一、Up and Down Expression of Androgen Receptor, Estrogen Receptor beta and Platelet Derived Growth Factor beta by Testosterone in Aortic Vascular Smooth Muscle Tissues（论文文献综述）
孙燕勇[1]（2021）在《整合eGWAS和eQTL分析绵羊全血转录组与繁殖激素的关联》文中指出血液中繁殖激素的动态变化对于评估家畜繁殖性能具有重要意义,血液转录组不仅用来鉴定多个物种的免疫相关调控因子,近年来在家畜生产管理中的应用也逐渐开展。为解析绵羊全血转录组的动态时序表达与繁殖激素调控的关联,本研究以巴美肉羊为研究对象,对血液转录组及其表达基因型进行深入挖掘,将有助于提升血液应用于家畜繁殖性能辅助管理的新认识。本研究获得的主要研究结果如下:1、对绵羊血液转录组的时序动态表达进行研究,检测3、4和5月的不同经产羔类型绵羊的血液转录组,对基因表达与可变剪接进行组间差异分析初探。结果不同经产羔类型之间共检测到1417个差异表达基因,3332个差异可变剪接基因,相比无羔组,单羔组与双羔组基因表达模式更接近。差异表达基因与差异可变剪接共同功能富集结果说明血液表征产羔类型与卵母细胞减数分裂、激素调节和免疫应答等相关。不同月份之间共鉴定到660个差异表达基因,3135个差异可变剪接基因,动态时序表达的基因在功能层面直接或者间接影响激素水平,由此推断绵羊血液时序表达基因可能与激素紧密相关。2、在研究一差异基因分析的基础上,扩大到237个样本,构建加权基因共表达网络（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）,并结合表达全基因组关联分析（expression genome-wide association study,e GWAS）重点研究促卵泡素（follicle-stimulaing hormone,FSH）、促黄体素（luteinizing hormone,LH）、生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）和骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15,BMP15）血清浓度与基因动态表达、变异的关联。结果产羔类型差异表达基因分布在红色和紫色基因模块中较多,且全局网络中红色和紫色基因模块与产羔数关联度较高。通过e GWAS发现模块的显着关联基因主要位于X染色体,包括COIL、NELFE和GCLM等,参与调控卵母细胞成熟、颗粒细胞毛细血管再生、季节性繁殖和免疫应答等。时序差异表达基因主要分布在黄色和蓝色基因模块中,且在全局网络中黄色、蓝色基因模块与激素关联度较高。e GWAS显着关联基因包括CASP9和SRP68基因等,功能富集到催产素信号通路,均影响激素调控过程。最后使用机器学习和先验的绵羊GWAS数据库的方法对样品分组与全局网络模块的功能进行验证补充,证明了小样本差异表达基因在大样本分析中的支持度与可行性。总之,通过表达基因组层面解析了绵羊繁殖激素的关联网络,为繁殖激素时序生理状态的基因表达与变异体之间提供互补信息。3、为进一步挖掘高繁绵羊血清LH/FSH比值调控的深层机制。发现不同LH/FSH比值的差异表达基因在50～150之间。这些基因影响核糖体、催乳激素信号通路、促性腺激素信号通路、卵巢类固醇生成、催产素信号通路和花生四烯酸代谢等与激素调控相关的通路。共鉴定了涉及黄色与蓝色基因模块的1 823个显着关联与1 433个e QTL-SNP,且不均一的分布在各染色体,e QTL-SNP共影响到690个基因。鉴定到26 445个ASE-SNP,影响了4 970个基因,均一分布在各染色体,可见LH/FSH比值与绵羊血液基因表达关联过程中受到广泛的顺式调控作用。结果共筛选出8个候选标记物:PCNX4、FAS、RPL36AL、JCHAIN、LOC101113346、IQSEC1、RPL21和RPL8,大多数的表达基因型特征显现出等位基因不平衡现象,且受到至少一个e QTL-SNP与两个ASE-SNP的影响。4、为了挖掘高繁绵羊GDF9和BMP15影响的深层机制。我们分别对不同GDF9和BMP15血清浓度下的转录组进行比较与关联研究。结果血清中BMP15和GDF9的浓度可能依赖于调节它们共享的差异表达基因RPL23A、LOC101110403、PAQR5、LOC114116858,LOC114114874和NAIP建立内分泌信号交换。其中RPL23A、PAQR5与NAIP直接或者间接地参与到卵母细胞发育和卵巢功能,证明了血液在识别激素影响下的主要基因及关联生物学过程方面的潜力。同时发现血液中广泛存在对GDF9、BMP15的ASE-SNP与e QTL-SNP的调控,共鉴定到502个ASE-SNP,包含58个同时与e QTL-SNP关联。共同调控GDF9与BMP15的e QTL-SNP与ASE-SNP表达的候选血液生物标志物JAK1,IL6R,ITGA4,GAA,PRKD3,CAMK2D,TAB2和IQGAP1的基因型存在明显的等位基因表达失衡现象。综上,本研究描绘了绵羊血液转录组与繁殖激素的网络全景,并对繁殖激素关联的调控元件进行深层探讨,证明了血液在识别激素影响下的主要基因及关联生物学过程方面的潜力,也为任何以血液为适合代理组织的复杂性状提供重要借鉴。
张英展[2]（2021）在《自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究》文中进行了进一步梳理背景和目的血管内皮细胞释放的一系列具有血管活性的小分子物质是调节血管张力和维持心血管稳态的关键。在高血压和衰老等的病理生理状态下,血管内皮细胞功能障碍可损害血管结构和功能。而内皮源性血管活性因子失衡是内皮功能障碍的主要原因之一,其中,环氧合酶催化花生四烯酸代谢所生成的前列腺素类起重要作用。前列环素是花生四烯酸在内皮细胞中代谢的主要产物之一,长期以来被认为是一种内皮依赖性舒张因子,其通过作用于前列环素（I prostaglandin,IP）受体诱发血管舒张效应。然而,越来越多的研究表明,前列环素（prostaglandin I2,PGI2）也可以作为血管内皮依赖性收缩因子,通过作用于血管收缩受体,如血栓素A2（thromboxane-prostaglandin,TP）受体和/或前列腺素E2受体3亚型（E prostaglandin receptor-3,EP3）受体诱发血管收缩效应。同时,在衰老和/或血管疾病状态下血管内皮依赖性收缩（endothelium-dependent contractions,EDCs）可以增强,部分原因是环氧化酶产物的增加和/或其下游受体的表达和/或功能发生改变。自发性高血压大鼠（SHR）作为人类高血压模型一直以来被广泛研究,其在4周龄的血压仍与Wistar-Kyoto大鼠（WKY）相当,而大约在6周龄时可产生高血压,在3-4月龄则为高血压确立期。SHR的血压和血管在幼年到成年的转变中发生了很大的改变,然而EDCs在此期间的变化及其潜在机制目前仍不清楚。髂动脉主要为盆腔器官和腿部输送血液,是一些老年相关疾病的临床干预靶标。因此,本研究主要阐明SHR高血压发展过程中髂动脉及其它血管的EDCs的变化及其内在机制,以期为控制此时期血压的升高提供血管生物学方面的实验依据。此外,舒张血管和/或抑制血管收缩是预防和治疗高血压的方法之一。我们之前的研究表明,拮抗TP受体可以抑制PGI2在某些动脉中诱发的血管收缩作用,从而改善血管舒张效应。并且,进一步阻断EP3受体可以更好地改善血管张力。在大鼠肠系膜动脉等血管中,EP3受体拮抗剂L-798106不仅与TP受体拮抗剂SQ29548有协同作用,而且比TP受体拮抗剂SQ29548更好地抑制PGI2血管张力效应。因此,迫切需要探究L-798106对髂动脉内皮依赖性收缩的影响,以及在体给药后其对SHR高血压发展的影响。本研究通过分离不同年龄段（幼年:4周龄;成年:12-16周龄）的WKY和SHR髂动脉、肾动脉和主动脉进行生化和/或功能分析,以解决上述问题。材料与方法本研究采用4周龄及12-16周龄的雄性无特定病原体（SPF）级的WKY和SHR髂动脉、肾动脉和主动脉进行生化实验和功能分析。无创血压测量系统检测L-798106处理前后SHR的收缩压和心率;血管环张力检测系统检测WKY和SHR离体髂动脉、肾动脉和主动脉的血管反应性;高效液相色谱质谱联用法检测成年WKY和SHR的离体髂动脉PGI2代谢产物6-keto-PGF1α、Tx A2代谢产物Tx B2、PGE2、PGF2α和PGD2的生成;酶联免疫吸附法检测内皮胆碱能受体激动剂乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）在幼年和成年WKY和SHR离体髂动脉中诱导产生的PGI2代谢产物6-keto-PGF1α的水平;免疫印迹法检测幼年和成年WKY及同年龄段的SHR的髂动脉的EP3受体和TP受体的蛋白表达;实时定量PCR法检测幼年和成年WKY和SHR髂动脉的IP受体m RNAs水平;称量L-798106处理前后SHR的体重及心脏的重量并计算心脏体重比。结果1.在有一氧化氮（nitric oxide,NO）合酶抑制剂L-NAME存在的情况下,ACh诱发幼年SHR髂动脉强烈的血管收缩效应,该效应在去内皮处理后基本消失,因此该效应为EDCs。ACh诱发幼年WKY和SHR的髂动脉程度相当的EDCs（P>0.05）,但该EDCs在成年动物血管中减弱（P<0.01）,并且成年SHR的髂动脉的EDCs随年龄增长而减弱的幅度较小（P<0.05）。2.高效液相色谱质谱联用方法检测到成年WKY和SHR的髂动脉主要生成6-keto-PGF1α。与基础状态（仅在PSS,未加入ACh刺激）相比,ACh刺激后的幼年和成年WKY的髂动脉及同年龄段的SHR的髂动脉产生的6-keto-PGF1α均增加（P<0.01）;并且,基础状态下和ACh刺激后的6-keto-PGF1α水平均随年龄的增加而减少（P<0.01）。另外,PGI2、TP受体激动剂U46619或EP3受体激动剂硫前列酮在成年的髂动脉中诱发的血管收缩效应比在幼年的髂动脉中明显减弱（P<0.01）。3.幼年和成年WKY及相应年龄段的SHR髂动脉均表达TP和EP3受体蛋白。其中,幼年WKY和SHR髂动脉的TP受体蛋白表达水平无明显差异（P>0.05）,其在成年大鼠中均下调（P<0.01）,并且成年SHR髂动脉的TP受体蛋白表达水平高于同年龄段的WKY髂动脉（P<0.05）。与此不同,幼年WKY髂动脉的EP3受体蛋白表达水平高于幼年SHR髂动脉（P<0.05）,并且EP3受体的蛋白表达在成年中均下调（P<0.01）,然而成年WKY和SHR髂动脉的EP3受体蛋白表达无差异（P>0.05）。不同年龄段的WKY髂动脉的IP受体m RNA水平无明显差异（P>0.05）,而成年SHR髂动脉的IP受体m RNA水平高于幼年髂动脉（P<0.01）。4.在有L-NAME存在的情况下,ACh、PGI2诱发幼年SHR髂动脉血管收缩效应,其可被SQ29548或L-798106减弱（P<0.01）。并且,L-798106的抑制作用比SQ29548更大（P<0.01）。同时,PE收缩后,ACh诱发幼年SHR髂动脉的血管舒张效应被一双相收缩反应所减弱。给予SQ29548预处理后,该双相收缩反应有减弱的趋势（P>0.05）。而L-79810预6处理能够消除ACh诱发的这一双相收缩反应,从而只表现为血管舒张反应,并且舒张程度比SQ29548处理后更强（P<0.01）。与此一致,PE收缩后,PGI2诱发幼年和/或成年SHR髂动脉的血管收缩效应仅在SQ29548预处理后有减弱的趋势（P>0.05）,而L-798106预处理后将其逆转为血管舒张效应（P<0.01）。5.在有L-NAME存在的情况下,TP受体激动剂U46619可引起幼年SHR髂动脉强烈的浓度依赖性血管收缩效应,而L-798106处理明显减弱该收缩效应（P<0.01）。6.在有L-NAME存在的情况下,ACh诱发幼年SHR肾动脉或主动脉EDCs,该效应在成年SHR肾动脉中明显减弱（P<0.01）。与此一致,与幼年相比,成年WKY肾动脉或主动脉的EDCs亦明显减弱（P<0.01）。7.SHR的收缩压随着年龄的增长而逐渐升高。然而,L-798106给药组可抑制给药期内（15天）血压的上升（P<0.01）;对照组和L-798106给药组的体重、心率和心脏体重比无差异（P>0.05）;此外,在L-798106处理前,两组幼年SHR大鼠体重、心率无差异（P>0.05）。结论1.幼年WKY和SHR髂动脉存在程度相当的EDCs,且其在幼年向成年转变中随年龄的增长及SHR血压的升高而降低。2.与WKY髂动脉相比,由于TP、EP3受体下调程度的不同,SHR髂动脉的EDCs随年龄的增长而降低的幅度较小,从而表现为成年SHR的EDCs比成年WKY的要强。3.在幼年向成年转变过程中,其它血管中的肾动脉与主动脉,EDCs亦存在与髂动脉相类似的变化规律。4.L-798106除可拮抗EP3受体外,还能部分阻断TP受体的功能,但保留具有舒张作用的IP受体功能,从而抑制幼年SHR高血压的发展。
梁爽[3]（2021）在《冠心病患者血清microRNA-223和CXCR4的变化及临床意义》文中研究指明研究背景:冠心病（Coronary artery disease,CAD）主要是由冠状动脉引起的心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）,是最常见、最致命的疾病之一,严重危及患者的生命和健康。其在中老年人中更为常见,而且CAD患者在发病初期没有特殊的临床症状,容易被患者疏忽和错误治疗。尽管,近年来冠状动脉造影技术逐渐发展成熟,但我们仍需要充分了解和掌握CAD的作用机理,以便早期识别CAD及预测其严重程度。生物信息学表明,miR-223调控许多与胆固醇代谢相关的基因,可以控制高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein cholesterol,HDL-C）的摄取。也有研究报道miR-223被发现在家族性高胆固醇血症的人类受试者中是上调的。血管CXCR4可以通过保护内皮屏障、维持动脉完整性功能来限制动脉粥样硬化,有研究显示miR-223可以调控基质细胞衍生因子-1（Stromal cell derived factor-1,SDF-1）和CXCR4的表达。然而,它仍需有待使用更多的CAD患者来确定它们的相互作用机制以及与冠脉Gensini评分的相关性。目的:本研究对miR-223、CXCR4在CAD组患者血清中的表达水平进行检测,分析其在两组间的表达差异,及旨在探讨在CAD中的作用机制。方法:1.收集2020年7月-2020年11月在我院心内科住院接受冠状动脉造影诊断CAD的患者70例（男50例,女20例,年龄58.46±1.16岁）,以及33例（男性22例,女性11例,年龄范围60.18±2.08岁）健康个体作为对照组。其中不明显血管狭窄冠心病（ICAD）组13例,男7例,女6例,年龄61.62±2.51岁;具有临床意义的CAD患者57例,男43例,女14例,年龄56.89±1.32岁。具有临床意义的CAD中稳定型心绞痛（Stable angina pectoris,SAP）组39例,男32例,女7例,年龄58.77±1.54岁;急性冠脉综合征（Acute coronary syndromes,ACS）组18例,男11例,女7例,年龄52.50±1.30岁。最初根据症状诊断为CAD的患者也包括在内,CAD的定义和诊断标准包含在以前的指南中。根据Gensini评分进行冠脉狭窄程度的评判。收集所有研究对象的一般临床资料包括年龄、身高、体重、性别、既往病史、甘油三酯（Triglyceride,TG）、总胆固醇（Total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）、脂蛋白a、尿酸、肾小球滤过率（Estimated glomerular filtration rate,eGFR）等。患者于入院第二天空腹状态下采集静脉血,室温情况或4℃下3000r离心15min,将上清置于无RNA酶EP管中-80℃冷冻保存,所有血清样品均在肝素给药前采集,用q RT-PCR测定各组血清中miR-223的相对表达量,酶联免疫法测定CXCR4的水平。2.采用SPSS统计软件进行统计分析,并使用Graph Pad Prism软件进行图形分析。计量资料以均值±标准差（X±SD）表示,对符合正态分布的计量资料采用Student t检验,对非正态分布资料采用Mann-Whitney U检验,均数组间比较采用独立样本t检验。P<0.05时,认为差异有统计学意义。采用Spearman法进行相关性分析,利用ROC曲线,检测其对疾病的诊断预测价值。结果:1.两组受试者在年龄、性别、血压、心率、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、高血压病史、TG、TC、LDL-C、脂蛋白α、尿酸、肌酐、eGFR、Hcy、PLT、NEUT、HB、PLT等方面均无统计学差异（p>0.05）。2.与对照组相比,血清miRNA-223在CAD组的相对表达量明显上调（p<0.01）,血清CXCR4水平明显升高（p<0.01）。3.与对照组相比,ICAD组、SAP组、ACS组血清miRNA-223相对表达量均明显上调（均p<0.01）,ICAD组血清CXCR4水平无统计学差异（p>0.05）,SAP组、ACS组血清CXCR4水平均明显升高（p<0.05）;与ICAD组相比,SAP组、ACS组血清miRNA-223相对表达量均明显上调（均p<0.05）,SAP组、ACS组血清CXCR4水平均明显升高（均p<0.05）;与SAP组相比,ACS组血清miRNA-223相对表达量明显上调（p<0.01）,ACS组血清CXCR4水平无统计学差异（p>0.05）。4.Spearman法相关性分析,显示血清miR-223与CXCR4在CAD组的表达具有相关性（r=0.23,p<0.05）。5.相关性分析显示,血清miR-223与Gensini评分具有相关性（r=0.8,p<0.01）;血清CXCR4与Gensini评分具有相关性（r=0.32,p<0.01）。6.对血清miR-223、CXCR4在冠脉狭窄的预测价值进行ROC分析,miR-223的AUC为0.784（95%CI:0.65-0.92;p<0.01）,最佳临界值为12.74,灵敏度为90%,特异度为73.9%;CXCR4的AUC为0.69（95%CI:0.58-0.80;p<0.05）,最佳临界值为713.6pg/ml,灵敏度为51.4%,特异度为78.8%。结论:1、血清miR-223、CXCR4参与了CAD发生发展的病理过程。2、血清miR-223、CXCR4可能是判定冠脉病变严重程度的指标之一。3、CAD患者血清CXCR4可能是miR-223的下游靶点。
吴洋[4]（2021）在《多囊卵巢综合征对于围着床期子宫中免疫细胞及细胞外基质的影响》文中进行了进一步梳理2018年“多囊卵巢综合征国际循证医学指南”中报道8%-13%的女性患有多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome,PCOS）,其中80%以上育龄期PCOS患者饱受不孕症的困扰。正常妊娠需要具备着床能力的胚胎与处于容受性的子宫内膜相互作用,两者缺一不可。即使PCOS患者通过辅助生殖技术移植了高质量的胚胎,子宫内膜的异常仍然会导致着床失败或不良的妊娠结局。目前,对于PCOS子宫内膜异常的研究相对不足,其导致着床失败的确切机制也仍未阐明。对于围着床期PCOS子宫内膜变化的机制研究,可以帮助我们寻找潜在的治疗靶点、进一步提升胚胎种植成功率并改善妊娠丢失。本课题从小鼠PCOS模型、脱氢表雄酮短期干预等小鼠处理,以及人PCOS内膜标本补充研究三个层次,对围着床期PCOS子宫内膜容受性的改变进行了分析探究。本论文利用脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEA）处理小鼠建立PCOS模型,这些小鼠成功地表现出卵巢多囊样改变、高雄激素血症、体重增加、不孕等PCOS特征。对PCOS小鼠妊娠第4天的子宫进行转录组测序显示,差异2倍以上的基因中有610个上调,91个下调。生物信息学分析显示:在细胞组分和分子功能方面,差异基因富集最多的是细胞外基质和多种与之相关的功能,如细胞粘附分子、基膜、细胞桥粒、细胞顶端质膜、微绒毛等;生物过程的富集分析显示,免疫反应相关生物学过程占比最高,包括细菌免疫反应和防御反应等。为进一步明确DHEA对小鼠子宫细胞外基质和免疫细胞的影响,本研究使用DHEA对小鼠进行了不同的处理:妊娠第3天DHEA处理小鼠1天,妊娠第1-3天DHEA处理正常妊娠小鼠3天,同样的方法处理假孕小鼠3天,卵巢切除后给予小鼠21天DHEA处理。基于上述预测分析以及DHEA不同处理,我们对小鼠子宫中的免疫细胞数量及定位进行了详细研究。（1）与对照组相比,PCOS小鼠围着床期子宫中性粒细胞增多并向腔上皮附近聚集,差异极为显着;妊娠第1-3天给予DHEA处理后,子宫中性粒细胞数量显着增多,同时向宫腔附近聚集,假孕小鼠同样给予3天DHEA处理后,中性粒细胞数量增多,但定位没有变化。（2）围着床期PCOS小鼠子宫中巨噬细胞显着增多并在子宫腔附近聚集,DHEA处理3天对巨噬细胞的数量和分布影响不大,但长期DHEA暴露可以增加内膜中的巨噬细胞数量,并促使其向宫腔附近聚集,围着床期胚胎对子宫中巨噬细胞的影响不大。（3）妊娠第4天PCOS小鼠子宫内膜基质中树突状细胞减少,肌层中树突状细胞数量无明显变化;围着床期使用DHEA分别处理正常妊娠小鼠和假孕小鼠3天,正常妊娠小鼠子宫中树突状细胞无明显改变,假孕小鼠子宫基质中树突状细胞数量大幅增加;卵巢切除小鼠DHEA处理21天后树突状细胞在子宫基质和肌层中的数量均显着增加。（4）与对照组相比,PCOS小鼠围着床期子宫肌层中肥大细胞增多,DHEA处理对子宫中肥大细胞数量影响不大。（5）围着床期PCOS小鼠子宫中B细胞显着增多,并向宫腔上皮附近聚集;DHEA处理3天可促使B细胞增多并向宫腔上皮聚集,宫腔中胚胎对B细胞的分布影响不大。此外,我们详细分析了DHEA对围着床期子宫细胞间连接和细胞外基质的影响。（1）与对照组相比,PCOS小鼠围着床期子宫中埃兹蛋白（Ezrin）在子宫腔上皮和腺上皮中表达明显增加,围着床期DHEA处理1天或3天都可以显着增加Ezrin在小鼠子宫上皮中的表达,并且影响其分布模式,胚胎对子宫中Ezrin表达的影响不明显。在人胚胎种植窗口期,PCOS患者子宫内膜腔上皮和腺上皮Ezrin表达均强于对照组,差异显着。（2）PCOS小鼠围着床期子宫腔上皮和腺上皮中钙粘蛋白的表达显着增加;DHEA处理3天对正常妊娠小鼠子宫中钙粘蛋白的表达影响不大,但假孕小鼠DHEA处理3天后子宫腔上皮和腺上皮钙粘蛋白的表达均增强。在人胚胎种植窗口期,PCOS患者子宫内膜腔上皮钙黏蛋白的表达明显强于对照组,腺上皮钙黏蛋白的表达无明显差异。（3）与对照组相比,PCOS围着床期子宫肌层中层粘连蛋白的表达显着增加,腔上皮基膜、腺上皮基膜和血管基膜中层粘连蛋白的沉积变薄,由正常的锯齿状变为细线状;围着床期DHEA处理3天可改变上皮基膜和血管基膜中层粘连蛋白沉积的形态,但对其厚度影响不大,同时子宫肌层中层粘连蛋白的表达显着增强,胚胎对围着床期子宫中层粘连蛋白的改变无明显影响。（4）围着床期PCOS小鼠子宫基质中层粘连蛋白γ1的表达随基质中血管数目的减少而下降,DHEA处理3天显着降低腺上皮基膜层粘连蛋白γ1的表达。在人胚胎种植窗口期,PCOS患者子宫内膜腔上皮和腺上皮层粘连蛋白γ1的表达无明显差异。（5）与对照组相比,围着床期PCOS小鼠子宫中胶原蛋白IV在腔上皮基膜或腺上皮基膜中的沉积变薄,并且随着子宫基质中血管的减少,胶原蛋白IV的表达显着减少;DHEA处理3天可产生与PCOS相似的变化。（6）CD31主要表达于血管内皮细胞质中,妊娠第4天小鼠子宫中CD31表达较为密集,但PCOS小鼠子宫中表达减少,差异极为显着;PCOS小鼠子宫中CD31显示切面呈圆环状的血管,其密度明显下降,更多的是切面管腔呈狭长状的血管,数量也较少;围着床期DHEA处理3天后子宫中血管显着减少;胚胎可能对围着床期小鼠子宫中血管的数量有影响。（7）妊娠第4天PCOS小鼠子宫腔上皮中荆豆凝集素（Ulex Europaeus Agglutinin,UEA）受体的表达强于对照组,腺上皮中UEA受体的表达无显着差异;围着床期DHEA处理小鼠1天,子宫腔上皮UEA受体于宫腔游离面顶端及邻近的细胞质中呈强表达;DHEA处理3天腔上皮UEA受体表达减少呈不均匀分布;卵巢切除后,子宫腔上皮和腺上皮中未见UEA受体的表达;围着床期子宫腔中的胚胎可能会诱导子宫上皮中UEA受体的表达增加。总之,PCOS小鼠与对照组小鼠妊娠第4天的子宫在m RNA层面存在显着差异,主要变化集中在免疫反应和细胞外基质等方面;DHEA对围着床期子宫中免疫细胞的数量和分布有较大影响,如中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和肥大细胞等,这可能对其发挥正常的免疫作用有不良影响;细胞外基质是细胞通讯和细胞骨架的重要组分,DHEA对埃兹蛋白和钙黏蛋白的表达量都有较大改变,可能影响细胞的正常粘附和极性;DHEA对层粘连蛋白及其亚型、胶原蛋白IV以及CD31的影响,可能导致胚胎着床中细胞骨架的重构及细胞间沟通的异常。
肖蕾[5]（2020）在《三角褐指藻和知母提取物对毛囊更新和毛发生长活性及其机制研究》文中提出脱发症是皮肤科常见疾病之一,虽不属于威胁人类生命的严重疾病,但却给患者带来巨大的精神痛苦。目前治疗脱发症多采用西药,虽然有一定的治疗效果,但副作用较大,停药后继续脱发。知母和三角褐指藻具有抗氧化和抗炎等多种生物活性,其对头皮护理具有一定的功效,但还缺乏知母和三角褐指藻对促进毛发生长和护理作用的机制研究,因而无法对相应产品开发提供有效的科学依据和理论指导。因此,本课题选取知母（Anemarrhena asphodeloides）和三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum）为研究对象,通过单细胞毛发生长评估体系、毛囊体外组织培养模型和动物实验模型,评价知母提取物和三角褐指藻提取物对毛囊单位相关细胞活力及群体生长活力的影响;研究影响毛囊周期及分化、细胞更新、毛发结构强度、黑色素转运等相关蛋白因子,以揭示三角褐指藻和知母促进毛发生长的分子机制;通过人体临床测试评估添加三角褐指藻和知母提取物的头皮护理制剂对人体毛囊、头发、头皮生理状况的综合影响。主要研究内容与结果如下:（1）三角褐指藻和知母中活性成分的提取及主要成分的分析在氮气保护下对三角褐指藻进行乙醇提取,三角褐指藻提取物（PTE）得率为0.985%,成分以十八碳不饱和脂肪酸为主。采用水/水-乙醇溶液对知母进行提取,知母提取物（AAE）中总多糖得率为22.642%;总皂苷得率为10.564%,其中知母皂苷BII和芒果苷含量分别为28.60%和2.75%;总黄酮得率6.378%,其中芒果苷和异芒果苷含量分别为21.60%和3.46%。（2）三角褐指藻及知母提取物对毛囊单位相关细胞生长的影响研究建立了稳定的人毛囊单位相关细胞（人毛乳头细胞（DPCs）、人生发基质细胞（HFGMCs）、人毛囊外根鞘细胞（HFORSCs）、人毛囊内根鞘细胞（HFIRSCs）和人表皮黑素细胞（HEM））的细胞生长体系,对PTE和AAE对人毛囊单位相关细胞生长的影响进行评估。PTE和AAE均在合适浓度下对群体生长的毛囊单位相关细胞具有不同程度的生长促进作用。但在高浓度情况下,部分提取物对毛囊单位相关细胞的生长活力具有抑制作用。PTE对HFGMCs和HFORSCs的细胞集落形成具有一定的促进作用;知母皂苷BII对HFGMCs的细胞集落形成具有一定的促进作用,但对HFORSCs的细胞集落形成具有抑制作用。体外培养毛囊组织的实验结果显示,100μg/ml的知母总皂苷、知母皂苷BII和芒果苷均引起体外培养的毛囊毛球区域细胞密度降低,并出现萎缩。在细胞培养实验中,这三种物质在100μg/ml的浓度下对DPCs的生长没有影响,对HFORSCs有一定的生长促进作用;在细胞集落形成实验中,6μg/ml的知母皂苷BII和21μg/ml的知母总皂苷显着降低了HFGMCs的生长。在C57BL/6小鼠毛发生长实验结果表明,知母皂苷BII的生发作用与浓度相关,知母皂苷BII在0.5%浓度下对小鼠具有较好的毛囊生长期激活与毛发生长刺激作用,与阳性对照0.2%米诺地尔相当,但知母皂苷BII 2.5%组则无显着刺激毛发生长作用。免疫组化结果提示毛囊生长期转化与激活Wnt10b和β-catenin通路相关。毛囊细胞培养实验、体外毛囊培养实验与动物实验结果不完全一致,推测可能是体外毛囊培养时药物浓度过高,也可能是因为毛球区域的生发基质细胞受到知母提取物的影响较大。（3）PTE及AAE对影响毛囊细胞信号传导和头发强度主要相关蛋白因子的影响PTE可以不同程度促进毛囊外根鞘细胞中几种角蛋白的表达量增加,尤其以0.25μg/ml的PTE效果最为明显,PTE在0.125-0.5μg/ml浓度下可以显着提高人表皮黑色素细胞活力,0.5μg/ml浓度下对黑色素细胞ERK的上调幅度达到56%,与黑素细胞的活力提高相一致。知母皂苷BII和知母多糖对DPCs中的IGF-1和Cyclin D1信号具有抑制作用,可能导致毛囊生长周期进程的减缓。AAE对HFGMCs的作用通过Wnt-10b/β-Catenin和phospho-GSK-3β信号实现调节;对HFORSCs的作用通过β-Catenin、Akt和Wnt-10b得以发生;对HFIRSCs的作用通过β-Catenin、Akt和phospho-GSK-3β信号实现调节,但是其影响存在不确定性。（4）含PTE及AAE的制剂对人体毛发生长的影响30名受试者使用含PTE和AAE的头皮护理制剂,与使用产品前相比较,使用产品后第7天以后,头发脱落数量、头皮油脂水平、头皮泛红状态均有下降趋势,头皮不适感觉及头屑水平显着下降,头皮水分含量及头发发质显着提升,这些趋势持续整个实验过程,有的指标、有的时间点没有统计学显着性差异,可能源于测试时间较短或测试人员较少、以及受试者个体差异较为分散所致。毛囊氢化可的松水平呈现先升高后降低的趋势,提示该制剂可能通过氢化可的松水平的提升促毛囊和头发生长,而之后水平下降可能提示对减少头屑代谢有所帮助。综上,合适浓度的PTE与AAE可以通过调节毛囊细胞的信号通路,达到刺激毛囊生长和防脱发的功效。研究结论有助于进一步理解天然产物在毛发护理中的作用机制,为PTE和AAE在防脱发产品中的应用提供了理论基础。
江振洲,袁子航,孙丽新,吴启鹏,柴媛媛,李思佳,向婷,喻琼娜,朱英,张陆勇[6]（2020）在《中国药物作用靶点研究进展（Ⅰ）》文中研究表明通过检索近2年中国学者在国内外杂志上发表的关于心脑血管疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、神经退行性疾病、精神障碍性疾病、感染性疾病、代谢类疾病等重大疾病治疗靶点的相关论文,分类综述这些重大疾病药物作用靶点研究的新进展,为新药研发及新治疗靶点的寻找提供参考和思路。
徐兴丽[7]（2020）在《血管重塑性疾病模型中NONO蛋白作用及其基因调控的机制》文中认为1研究背景目前,心血管疾病目前已成为发达国家最常见的致死疾病,而动脉粥样硬化是心血管疾病的主要病理原因。对于危及生命的冠状动脉粥样硬化患者,血管成形术、支架植入术、动脉粥样硬化斑块切除和旁路移植术等手术治疗仍然是不可缺少的手段。然而,机械损伤后导致的血管再狭窄是限制患者预后的最突出的病理问题。血管再狭窄是以血管中膜层增厚导致动脉新生内膜形成为特征的血管性疾病。术后血管再狭窄是位于手术扩张局部血管中膜平滑肌细胞移行至内膜并在内膜增殖,产生大量细胞外基质,造成血管内膜明显增厚,从而形成新生内膜收缩型和合成型两种表现为特征的血管重塑性疾病。因此,探讨VSMCs增殖、迁移及表型转化的影响因素和分子机制在血管新生内膜导致的血管再狭窄的防治中具有重要意义。NONO（即人p54nrb）是一个无POU结构域的八聚体结合蛋白,与SFPQ、PSPC1蛋白和长非编码RNA NEAT1共同构成DBHS蛋白家族。NONO蛋白具有RRMs、NOPS和卷曲螺旋结构域,可作为转录因子或剪切因子参与蛋白-蛋白互作和蛋白-核酸互作,在DNA损伤、RNA合成和转录调控等方面发挥重要的生物学作用。近年来研究发现,NONO还参与了乳腺癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤、主动脉夹层及动脉粥样硬化等多种疾病。NONO作为一种多功能核蛋白,还被证实参与自身免疫性疾病的炎症因子分泌等多种病理过程。我们在前期的研究发现,过表达NONO蛋白明显抑制ApoE-/-小鼠粥样硬化斑块纤维帽的形成、抑制斑块内胶原的沉积,进而导致斑块的不稳定,促进ApoE-/-小鼠粥样硬化斑块的进展;而降低NONO蛋白的表达,通过促进胶原沉积、抑制炎症因子的表达水平,发挥稳定粥样硬化斑块的作用。然而NONO蛋白对血管新生内膜的作用及机制尚未明确,仍需进一步探索。2研究目的（1）检测NONO蛋白在人体冠状动脉组织和小鼠新生内膜组织中的表达水平;（2）检测NONO对正常幼年小鼠血管形态的影响;（3）检测NONO蛋白缺失对小鼠颈动脉结扎导致的血管新生内膜的影响;（4）探索NONO对血管新生内膜影响的潜在机制。3研究方法3.1利用CRISPR/Cas9技术获得NONO基因敲除小鼠本实验室姜虹教授利用CRISPR/Cas9技术在C57BL/6J背景小鼠中得到NONOgt/0敲基因小鼠。NONO基因位于X染色体,通过杂合母鼠NONOgt/+和野生型WT雄鼠杂交,获得NONOgt/0敲基因小鼠及其同窝对照的NONO+/0野生WT雄鼠。3.2颈动脉结扎小鼠模型的构建稳定繁殖10代后的NONO敲基因鼠及其同窝对照WT雄鼠为本实验中的所有研究用鼠。9-10周NONO基因敲除小鼠及同窝对照WT雄鼠于左侧颈动脉结扎21天后取材。3.3动物取材腹腔注射戊巴比妥钠麻醉小鼠,称量体重后固定。心尖取血后留取血清,检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）水平。生理盐水充分灌流后,留取小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏及两侧颈动脉,置于4%多聚甲醛或液氮中保存。颈动脉组织于甲醛固定24小时后流水冲洗,梯度酒精脱水后石蜡包埋。石蜡切片机进行5 μm连续切片。3.4组织蛋白提取采用Invent MinuteTM蛋白提取试剂盒,将液氮保存的人冠脉组织及小鼠组织放入离心管套柱中,按照1mg组织对应10μl体积的比例加入变性总蛋白提取裂解液,用研磨棒充分研磨后高速离心获得组织蛋白。采用BCA试剂盒检测蛋白浓度,加入蛋白上样缓冲液后99℃煮沸10 min使蛋白变性。3.5组织切片染色颈动脉切片分别进行苏木素-伊红（H&E）染色、Verhoeff氏酒精苏木素染色、免疫组织化学染色及组织免疫荧光染色。测量血管新生内膜面积、新生内膜内平滑肌细胞、巨噬细胞和内皮细胞的含量、NONO表达水平的检测、PCNA及Ki67等增值指标表达水平的检测、SPHK1及S1PR1等迁移指标表达水平的检测。3.6小鼠原代平滑肌细胞VSMCs的提取与培养5-6周大小的NONOgt/0敲基因小鼠及其同窝对照的WT雄鼠用于提取小鼠原代平滑肌细胞。剥离、冷PBS清洗小鼠的主动脉后,采用组织贴壁法提取VSMCs,在含20%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的高糖DMEM培养基培养并按照常规方法传代。3.7人原代平滑肌细胞HASMCs的培养HASMCs购买于美国ScienCell公司,采用SMCM培养基培养并按常规方法传代。3.8 VSMCs细胞迁移的检测采用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测有无20ng/ml的PDGF-BB刺激对WT和NONO KO的VSMCs细胞迁移的影响3.9 VSMCs细胞增殖的检测采用细胞周期检测试剂盒和CCK8检测20ng/ml的PDGF-BB对WT和NONO KO的VSMCs细胞周期及细胞增殖能力的影响。3.10逆转录荧光定量PCR（RT-PCR）组织RNA采用Qiagen的RNA提取试剂盒提取。细胞RNA采用Fastagen的RNA提取试剂盒提取。步骤均参照试剂盒说明书。Nanodrop检测RNA浓度后,采用Takara反转录试剂盒获得cDNA,SYBR及特异性引物进行实时定量PCR,检测NONO、PCNA、p21、SPHK1、S1PR1、α-SMA、CNN1、SM22α的 mRNA 表达水平。3.11细胞免疫荧光细胞免疫荧光检测20ng/ml的PDGF-BB对WT和NONO KO的VSMCs细胞诱导的Erkl/2表达水平及细胞核转位的影响。3.12 蛋白质印记法（Western blot,WB）收集人冠脉组织及小鼠动脉组织和细胞,提取蛋白,检测组织NONO及VSMCs细胞内 NONO、PCNA、p21、α-SMA、SM22α、p-MEK1、t-MEK1、p-Erk1/2、t-Erk1/2的蛋白表达水平,以GAPDH作为内参。3.13蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）适用于IP实验的RIPA及PMSF裂解VSMCs细胞蛋白,检测20ng/ml的PDGF-BB刺激细胞后NONO与Erk1/2相互结合的情况。3.14人冠状动脉组织的获取冠状动脉组织来自山东大学齐鲁医院心血管实验室。从器官供者的移植心脏获取冠状动脉,并在手术室内以最短的缺血时间（<15分钟）进行处理。由经验丰富的心脏外科医生根据器官供者冠状动脉粥样硬化的不同程度,将动脉段划分为健康或病变。研究方案由山东大学齐鲁医院科研伦理委员会批准科研伦理号:KYLL-2016-333。3.15统计分析实验数据均以均数±标准误表示。应用SPSS 19和Graphpad Prism 5软件进行统计学分析及作图。对于符合正态分布的两组样本间比较采用独立样本t检验,多样本间比较采用单因素方差分析One-way ANOVA检验,其下的各组间事后检验采用Dunnett’s多重检验;对于不符合正态分布的样本比较采用非参数检验。双侧P<0.05认为具有统计学差异。4研究结果4.1 NONO在人体狭窄的冠脉组织和WT小鼠颈动脉结扎组织中的表达增加人体粥样硬化斑块导致的狭窄冠脉组织中NONO的RNA水平及蛋白水平均显着高于正常冠脉组织中NONO的表达水平（P<0.05）;在WT小鼠颈动脉结扎后内膜新生的动脉组织NONO的RNA水平及蛋白水平均明显高于对侧正常的小鼠颈动脉组织（P<0.05）。4.2 NONO蛋白主要分布在平滑肌细胞内人粥样硬化斑块导致的狭窄冠脉组织及WT小鼠颈动脉结扎导致血管新生内膜的组织免疫荧光染色显示,NONO与SM22α的荧光共定位最多,推测在狭窄的冠脉及内膜新生组织中,NONO蛋白主要分布在平滑肌细胞内。4.3 NONO基因敲除小鼠及其同窝对照小鼠的基本情况通过CRISPR/Cas9技术在C57BL/6J背景小鼠中得到NONOgt/0敲基因小鼠。NONOgt/0雄鼠的体重、出生率和存活率严重低于同窝对照的WT雄鼠,此外,与WT小鼠相比,NONO KO小鼠的颅面形态也发生了变化。在NONOgt/0敲基因小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑及主动脉血管等组织中均不存在NONO蛋白的表达。9-10周龄的NONO基因敲除小鼠及其同窝对照小鼠的血清TC、TG、LDL-C及HDL-C表达水平无统计学差异,提示NONO对小鼠的血脂水平无影响。但NONO基因敲除小鼠的体重明显低于同窝对照的WT小鼠（P<0.05）,提示NONO对小鼠的生长发育有影响。4.4 NONO蛋白不参与小鼠血管形态的维持NONO蛋白缺失会导致小鼠体重减轻,但对血管形态的维持无影响。分别取4周、5周、6周龄NONOgt/0敲基因小鼠及其同窝对照WT雄鼠的左侧颈动脉H&E染色,显示2组小鼠血管内径及血管中膜厚度均无显着差异。此外,NONO蛋白缺失会影响DBHS蛋白家族PSPC1的表达,对SFPQ的表达量无影响。4.5 NONO蛋白缺失抑制小鼠结扎血管的内膜新生Verhoeff染色显示NONO蛋白缺失明显抑制了小鼠结扎颈动脉血管的内膜新生（P<0.05）。4.6 NONO蛋白缺失抑制血管平滑肌细胞的增殖组织免疫荧光染色及组织化学染色显示,NONO蛋白缺失通过抑制Ki67及PCNA的表达明显抑制血管新生内膜病理过程中的细胞增殖作用（P<0.05）。体外培养原代VSMCs的实验结果进一步显示,NONO蛋白缺失明显抑制PDGF-BB刺激下细胞周期中的合成期（S期）、抑制细胞增殖（P<0.05）,同时WB及PCR结果显示NONO KO能显着抑制PDGF-BB刺激下的VSMCs中PCNA表达量（P<0.05）,显着增加p21的表达量（P<0.05）。4.7 NONO蛋白缺失抑制血管平滑肌细胞的迁移和表型转换组织化学染色显示,NONO蛋白缺失通过抑制SPHK1及S1PR1的表达明显抑制血管新生内膜病理过程中的细胞迁移作用（P<0.05）。体外培养原代VSMCs的实验结果进一步显示,NONO蛋白缺失明显抑制细胞迁移（P<0.05）,PCR结果显示NONO KO明显抑制PDGF-BB刺激下的VSMCs中SPHK1及S1PR1的表达量显着下降（P<0.05）。同时WB及PCR结果显示,PDGF-BB刺激的NONO KO的VSMCs中平滑肌收缩表型α-SMA、CNN1、SM22α的表达水平显着增加（P<0.05）。4.8 NONO蛋白与Erk1/2相互作用共同调控血管新生内膜中VSMCs的作用细胞免疫荧光染色显示,在PDGF-BB的刺激下,WT VSMCs中Erk1/2发生明显核转位,而NONO KO能够显着抑制Erk的核转位。免疫共沉淀检测发现NONO蛋白能够与Erk1/2蛋白相互结合。WB结果进一步显示,NONO KO降低PDGF-BB刺激下Erk1/2的磷酸化表达水平。5结论（1）血管新生内膜的NONO蛋白主要存在于平滑肌细胞中,NONO蛋白缺失明显抑制血管重塑的病理过程;（2）NONO蛋白缺失对血管的完整性无影响;（3）NONO蛋白缺失通过抑制VSMCs的增殖、迁移、细胞表型转化,抑制新生内膜,并通过抑制Erk1/2的磷酸化水平发挥作用。1研究背景腹主动脉瘤（AAA）是一种慢性退行性血管疾病,病人常突发动脉瘤破裂、猝死等严重并发症。目前,世界上每年至少20万人死于AAA,而其中瘤体破裂出血占AAA患者死因的90%。对于AAA瘤体巨大的患者而言,外科手术进行血管修复是目前唯一可行的办法;而对于瘤体较小的患者,仍缺乏行之有效的药物治疗或手术替代疗法。AAA的病理过程包括细胞外基质（ECM）受损及炎性反应。血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）是肾素-血管紧张素系统的重要调控因子,促进AAA的基质降解、慢性炎症浸润及血管重塑。一方面,转化生长因子β（TGF-β）信号转导通路的失活通过抑制ECM合成及促进基质降解,促进AAA的病理性发展。而TGF-β1通过促进胶原合成的关键限速酶辅氨酰-4-羟化酶α1（P4Hα1）的合成促进胶原的合成。另一方面,AAA组织炎性细胞的浸润增加基质金属蛋白酶（MMPs）活性导致ECM的降解,进而加剧AAA的发展。本实验室首次发现肿瘤坏死因子α（TNF-α）通过ASK-JNK-NONO信号通路直接抑制P4Hα1的活性,抑制胶原合成;并首次提出NONO蛋白参与动脉粥样硬化（AS）的病理过程,同时通过与NF-κB p65蛋白相互作用调控AS的炎症反应。NONO（即人p54nrb）作为核蛋白,参与DNA损伤修复、RNA转运及翻译调控等基因调控过程,是一个多功能的高度保守蛋白。NONO蛋白作为cAMP信号通路的重要组成部分,调控cAMP下游TNF-α及白介素6（IL-6）的表达。一方面,NONO下调人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）及小鼠AS斑块P4Hα1的表达,抑制ECM合成;另一方面,NONO与NF-κB p65相互作用加剧AS的炎症反应并参与不稳定斑块的形成。这两方面的作用均表明,NONO可能参与AAA的病理过程,而目前尚无相关研究。由此,我们推测通过NONO蛋白的敲减可能会通过增加胶原沉积及抑制炎症反应发挥抑制AAA病理过程的作用。2研究目的（1）探索NONO在AAA中的分布及作用;（2）观察NONO敲减后对AAA病理过程的影响;（3）探索NONO敲减对AAA的作用机制。3研究方法3.1分离并培养小鼠原代血管平滑肌细胞（VSMCs）将6周龄ApoE-/-雄性小鼠主动脉剥离后,剥去动脉外膜及内膜,冷PBS加1%青链霉素清洗三遍后,将血管用无菌维纳斯剪成长度为1mm左右的动脉组织,在含20%胎牛血清（FBS）的高糖培养基（DMEM）中贴壁培养,7天后换液。第3～9代的小鼠原代VSMCs用于本实验研究。3.2小干扰RNA（siRNA）及干扰慢病毒的制备无义序列的小干扰RNA（si-NC）作为阴性对照,NONO干扰序列的小干扰RNA（si-NONO）如下:CCCACCAACAACTGAACGTTTCTCGAGAAACGTTCA GTTGTTGGTGGG。利用含有 pHelper 1.0 和 pHelper 2.0 的 siRNA 表达载体,在293T细胞中构建慢病毒（LV）。在293T细胞中转染si-RNA48小时后,收集病毒上清并将其通过0.45孔径的醋酸纤维素针式过滤器过滤。通过对293T细胞GFP阳性细胞进行荧光激活细胞分选分析,检测病毒载体的滴度。按照病毒感染复数（MOI）=100的比例,利用NONO干扰慢病毒转染VSMCs。病毒转染3天后收集细胞蛋白检测转染效率或用于不同实验研究。3.3动物造模8周龄ApoE-/-雄性小鼠购于北京维通利华动物实验中心,遵循山东大学齐鲁医院伦理委员会要求饲养小鼠并造模。在22℃室温12h白天/12h黑夜齐鲁医院心血管实验室动物中心高脂（0.25%胆固醇加15%可可脂）喂养小鼠。本实验共包括三个部分:第一部分:20只8周龄ApoE-/-雄性小鼠随机分为对照组（n=10）和AAA组（n=10）。高脂喂养4周后对照组小鼠继续高脂喂养4周获得对照组模型;AAA组小鼠通过高脂喂养4周后皮下埋入渗透泵（Alzet model 2004）泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）4周获得小鼠AAA组。用以检测小鼠AAA组织中NONO蛋白的表达量。第二部分:20只8周龄ApoE-/-雄性小鼠随机分为以下四组。无尾静脉注射慢病毒且无Ang Ⅱ泵注高脂喂养4周后取材（n=5）;高脂喂养初期尾静脉注射sh-NC慢病毒（2 × 107TU/只）并高脂喂养4周后取材（n=5）;高脂喂养初期尾静脉注射sh-NC慢病毒（2 × 107 TU/只）并高脂喂养4周后皮下埋入渗透泵泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）2周后取材（n=5）;高脂喂养初期尾静脉注射sh-NC慢病毒（2 × 107 TU/只）并高脂喂养4周后皮下埋入渗透泵泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）4周后取材（n=5）时取材,均用于检测GFP荧光强度,明确转染效率。第三部分:100只8周龄ApoE-/-雄性小鼠随机分为对照组（n=25）、Ang Ⅱ组（NT 组,n=25）、Ang Ⅱ+sh-NC 组（sh-NC 组,n=25）、以及 Ang Ⅱ+sh-NONO组（sh-NONO组,n=25）。其中,对照组小鼠无尾静脉注射慢病毒且无Ang Ⅱ泵注高脂喂养8周后取材;NT组于高脂喂养初期尾静脉注射0.9%生理盐水4周后皮下埋入渗透泵泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）4周后取材,sh-NC组于高脂喂养初期尾静脉注射sh-NC（2 × 107TU/只）的阴性对照慢病毒4周后皮下埋入渗透泵泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）4周后取材,sh-]NO]NO组于高脂喂养初期尾静脉注射sh-NONO（2 × 107 TU/只）的干扰慢病毒4周后皮下埋入渗透泵泵注Ang Ⅱ（1.44mg/kg/d）4 周后取材。3.4小鼠体重及血脂水平的检测分别于实验前及试验结束时称量ApoE-/-小鼠体重。左室心尖部抽血留取血清,分别检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的血脂水平。3.5血压测量分别于实验前及试验结束时,通过尾静脉测量ApoE-/-小鼠血压。每只小鼠血压测量三次取平均值。3.6AAA测量留取小鼠全长主动脉,置于4%多聚甲醛过夜保存。大体显微镜下剥离主动脉外膜多余的结缔组织及脂肪组织,拍照记录。通过Image-Pro Plus 6.0测量动脉最大直径以测量瘤体大小。AAA是以主动脉直径增加150%,或任何瘤体内出血（含直径增加仅110%）。AAA的严重度分级包括:None,无动脉瘤;Ⅰ型,管腔扩张但无腔内血栓形成;Ⅱ型,管腔扩张伴腔内血栓形成;Ⅲ型,明显的管腔扩张但无腔内血栓形成;Ⅳ型多发动脉瘤伴血栓,部分动脉瘤重叠。两名研究者进行统计分析。3.7主动脉组化分析石蜡包埋主动脉弓至肾动脉的组织,在主动脉直径最大部分利用石蜡切片机进行5μm连续切片用于组织化学染色。苏木素-伊红染色（HE染色）用于评估AAA形态;Verhoeff染色用于观察AAA弹力纤维的完整性:Masson染色及天狼猩红染色用于检测AAA胶原含量;组化染色分别检测巨噬细胞、平滑肌细胞、胶原Ⅰ（CI）、胶原Ⅲ（CⅢ）、P4Hα1、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、白介素1β（IL-1β）、单核细胞趋化因子1（MCP-1）、白介素6（IL-6）及TNF-α的表达量,IgG作为组化染色的阴性对照,所有组化染色结果利用Image J软件统计分析。3.8细胞培养含20%胎牛血清的高糖DMEM用于培养原代小鼠VSMCs。首先,1 × 10-7 mol/L的Ang Ⅱ用于刺激VSMCs模拟AAA,收集细胞蛋白检测NONO表达量;然后,通过MOI=100的病毒复染指数转染VSMCs分别转染sh-NC及sh-NONO病毒,三天后加入1 × 10-7 mol/L的Ang Ⅱ刺激VSMCs进行体外实验研究。所有实验结果至少重复三次。3.9 Western Blot 检测ApoE-/-雄性小鼠主动脉或VSMCs提取组织蛋白或细胞蛋白用于Western blot实验。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜、5%脱脂牛奶封闭非特异性抗原、孵育对应的一抗及二抗、辣根过氧化物酶发光显影等操作,检测NONO、CⅠ、CⅢ、P4Hαl、MMP2、MMP9、IL-lβ、MCP-1、TNF-α 磷酸化NF-κB p65（p-p65）及总NF-κB p65（t-p65）的蛋白表达量,GAPDH作为western blot的内参以证实蛋白上样量一致。3.10细胞免疫共沉淀（co-IP）将VSMCs种于150 mm2培养皿中,在细胞密度达80%-90%后血清饥饿细胞24h,加入1 × 10-7 mol/L的Ang Ⅱ刺激1h,提取蛋白进行免疫共沉淀。分别用NONO一抗或NF-κB p65一抗孵育的蛋白A/G琼脂糖珠拉取NONO蛋白及NF-κB p65蛋白,IgG为阴性对照。通过western blot技术检测结合蛋白。3.11细胞免疫荧光检测1 × 10-7 mol/L的Ang Ⅱ刺激80%密度的VSMCs细胞爬片1h后,通过甲醛固定、Triton破膜、5%BSA封闭非特异性抗原、孵育NONO及NF-κB p65一抗、相对应的荧光二抗、DAPI染色及荧光共聚焦显影,检测NONO及NF-κB p65的共定位。3.12数据统计利用SPSS v19.0进行数据分析。统计数据均以均数±标准误表示。通过独立样本t检验进行两两比较;单因素方差分析用于满足方差齐性假设的多组比较;非参数齐性检测用于多因素比较。卡普兰-迈耶曲线（生存率曲线）用于小鼠生存状态的统计分析。P<0.05表示差异有统计学意义。4研究结果4.1 NONO蛋白在ApoE--小鼠AAA组织及Ang Ⅱ刺激的VSMCs中的表达与正常主动脉组织相比,ApoE-/-小鼠AAA组织中NONO蛋白的表达量明显增加（P<0.05）;与正常VSMCs相比,Ang Ⅱ刺激后VSMCs中NONO蛋白的表达量明显增加（P<0.05）。小鼠AAA组织荧光共定位染色显示,NONO蛋白在巨噬细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞中均有表达,且无明显的统计学差异。4.2慢病毒在体内及体外的转染效率检测分别于ApoE-/-小鼠尾静脉注射sh-NC慢病毒4周、6周及8周时,通过检测小鼠主动脉GFP荧光强度明确小鼠体内慢病毒的转染效率,结果显示三个不同的时间节点取材获得的小鼠主动脉均观察到GFP的绿色荧光。Sh-NONO慢病毒转染小鼠后,AAA组织中NONO蛋白表达量下调约50%（P<0.01）。Sh-NONO慢病毒转染VSMCs后,小鼠原代平滑肌细胞中NONO蛋白表达量下调超过50%（P<0.01）。4.3四组ApoE-/-小鼠的血脂及血压水平本实验第三部分的四组ApoE-/-小鼠的血脂水平均无明显差异。皮下泵注AngⅡ的小鼠收缩压水平明显升高,而NONO蛋白敲减组AAA造模小鼠的收缩压较其他AAA造模小鼠的收缩压无明显差异。4.4降低NONO蛋白的表达明显下调Ang Ⅱ导致的ApoE-/-小鼠AAA的发生率第三部分实验结果显示,对照组小鼠无AAA的发生,而Ang Ⅱ导致的ApoE-/-小鼠AAA的发生率在NT组、sh-NC组及sh-NONO组分别为80%（P<0.05）、84%（P<0.05）及48%（P<0.05）。根据AAA的严重度分级显示,NT组及sh-NC组中Ⅲ型及Ⅳ型AAA 比例更高,而sh-NONO组中Ⅰ型及Ⅱ型AAA的比例较高。因此,降低NONO蛋白的表达量能够明显降低AAA的发生发展。此外,腹主动脉的最大直径在Ang Ⅱ刺激ApoE-/-小鼠中明显升高（P<0.05）,sh-NONO组腹主动脉的最大直径显着低于NT组（P<0.05）及sh-NC组（P<0.05）,NT组及sh-NC组无明显统计学差异。生存曲线显示,Ang Ⅱ明显降低小鼠的存活率。4.5降低NONO蛋白的表达对AAA组织及形态的影响HE及Verhoeff染色显示,Ang Ⅱ刺激ApoE-/-、鼠导致AAA的病理过程中出现主动脉外膜病理性膨大、中膜结构损坏及弹力纤维断裂等。慢病毒敲减NONO蛋白后,上述病理性改变较NT组及sh-NC组明显减轻;而NT组及sh-NC组的血管病理性形态改变无明显差异。此外,sh-NONO组小鼠AAA组织中动脉壁胶原含量、平滑肌细胞含量明显升高（P<0.05）,巨噬细胞含量明显下降（P<0.01）;而NT组及sh-NC组的血管中的胶原含量及细胞组成成分的改变无明显差异。4.6降低NONO蛋白的表达对胶原沉积和胶原降解的影响免疫组化及天狼猩红染色结果显示,相比NT组及sh-NC组的AAA组织,敲减 NONO 蛋白能够显着增加 P4Hα1（P<0.01）、CI（P<0.01）和 CⅢ（P<0.01）的表达量及天狼猩红阳性率（P<0.01）,同时显着降低MMP2（P<0.01）、MMP9（P<0.01）的表达量;而上述指标在NT组及sh-NC组的AAA组织无明显差异。Ang Ⅱ刺激VSMCs 24h提取细胞蛋白的Western Blot结果显示,相比NT组及sh-NC组的VSMCs,敲减NONO蛋白能够显着增加CI（P<0.01）、CⅢ（P<0.01）及P4Hα1（P<0.01）的蛋白表达量,同时显着降低MMP2（P<0.01）、MMP9（P<0.05）的表达量。4.7降低NONO蛋白的表达对炎性因子浸润的影响免疫组化染色结果显示,相比NT组及sh-NC组的AAA组织,敲减NONO蛋白能够显着降低 IL-1β（P<0.01）、MCP-1（P<0.01）、IL-6（P<0.01）和 TNF-α（P<0.01）的表达;而上述指标在NT组及sh-NC组的AAA组织无明显差异。Ang Ⅱ刺激VSMCs 24h提取细胞蛋白的Western Blot结果显示,相比NT组及sh-NC组的VSMCs,敲减NONO蛋白能够显着抑制IL-1β（P<0.01）、MCP-1（P<0.01）和TNF-α（P<0.01）的表达。4.8降低NONO蛋白的表达对NF-κB p65核转位及磷酸化水平的影响转录因子NF-κB p65作为AS的重要调控因子,参与调控炎症因子IL-1β、IL-6及MCP-1的表达水平。通过细胞免疫共沉淀实验,发现NONO蛋白与NF-κB p65在Ang Ⅱ刺激后能够相互结合。荧光染色结果显示,NONO蛋白敲减能够显着抑制Ang Ⅱ刺激导致的NF-κB p65的核转位,IgG为阴性对照。同时,NONO蛋白敲减能够显着抑制Ang Ⅱ刺激导致的NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.01）。5结论（1）通过慢病毒敲减ApoE-/-小鼠NONO蛋白的表达量,可通过增加胶原沉积、抑制炎症反应,抑制Ang Ⅱ导致的小鼠AAA的形成;（2）敲减NONO蛋白可能通过抑制NF-κB p65的磷酸化水平发挥对AAA的有益作用。
陶斯腾[8]（2020）在《三棱内酯B和姜黄素对动脉粥样硬化的影响及其作用机制的研究》文中进行了进一步梳理动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是心脏病以及中风的主要症状,同时也是导致人类死亡的主要原因。动脉粥样硬化是脂质沉积和慢性血管炎症共同作用的结果。许多研究已经证明巨噬细胞与血管平滑肌细胞（VSMC）病变是动脉粥样硬化形成过程中的主要原因。其中血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化斑块的发展过程中向内膜迁移并且出现炎症表型和增殖表型。血管平滑肌细胞可以通过吞噬脂质而转化为泡沫细胞,同时还会通过分泌炎性细胞因子来影响病灶内炎性发展,从而导致炎性斑块增殖。三棱内脂B（Sparstolonin B,SsnB）是一种从三棱科植物块茎中分离得到的含氧蒽类化合物。三棱科植物在中药中一直用于治疗炎症类性疾病。姜黄素（Curcumin,CUR）是从姜科以及天南星科一类的植物根茎中提取的一种二酮类有色物质。近年来,多项研究结果表明姜黄素对于许多疾病,尤其是炎症类疾病具有潜在的治疗作用。同时还有大量研究表明姜黄素在多种肿瘤中有一定的治疗作用。这些研究还发现姜黄素可以通过影响细胞核因子κB（NF-κB）的表达来调节细胞凋亡、细胞增殖等过程。但是两种中药是否可以联合作用于动脉粥样硬化,以及通过怎样的机制来发挥作用,目前还未见相关报道。综上所述,在本研究中,我们拟对三棱内酯B和姜黄素对动脉粥样硬化的影响及其作用机制进行研究。首先,我们连续使用高脂饲料饲喂ApoE-/-小鼠,同时连续腹腔注射血小板衍生因子（PDGF）与白介素17（IL-17）进一步刺激小鼠产生炎症反应,通过这种方式我们成功建立了ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型;其次,我们再对一部分动脉粥样硬化模型小鼠单独腹腔注射SsnB或CUR,对一部分动脉粥样硬化模型小鼠联合腹腔注射SsnB以及CUR。通过对小鼠体内与炎症相关因子的mRNA表达检测以及切片观察,我们发现单独使用SsnB或者CUR并不能明显改善模型小鼠的动脉粥样硬化症状,这两组中依然出现大量肌细胞异常增殖与迁移,而且红细胞渗出的情况并没有得到明显好转。而在联合注射SsnB与CUR之后,小鼠的动脉粥样硬化症状得到明显改善,之前增殖的动脉粥样硬化病灶明显有收缩迹象,而红细胞渗出的情况几乎消失。同时联合用药组中的CCL2、IL-6、MMP2、MMP9以及TNF-α这一类炎症因子的表达相对于模型组明显下降。为了进一步探索三棱内酯B和姜黄素对动脉粥样硬化影响的作用机制,我们又进行了如下的细胞实验:我们首先建立了细胞炎症模型,即使用血小板衍生因子（PDGF）与白介素17（IL-17）处理小鼠的血管平滑肌细胞以及巨噬细胞;其次,我们同样的再对细胞炎症模型单独以及联合使用SsnB以及CUR处理,通过检测加药后细胞中的相关炎症因子表达以及相关蛋白的表达改变。我们发现单独使用SsnB或者CUR对细胞模型中的炎症因子表达没有明显下调作用,而联合使用两种药物则明显起到了改善作用。其中单独使用SsnB处理细胞时,CCL2的基因表达相对于模型组变化不大,而其他炎症因子如IL-1β、IL-6、MMP2、MMP9以及TNF-α反而有所上升,白细胞介素（IL）和肿瘤坏死因子（TNF）能够增加白细胞的粘附,这类细胞因子表达下降说明动脉粥样硬化过程中巨噬细胞招募在下降,而能够介导稳定型动脉粥样硬化病变向不稳定表型的转化基质金属蛋白酶（MMP2与MMP9）的下降说明这种炎症趋于稳定。单独用CUR进行处理时我们发现虽然相对于模型组CUR能下调CCL2、IL-1β、IL-6、MMP2、MMP9以及TNF-α的表达,但是表达水平依然高于空白对照组。而在细胞通路水平上,单独使用SsnB或CUR对激活的P38、P50、P65蛋白（磷酸化蛋白）作用不明显。而联合使用CUR与SsnB实验组中我们发现该组中相关P-P38、P-P50、P-P65等蛋白相对模型组以及空白对照组都下降明显。P38MAPK、NF-κB通路、ERK通路在动脉粥样硬化的发生发展和转移过程中起重要作用,这一类磷酸化蛋白表达的下降充分说明了CUR与SsnB联合作用对抑制动脉粥样硬化病变有明显作用。这一结果说明SsnB与CUR的联合添加可以抑制动脉粥样硬化的发生,并且是通过P38MAPK、NF-κB通路以及ERK通路信号通路发挥作用。
赵梦婕[9]（2020）在《引起兔腹主动脉瘤破裂相关因素的试验研究》文中指出目的使用不同药物损伤血管诱导炎症反应,通过缩窄腹主动脉流出道使血液流出受阻,从而增大管壁应力。从腹主动脉瘤直径、管壁压力变化、血管病理变化等方面综合分析腹主动脉瘤破裂的高风险因素,为临床上腹主动脉瘤破裂风险评估提供理论依据。方法选取健康的雌性新西兰大白兔30只,体重2～3 kg,随机分为5组,每组6只:氯化钙浸润组、氯化钙浸润联合流出道缩窄组、低浓度胰蛋白酶浸润组、低浓度胰蛋白酶浸润联合流出道缩窄组、高浓度胰蛋白酶浸润联合流出道缩窄组。根据分组使用不同药物包裹浸润血管30 min,流出道缩窄组药物损伤后根据血管直径选择不同型号的猫导尿管于浸润段远心端与腹主动脉平行结扎,后撤出导尿管,使之形成约50%～60%的缩窄。术后每周对试验兔进行腹主动脉超声检查,观察并测量浸润段腹主动脉直径变化;分别于术前、术后2天内、术后1周、术后2周清晨空腹采血检测试验兔血常规变化;分别于术后1周、术后2周清晨空腹采血收集于普通采血管中,静置后取上层血清检测血液中IL-6和MMP-9含量变化;分别于术后1周、术后2周使用兽用电子血压监测仪监测试验兔血压变化;使用ANSYS 15.0软件模拟计算腹主动脉瘤并计算不同情况下腹主动脉管壁所受峰值壁应力;2周后,牺牲试验兔,取腹主动脉损伤段固定、包埋、切片,分别行HE染色观察主动脉壁组织结构及细胞组成变化、EVG染色观察弹力纤维的破坏程度,并使用图像分析软件测量血管内膜、中膜厚度及分析弹力纤维面积百分比。试验数据均用应用Excel和SPSS 19.0软件进行数据统计学处理,组间比较用Duncan法检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果术后2周氯化钙浸润组和胰蛋白酶浸润组血管扩张均未达1.5倍,无腹主动脉瘤形成;氯化钙+狭窄组成瘤率66.67%,血管平均扩张1.61倍,无动脉瘤破裂;低浓度胰酶+狭窄组成瘤率83.33%,血管平均扩张1.89倍,无动脉瘤破裂;高浓度胰酶+狭窄组成瘤率100.00%,血管平均扩张2.43倍,3只试验兔（3/6）因动脉瘤破裂死亡。血常规结果显示:术后2 d内,各组白细胞总数均升高,其中淋巴细胞于术后2 d内始终无明显变化,氯化钙组、氯化钙+狭窄组和低浓度胰酶组分别于术后1-2 d显示中性粒细胞（NEU）较术前显着升高（P<0.05）,高浓度胰酶+狭窄组则是于术后2 d显示单核细胞（MON）较术前显着升高（P<0.05）。术后1-2w各项指标均恢复至术前水平。术后2w,各组IL-6含量均较术后1w时升高2-5 pg/m L,且高浓度胰酶+狭窄组显着高于其他组（P<0.05）;各组MMP-9含量均较术后1w时下降3-4ng/m L,高浓度胰酶+狭窄组仍显着高于其他组（P<0.05）。试验兔术前袖带测量MAP约为70 mm Hg。术后1w,流出道缩窄的组MAP均较术前升高约10 mm Hg,显着高于流出道未缩窄的组（P<0.05）;术后2w,各组MAP较术后1w均无明显变化。计算机数值模拟发现流出道缩窄使血管壁应力增大。切片结果显示:正常腹主动脉内膜厚度约为3.2μm,药物损伤使各组血管内膜显着增厚（P<0.05）,且氯化钙损伤后的血管内膜厚度显着大于胰蛋白酶损伤后的血管内膜厚度（P<0.05）,而低浓度胰蛋白酶损伤后的血管内膜厚度显着大于高浓度胰蛋白酶损伤后的血管内膜厚度（P<0.05）;正常腹主动脉血管中膜厚度约为134.83μm,氯化钙浸润组中膜较正常腹主动脉增厚33.65%,EVG染色示中膜弹力纤维曲度变直,出现断裂、碎片,氯化钙+狭窄组中膜裂解,形成直径大于其它组中膜厚度的腔隙,低浓度胰蛋白酶浸润组和低浓度胰酶+狭窄组中膜厚度较正常腹主动脉增加10.68%-13.55%,EVG染色示弹力纤维部分断裂、变细,但整体仍具完整性和连续性,高浓度胰酶+狭窄组中膜厚度较正常腹主动脉降低89.93%,EVG染色可见管壁结构疏松,弹力纤维较正常腹主动脉显着减少。结论1.由于不同个体间主动脉直径的差异,腹主动脉瘤的扩张倍数较腹主动脉瘤直径能更好地评估破裂风险,当AAA扩张倍数大于或等于2.43倍时容易发生破裂;2.缩窄腹主动脉流出道会导致试验兔平均动脉压升高约10 mm Hg,同时造成腹主动脉瘤壁面应力增大从而加速瘤体扩张并增加瘤体破裂风险;3.高浓度胰蛋白酶水解大量弹性蛋白和胶原蛋白会导致管壁变薄、结构疏松,更容易在壁应力增大时因局部弹力纤维断裂和胶原纤维塌陷发生腹主动脉瘤破裂。
景炅婕[10]（2020）在《双酚类化合物处理妊娠期绵羊对胎儿骨骼肌发育的影响》文中研究表明双酚类化合物广泛应用于各种工业产品和日常消费品,可与多种内源性受体结合,干扰内源性激素的合成和代谢,引起代谢紊乱。胚胎期和出生后双酚A（bisphenol A,BPA）的暴露可导致机体产生胰岛素抵抗进而引起代谢障碍。双酚类化合物存在于脐带血和母乳中,可能对后代产生长远的影响。骨骼肌的发育开始于胚胎期形成于胎儿期,作为胰岛素最大的靶组织,在维持葡萄糖稳态和机体能量平衡中起着重要作用。双酚类化合物对骨骼肌发育的影响鲜有报道。本研究用双酚类化合物处理妊娠期母羊,从体内和体外两个层面研究其对胎儿骨骼肌发育的影响,探究其作用机制。选取妊娠绵羊（N=78只/处理组）为体内试验研究对象,在妊娠第30100 d每日背部皮下注射BPA或双酚S（bisphenol S,BPS）（0.5 mg/kg/d）。妊娠第120 d,屠宰母羊采集胎儿后肢上部骨骼肌组织通过HE染色法检测肌纤维横截面面积,q RTPCR法检测肌纤维类型决定基因、成肌调节因子基因和肌纤维大小相关基因的表达,Western blotting法检测肌纤维类型相关蛋白的表达。同时,采集妊娠第120 d的胎羊新鲜骨骼肌组织,体外分离纯化培养成肌细胞,用Ed U法检测其增殖能力,免疫荧光染色法检测其诱导分化后形成肌管的大小。另外,选取小鼠C2C12成肌细胞和大鼠L6成肌细胞作为体外研究模型进行了研究,用MTT法检测其细胞毒性,Ed U法检测其增殖能力,免疫荧光染色法检测其诱导分化形成的肌管大小,Western blotting法检测胰岛素刺激前后C2C12和L6成肌细胞和分化后肌管细胞中胰岛素信号通路关键因子的表达。主要研究结果如下:1.动物试验体内研究结果:（1）BPA和BPS处理组的公胎羊和母胎羊肌纤维面积均大于对照组。（2）肌纤维类型决定基因MYH1在BPA处理组母胎羊骨骼肌组织中高表达,MYH2和MYH7在BPS处理组母胎羊骨骼肌组织中高表达,但在不同处理组公胎羊骨骼肌组织中表达差异不显着（P>0.05）。（3）促进肌纤维肥大因子（JUNB）、成肌细胞融合启动子（My D88）和成肌调节因子基因（Myf5、Myog、MyoD和MRF4）mRNA均在BPS处理组的母胎羊骨骼肌组织高表达,但在不同处理组公胎羊骨骼肌组织中表达差异不显着（P>0.05）。（4）快收缩蛋白（fast MHC）在对照组、BPA和BPS处理组的母胎羊骨骼肌组织中高表达（P<0.05）,慢收缩蛋白（slow MHC）只在BPS处理组的母胎羊骨骼肌组织中高表达（P<0.05）。2.动物试验体外研究结果:（1）BPA和BPS处理的公胎羊和母胎羊成肌细胞诱导分化后平均肌管面积和肌管直径均显着大于对照组;所有处理组的母胎羊成肌细胞分化形成的肌管面积均显着大于公胎儿（P<0.05）。（2）BPA和BPS处理对胎羊成肌细胞增殖能力和胰岛素反应性没有显着性影响（P>0.05）。3.体外成肌细胞系研究结果:（1）C2C12细胞和L6细胞分别经11个剂量的BPA、BPS或双酚F（bisphenol F,BPF）处理72 h后,C2C12细胞对双酚类化合物有更强的敏感性,三种双酚类化合物对成肌细胞毒性作用强度依次为BPA>BPF>BPS。（2）10-4 M、10-6 M、10-8 M和10-10 M BPS和BPF处理C2C12细胞8 d后,仅10-4 M BPF处理组促进了C2C12成肌细胞的增殖,所有处理组均促进了C2C12成肌细胞的融合。（3）非细胞毒性剂量（10-5 M）BPA、BPS和BPF处理C2C12细胞和L6细胞5 d后,BPS和BPF处理组p-AKT（Thr）和p-GSK-3β的表达水平降低（P<0.05）,但是下游因子mTOR和GLUT4的表达没有显着性差异（P>0.05）。综上所述,绵羊妊娠期第30100 d每日连续注射BPA或BPS可导致120胎龄的胎儿肌纤维横截面增加,诱导分化后的肌管面积更大,引起胎儿骨骼肌肥大且不存在性别特异性。小鼠C2C12成肌细胞是研究双酚类化合物对骨骼肌发育影响更敏感的体外模型。BPS和BPF处理可降低胰岛素受体信号通路关键因子p-AKT（Thr）和p-GSK-3β的表达,但不影响信号通路终端因子mTOR和GLUT4的表达,不损害成肌细胞对胰岛素的反应性,但是干扰了胰岛素信号通路前端部分因子的表达,其应用于工业生产的安全性有待进一步研究。
二、Up and Down Expression of Androgen Receptor, Estrogen Receptor beta and Platelet Derived Growth Factor beta by Testosterone in Aortic Vascular Smooth Muscle Tissues（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Up and Down Expression of Androgen Receptor, Estrogen Receptor beta and Platelet Derived Growth Factor beta by Testosterone in Aortic Vascular Smooth Muscle Tissues（论文提纲范文）
（1）整合eGWAS和eQTL分析绵羊全血转录组与繁殖激素的关联（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 血液转录组的应用研究 |
| 1.1.1 预测疾病生物标记物 |
| 1.1.2 鉴定免疫调控因子 |
| 1.1.3 家畜生产管理中的应用 |
| 1.2 绵羊繁殖转录组研究进展 |
| 1.2.1 巴美肉羊概况 |
| 1.2.2 基于性腺轴的研究进展 |
| 1.2.3 可变剪接与单核苷酸多态性的调控研究 |
| 1.3 绵羊产羔与排卵的调节机制 |
| 1.3.1 BMP15、GDF9 对排卵和产羔数的调节 |
| 1.3.2 FSH、LH对排卵和产羔数的调节 |
| 1.4 研究的主要内容 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 研究一不同产羔类型绵羊血液转录组时序动态表达初探 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验主要仪器与试剂 |
| 2.1.3 RNA提取 |
| 2.1.4 转录组文库构建与测序 |
| 2.1.5 测序数据质量评估和过滤去噪 |
| 2.1.6 参考序列比对与转录本检测定量分析 |
| 2.1.7 差异表达基因分析 |
| 2.1.8 差异可变剪接分析 |
| 2.1.9 差异表达基因与差异可变剪接的聚类分析 |
| 2.1.10 短时序表达分析 |
| 2.1.11 功能富集分析 |
| 2.1.12 统计显着性分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 绵羊产羔类型的差异表达基因分析 |
| 2.2.2 绵羊产羔类型差异可变剪接分析 |
| 2.2.3 绵羊产羔类型差异表达基因与差异可变剪接的聚类分析 |
| 2.2.4 绵羊转录组时序表达变化 |
| 2.2.5 绵羊转录组时序动态表达模块分析 |
| 2.2.6 绵羊转录组时序可变剪接变化 |
| 2.2.7 绵羊产羔类型与时序性表达的整合分析 |
| 2.2.8 试验重复性验证 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 3 研究二大样本动态血液基因整合e GWAS解析绵羊繁殖激素共表达网络 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验主要仪器与试剂 |
| 3.1.3 RNA 提取与建库测序 |
| 3.1.4 测度数据质量评估与过滤去噪 |
| 3.1.5 参考序列比对与转录本检测定量分析 |
| 3.1.6 血清LH、FSH、GDF9与BMP15 的浓度测定 |
| 3.1.7 加权基因共表达网络分析 |
| 3.1.8 eGWAS分析 |
| 3.1.9 基因功能注释与候选位点的确定 |
| 3.1.10 构建主题文献摘要与全文的绵羊GWAS数据库 |
| 3.1.11 机器学习验证分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 全局样本构建繁殖激素调控的共表达网络 |
| 3.2.2 基于表达的全基因组关联研究 |
| 3.2.3 产羔类型相关的模块 |
| 3.2.4 激素调控相关模块 |
| 3.2.5 产羔类型与月份之间的关联模块 |
| 3.2.6 绵羊GWAS数据库验证全局网络的功能属性 |
| 3.2.7 机器学习验证小样本产羔类型差异表达基因对于大样本的支持度 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 4 研究三 LH/FSH 血清浓度比值的绵羊等位基因特异性表达与遗传关联研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验样品 |
| 4.1.2 试验主要仪器与设备 |
| 4.1.3 RNA提取 |
| 4.1.4 转录组文库构建与测序 |
| 4.1.5 测序数据质量评估与过滤去噪 |
| 4.1.6 参考序列比对与转录本检测定量分析 |
| 4.1.7 LH、FSH激素浓度的测定 |
| 4.1.8 差异表达基因分析 |
| 4.1.9 差异ASE分析 |
| 4.1.10 eQTL分析 |
| 4.1.11 功能富集分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 LH与FSH血清浓度相关性分析 |
| 4.2.2 LH/FSH比值在不同月份的方差分析 |
| 4.2.3 LH/FSH比值在不同月份的转录组差异分析 |
| 4.2.4 LH/FHS比值差异表达基因通路富集分析 |
| 4.2.5 ASE证实血液存在广泛的顺式调控影响 |
| 4.2.6 eQTL-SNP和 ASE-SNP联合分析 |
| 4.2.7 eQTL-SNP与 ASE-SNP富集分析 |
| 4.2.8 LH/FSH比值生物标志物的表达基因型 |
| 4.2.9 LH/FSH比值生物标志物的遗传调控网络 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 5 研究四 GDF9、BMP15 血清浓度的绵羊等位基因特异性表达与遗传关联研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验样品 |
| 5.1.2 试验主要仪器与设备 |
| 5.1.3 RNA提取 |
| 5.1.4 转录组文库构建与测序 |
| 5.1.5 测序数据质量评估与过滤去噪 |
| 5.1.6 参考序列比对与转录本检测定量分析 |
| 5.1.7 血清GDF9、BMP15 激素浓度的测定 |
| 5.1.8 差异表达基因分析 |
| 5.1.9 差异ASE分析 |
| 5.1.10 eQTL分析 |
| 5.1.11 功能富集分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 不同GDF9 血清浓度的差异表达基因分析 |
| 5.2.2 不同GDF9 血清浓度的ASE分析 |
| 5.2.3 不同BMP15 血清浓度的差异表达基因分析 |
| 5.2.4 不同BMP15 血清浓度的ASE分析 |
| 5.2.5 GDF9与BMP15 的联合分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 结论 |
| 6 全文主要结论、创新点及展望 |
| 6.1 论文主要结论 |
| 6.2 论文创新点 |
| 6.3 论文未来研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（2）自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 花生四烯酸代谢通路 |
| 1.2 环氧化酶代谢通路 |
| 1.3 前列腺素及其受体 |
| 1.4 前列环素与内皮依赖性收缩 |
| 1.5 前列环素与高血压、年龄 |
| 1.6 本课题的目的和研究意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂及仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物购买及饲养 |
| 2.2.2 血管舒缩反应性检测 |
| 2.2.3 高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)检测不同前列腺素的水平 |
| 2.2.4 酶联免疫法(ELISA)测定环氧化酶代谢产物水平 |
| 2.2.5 蛋白质免疫印迹法检测 |
| 2.2.6 实时定量PCR反应 |
| 2.2.7 尾套法无创血压测量系统检测SHR大鼠血压和心率 |
| 2.2.8 L-798106 口服给药监测幼年SHR血压变化 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 SHR血压发展过程中髂动脉的EDCs及其变化规律 |
| 3.1.1 乙酰胆碱在髂动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.1.2 COX抑制剂或NO对乙酰胆碱诱发的血管效应的影响 |
| 3.2 PGI2 的生成及血管舒缩作用 |
| 3.2.1 乙酰胆碱诱导髂动脉PGI_2的生成 |
| 3.2.2 WKY和 SHR髂动脉PGIS的表达 |
| 3.2.3 PGI_2在WKY和 SHR髂动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.3 TP或EP3 受体对髂动脉的血管舒缩反应的影响 |
| 3.3.1 TP或EP3 受体激动剂诱发髂动脉的血管舒缩反应 |
| 3.3.2 WKY和 SHR髂动脉TP、EP3和IP受体的表达 |
| 3.3.3 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对乙酰胆碱诱发幼年SHR髂动脉的血管效应的影响 |
| 3.3.4 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对PGI_2诱发SHR髂动脉的血管效应的影响. |
| 3.3.5 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对PGI_2诱发幼年SHR肾动脉的血管效应的影响 |
| 3.4 L-798106 处理对U46619 诱发的血管效应的影响 |
| 3.5 其它血管的EDCs效应 |
| 3.5.1 乙酰胆碱在肾动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.5.2 乙酰胆碱在主动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.6 L-798106 处理对幼年SHR血压进程的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 SHR血压发展过程中血管EDCs变化 |
| 4.2 PGI_2的生成及血管舒缩功能变化 |
| 4.3 TP、EP3 受体参与血管EDCs作用 |
| 4.4 L-798106 对TP受体的拮抗作用 |
| 4.5 L-798106 处理抑制幼年SHR高血压的发展 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 内皮源性收缩因子调节血管张力的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）冠心病患者血清microRNA-223和CXCR4的变化及临床意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词汇对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 综述 |
| 1.2.1 miR-223 在心血管疾病中的研究进展 |
| 1.2.1.1 miRNAs概述 |
| 1.2.1.2 miR-223 与心肌肥厚 |
| 1.2.1.3 miR-223 与心力衰竭 |
| 1.2.1.4 miR-223 与血管重塑 |
| 1.2.1.5 miR-223 与川崎病 |
| 1.2.1.6 miR-223 与糖尿病心肌病 |
| 1.2.2 CXCR4 在心血管疾病中的研究进展 |
| 1.2.2.1 CXCR4 与动脉粥样硬化 |
| 1.2.2.2 CXCR4 与进行性心肌病 |
| 1.2.2.3 CXCR4 与分子成像 |
| 1.2.2.4 CXCR4 与心肌纤维化 |
| 1.2.2.5 CXCR4 与心肌再生 |
| 第2章 实验对象及实验材料 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 标本选择 |
| 2.1.2 入选标准 |
| 2.1.3 排除标准 |
| 2.1.4 冠状动脉造影方法及狭窄程度评价 |
| 2.1.5 血清标本采集 |
| 2.1.6 临床基线资料 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 第3章 实验方法 |
| 3.1 血清miRNA-223 表达水平的检测步骤 |
| 3.1.1 血清总RNA提取并分离 |
| 3.1.2 逆转录合成cDNA |
| 3.1.3 血清miRNA实时荧光定量PCR检测 |
| 3.2 血清中CXCR4 浓度测定 |
| 3.3 数据处理及统计分析 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 一般临床资料对比 |
| 4.2 CAD组和对照组患者血清miR-223及CXCR4 的表达 |
| 4.3 各亚组患者血清miR-223和CXCR4 的表达 |
| 4.4 CAD患者血清中miR-223和CXCR4的表达相关性分析 |
| 4.5 miR-223、CXCR4与Gensini评分相关性分析 |
| 4.6 血清miR-223及CXCR4在CAD患者中的预测价值 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 miR-223和CXCR4与CAD的关系 |
| 5.2 miR-223和CXCR4与CAD严重程度的关系 |
| 5.3 miR-223和CXCR4对CAD发生的预测价值 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）多囊卵巢综合征对于围着床期子宫中免疫细胞及细胞外基质的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 多囊卵巢综合征流行病学 |
| 1.2 多囊卵巢综合征的诊断和病理生理 |
| 1.2.1 PCOS的诊断标准 |
| 1.2.2 PCOS的病理生理 |
| 1.3 多囊卵巢综合征与不孕症 |
| 1.4 妊娠早期子宫中免疫细胞的研究现状 |
| 1.4.1 妊娠早期免疫耐受 |
| 1.4.2 各类免疫细胞在妊娠早期子宫中的变化 |
| 1.4.2.1 巨噬细胞 |
| 1.4.2.2 树突状细胞 |
| 1.4.2.3 中性粒细胞 |
| 1.4.2.4 肥大细胞 |
| 1.4.2.5 B细胞 |
| 1.5 围着床期细胞间连接和细胞外基质的变化 |
| 1.5.1 细胞黏着分子-钙粘蛋白 |
| 1.5.2 膜细胞骨架连接蛋白-埃兹蛋白 |
| 1.5.3 细胞外基质-层粘连蛋白 |
| 1.5.4 细胞外基质-胶原蛋白IV |
| 1.5.5 细胞质膜表面的粘多糖—糖萼 |
| 1.6 多囊卵巢综合征动物模型的构建 |
| 1.7 本论文的研究目的、意义及技术路线 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 动物模型的构建 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 药物配制 |
| 2.1.3 动物材料收集 |
| 2.1.4 PCOS小鼠模型 |
| 2.1.5 早期妊娠 |
| 2.1.6 围着床期DHEA短期处理早期妊娠小鼠 |
| 2.1.7 围着床期DHEA处理假孕小鼠 |
| 2.1.8 DHEA处理卵巢切除小鼠 |
| 2.2 PCOS小鼠模型子宫中m RNA表达谱的研究 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 样品总RNA提取 |
| 2.2.3 样品RNA检测 |
| 2.2.4 RNA文库的构建与质量检测 |
| 2.2.5 上机测序 |
| 2.2.6 数据分析 |
| 2.3 人子宫内膜收集 |
| 2.4 免疫组织化学 |
| 2.4.1 试剂配制 |
| 2.4.2 免疫组化中使用的抗体 |
| 2.4.3 石蜡包埋及切片 |
| 2.4.4 具体操作步骤 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.5.1 试剂配制 |
| 2.5.2 免疫荧光中使用的抗体 |
| 2.5.3 具体操作步骤 |
| 2.6 卵巢组织苏木精-伊红染色 |
| 2.6.1 石蜡切片脱蜡复水 |
| 2.6.2 染色步骤 |
| 2.7 甲苯胺蓝染色 |
| 2.7.1 染色试剂配制 |
| 2.7.2 甲苯胺蓝染色步骤 |
| 2.8 Western Blot |
| 2.8.1 所用试剂配制 |
| 2.8.2 制备蛋白样品 |
| 2.8.3 测定蛋白浓度并制备上样液 |
| 2.8.4 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 2.8.5 蛋白条带转膜 |
| 2.8.6 免疫印迹 |
| 2.9 Real-time PCR |
| 2.9.1 样品总RNA提取 |
| 2.9.2 反转录 |
| 2.9.3 qPCR引物设计 |
| 2.9.4 qPCR具体步骤 |
| 2.9.5 数据分析 |
| 2.10 统计学分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 PCOS模型的成功建立 |
| 3.1.1 表观及着床结局指标 |
| 3.1.2 病理学指标 |
| 3.1.3 血清生化指标 |
| 3.1.4 子宫中雄激素受体测定 |
| 3.2 PCOS模型小鼠子宫的m RNA表达谱测序结果 |
| 3.2.1 RNA质量评估 |
| 3.2.2 原始测序数据过滤及质量评估 |
| 3.2.3 参考基因组比对 |
| 3.2.4 基因表达分布和样本间相关性 |
| 3.2.5 差异基因的筛选 |
| 3.2.6 富集分析 |
| 3.3 DHEA对子宫免疫细胞数量及定位的影响 |
| 3.3.1 中性粒细胞 |
| 3.3.2 巨噬细胞 |
| 3.3.3 树突状细胞(DC) |
| 3.3.4 肥大细胞 |
| 3.3.5 B细胞 |
| 3.4 DHEA对子宫细胞间连接和细胞外基质的影响 |
| 3.4.1 埃兹蛋白 |
| 3.4.2 钙黏蛋白 |
| 3.4.3 细胞外基质-层粘连蛋白 |
| 3.4.4 胶原蛋白IV |
| 3.4.5 CD31 |
| 3.4.6 UEA受体 |
| 第四章 全文讨论 |
| 4.1 PCOS小鼠模型的成功构建 |
| 4.2 PCOS小鼠妊娠第4 天子宫m RNA表达谱的启示 |
| 4.3 PCOS围着床期子宫中免疫细胞异常变化 |
| 4.4 PCOS 围着床期子宫上皮细胞间连接的改变 |
| 4.5 PCOS围着床期子宫细胞外基质的变化 |
| 4.6 PCOS围着床期子宫上皮细胞质膜表面糖萼的变化 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（5）三角褐指藻和知母提取物对毛囊更新和毛发生长活性及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 常见英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 脱发症 |
| 1.2 脱发症 |
| 1.2.1 头发及毛囊生理学 |
| 1.2.2 毛囊生长周期 |
| 1.2.3 毛发生长评估模型 |
| 1.2.4 毛囊更新周期和头发生长相关的蛋白质信号因子 |
| 1.2.5 防脱生发的主要治疗途径 |
| 1.3 天然产物在毛发健康领域优势 |
| 1.3.1 三角褐指藻的特点及其研究意义 |
| 1.3.2 知母的特点及其研究意义 |
| 1.4 本课题立题依据和研究内容 |
| 1.4.1 立题依据 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第二章 PTE及 AAE中活性成分的提取与分离及主要成分分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要设备 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.5 数据处理 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 三角褐指藻与知母提取物得率 |
| 2.3.2 三角褐指藻提取物含量分析 |
| 2.3.3 知母总皂苷含量分析 |
| 2.3.4 知母总黄酮含量分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 PTE及 AAE对毛囊单位相关细胞生长的影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 主要试剂和材料 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 |
| 3.2.3 实验动物准备 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 毛乳头细胞的培养和生长 |
| 3.3.2 人生发基质细胞的培养和生长 |
| 3.3.3 毛囊外根鞘细胞的培养和生长 |
| 3.3.4 毛囊内根鞘细胞的培养和生长 |
| 3.3.5 人体黑素细胞的培养和生长 |
| 3.3.6 PTE对毛囊单位相关细胞活力的影响 |
| 3.3.7 PTE对毛囊单位相关细胞生长曲线的影响 |
| 3.3.8 PTE对毛囊单位相关细胞的细胞集落形成能力的影响 |
| 3.3.9 AAE对毛囊单位相关细胞活力的影响 |
| 3.3.10 AAE对毛囊单位相关细胞的细胞集落形成能力的影响 |
| 3.3.11 AAE对体外毛囊生长状态的影响 |
| 3.3.12 AAE对 C57BL/6 小鼠毛囊和毛发生长的影响 |
| 3.3.13 C57BL/6 小鼠背部皮肤病理切片及AAE对关键信号分子表达的影响 |
| 3.4 分析和讨论 |
| 3.4.1 毛囊单位相关细胞培养体系的建立 |
| 3.4.2 PTE和 AAE对毛囊单位相关细胞生长活力、集落形成的影响 |
| 3.4.3 AAE对体外培养的毛囊组织及C57BL/6 小鼠毛发生长的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 PTE及 AAE对毛囊细胞信号传导和头发强度相关蛋白因子的影响研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验材料和主要试剂 |
| 4.2.2 主要设备 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 三角褐指藻提取物(PTE)的作用 |
| 4.3.2 知母体提取物(AAE)的作用 |
| 4.4 分析和讨论 |
| 4.4.1 PTE对毛发生长的作用机制 |
| 4.4.2 PTE对毛发黑素产生的作用机制 |
| 4.4.3 AAE对毛发生长的作用机制 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 含PTE及 AAE制剂对人体毛发生长的影响研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 受试者 |
| 5.2.2 测试样品 |
| 5.2.3 试剂和材料 |
| 5.2.4 仪器和设备 |
| 5.2.5 方法和流程 |
| 5.2.6 数据、定义和数据的统计学分析方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 含PTE及 AAE的制剂对毛囊、头发和头皮生理状态的影响 |
| 5.3.2 测试样品对毛囊、头发和头皮生物化学状况的影响 |
| 5.3.3 对测试样品对头皮和头发生理指标和生化指标影响的汇总 |
| 5.3.4 含PTE和 AAE的制剂对人体头皮和头发健康综合影响的分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 结论和展望 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（6）中国药物作用靶点研究进展（Ⅰ）（论文提纲范文）
| 1 心血管疾病作用靶点 |
| 1.1 高血压作用靶点 |
| 1.1.1 高血压治疗相关的miRNA靶点 |
| 1.1.1.1 miR-34b |
| 1.1.1.2 miR-34a |
| 1.1.1.3 miR-142-3p |
| 1.1.1.4 miR-16 |
| 1.1.2 高血压治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 1.1.2.1 Rho激酶 |
| 1.1.2.2 T-细胞盐皮质激素受体 |
| 1.1.2.3 补体成分3a受体和补体成分5a受体 |
| 1.2 心律失常作用靶点 |
| 1.2.1 心律失常治疗相关的miRNA靶点 |
| 1.2.1.1 miR-3144-5p |
| 1.2.1.2 miR-1231 |
| 1.2.2 心律失常治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 1.2.2.1 丝裂原活化激酶激酶-7 |
| 1.2.2.2 成纤维细胞生长因子13 |
| 1.3 心力衰竭作用靶点 |
| 1.3.1 心力衰竭治疗相关的miRNA靶点 |
| 1.3.2 心力衰竭治疗相关的LncRNA靶点 |
| 1.3.2.1 心肌细胞再生相关LncRNA |
| 1.3.2.2 内源性心脏再生相关调节因子 |
| 1.3.3 心力衰竭治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 1.3.3.1 去乙酰化酶-6 |
| 1.3.3.2 内膜转位酶50 |
| 1.3.3.3 转录激活因子3 |
| 1.3.3.4 ATP酶抑制因子1 |
| 1.3.3.5 EphrinB2 心脏纤维化是左心室重构常见的特征,最终会导致心力衰竭。 |
| 1.4 冠心病与心肌梗死作用靶点 |
| 1.4.1 冠心病与心肌梗死治疗相关的miRNA靶点 |
| 1.4.1.1 miR-20a |
| 1.4.1.2 miR-574-5p |
| 1.4.1.3 miR-21 |
| 1.4.2 冠心病与心肌梗死治疗相关的LncRNA靶点 |
| 1.4.2.1 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ型亚基δ转录本1相关LncRNA |
| 1.4.3 冠心病与心肌梗死治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 1.4.3.1 ADAMTS7 |
| 1.4.3.2 烟酰胺N-甲基转移酶 |
| 1.4.3.3 转化生长因子-β受体Ⅲ |
| 1.4.3.4 前列腺素E3受体 |
| 1.4.3.5 IL-37 |
| 1.4.3.6 Tim-1 + B细胞 |
| 1.4.3.7 热休克转录因子1 |
| 1.5 动脉粥样硬化作用靶点 |
| 1.5.1 动脉粥样硬化治疗相关的miRNA靶点 |
| 1.5.1.1 hsa-miR-148b |
| 1.5.1.2 miR-155 |
| 1.5.1.3 miR-17-5p |
| 1.5.1.4 miR-126 |
| 1.5.1.5 miR-9 |
| 1.5.1.6 miR-182 |
| 1.5.1.7 miR-210 |
| 1.5.1.8 miR-1185 |
| 1.5.1.9 miR-98 |
| 1.5.1.10 miR-338-3p |
| 1.5.1.11 miR-328 |
| 1.5.1.12 miR-377 |
| 1.5.2 动脉粥样硬化治疗相关的LncRNA靶点 |
| 1.5.3 动脉粥样硬化治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 1.5.3.1 腺苷酸激活蛋白激酶 |
| 1.5.3.2 胃饥饿素 |
| 1.5.3.3 Jmjd3 |
| 1.5.3.4 CD137 |
| 1.5.3.5 CD146 |
| 1.5.3.6 表皮生长因子受体 |
| 1.5.3.7血小板二磷酸腺苷受体亚基12 |
| 1.5.3.8 干扰素调节因子3 |
| 1.5.3.9 apelin-13 |
| 1.5.3.10 脂肪分化相关蛋白 |
| 1.5.3.11 囊性纤维化跨膜转运调节体 |
| 1.5.3.12 β-干扰素Toll/1L-1R结构域衔接蛋白 |
| 1.5.3.13 信号转导淋巴细胞活化分子家族成员7 |
| 2 脑血管病作用靶点 |
| 2.1 脑血管病治疗相关的miRNA靶点 |
| 2.1.1 miR-195 |
| 2.1.2 miR-9-5p |
| 2.2 脑血管病治疗相关的蛋白与基因靶点 |
| 2.2.1 肺腺癌转移相关转录本1 |
| 2.2.2 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 |
| 2.2.3 15-脂氧合酶/15-羟二十碳四烯酸 |
| 2.2.4 组蛋白去乙酰酶4 |
| 2.2.5 趋化因子受体5 |
| 2.2.6 sigma-1 受体 |
| 2.2.7 血管内皮生长因子 |
| 2.2.8 脑活素 |
| 2.2.9 血管生成素样4 |
| 2.2.10 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ |
| 2.2.11 Netrin-1 |
| 2.2.12 TNF-α刺激基因/蛋白6 |
| 3 自身免疫性疾病作用靶点 |
| 3.1 类风湿性关节炎作用靶点 |
| 3.1.1 可溶性白细胞介素2受体 |
| 3.1.2 T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3 |
| 3.1.3 RIPK1-VDAC1途径 |
| 3.1.4 金属硫蛋白-1、Th17与Treg |
| 3.2 系统性红斑狼疮作用靶点 |
| 3.2.1 Toll样受体-4 |
| 3.2.2 B淋巴细胞刺激因子 |
| 3.2.3 肿瘤坏死因子α诱导的蛋白3 |
| 3.2.4 血清颗粒蛋白前体和卵泡抑素样蛋白1 |
| 3.3 多发性硬化作用靶点 |
| 3.4 银屑病作用靶点 |
| 3.4.1 miR-194 |
| 3.4.2 Yes相关蛋白 |
| 3.4.3 角蛋白17 |
| 3.4.4 富含半胱氨酸蛋白61 |
| 3.5 原发性免疫性血小板减少症作用靶点 |
| 3.5.1 miR-15a |
| 3.5.2 Toll样受体-4 |
| 3.5.3 CXC趋化配体因子16 |
| 3.5.4 非经典和中间单核细胞亚群 |
（7）血管重塑性疾病模型中NONO蛋白作用及其基因调控的机制（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ 血管重塑性疾病组织NONO蛋白表达及其基因敲除作用机制 |
| 中文摘要Ⅰ |
| 英文摘要Ⅰ |
| 符号说明Ⅰ |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ NONO基因敲减ApoE~(-/-)小鼠中控制腹主动脉瘤的调控机制 |
| 中文摘要Ⅱ |
| 英文摘要Ⅱ |
| 符号说明Ⅱ |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 英文论文Ⅰ |
| 英文论文Ⅱ |
| 英文论文Ⅲ |
| 英文论文Ⅳ |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（8）三棱内酯B和姜黄素对动脉粥样硬化的影响及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 动脉粥样硬化中的炎症研究 |
| 1.1 动脉粥样硬化中的炎症研究 |
| 1.1.1 动脉粥样硬化的病理过程 |
| 1.1.2 炎症在动脉粥样硬化中的作用 |
| 1.1.3 血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化过程中的作用 |
| 1.1.4 巨噬细胞在动脉粥样硬化过程中的作用 |
| 1.2 动脉粥样硬化炎症发展中的标志物 |
| 1.3 动脉粥样硬化相关的炎症信号通路 |
| 第二章 三棱内酯B和姜黄素的研究进展 |
| 2.1 三棱内脂B的研究进展 |
| 2.2 姜黄素的研究进展 |
| 第三章 三棱内酯B和姜黄素对于动脉粥样硬化的研究进展 |
| 3.1 SsnB的抗炎症作用的研究进展 |
| 3.2 CUR 的抗炎症作用的研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 SsnB和CUR对ApoE-/-小鼠炎症模型的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 SsnB与 CUR对小鼠VSMC与巨噬细胞炎症的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）引起兔腹主动脉瘤破裂相关因素的试验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 试验试剂 |
| 1.1.3 试验仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 分组 |
| 1.2.2 腹主动脉瘤模型的制备 |
| 1.2.3 彩超诊断仪检测 |
| 1.2.4 血常规监测 |
| 1.2.5 IL-6、MMP-9含量测定 |
| 1.2.6 血压测量 |
| 1.2.7 计算机模拟血管峰值壁应力及壁面剪切应力 |
| 1.2.8 组织病理学观察 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 腹主动脉瘤超声图像及各组直径、成瘤率比较 |
| 2.2 血常规 |
| 2.3 术后IL-6、MMP-9变化 |
| 2.4 术后平均动脉压变化 |
| 2.5 计算机模拟血管壁面应力 |
| 2.6 组织病理学观察 |
| 2.7 内膜、中膜厚度及各组弹力纤维面积百分比变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 AAA扩张倍数与破裂之间的联系 |
| 3.2 钙化与AAA破裂之间的联系 |
| 3.3 蛋白水解与AAA破裂之间的联系 |
| 3.4 动脉缩窄与AAA破裂之间的联系 |
| 3.5 循环血白细胞与AAA的联系 |
| 3.6 MMP-9与AAA破裂之间的联系 |
| 3.7 IL-6与AAA破裂之间的联系 |
| 4 结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）双酚类化合物处理妊娠期绵羊对胎儿骨骼肌发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 骨骼肌概述 |
| 1.1 骨骼肌的结构和功能 |
| 1.2 肌纤维的类型及生理特性 |
| 1.3 骨骼肌生长发育的调控网络 |
| 1.4 骨骼肌的再生修复 |
| 1.5 影响骨骼肌生长发育的外在因素 |
| 2 胎儿骨骼肌的生长发育及影响因素 |
| 2.1 胎儿骨骼肌的生长发育 |
| 2.2 母体因素对胎儿骨骼肌生长发育的影响 |
| 3 内分泌干扰物 |
| 3.1 内分泌干扰物概述 |
| 3.2 内分泌干扰物的暴露及危害 |
| 3.3 内分泌干扰物的易感期(妊娠期和围产期) |
| 4 双酚类内分泌干扰物 |
| 4.1 双酚A概述 |
| 4.2 双酚类化合物暴露对骨骼肌发育的影响 |
| 4.3 双酚A的类似物 |
| 4.4 双酚类化合物的比较 |
| 5 妊娠期双酚类化合物暴露对母体和后代的影响 |
| 5.1 妊娠期双酚类化合物暴露对母体的影响 |
| 5.2 妊娠期双酚类化合物暴露对后代的影响 |
| 6 研究骨骼肌发育的模型 |
| 6.1 骨骼肌发育-体内研究模型 |
| 6.2 骨骼肌发育-体外研究模型 |
| 6.3 体内与体外研究模型的比较 |
| 7 研究目的及意义 |
| 第二章 BPA和BPS处理妊娠期母羊对胎儿骨骼肌肌纤维大小和类型的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 BPA和BPS处理对胎儿骨骼肌肌纤维大小的影响 |
| 2.2 BPA和BPS处理对胎儿骨骼肌发育相关基因表达的影响 |
| 2.3 BPA和BPS处理对胎儿骨骼肌肌纤维类型决定基因和蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 BPA和BPS处理改变了胎儿骨骼肌肌纤维的大小 |
| 3.2 BPA和BPS处理改变了胎儿骨骼肌肌纤维决定基因的表达 |
| 4 小结 |
| 第三章 BPA和BPS处理妊娠期绵羊对胎儿成肌细胞增殖、分化和胰岛素反应性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 骨骼肌成肌细胞纯度检测结果 |
| 2.2 BPA和BPS处理对绵羊胎儿骨骼肌成肌细胞增殖的影响 |
| 2.3 BPA和BPS处理对绵羊胎儿骨骼肌成肌细胞分化的影响 |
| 2.4 BPA和BPS处理对胎儿成肌细胞胰岛素反应性的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 BPA和BPS处理没有改变胎儿成肌细胞的增殖能力 |
| 3.2 BPA和BPS处理改变了胎儿成肌细胞的分化能力 |
| 3.3 BPA和BPS处理没有改变胎儿成肌细胞对胰岛素的反应性 |
| 4 小结 |
| 第四章 BPA、BPS和BPF处理对C2C12和L6成肌细胞分化和胰岛素反应性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 C2C12和L6细胞毒性的检测 |
| 1.3 C2C12细胞增殖的检测 |
| 1.4 C2C12细胞分化的检测 |
| 1.5 C2C12细胞对胰岛素敏感性的检测 |
| 1.6 C2C12和L6细胞胰岛素信号通路关键因子蛋白表达的检测 |
| 1.7 数据处理与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 BPA、BPS和BPF对C2C12和L6细胞毒性的影响 |
| 2.2 BPS和BPF对C2C12细胞增殖、分化和胰岛素敏感性的影响 |
| 2.3 BPA、BPS和BPF对C2C12细胞胰岛素通路蛋白的影响 |
| 2.4 BPA、BPS和BPF对L6细胞胰岛素通路蛋白的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 BPA、BPS和BPF处理对成肌细胞毒理作用的影响 |
| 3.2 BPS和BPF处理对成肌细胞增殖和分化的影响 |
| 3.3 BPA、BPS和BPF处理对成肌细胞胰岛素信号传导的影响 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 特色与创新 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 攻读博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、Up and Down Expression of Androgen Receptor, Estrogen Receptor beta and Platelet Derived Growth Factor beta by Testosterone in Aortic Vascular Smooth Muscle Tissues（论文参考文献）
- [1]整合eGWAS和eQTL分析绵羊全血转录组与繁殖激素的关联[D]. 孙燕勇. 内蒙古农业大学, 2021
- [2]自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究[D]. 张英展. 汕头大学, 2021
- [3]冠心病患者血清microRNA-223和CXCR4的变化及临床意义[D]. 梁爽. 吉林大学, 2021(01)
- [4]多囊卵巢综合征对于围着床期子宫中免疫细胞及细胞外基质的影响[D]. 吴洋. 兰州大学, 2021(09)
- [5]三角褐指藻和知母提取物对毛囊更新和毛发生长活性及其机制研究[D]. 肖蕾. 华南理工大学, 2020(05)
- [6]中国药物作用靶点研究进展（Ⅰ）[J]. 江振洲,袁子航,孙丽新,吴启鹏,柴媛媛,李思佳,向婷,喻琼娜,朱英,张陆勇. 药学进展, 2020(06)
- [7]血管重塑性疾病模型中NONO蛋白作用及其基因调控的机制[D]. 徐兴丽. 山东大学, 2020(11)
- [8]三棱内酯B和姜黄素对动脉粥样硬化的影响及其作用机制的研究[D]. 陶斯腾. 吉林大学, 2020(08)
- [9]引起兔腹主动脉瘤破裂相关因素的试验研究[D]. 赵梦婕. 贵州大学, 2020
- [10]双酚类化合物处理妊娠期绵羊对胎儿骨骼肌发育的影响[D]. 景炅婕. 山西农业大学, 2020