等相关下游信号蛋白表达情况;第二部分:采用荧光激活细胞筛选法(fluorescence-activated cell sorter,FACS)分选 delta-like1 homologue(DLK1)表面抗原阳性的原代mHPCs;分选的细胞利用免疫荧光染色法观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、白蛋白(albumin,ALB)及细胞角蛋白 19(cytokeratin19,CK19)抗原表达情况;mHPCs与各转染组mHSCs transwell 共培养 6d 后,分为 mHPCs+mHSCs-TGF-β1 组,mHPCs+mHSCs-RFP 组,mHPCs+mHSCs-TGF-βR1sih3 组和 mHPCs 组;细胞免疫荧光技术法检测AFP、ALB、CK19表达情况;qRT-PCR法检测分化标志物AFP、ALB、CK19、SOX9、Hes1等mRNA表达以及糖原染色法鉴定分化后细胞的糖原合成及储存功能。第叁部分:建立pHBLV-CMVIE-GFP稳定转染的mHPCs-E14.5细胞株,并通过细胞免疫荧光及流式细胞术检测转染效率;以细胞免疫荧光染色法鉴定mHPCs-E14.5细胞株肝干细胞特性;通过CCl4腹腔注射联合2/3肝切除构建小鼠急性肝损伤模型,然后进行20ul DMEM培养基移植(假手术组),mHPCs-E14.5单独移植(mHPCs-E14.5移植组),mHPCs-E14.5 与 mHSCs-TGF-β1 联合移植(mHPCs-E14.5+mHSCs-TGF-β1联合移植组),mHPCs-E14.5与mHSCs-RFP联合移植(mHPCs-E14.5+mHSCs-RFP 联合移植组),mHPCs-E14.5 与 mHSCs-TGF-βR1sih3 联合移植(mHPCs-E14.5+mHSCs-TGF-βR1sih3联合移植组);在肝切除后7d,H&E染色及共聚焦免疫荧光观察移植细胞在脾脏实质内的定植情况;通过免疫组织化学法和qRT-PCR法检测各组AFP、ALB、CK19、SOX9、α-SMA、Jagged1等表达情况来说明移植细胞体内的分化;全自动生化分析仪检测小鼠血清谷丙转移酶(ALT)、谷草转移酶(AST)活性,比较各组转移酶变化来说明肝功能恢复情况。结果第一部分:TGF-β1激活组 mHSCs 中 TGF-β1、α-SMA、TGF-βR1、Smad2、Smad3、Jaggedl、VEGF、HGF、Wnt3α等 mRNA 和 TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Smad2/3、p-Smad2/3、Jaggedl 等蛋白的表达量均较对照组明显增加(P<0.01),而TGF-β-Rlsih3敲低组mHSCs中TGF-β1、α-SMA、TGF-βRl、Smad2、Smad3、Jaggedl、VEGF、HGF、Wnt3α等 mRNA 和 TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Smad2/3、p-Smad2/3、Jaggedl等蛋白的表达量均较对照组明显降低(P<0.01);免疫荧光结果提示:TGF-βl激活组mHSCs胞质中高表达肌成纤维细胞标志物a-SMA而TGF-β-Rlsih3敲低组mHSCs胞质中低表达a-SMA,说明TGF-β1通过Jagged-1/Notch激活mHSCs并活化后促使mHSCs分泌更多的细胞因子。第二部分:FACS新分选的DLK1+细胞质中表达AFP,同时微弱表达ALB,而不表达CK19,证实分选出的提示分选出的DLK1+细胞为mHPCs;mHPCs 与 mHSCs 共培养 6d后,mHPCs+mHSCs-TGF-β1组mHPCs胞质中大量表达胆管细胞标志物CK19,而且AFP、ALB表达较其明显较少,而mHPCs+mHSCs-TGF-βRlsih3组mHPCs胞质中高表达成熟肝细胞标志物ALB;qRT-RCR结果提示,在mHPCs+mHSCs-TGF-β1组mHPCs中不仅胆管细胞标志物CK19表达量明显增加,而且Jaggedl/Notch下游直接靶基因SOX9、Hesl的表达也明显增加;反之,mHPCs+mHSCs-TGF-βRlsih3组mHPCs中ALB表达量最高;mHPCs+mHSCs-RFP组和mHPCs组mHPCs中肝干细胞标志物AFP表达量较高,差异均有统计学意义(P<0.05);糖原染色结果显示:mHPCs+mHSCs-TGF-βRlsih3 组中 90%以上的 mHPCs具有糖原合成及储存功能,而mHPCs+mHSCs-TGF-β1组中仅20%的细胞糖原染色反应阳性,mHPCs+mHSCs-RFP组和mHPCs组中45%-60%细胞糖原染色呈紫色,差异均有统计学意义(P<0.05)。以上结果说明,TGF-β1信号介导的mHSCs通过Jagged-1/Notch促进mHPCs向胆管方向分化。第叁部分:成功建立pHBLV-CMVIE-GFP稳定感染的mHPCs-E14.5细胞株,细胞免疫荧光及流式细胞术检测转染效率大于95%;细胞免疫荧光结果证实mHPCs-E14.5细胞株胞质中大量表达AFP,同时微弱表达成熟肝细胞和胆管细胞标志物,提示mHPCs-E14.5细胞株为胚胎肝祖细胞而且体外尚未发生分化;细胞移植后7天的共聚焦免疫荧光及H&E染色结果提示,移植细胞成功定植在受体脾脏实质内而且未发现异常的肿瘤细胞;免疫组织化学及qRT-PCR结果均提示,mHPCs-E14.5+mHSCs-TGF-β1 联合移植组中不仅 a-SMA、Jaggedl 表达量明显增加,而且胆管细胞标志物表达量也明显增加;而mHPCs-E14.5+mHSCs-TGF-βRlsih3联合移植组中成熟肝细胞标志物表达量最高;mHPCs-E14.5+mHSCs-RFP联合移植组和mHPCs-E14.5移植组中肝干细胞表达量最高,同时少量表达ALB、CK19,而假手术组中几乎不表达上述指标,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝功能检测结果提示,细胞移植后小鼠血清谷丙转移酶及谷草转移酶较对照组有所下降,而在mHPCs-E14.5+mHSCs-TGF-βRlsih3联合移植组中肝功能改善更为明显(P<0.05)。结果提示,移植细胞在脾实质内定植并定向分化,且能有效促进小鼠急性肝损伤的修复过程。结论1、TGF-β1通过Jagged1/Notch激活mHSCs为肌成纤维细胞并分泌更多的细胞因子,共同参与病理及生理状态下mHSCs的生物学效应。2、体外transwell共培养的条件下,mHSCs通过TGF-β1-Jagged1/Notch诱导原代mHPCs向着胆管细胞方向分化。3、以联合细胞移植的方式细胞移植后,mHPCs-E14.5细胞株在脾实质内定植并在TGF-β1激活的mHSCs作用下定向分化为胆管细胞,而在TGF-β1信号通路阻断的条件下定向分化为肝细胞;并且移植细胞能有效促进小鼠急性肝损伤的修复过程。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2018-05-01）
龚梦嘉,惠慧,崔洁洁,毕杨,何昀[6]（2018）在《全反式维甲酸促进骨形态发生蛋白9诱导肝祖细胞成熟分化的作用研究》一文中研究指出该文研究了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)促进骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导肝祖细胞14-19(hepatic progenitor cell 14-19,HP14-19)成熟分化的作用。重组腺病毒Ad-BMP9和ATRA单独及联合作用诱导肝祖细胞HP14-19成熟分化,荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc表达情况,Real-time PCR检测肝脏相关基因DLK、AFP、ALB和TAT的mRNA水平,Western blot及免疫荧光检测AFP、ALB、CK18和UGT1A蛋白质水平,PAS染色和ICG摄取实验检测成熟分化后的功能。Ad-BMP9组和ATRA组的ALB-Gluc活性较对照组增高,而AdBMP9+ATRA组ALB-Gluc活性又显着高于Ad-BMP9组和ATRA组。Ad-BMP9+ATRA组的ALB和TAT mRNA水平以及ALB、CK18和UGT1A蛋白质水平均高于Ad-BMP9组和ATRA组,但肝干细胞标志DLK、AFP的表达均降低(P<0.05)。Ad-BMP9+ATRA组的ICG摄取及PAS染色阳性细胞数显着高于Ad-BMP9组和ATRA组。ATRA和Ad-BMP9均诱导肝祖细胞HP14-19成熟分化,联合作用强于单独作用。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年01期）
李飞,马振增,陆伦根[7]（2017）在《成体肝祖细胞的研究进展》一文中研究指出肝脏具有极强的再生能力,在遭受急性损伤时,由成熟肝细胞增殖完成肝再生。但在肝脏遭受慢性损伤时,成熟肝细胞增殖能力受损或耗竭,肝祖细胞活化、增殖、分化,参与肝再生。介绍了肝祖细胞的特征及来源,在肝损伤后组织修复和肝癌发生中的作用,以及用于细胞移植治疗肝脏疾病的潜能和面临的问题。认为对于肝祖细胞的生物学特性及其在肝损伤和肝癌中的作用和发病机制的认识有利于肝病的治疗。(本文来源于《临床肝胆病杂志》期刊2017年05期）
王伟,吕峰,金鑫,艾麦提·牙森,李德卫[8]（2017）在《小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养》一文中研究指出目的从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞(m HPCs),并将其诱导分化为胆管细胞。方法用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4和6 d的DLK1~+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。结果体外共培养时,大部分DLK1~+细胞分裂增殖明显,呈葡萄状聚集生长。第4天,部分细胞开始贴壁增殖,形态开始变成梭形。结果显示,分选的DLK1~+细胞表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;在共培养的第4天其开始表达CK19,和微弱表达ALB;第6天,其高表达CK19,而几乎不表达的ALB。结论应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1~+细胞并鉴定其大部分为mHPCs,并可在体外与MEFs Transwell共培养的条件下,诱导培养其分化为胆管细胞。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2017年05期）
王伟[9]（2017）在《TGFβ信号通路介导激活成纤维细胞促进胚胎肝祖细胞向胆管发育的研究》一文中研究指出背景和目的胚胎肝祖细胞可分化为成熟的肝细胞和胆管细。在胎肝发育中,分布在门静脉周围的肝祖细胞分化为胆管细胞,而分布肝实质中远离门静脉的肝祖细胞则分化为肝细胞。本研究探索TGFβ信号通路在胆管发育中的作用,及其可能的调控机制。方法第一部分:将分离得到的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)培养至第二代,分成4组,分别用普通培养液、5ng/m L TGFβ1、5ng/m L TGFβ1+10μM TGFβR1抑制剂(SB525334)及10μM TGFβR1抑制剂(SB525334)处理72h。用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和肌成纤维细胞或成纤维细胞Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测MEFs处理72h后α﹣SMA的表达,检测刚分选和共培养4、6d的DLK1+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。q RT-PCR检测肌成纤维细胞和成纤维细胞α﹣SMA、HGF、TGFβ1、Jagged1、PTN、MDK、IGF1及IGF2等基因的表达,检测胎肝祖细胞共培养6d后,CK19、ALB、AFP、Sox9等基因表达。第二部分:孕10.5的C57孕鼠共8只,随机平均分成2组,药物干预组腹腔注射TGFβRI抑制剂SB525334(5mg/kg)(溶于2.2%DMSO和97.8%玉米油),对照组腹腔注射等量的2.2%DMSO和97.8%玉米油为对照组,每天注射药物,共干预8天。免疫荧光检测E14.5、E16.5、E18.5、P0、P10等各个阶段胎肝或肝脏的α﹣SMA、Sox9或CK19的表达,免疫荧光检测药物干预组和对照组E18.5胎肝α﹣SMA、Jagged1、Sox9、CK19的表达。q RT-PCR检测药物干预组和对照组E18.5胎肝α﹣SMA、Jagged1、Sox9、CK19基因的表达。免疫荧光试验计数周围区域门脉周围Ck19+细胞的数量,计数在中央区域门脉周围胆管的数量。然后计算每个动物中央区域的胆管数量/门静脉的比值和周围区域的胆管细胞数量/门静脉的比值。结果第一部分:FACS分析示DLK1+细胞占E14.5胚胎肝细胞比例约10%~20%。体外共培养24 h内分选的大部分DLK1+细胞开始分裂增殖,呈半贴壁生长。培养第2~3 d,细胞增殖明显呈葡萄状聚集生长,形态开始变成大圆形。共培养第4~6 d,部分细胞开始贴壁生长,并且形态成开始变梭形。细胞免疫荧光结果显示,FACS分选的DLK1+细胞表达AFP和少量ALB,但是不表达CK19。在共培养的第4天其开始表达CK19,和微弱表达ALB;第6天,其高表达CK19,而几乎不表达的ALB。以上结果说明分选DLK1+细胞大部分为m HPCs,与MEF共培养后可促进m HPCs增殖分化为胆管细胞。免疫荧光结果显示MEFs能被TGFβ通路激活转化为肌成纤维细胞。倒置显微镜下观察结果显示和肌成纤维细胞共培养6天后,m HPCs大部分细胞贴壁增殖,并形成树枝样胆管结构。而和成纤维细胞共培养组的m HPCs部分细胞贴壁增殖,部分细胞为圆形散在或成球增殖,未见树枝样胆管结构。免疫荧光结果显示肌成纤维细胞共培养组m HPCs的CK19的表达高于成纤维细胞组,而ALB的表达低于成纤维细胞组。q RT-PCR结果显示肌成纤维细胞共培养组m HPCs的CK19、Sox9基因的表达高于成纤维细胞组,而AFP、KI67基因的表达低于成纤维细胞组(P<0.05)。细胞计数结果表明肌成纤维细胞共培养组的m HPCs子代细胞数量是成纤维细胞共培养组约2.5倍(P<0.05)。以上结果说明同成纤维细胞相比,肌成纤维细胞促进胎肝祖细胞向胆管细胞分化作用更强,但抑制其增殖。第二部分:免疫荧光证实在E14.5~E18.5阶段,α-SMA+肌成纤维细胞主要分布在门静脉周围,出生后包绕胆管。此外,肌成纤维细胞为门静脉周围表达Jagged1的主要细胞,在胆管发育中起重要作用。阻断TGFβ信号通路后,中央区域的胆管数量/门静脉的比值和周围区域的胆管细胞数量/门静脉的比值明显减少(P<0.05),说明TGFβ信号通路在胆管发育中发挥重要作用。当阻断TGFβ信号通路后,免疫荧光证实门静脉周围间质细胞α-SMA的表达减少,q RT-PCR检测进一步证实α-SMA基因的转录降低(P<0.05),说明TGFβ信号通路调控门静脉周围间质细胞向肌成纤维细胞的转化。同时免疫荧光证实门静脉周围Jagged1的表达也相应减少,q RT-PCR检测进一步证实Jagged1基因的转录降低(P<0.05),说明TGFβ信号通路调控门静脉周围的间质细胞向肌成纤维细胞的转化进而调控Jagged1表达。但胆管细胞Jagged1的表达未见减少,说明胆管细胞Jagged1的表达不受TGFβ信号通路的调控。在胆管发育中,Sox9为Notch通路的下游,阻断TGFβ信号通路后,门静脉周围Sox9+胆管细胞明显减少,q RT-PCR检测进一步证实Sox9基因的转录降低(P<0.05),说明TGFβ信号通路可能通过Jagged1-Notch-Sox9机制途径调控胆管的发育。结论1.应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1+细胞并鉴定其大部分为m HPCs,在体外与MEFs Transwell共培养的条件下可扩增培养并诱导其分化为胆管细胞。2.在Transwell共培养的条件下,与成纤维细胞相比,肌成纤维细胞促进m HPCs向胆管细胞分化作用更强,但促进其增殖的能力较低。3.在动物体内,TGFβ信号通路在肝内胆管的发育中起重要作用,可能通过Jagged1-Notch-Sox9机制途径调控胆管的发育。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
赵丽,黄道超,龚梦嘉,李娅莎,毕杨[10]（2015）在《肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用》一文中研究指出目的:观察肝祖细胞(HPCs)移植后不同浓度四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝衰竭小鼠模型肝脏修复情况,评价HPCs对肝损伤的修复能力,为评估HPCs移植疗效建立理想的肝衰竭模型。方法:96只ICR小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组(0.1%CCl4组、0.5%CCl4组、2.0%CCl4组、10.0%CCl4组)和实验组(0.1%CCl4+HPCs组、0.5%CCl4+HPCs组、2.0%CCl4+HPCs组和10.0%CCl4+HPCs组)。空白对照组小鼠灌胃给予生理盐水,阴性对照组和实验组小鼠灌胃给予不同剂量CCl4。CCl4造模后1d,将实验组和阴性对照组小鼠常规麻醉后切开腹腔,实验组小鼠经脾脏注射HPCs,阴性对照组小鼠注射等剂量无菌生理盐水。动态观察小鼠生命体征,监测其存活率;采血检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝脏计算肝脏指数;HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理学变化;Hoechst33342标记外源性HPCs,激光共聚焦显微镜检测移植HPCs在肝脏中的分布情况及肝脏标志蛋白细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白(ALB)的表达。结果:与空白对照组比较,0.1%和0.5%CCl4组小鼠存活率、肝脏指数、AST和ALT活性无明显变化(P>0.05)。病理学检测,肝细胞有自我修复作用,HPCs移植治疗的效果不明显。与2.0%CCl4组比较,2.0%CCl4+HPCs组小鼠AST和ALT活性及肝脏指数降低(P<0.01),存活率增加(P<0.01);病理学检测可见肝细胞再生和大量外源性肝细胞,CK18和ALB表达与内源性肝细胞相当,HPCs移植治疗有效。10.0%CCl4组和10.0%CCl4+HPCs组小鼠2d内全部死亡,无法评估HPCs的治疗效果。结论:HPCs移植可提高急性肝衰竭模型小鼠存活率,改善AST和ALT活性,对肝损伤具有较强的修复能力;且2.0%CCl4诱导的ICR小鼠急性肝衰竭模型能有效反映HPCs移植治疗的效果。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2015年03期）
肝祖细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探讨不同血清浓度诱导培养条件下对体外诱导胚胎肝祖细胞成熟分化的影响。本研究选用含有10%FBS、5%FBS、2%FBS的DMEM/HGF/FGF4肝细胞培养基体外诱导胚胎肝祖细胞的成熟分化,分别于诱导后0d、3d、6d、9d、12dALB-GLuc检测细胞白蛋白的合成水平,细胞计数检测细胞的成长曲线。RT-PCR检测肝细胞相关标志DLK、AFP、CK18,免疫荧光检测ALB、UGT1A的表达情况。ICG摄取和尿素氮检测肝细胞成熟功能。诱导后第叁天,ALB-GLuc开始增高,于第9天达高峰,2%FBS组ALB-GLuc读数最高。生长曲线显示低血清浓度下细胞的增殖速度明显慢于高血清浓度。RT-PCR和免疫荧光结果显示诱导后第9天,3个诱导组DLK、AFP表达低于无诱导组,CK18、ALB、UGT1A均高于无诱导组,2%FBS组差异最显着。3个诱导组的肝细胞ICG摄取能力明显增高,2%FBS组ICG阳性细胞数为(60.2±9.0)%,明显高于5%FBS(45.0±3.6)%及10%FBS组(35.2±2.9)%,诱导后肝细胞的尿素合成功能增强,尤其是2%FBS组。低浓度血清培养条件能更好的诱导胚胎肝祖细胞的体外成熟分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝祖细胞论文参考文献
[1].徐婷.肝星状细胞通过层粘连蛋白-整合素ɑvβ6途径参与肝细胞向肝祖细胞转化[D].华中科技大学.2019
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[3].崔洁洁,方姝煜,龚梦嘉,何昀,毕杨.全反式维甲酸调控自噬促进肝祖细胞成熟分化的作用研究[J].中国细胞生物学学报.2018
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[5].艾麦提·牙森.TGF-β1信号介导的肝星状细胞促进胚胎肝祖细胞向胆管细胞分化[D].重庆医科大学.2018
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[8].王伟,吕峰,金鑫,艾麦提·牙森,李德卫.小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养[J].基础医学与临床.2017
[9].王伟.TGFβ信号通路介导激活成纤维细胞促进胚胎肝祖细胞向胆管发育的研究[D].重庆医科大学.2017
[10].赵丽,黄道超,龚梦嘉,李娅莎,毕杨.肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用[J].吉林大学学报(医学版).2015