本文主要研究内容
作者张世勋（2019）在《BVDV QRT-PCR检测方法的建立与应用及荧光微球试纸条的初步建立》一文中研究指出：牛病毒性腹泻-黏膜病(Bovine Viral Diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的,BVDV是世界大部分地区牛群中的一种地方性疾病,并且由于其在奶牛和牛群中的高流行率和持续的经济损失,因此被认为是畜牧业中最重要的传染性病原体之一。BVDV在群内和群间传播,它能引起腹泻、繁殖障碍、肠道和呼吸系统疾病,甚至可以引起持续性感染(PI),所以减少PI动物是控制临床发病和BVD引起的经济损失的主要策略,目前,检测BVDV的方法主要有ELISA、试纸条等,但是在大规模的样本检测中他们的成本较高,所以建立一个经济、简便、快速的方法意义非凡。本研究拟建立BVDV SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及初步建立E0、E2融合蛋白荧光微球试纸条的检测方法,并对黑龙江地区奶牛腹泻主要病原(BVDV)进行净化检测。按照GenBank上BVDV V027株NS3基因序列,针对其保守基因区段设计3对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增目的基因,连接目的片段至克隆载体pMD-18T上,构建标准品质粒,以其为模板,分别在两种仪器上进行QRT-PCR的条件优化,对两台仪器的敏感性进行比较;并把建立的QRT-PCR方法与商品化试剂盒的检测结果比较符合率;表达E0、E2融合蛋白,制备兔源融合蛋白多克隆抗体,经纯化,稀释至不同浓度梯度与荧光微球偶联,初步建立E0、E2融合蛋白一步法荧光微球试纸条,并检测试条重复性、特异性、灵敏性。试验结果显示,BVDV NS3质粒构建成功,建立的BVDV QRT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性、稳定性。BVDV QRT-PCR和商品化试剂盒符合率为100%,并对黑龙江部分地区牛群进行BVDV净化检测,结果显示,场群阳性率为75%,PI牛总检出率为0.33%;建立的试纸条特异性、稳定性良好,抗体最多稀释10~3倍可与BVDV良好结合。综上建立的基于BVDV NS3基因的QRT-PCR方法具有敏感性、特异性、重复性高的特点,适用于不同的仪器,并明确了我省BVDV抗原流行情况,初步建立了BVDV E0、E2融合蛋白荧光微球试纸条检测方法;本试验为大量、快速检测BVDV抗原提供了有效方法,并对牛场BVDV的净化提供理论支持。
Abstract
niu bing du xing fu xie -nian mo bing (Bovine Viral Diarrhea,BVD)shi you niu bing du xing fu xie bing du (BVDV)yin qi de ,BVDVshi shi jie da bu fen de ou niu qun zhong de yi chong de fang xing ji bing ,bing ju you yu ji zai nai niu he niu qun zhong de gao liu hang lv he chi xu de jing ji sun shi ,yin ci bei ren wei shi chu mu ye zhong zui chong yao de chuan ran xing bing yuan ti zhi yi 。BVDVzai qun nei he qun jian chuan bo ,ta neng yin qi fu xie 、fan shi zhang ai 、chang dao he hu xi ji tong ji bing ,shen zhi ke yi yin qi chi xu xing gan ran (PI),suo yi jian shao PIdong wu shi kong zhi lin chuang fa bing he BVDyin qi de jing ji sun shi de zhu yao ce lve ,mu qian ,jian ce BVDVde fang fa zhu yao you ELISA、shi zhi tiao deng ,dan shi zai da gui mo de yang ben jian ce zhong ta men de cheng ben jiao gao ,suo yi jian li yi ge jing ji 、jian bian 、kuai su de fang fa yi yi fei fan 。ben yan jiu ni jian li BVDV SYBR GreenⅡshi shi ying guang ding liang PCR(QRT-PCR)ji chu bu jian li E0、E2rong ge dan bai ying guang wei qiu shi zhi tiao de jian ce fang fa ,bing dui hei long jiang de ou nai niu fu xie zhu yao bing yuan (BVDV)jin hang jing hua jian ce 。an zhao GenBankshang BVDV V027zhu NS3ji yin xu lie ,zhen dui ji bao shou ji yin ou duan she ji 3dui te yi xing yin wu ,tong guo RT-PCRfang fa kuo zeng mu de ji yin ,lian jie mu de pian duan zhi ke long zai ti pMD-18Tshang ,gou jian biao zhun pin zhi li ,yi ji wei mo ban ,fen bie zai liang chong yi qi shang jin hang QRT-PCRde tiao jian you hua ,dui liang tai yi qi de min gan xing jin hang bi jiao ;bing ba jian li de QRT-PCRfang fa yu shang pin hua shi ji he de jian ce jie guo bi jiao fu ge lv ;biao da E0、E2rong ge dan bai ,zhi bei tu yuan rong ge dan bai duo ke long kang ti ,jing chun hua ,xi shi zhi bu tong nong du ti du yu ying guang wei qiu ou lian ,chu bu jian li E0、E2rong ge dan bai yi bu fa ying guang wei qiu shi zhi tiao ,bing jian ce shi tiao chong fu xing 、te yi xing 、ling min xing 。shi yan jie guo xian shi ,BVDV NS3zhi li gou jian cheng gong ,jian li de BVDV QRT-PCRfang fa ju you liang hao de te yi xing 、min gan xing 、wen ding xing 。BVDV QRT-PCRhe shang pin hua shi ji he fu ge lv wei 100%,bing dui hei long jiang bu fen de ou niu qun jin hang BVDVjing hua jian ce ,jie guo xian shi ,chang qun yang xing lv wei 75%,PIniu zong jian chu lv wei 0.33%;jian li de shi zhi tiao te yi xing 、wen ding xing liang hao ,kang ti zui duo xi shi 10~3bei ke yu BVDVliang hao jie ge 。zeng shang jian li de ji yu BVDV NS3ji yin de QRT-PCRfang fa ju you min gan xing 、te yi xing 、chong fu xing gao de te dian ,kuo yong yu bu tong de yi qi ,bing ming que le wo sheng BVDVkang yuan liu hang qing kuang ,chu bu jian li le BVDV E0、E2rong ge dan bai ying guang wei qiu shi zhi tiao jian ce fang fa ;ben shi yan wei da liang 、kuai su jian ce BVDVkang yuan di gong le you xiao fang fa ,bing dui niu chang BVDVde jing hua di gong li lun zhi chi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自黑龙江八一农垦大学的张世勋，发表于刊物黑龙江八一农垦大学2019-07-08论文，是一篇关于牛病毒性腹泻黏膜病毒论文,荧光微球试纸条论文,净化论文,黑龙江八一农垦大学2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自黑龙江八一农垦大学2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。