导读:本文包含了磷脂酰肌醇蛋白聚糖论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:原发性肝癌,磷脂酰肌醇蛋白聚糖,Glypican,诊断方法
磷脂酰肌醇蛋白聚糖论文文献综述
张雷,祁峰,龚建平[1]（2019）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖在诊断原发性肝癌中的研究进展》一文中研究指出由于导致肝癌的各种危险因素的差异巨大,肝癌的早期检测受到了极大地限制。寻找敏感性和特异性俱佳的HCC诊断指标,对于提高患者生存率及生活质量具有重要意义。磷脂酰肌醇蛋白聚糖(Glypican,GPC)是一种硫酸乙酰肝素蛋白多糖,其家族由六个基因组成(GPC-1至GPC-6)。现阶段研究热点多集中在GPC-3和GPC-1上。GPC-3既可作为细胞信号通路的调节剂参与生物学过程,也可作为肿瘤学指标用于检测肝癌等恶性肿瘤。而GPC-1在早期胰腺癌患者中高表达,其诊断早期胰腺癌的特异度和敏感度均达到100%,是一种理想的肿瘤早期标志物。但其在原发性肝癌中444达,以及在诊断早期HCC中的临床意义还不清楚,值得深入研究。本文将对磷脂酰肌醇蛋白聚糖在诊断原发性肝癌中的临床意义的研究进展进行综述。(本文来源于《西南军医》期刊2019年05期）
姚艳丽[2]（2019）在《多糖HH1-1抗胰腺癌和糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖GPC6促胰腺癌的功能及机制研究》一文中研究指出胰腺癌作为恶性程度极高的实体肿瘤,具有发病率逐年升高,预后差,致死率高的特点。胰腺癌易复发和转移,并易对化疗药物产生耐药性。胰腺癌的高发病率和死亡率主要由两方面的临床困境造成,一是缺乏有效的早期检测方法,二是由于对胰腺癌发生发展机理缺乏深入了解而缺乏有效的治疗手段。因此,揭示胰腺癌的发病机制,寻求有效的早期检测方法和治疗策略是治疗胰腺癌的核心任务。本课题主要研究天然多糖对胰腺癌的干预机制以及细胞膜糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖GPC6在胰腺癌中的功能及机制。细胞毒性的化疗一直是胰腺癌治疗的主要手段。目前临床上广泛使用的胰腺癌一线治疗是FOLFIRINOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂等几种化疗药物联合用药方案)和吉西他滨-白蛋白紫杉醇联合用药方案。但胰腺癌对这些化疗药物易产生高耐药性,且化疗药物毒副作用大,将大大降低患者的生活质量。此外,由于胰腺癌特殊的肿瘤微环境特征,将阻碍药物渗透至肿瘤细胞,使其克服化疗药物的毒性,而实现肿瘤持续性增长。因此,胰腺癌新的治疗策略亟待开发。但是到目前为止,无论是靶向治疗还是免疫治疗,这两种癌症治疗的最新举措,都没有在胰腺癌的治疗上取得突破性的积极成果。多糖是构成生命体的重要组成成分具有广泛的生物活性。例如免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、降血糖、抗氧化、抗病毒、神经保护、抗Aβ_(42)聚集以及缺血再灌注损伤保护等作用。此外,相对小分子化合物,大部分多糖几乎没有毒副作用。相比于细胞毒类药物,多糖类药物在临床上可改善患者生存质量,减轻毒副作用。基于此,我们从活血化瘀的中药红花中提取得到红花多糖,对其在胰腺癌中的作用进行深入研究。红花是最古老的作物之一,属于桔梗目、菊科、红花属植物,红花的入药部位是其干燥花。据《本草纲目》、《雷公炮制药性解》和《金匮要略》等书籍记载,红花广泛用于治疗血瘀,痛经和其他女性疾病。此外,红花的水提取物,羟基红花黄色素A(HSYA),被用于治疗心血管疾病,疗效显着。由于该植物的广泛生物活性,越来越多研究正致力于研究红花中有效的活性成分和作用机制。目前据文献统计,已经分离和鉴定了来自红花的种子,根茎和花中超过100种化合物,主要包括类黄酮、生物碱、有机酸和聚乙炔。但是红花中的多糖成分研究较少,尤其在抗肿瘤领域更是鲜有研究。我们从红花中分离出粗多糖HH,对HH进行抗胰腺癌、乳腺癌、脑星形胶质母细胞瘤、肝癌、结肠腺癌、慢性髓系白血病、宫颈癌、恶性黑色素瘤和非小细胞肺癌九种肿瘤的活性筛选,发现HH对胰腺癌BxPC-3细胞生长有良好的抑制活性,抑制率为89.50%。随后,通过进一步分离纯化和结构解析,我们发现粗多糖HH中的主要成分HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性。而该均一多糖对正常胰腺导管上皮细胞和肝细胞几乎没有毒性。克隆形成实验揭示HH1-1可显着抑制胰腺癌细胞形成的克隆数目和克隆大小。细胞周期检测发现,HH1-1处理后的胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞周期会阻滞于S期,细胞周期相关蛋白磷酸化AKT,磷酸化CDK2,Cyclin A_2表达下调,激酶抑制蛋白P21表达上调。Annexin V/PI双染色法、Hoechst 33258染色法和Caspase-3活性检测法的结果显示,HH1-1可诱导胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1凋亡。Bcl-2在HH1-1处理后表达下调;Bax和Cleaved Caspase-3在HH1-1处理后表达量上调。此外,HH1-1还可以抑制胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1的迁移和侵袭。通过HMEC-1细胞管腔形成实验和鸡胚尿囊膜实验发现,HH1-1可在体内和体外显着抑制血管新生。随后,我们通过体内实验,进一步证实了HH1-1的抗胰腺癌作用。通过胰腺癌细胞BxPC-3皮下移植瘤实验,我们发现0.5 mg/kg HH1-1可显着抑制肿瘤的体积和重量,其抑制作用与40 mg/kg阳性药吉西他滨的抑制作用相类似。我们使用人源性肿瘤组织异种移植模型(PDX),来模拟胰腺癌病人肿瘤的血运特点、基质特征和坏死状况等。实验结果显示,HH1-1能够浓度依赖性的抑制PDX肿瘤的体积和重量,高浓度50 mg/kg时其相对抑制率达58.78%。并且,在两项动物实验中,我们发现HH1-1对小鼠的体重和状态没有明显的影响,表明HH1-1具有很好的安全性。针对HH1-1的结构特征,我们对它的靶向性进行了探索。HH1-1作为一种阿拉伯半乳聚糖,可能会与半乳糖凝集素家族成员发生相互作用。我们发现在HH1-1处理BxPC-3和AsPC-1细胞后,Galectin-1、3、7在mRNA水平会发生显着下调。表面等离子共振实验(SPR)结果显示,HH1-1能够和Galectin-3结合,KD=4.158E~(-6)。但HH1-1不与Galectin-1和Galectin-7结合。且HH1-1不能与Galectin-3的配体EGFR结合,却能够抑制Galectin-3和EGFR的结合,从而阻断EGFR下游信号通路。EGFR作为肿瘤增殖、血管生成和肿瘤侵袭转移等过程的关键分子,阻断EGFR下游信号通路可显着抑制肿瘤进展。由于HH1-1可以抑制Galectin-3和EGFR的mRNA水平和蛋白水平,因此我们推测HH1-1可通过影响Galectin-3和EGFR的转录,进而影响两者的表达。通过分析和筛选Galectin-3和EGFR的转录因子,我们发现HH1-1处理胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1后,两者的共同转录因子FOXO3表达量显着上调。通过构建shRNA敲减Galectin-3和EGFR,以及外源性加入Galectin-3蛋白的回补实验,我们进一步在mRNA和蛋白水平研究,发现HH1-1可通过抑制Galectin-3/EGFR/AKT/FOXO3信号通路,发挥抗胰腺癌的活性。通过免疫组化和Western Blot,我们在两种移植瘤模型中验证了HH1-1在体内也是通过这一信号通路发挥作用。综上所述,我们从红花中分离纯化出一种结构明确的均一多糖HH1-1。HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性,且无明显毒副作用。HH1-1通过抑制胰腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制迁移和侵袭、抑制血管新生,发挥抗胰腺癌活性。靶向性研究发现HH1-1可结合Galectin-3。机制研究揭示,HH1-1结合Galectin-3,从而抑制Galectin-3与EGFR的结合,抑制EGFR下游信号通路:阻滞AKT的磷酸化水平,进一步导致FOXO3的磷酸化水平降低,FOXO3的表达量上升,转录因子FOXO3进入细胞核,影响关键分子的转录,最终呈现胰腺癌抑制表型。此外,FOXO3是Galectin-3与EGFR的转录负调控因子,当FOXO3表达量上升后,Galectin-3与EGFR的转录被抑制,最终导致Galectin-3与EGFR表达下调,进一步增加其抑制胰腺癌的作用。上述研究表明多糖HH1-1通过与Galectin-3结合,干预EGFR信号通路发挥抗胰腺癌活性。而在胰腺癌临床研究中的另一困境则揭露出,目前针对胰腺癌尚无有效的诊断标志物和药物靶点。因此,我们关注细胞膜表面的蛋白聚糖在胰腺癌发生发展中的功能和机制。前期已有研究表明糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在多种肿瘤中具有重要的生物学作用,我们将聚焦糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在胰腺癌发生发展过程中发挥什么生物活性呢?为了回答这一问题,我们首先利用5对胰腺癌病人样本的mRNA芯片,分析发现GPC6在胰腺癌肿瘤中表达量显着高于癌旁组织。随后我们采用111对胰腺癌病人样本的RT-qPCR和免疫组化进行验证,发现GPC6在79例胰腺癌患者肿瘤组织中高表达,提示GPC6有可能在胰腺癌中担任重要角色并可能成为胰腺癌的分子标志物或潜在药物作用靶点。将GPC6表达水平与临床样本信息整合,我们发现GPC6在恶性程度高的T3期表达显着升高,并且GPC6表达量高的患者存在总生存期短的特征。随后我们对GPC6在胰腺癌中的功能进行深入研究。首先通过构建GPC6敲减或过表达的胰腺癌稳转细胞株,我们发现GPC6可显着促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990增殖,敲减GPC6则抑制胰腺癌细胞生长。此外,显微镜下观察可发现,过表达GPC6会导致胰腺癌细胞形态发生改变,使其具有间质细胞形态特征。同时,划痕愈合实验和迁移侵袭实验证实,GPC6可促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990迁移和侵袭,而敲减GPC6则会抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭。体内实验运用BxPC-3和PANC-1细胞皮下移植瘤实验证实,敲减GPC6会显着抑制肿瘤的生长,导致肿瘤体积减小,重量减轻;反之,过表达GPC6则会显着促进皮下移植瘤的生长。重要的是,在胰腺癌PDX模型中敲减GPC6也能显着抑制肿瘤生长。通过尾静脉注射过表达GPC6的胰腺癌细胞SW1990及其对照细胞,发现过表达GPC6能显着促进胰腺癌细胞在肝脏和肺部肿瘤的形成。有趣的是,我们对皮下移植瘤的肿瘤组织进行HE染色和天狼猩红染色后发现,过表达GPC6可显着促进胰腺癌肿瘤组织的纤维化,而敲减GPC6后肿瘤组织纤维化程度降低。对转移性肝脏和肺部肿瘤组织进行天狼猩红染色后也可发现,过表达GPC6会显着促进肝脏组织纤维化,并轻微促进肺部肿瘤组织纤维化。此外,我们通过对纤维化相关蛋白的检测,发现敲减GPC6后,细胞胶原蛋白及其相关酶表达量均显着降低;转化生长因子家族蛋白TGFβI和TGFβ2表达量也显着降低;肌动蛋白和细胞骨架蛋白ACTN2,ABLIM1,LIMA1和ACTN4表达量均显着降低。基于此,我们推测,GPC6在促进肿瘤增殖、迁移侵袭和纤维化进程中担任关键角色。进一步的机制研究,我们发现GPC6可影响胰腺癌细胞PANC-1和BxPC-3EMT相关标志物的表达。敲减GPC6后,与细胞粘附和紧密连接相关的蛋白,如E-Cadherin、Claudin-1、ZO-1表达上调;反之,间质表型相关分子如N-Cadherin、Vimentin、?-Catenin、TCF8/ZEB1、Slug和Snail表达量则降低。因此,我们推测,GPC6可能通过影响EMT进程来影响胰腺癌肿瘤进展。上述研究表明,多糖HH1-1可能成为抗胰腺癌的候选药物,GPC6可能是抗胰腺癌的药物靶点。这些研究为我们理解胰腺癌的发生发展机理和基于多糖的创新药物研究奠定了坚实基础。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)》期刊2019-06-01）
岳潇,张国培,李绍强[3]（2019）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖3促进肝细胞癌侵袭和转移的初步研究》一文中研究指出目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是否能促进肝细胞癌(HCC)侵袭、转移。方法通过siRNA靶向沉默GPC3在人肝癌细胞Hep3B、HepG2中的表达,慢病毒介导GPC3在人肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP-1中过表达,用于体外细胞功能试验和建立体内裸鼠原位种植瘤模型。Western blotting、qPCR检测GPC3、上皮间质转化(EMT)相关分子N-Cadherin、E-Cadherin、SNAIL、Vimentin和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-3、MMP-7的表达。结果过表达GPC3的Hep3B、HepG2细胞株的迁移和侵袭能力显着大于GPC3低表达的SMMC-7721、SK-HEP-1细胞株(P<0.05);小鼠肝脏原位癌模型显示,过表达GPC3的HCC肝脏转移发生率明显高于GPC3低表达者(P<0.05)。过表达GPC3可以降低E-Cadherin,上调N-Cadherin的表达;干扰GPC3表达后,E-Cadherin表达上调,N-Cadherin表达下调。GPC3过表达可显着上调MMP-2、MMP-3、MMP-7的表达(P<0.05)。结论 GPC3可通过诱导HCC发生EMT和分泌MMPs,促进HCC细胞迁移和侵袭。(本文来源于《中华普通外科学文献(电子版)》期刊2019年02期）
田江川[4]（2019）在《血清异常凝血酶原、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、甲胎蛋白联合检测对HBV相关HCC的诊断价值分析》一文中研究指出目的探讨血清异常凝血酶原(DCP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、甲胎蛋白(AFP)联合检测对乙型肝炎病毒(HBV)相关原发性肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法选取HBV相关HCC患者80例为HBV+HCC组,另选择无HBV感染或携带史的HCC患者40例(HCC组)及健康体检者30例(对照组),检测叁组血清DCP、GPC3、AFP水平,应用ROC曲线分析血清DCP、GPC3、AFP联合检测诊断HBV相关HCC的价值,并对比不同预后者(存活组、死亡组)入院时的血清DCP、GPC3、AFP水平。结果 HBV+HCC组血清DCP、GPC3、AFP水平及阳性率高于HCC组和对照组(P <0. 05)。血清DCP、GPC3、AFP叁项联合检测诊断灵敏度高于AFP、DCP+AFP诊断,特异度高于DCP、AFP诊断,准确度高于DCP、AFP、DCP+AFP诊断(P <0. 05);叁项联合诊断时kappa值、约登指数、曲线下面积(AUC)分别为0. 675、0. 700、0. 843; HBV相关HCC患者中6个月后死亡20例,存活60例,死亡组入院时的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活组(P <0. 05)。结论血清DCP、GPC3、AFP联合检测可提高HBV相关HCC检出率,在HBV相关HCC中有较高诊断价值,且对患者预后也有一定评估价值,值得在临床推广应用。(本文来源于《实用医院临床杂志》期刊2019年02期）
杨瑞,戴光荣,陈延平,白金娥[5]（2018）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖3和肝细胞石蜡抗原对原发性肝癌的诊断价值研究》一文中研究指出目的评价磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)和肝细胞石蜡抗原(Hep Par-1)对原发性肝癌(HCC)的诊断价值。方法选择2012年1月-2016年12月在延安市延安大学附属医院就诊的肝癌患者73例,测量病理组织的GPC-3和Hep Par-1的表达含量,同时对HCC进行病理学分级,评价两组标记物对HCC诊断和分化程度的判断价值。结果 73例患者中28例HCC(38.36%),5例ICC(6.85%),转移性肝癌40例(54.79%),包括消化系统来源29例(39.73%),非消化系统6例(8.22%),不明来源5例(6.85%)。29例Hep Par-1(+)患者中25例为HCC,4例为非HCC,Hep Par-1阳性率组间比较差异有统计学意义(P <0.05);24例GPC-3(+)患者中19例为HCC病例,5例非HCC,GPC-3阳性率组间比较差异有统计学意义(P <0.05),Hep Par-1的敏感度和特异度分别为91.50%和89.21%,GPC-3为78.32%和94.07%;25例HCC病例中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为10、12、6例,无Ⅳ级病例,Ⅰ级病例中Hep Par-1、GPC-3阳性率分别为90.00%和60.00%(χ~2=2.400,P=0.121),Ⅱ级为83.33%和75.00%(χ~2=0.253,P=0.615),Ⅲ级为100%和66.67%(χ~2=2.400,P=0.121)。结论 GPC-3是诊断HCC的敏感指标,但敏感度不如Hep Par-1,两者联合应用有助于提高HCC确诊率。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2018年12期）
李保芬,关素梅,毛茹倩,杜晓丹,张旭[6]（2018）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝细胞癌诊断中的研究进展》一文中研究指出肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)主要由慢性肝病和肝硬化引起,全世界每年约超过70万人被诊断为HCC,从2003年到2012年,发病率每年增长2.7%~([1])。2012年,美国疾病预防控制中心的统计数据显示亚洲的HCC发病率最高,该病的病死率位居世界第2位,其中一半的病例和50%的病死率发生在中国~([2-3])。2013年全国肿瘤登记中心的数据显示,肝癌的新发病例为36.2万例,死亡人数约31.6万例~([4]),肝癌已经严重威胁到人们的健康和生命。HCC病死率高的主要原因是起病隐匿,早期无明显症状,又缺乏有效的早期诊断方法,就诊时大多为中晚期,失去手术治疗的最佳时机。因此,寻找HCC早期诊断、预测复发的生物指标,是当前的迫切任务之一。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3, GPC3)是近年发(本文来源于《北京医学》期刊2018年11期）
路翔宇,龚军,许建,熊伟,俞小炯[7]（2018）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的检测在肝细胞肝癌诊断中的研究进展》一文中研究指出肝癌是最常见的癌症之一,在全世界癌症死亡原因中列第叁,是中国位居第二的癌症"杀手",其恶性程度高、病情进展快[1-3]。根据组织学分类可将肝癌分为胆管细胞型肝癌(ICC)、混合型肝癌、肝细胞肝癌(HCC)叁大类。在中国原发性肝癌中HCC占91.5%,患者早期无明显症状,一旦出现症状就诊,往往已属中晚期,其5年生存率低于10%～15%[4-5]。影像学技术,如CT扫描、超(本文来源于《上海医学》期刊2018年08期）
张香西[8]（2018）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)对肝细胞癌生长及侵袭的影响》一文中研究指出【背景和目的】肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝癌,占肝癌的90%,有数据表明:HCC由于其发病率逐年增加且预后差现位居世界恶性肿瘤致死病因的第2位。GPC-3是过度生长综合症(Simpson Golabi Behmel Syndrome,SGBS)患者中普遍存在的功能突变基因,是蛋白聚糖家族成员之一。GPC-3基因编码的GPC-3蛋白可通过共受体(co-receptor)与相关配基如生长因子、细胞黏附分子等共同作用,来参与细胞生物学行为的调节。有学者认为在细胞生长的各个过程包括细胞的繁殖、黏附、分化、迁移等过程中均存在GPC-3的直接或间接调控。研究发现HCC患者体内的GPC-3表达水平跟健康人及良性肝疾病患者相比显着升高,正常成人及良性肝疾病患者组织和血清中的GPC-3表达水平极低甚至检测不到,这表明GPC-3与HCC关系密切,可能在其发生发展中起促进作用。GPC-3是HCC临床鉴别诊断中有用的特异性标志物,又是HCC预防和免疫治疗的新靶点,尽管目前有多篇文章探讨其分子机制,它的结构已基本研究清楚,但是其功能尚未完全阐明。基于以上研究背景,本课题通过Crispr/cas9技术对GPC-3进行敲除并构建了GPC-3过表达载体,沉默和上调HCC细胞中GPC-3基因的表达,进而研究GPC-3对于肝癌的生长、侵袭等生物学行为的影响,为进一步阐明GPC-3在HCC中的作用机制,指导HCC的临床治疗奠定基础。【研究方法】1通过Western-blot和Q-PCR检测多株HCC细胞中GPC-3蛋白/基因的表达水平,选择GPC-3高表达和低表达的HCC细胞株;2按照Genebank(NCBI)中GPC-3基因序列设计引物,PCR扩增、纯化以获取GPC-3目的片段,经基因重组及双酶切来构建GPC-3过表达载体;3运用Crispr/cas9技术设计叁条靶向GPC-3基因的gRNA,插入Crispr/cas9敲除载体后导入高表达GPC-3的细胞株,筛选出一条编辑效率最高的gRNA;4将上述GPC-3过表达载体及GPC-3敲除载体用第叁代慢病毒包装系统分别进行慢病毒载体包装,浓缩细胞上清液后获得相应的病毒液;5用上述含有GPC-3过表达载体的慢病毒液感染低表达GPC-3的HCC细胞,用含有GPC-3敲除载体的慢病毒液感染高表达GPC-3的HCC细胞,通过嘌呤霉素(puro)持续药筛获得GPC-3过表达稳定细胞株以及不表达GPC-3的单克隆细胞株,用Western-blot和Q-PCR技术检测细胞中GPC-3的表达情况;6通过CCK-8、划痕实验、Transwell及流式细胞仪分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡情况,观察GPC-3过表达/敲除后细胞的生物学行为的改变趋势;7观察敲除GPC-3后Huh-7细胞的裸鼠皮下移植瘤模型的生长情况,判断GPC-3敲除细胞株的体内成瘤能力。【研究结果】1多株HCC细胞中GPC-3基因表达水平从高到低的顺序为:HepG2>Hep3B>Huh-7>LM3>MHCC97H>MHCC97L,SK-hep-1几乎不表达GPC-3;2 Western-blot检测HCC细胞的GPC-3蛋白表达水平,HepG2、Hep3B、Huh-7叁株细胞高表达GPC-3,LM3、MHCC97H、MHCC97L、SK-hep-1四株细胞未检测到明显GPC-3条带;3成功构建GPC-3过表达慢病毒载体,获得叁个GPC-3完全敲除的病毒载体;4选择MHCC97L、SK-hep-1两株细胞用于过表达GPC-3,Huh-7细胞用于敲除GPC-3,获得GPC-3过表达的稳转细胞株及敲除的单克隆细胞株。通过Western-blot和Q-PCR证实各株细胞成功过表达/敲除GPC-3;5过表达GPC-3后,SK-hep-1细胞的增殖能力被抑制,而MHCC97L细胞的增殖能力不受影响,敲除GPC-3后,Huh-7细胞的增殖能力明显降低;6过表达GPC-3后,与对照组相比,MHCC97L、SK-hep-1细胞的迁移/侵袭能力均增强,而敲除GPC-3的Huh-7细胞的迁移及侵袭能力明显低于对照组;7过表达/敲除GPC-3后,MHCC97L、SK-hep-1、Huh-7叁株细胞的凋亡情况与对照组相比均没有明显差异;8裸鼠成瘤实验发现敲除GPC-3组Huh-7细胞在裸鼠体内成瘤能力低于对照组。【结论】成功构建GPC-3过表达/敲除载体,并获得稳定过表达/敲除GPC-3的HCC细胞株。通过体内外实验发现GPC-3能促进HCC细胞的迁移、侵袭,但对HCC细胞体外增殖的影响因细胞系的不同而不同,GPC-3与肝癌细胞的凋亡无密切相关。以上结果提示通过抑制HCC患者体内GPC-3的表达可作为治疗HCC的有效手段。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-06-01）
徐震,朱善军,马春芳,郝天波,张肖[9]（2018）在《磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在乙肝肝硬化患者中鉴别小肝癌的价值》一文中研究指出目的探究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)在乙肝肝硬化患者中鉴别小肝癌(SHCC)的价值。方法选取某院住院治疗的符合要求的乙肝肝硬化患者及乙肝肝硬化合并SHCC患者作为研究对象,分别定义为肝硬化组和SHCC组。收集2组患者的一般资料并利用单多因素分析筛选出导致肝硬化合并小肝癌的危险因素。利用ROC曲线分析各指标鉴别乙肝肝硬化合并SHCC的潜在诊断效能。结果本研究共纳入103例患者。其中肝硬化组共67例,SHCC组共36例。SHCC组患者的总胆红素、MRI检查、血清AFP、血清GPC-3等指标显着高于肝硬化组,差异均有统计学意义(P<0.05)。其中MRI检查、血清AFP和血清GPC-3是乙肝肝硬化合并SHCC的影响因素(P<0.05)。受试者的血清GPC-3和血清AFP呈正相关(r=0.222,P<0.05)。血清AFP和血清GPC-3鉴别乙肝肝硬化合并HCC的AUC为0.723和0.884,其敏感度为69.44%和66.67%,特异度为61.19%和100%;二者联合诊断鉴别乙肝肝硬化合并HCC的AUC最高(0.927)。结论 GPC-3在乙肝肝硬化患者中鉴别小肝癌时具有一定的价值,可作为诊断乙肝肝硬化合并小肝癌的指标之一。(本文来源于《现代预防医学》期刊2018年10期）
翟景勤,窦晓倩,王文宇,付洁,王宇光[10]（2018）在《靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖1的DNA适配体筛选》一文中研究指出目的:筛选获得特异性结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)的单链DNA适配体。方法:合成全长81 nt,中间含39个随机序列的单链寡核苷酸(ss DNA)文库,运用指数富集配基系统进化(SELEX)技术筛选获得GPC1适配体;酶联免疫吸附分析法(ELISA)实验确定候选适配体与GPC1蛋白的亲和力,流式细胞术确定候选适配体与2种GPC1高表达细胞系(胰腺癌Panc-1细胞和工具细胞Luc-ZR-75-1~(GPC1))的结合特异性。结果:经过10轮SELEX筛选获得#9适配体,ELISA分析其亲和力为44±0.69 nmol/L,流式细胞术结果表明其与胰腺癌Panc-1细胞和Luc-ZR-75-1~(GPC1)细胞的阳性结合率分别为44.69%和51.44%。结论:筛选获得与GPC1蛋白有较高亲和力、与表达GPC1细胞系特异结合的ss DNA适配体。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年01期）
磷脂酰肌醇蛋白聚糖论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胰腺癌作为恶性程度极高的实体肿瘤,具有发病率逐年升高,预后差,致死率高的特点。胰腺癌易复发和转移,并易对化疗药物产生耐药性。胰腺癌的高发病率和死亡率主要由两方面的临床困境造成,一是缺乏有效的早期检测方法,二是由于对胰腺癌发生发展机理缺乏深入了解而缺乏有效的治疗手段。因此,揭示胰腺癌的发病机制,寻求有效的早期检测方法和治疗策略是治疗胰腺癌的核心任务。本课题主要研究天然多糖对胰腺癌的干预机制以及细胞膜糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖GPC6在胰腺癌中的功能及机制。细胞毒性的化疗一直是胰腺癌治疗的主要手段。目前临床上广泛使用的胰腺癌一线治疗是FOLFIRINOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂等几种化疗药物联合用药方案)和吉西他滨-白蛋白紫杉醇联合用药方案。但胰腺癌对这些化疗药物易产生高耐药性,且化疗药物毒副作用大,将大大降低患者的生活质量。此外,由于胰腺癌特殊的肿瘤微环境特征,将阻碍药物渗透至肿瘤细胞,使其克服化疗药物的毒性,而实现肿瘤持续性增长。因此,胰腺癌新的治疗策略亟待开发。但是到目前为止,无论是靶向治疗还是免疫治疗,这两种癌症治疗的最新举措,都没有在胰腺癌的治疗上取得突破性的积极成果。多糖是构成生命体的重要组成成分具有广泛的生物活性。例如免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、降血糖、抗氧化、抗病毒、神经保护、抗Aβ_(42)聚集以及缺血再灌注损伤保护等作用。此外,相对小分子化合物,大部分多糖几乎没有毒副作用。相比于细胞毒类药物,多糖类药物在临床上可改善患者生存质量,减轻毒副作用。基于此,我们从活血化瘀的中药红花中提取得到红花多糖,对其在胰腺癌中的作用进行深入研究。红花是最古老的作物之一,属于桔梗目、菊科、红花属植物,红花的入药部位是其干燥花。据《本草纲目》、《雷公炮制药性解》和《金匮要略》等书籍记载,红花广泛用于治疗血瘀,痛经和其他女性疾病。此外,红花的水提取物,羟基红花黄色素A(HSYA),被用于治疗心血管疾病,疗效显着。由于该植物的广泛生物活性,越来越多研究正致力于研究红花中有效的活性成分和作用机制。目前据文献统计,已经分离和鉴定了来自红花的种子,根茎和花中超过100种化合物,主要包括类黄酮、生物碱、有机酸和聚乙炔。但是红花中的多糖成分研究较少,尤其在抗肿瘤领域更是鲜有研究。我们从红花中分离出粗多糖HH,对HH进行抗胰腺癌、乳腺癌、脑星形胶质母细胞瘤、肝癌、结肠腺癌、慢性髓系白血病、宫颈癌、恶性黑色素瘤和非小细胞肺癌九种肿瘤的活性筛选,发现HH对胰腺癌BxPC-3细胞生长有良好的抑制活性,抑制率为89.50%。随后,通过进一步分离纯化和结构解析,我们发现粗多糖HH中的主要成分HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性。而该均一多糖对正常胰腺导管上皮细胞和肝细胞几乎没有毒性。克隆形成实验揭示HH1-1可显着抑制胰腺癌细胞形成的克隆数目和克隆大小。细胞周期检测发现,HH1-1处理后的胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞周期会阻滞于S期,细胞周期相关蛋白磷酸化AKT,磷酸化CDK2,Cyclin A_2表达下调,激酶抑制蛋白P21表达上调。Annexin V/PI双染色法、Hoechst 33258染色法和Caspase-3活性检测法的结果显示,HH1-1可诱导胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1凋亡。Bcl-2在HH1-1处理后表达下调;Bax和Cleaved Caspase-3在HH1-1处理后表达量上调。此外,HH1-1还可以抑制胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1的迁移和侵袭。通过HMEC-1细胞管腔形成实验和鸡胚尿囊膜实验发现,HH1-1可在体内和体外显着抑制血管新生。随后,我们通过体内实验,进一步证实了HH1-1的抗胰腺癌作用。通过胰腺癌细胞BxPC-3皮下移植瘤实验,我们发现0.5 mg/kg HH1-1可显着抑制肿瘤的体积和重量,其抑制作用与40 mg/kg阳性药吉西他滨的抑制作用相类似。我们使用人源性肿瘤组织异种移植模型(PDX),来模拟胰腺癌病人肿瘤的血运特点、基质特征和坏死状况等。实验结果显示,HH1-1能够浓度依赖性的抑制PDX肿瘤的体积和重量,高浓度50 mg/kg时其相对抑制率达58.78%。并且,在两项动物实验中,我们发现HH1-1对小鼠的体重和状态没有明显的影响,表明HH1-1具有很好的安全性。针对HH1-1的结构特征,我们对它的靶向性进行了探索。HH1-1作为一种阿拉伯半乳聚糖,可能会与半乳糖凝集素家族成员发生相互作用。我们发现在HH1-1处理BxPC-3和AsPC-1细胞后,Galectin-1、3、7在mRNA水平会发生显着下调。表面等离子共振实验(SPR)结果显示,HH1-1能够和Galectin-3结合,KD=4.158E~(-6)。但HH1-1不与Galectin-1和Galectin-7结合。且HH1-1不能与Galectin-3的配体EGFR结合,却能够抑制Galectin-3和EGFR的结合,从而阻断EGFR下游信号通路。EGFR作为肿瘤增殖、血管生成和肿瘤侵袭转移等过程的关键分子,阻断EGFR下游信号通路可显着抑制肿瘤进展。由于HH1-1可以抑制Galectin-3和EGFR的mRNA水平和蛋白水平,因此我们推测HH1-1可通过影响Galectin-3和EGFR的转录,进而影响两者的表达。通过分析和筛选Galectin-3和EGFR的转录因子,我们发现HH1-1处理胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1后,两者的共同转录因子FOXO3表达量显着上调。通过构建shRNA敲减Galectin-3和EGFR,以及外源性加入Galectin-3蛋白的回补实验,我们进一步在mRNA和蛋白水平研究,发现HH1-1可通过抑制Galectin-3/EGFR/AKT/FOXO3信号通路,发挥抗胰腺癌的活性。通过免疫组化和Western Blot,我们在两种移植瘤模型中验证了HH1-1在体内也是通过这一信号通路发挥作用。综上所述,我们从红花中分离纯化出一种结构明确的均一多糖HH1-1。HH1-1具有良好的抗胰腺癌活性,且无明显毒副作用。HH1-1通过抑制胰腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制迁移和侵袭、抑制血管新生,发挥抗胰腺癌活性。靶向性研究发现HH1-1可结合Galectin-3。机制研究揭示,HH1-1结合Galectin-3,从而抑制Galectin-3与EGFR的结合,抑制EGFR下游信号通路:阻滞AKT的磷酸化水平,进一步导致FOXO3的磷酸化水平降低,FOXO3的表达量上升,转录因子FOXO3进入细胞核,影响关键分子的转录,最终呈现胰腺癌抑制表型。此外,FOXO3是Galectin-3与EGFR的转录负调控因子,当FOXO3表达量上升后,Galectin-3与EGFR的转录被抑制,最终导致Galectin-3与EGFR表达下调,进一步增加其抑制胰腺癌的作用。上述研究表明多糖HH1-1通过与Galectin-3结合,干预EGFR信号通路发挥抗胰腺癌活性。而在胰腺癌临床研究中的另一困境则揭露出,目前针对胰腺癌尚无有效的诊断标志物和药物靶点。因此,我们关注细胞膜表面的蛋白聚糖在胰腺癌发生发展中的功能和机制。前期已有研究表明糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在多种肿瘤中具有重要的生物学作用,我们将聚焦糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族在胰腺癌发生发展过程中发挥什么生物活性呢?为了回答这一问题,我们首先利用5对胰腺癌病人样本的mRNA芯片,分析发现GPC6在胰腺癌肿瘤中表达量显着高于癌旁组织。随后我们采用111对胰腺癌病人样本的RT-qPCR和免疫组化进行验证,发现GPC6在79例胰腺癌患者肿瘤组织中高表达,提示GPC6有可能在胰腺癌中担任重要角色并可能成为胰腺癌的分子标志物或潜在药物作用靶点。将GPC6表达水平与临床样本信息整合,我们发现GPC6在恶性程度高的T3期表达显着升高,并且GPC6表达量高的患者存在总生存期短的特征。随后我们对GPC6在胰腺癌中的功能进行深入研究。首先通过构建GPC6敲减或过表达的胰腺癌稳转细胞株,我们发现GPC6可显着促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990增殖,敲减GPC6则抑制胰腺癌细胞生长。此外,显微镜下观察可发现,过表达GPC6会导致胰腺癌细胞形态发生改变,使其具有间质细胞形态特征。同时,划痕愈合实验和迁移侵袭实验证实,GPC6可促进胰腺癌细胞PANC-1、BxPC-3和SW1990迁移和侵袭,而敲减GPC6则会抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭。体内实验运用BxPC-3和PANC-1细胞皮下移植瘤实验证实,敲减GPC6会显着抑制肿瘤的生长,导致肿瘤体积减小,重量减轻;反之,过表达GPC6则会显着促进皮下移植瘤的生长。重要的是,在胰腺癌PDX模型中敲减GPC6也能显着抑制肿瘤生长。通过尾静脉注射过表达GPC6的胰腺癌细胞SW1990及其对照细胞,发现过表达GPC6能显着促进胰腺癌细胞在肝脏和肺部肿瘤的形成。有趣的是,我们对皮下移植瘤的肿瘤组织进行HE染色和天狼猩红染色后发现,过表达GPC6可显着促进胰腺癌肿瘤组织的纤维化,而敲减GPC6后肿瘤组织纤维化程度降低。对转移性肝脏和肺部肿瘤组织进行天狼猩红染色后也可发现,过表达GPC6会显着促进肝脏组织纤维化,并轻微促进肺部肿瘤组织纤维化。此外,我们通过对纤维化相关蛋白的检测,发现敲减GPC6后,细胞胶原蛋白及其相关酶表达量均显着降低;转化生长因子家族蛋白TGFβI和TGFβ2表达量也显着降低;肌动蛋白和细胞骨架蛋白ACTN2,ABLIM1,LIMA1和ACTN4表达量均显着降低。基于此,我们推测,GPC6在促进肿瘤增殖、迁移侵袭和纤维化进程中担任关键角色。进一步的机制研究,我们发现GPC6可影响胰腺癌细胞PANC-1和BxPC-3EMT相关标志物的表达。敲减GPC6后,与细胞粘附和紧密连接相关的蛋白,如E-Cadherin、Claudin-1、ZO-1表达上调;反之,间质表型相关分子如N-Cadherin、Vimentin、?-Catenin、TCF8/ZEB1、Slug和Snail表达量则降低。因此,我们推测,GPC6可能通过影响EMT进程来影响胰腺癌肿瘤进展。上述研究表明,多糖HH1-1可能成为抗胰腺癌的候选药物,GPC6可能是抗胰腺癌的药物靶点。这些研究为我们理解胰腺癌的发生发展机理和基于多糖的创新药物研究奠定了坚实基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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