导读:本文包含了定性内胚层论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:间充质干细胞,限定性内胚层,诱导分化方案
定性内胚层论文文献综述
李静,杨岩磊,赵春华[1]（2019）在《人脂肪间充质干细胞向限定性内胚层细胞分化体系的优化》一文中研究指出目的探讨activin A、WNT通路激活剂、BMP4以及bFGF信号对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向限定性内胚层(DE)分化的影响。方法基于胚胎干细胞(ESCs)或多潜能干细胞(iPS)向DE分化的诱导体系,建立并优化hADSCs向DE细胞分化的诱导体系。在hADSCs向DE诱导体系中,分别比较不同浓度的activin A、Chir99021替代Wnt3a、添加/去除bFGF以及BMP4等对分化效率的影响。用RT-qPCR检测诱导前后限定性内胚层标志基因FOXA2和SOX17的表达;Western blot检测FOXA2和SOX17蛋白水平;用免疫荧光检测FOXA2和SOX17的表达,鉴定DE分化。结果与ESCs或iPS向DE分化的诱导体系相比,低浓度的activin A,GSK3抑制剂Chir99021替代Wnt3a,去除BMP信号和bFGF信号的诱导方案可以明显促进hADSCs向DE分化的影响(P<0.01)。结论 hADSCs向DE分化与hESC/hiPS相比,需要激活不同信号通路,因此最适诱导体系不同。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年07期）
杜聪,邱东波,蔡楠,王亚彬,奉源[2]（2014）在《糖原合成酶激酶3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞》一文中研究指出目的探讨糖原合成酶激酶(GSK)3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞的可行性。方法将人胚胎干细胞H1细胞置于无滋养层培养基(Essential 8)培养。采用免疫荧光法检测人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。于细胞中加入0.33、1.00、3.00、9.00、27.00μmol/L浓度的CHIR99021培养3 d,以不加CHIR99021的细胞作对照。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞多能性相关基因OCT4、SOX2和限定性内胚层相关基因GATA4、SOX17的表达水平。实验数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果免疫荧光法能够检测到人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。经0.33、1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的人胚胎干细胞生长状态良好,CHIR99021浓度较高时细胞生长状态较差或死亡。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞多能性相关基因OCT4表达均下调(LSD-t=-40.54,-59.12;P<0.05),SOX2表达亦明显下调(LSD-t=-20.46,-3.87;P<0.05)。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞限定性内胚层相关基因GATA4表达上调(LSD-t=137.21,65.29;P<0.05),SOX17表达亦明显上调(LSD-t=50.93,6.56;P<0.05)。结论人胚胎干细胞应用无滋养层培养仍然保持良好的干细胞生物学特性。CHIR99021可以高效诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化。(本文来源于《中华肝脏外科手术学电子杂志》期刊2014年03期）
苏家荪[3]（2014）在《DMD病人特异性iPSCs诱导及hESCs向限定性内胚层细胞分化的研究》一文中研究指出胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)和诱导多潜能性干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)为基因修饰以及基因治疗提供了一种新型的研究工具。将基因修正后的人类多潜能性干细胞细胞经过自体移植,可实现某些遗传疾病治疗的目的。我室一直致力于杜氏肌营养不良(DMD)及血友病A的基因治疗研究。作为基因治疗的靶细胞,解决iPS细胞的来源是进行后续研究得以顺利开展的基础。本研究第一章内容拟将病人来源的尿液细胞诱导为iPS细胞,为后续DMD病人的自体化基因治疗提供合适的细胞来源。第二章研究内容拟利用我室之前建立的定点整合hFⅧ的人胚胎干细胞细胞株ET5作为研究对象,初步建立hESCs向限定性内胚层细胞(Definitive endoderm cells, DECs)分化的技术平台,从而为后续血友病A的治疗中肝细胞的来源提供一种解决思路。第一章：DMD病人尿液细胞向iPSCs的诱导与初步鉴定。目的：利用DMD病人尿液来源的细胞获得病人特异性iPSCs。方法：1.收集DMD基因50号外显子缺失的DMD病人尿液,分离并培养尿液细胞中肾小管上皮细胞。2.利用逆转录病毒将Oct4,Sox2, c-Myc和Klf4四种转录因子导入尿液细胞,经过20天左右的诱导,获得形态与hESCs细胞系高度相似的细胞克隆。3.对所得的细胞克隆进行多潜能性干细胞的表面标志物、碱性磷酸酶、细胞核型及体外随机分化的鉴定。结果：1.经上述方法诱导可获得尿液细胞来源的iPSCs样细胞系,MLPA检测诱导后iPSCs基因组DMD基因50号外显子缺失；2.诱导iPSCs细胞碱性磷酸酶染色阳性,且干细胞表面标志物表达与hESCs一致；细胞染色体核型显示无染色体水平的畸变；体外EB形成检测诱导的iPSCs可分化出表达内、中胚层特异标志物的细胞。结论：建立了DMD基因50号外显子缺失的iPS细胞系。第二章：hESCs向限定性内胚层细胞的诱导分化。目的：初步建立hESCs定向限定性内胚层细胞诱导分化以及鉴定的技术平台。方法：1.联合BMP4、Activin A、chir99021诱导ET5向限定性内胚层细胞分化；2.分化过程的第一天和第五天抽提分化细胞的RNA, RT-PCR检测内胚层标志基因Sox17, FoxA2的表达情况；3.分化五天后流式分析DE细胞表面特异标志物c-kit(CD117)、CXCR4(CD184)的表达。结果：1.联合高浓度Activin A、BMP4、chir99021对ET5诱导5天,分化第二天即可在ET5克隆中观察到上皮样细胞的出现。2.分别抽提分化过程当中第一天和第五天的细胞的RNA, RT-PCR分析可检测到Sox17, FoxA2的表达。3.诱导五天后,流式分析DE细胞表面共表达c-kit、CXCR4阳性率达到39.01%。结论：初步建立hESCs向限定性内胚层细胞分化的方法。(本文来源于《中南大学》期刊2014-06-01）
李进,贺菁菁,林戈,卢光琇[4]（2014）在《视黄酸促进限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞分化》一文中研究指出研究视黄酸(RA)在限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞诱导过程中的最佳作用方式。在无饲养层培养体系下联合多因子分阶段诱导经历10天时间获得胰腺前体细胞。获得的细胞不仅表达胰腺前体细胞的标记pdx1,但是也同时表达肝脏前体细胞的标记afp。有研究表明在胰腺特化过程中RA能起到抑制afp的作用,因此在不同的时间点添加RA并持续不同的作用时间来调节内胚层细胞向肝胰分化的命运。收集d7到d10的细胞用免疫组化和RT-PCR检测pdx1和afp的表达情况。结果显示RA从d3开始持续作用到d10可以获得更高的pdx1阳性细胞同时能有效的抑制afp的表达,并且在d9可以获得最高比率的pdx1阳性细胞,提示RA持续作用促进限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞分化。(本文来源于《激光生物学报》期刊2014年02期）
李进,贺菁菁,林戈,卢光琇[5]（2013）在《不同人胚胎干细胞系向限定性内胚层分化能力存在差异》一文中研究指出研究不同的人胚胎干细胞系向限定性内胚层细胞分化能力是否存在差异,并尝试寻找造成差异的原因。基于已建立的人胚胎干细胞库资源和限定性内胚层定向诱导分化体系,流式检测诱导分化3天后10株细胞系Sox17的阳性比率发现其值在60%到80%之间波动,而SSEA4的阳性比率在人胚胎干细胞系中不存在明显差异。基因表达谱结果显示像Sox17,Foxa2等内胚层标记在这些细胞之间不存在显着的差异,而像MEG3和SNORD114-3在差异细胞系之间和同株细胞早晚期代数之间存在表达差异。结果提示不同的人胚胎干细胞系向限定性内胚层细胞分化能力存在着差异,推测这些差异可能与MEG3和SNORD114-3的差异表达相关。(本文来源于《激光生物学报》期刊2013年06期）
孙博,孙莹璞[6]（2013）在《人胚胎干细胞向肝脏样细胞诱导分化中限定性内胚层分化的研究进展》一文中研究指出胚胎干细胞(ESC)是来源于囊胚内细胞团的一种高度未分化细胞,具有无限增殖和发育全能性等特点,可自发分化为多种细胞类型,如神经细胞、肝脏细胞、胰腺细胞和心肌细胞等。在之前的诱导分化方案中,主要通过ESC形成拟胚体后,再进一步进行各种细胞的诱导分化,诱导分化效率较低。目前的研究表明,直接添加诱导因子能够使ESC直接分化成限定性内胚层,并在此基础上进一步诱导分化形成肝脏细胞,从而显着提高向肝脏细胞的诱导分化效率。通过鉴定限定性内胚层的表面标记因子SOX17和FOX2来评定限定性内胚层的诱导分化效率。但是,何种诱导因子的组合诱导分化效率最高并最接近人胚胎正常发育过程并不十分明确。(本文来源于《国际生殖健康/计划生育杂志》期刊2013年01期）
孙懿,周静,卢光琇,林戈[7]（2012）在《SMAD2介导的Activin A信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用》一文中研究指出【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2(p-SMAD2)表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2后48h时才检测到Brachyury强表达,而单纯Activin A处理组24h就检测到强表达;Sox17的表达始终较单纯Activin A处理组明显降低,因此,干扰SMAD2直接抑制了Activin A的诱导作用。而过表达SMAD2,Brachyury和Sox17的表达水平较单纯Activin A处理组明显增加,促进了限定性内胚层的发生;并且在Activin A诱导过程中,p-SMAD2的表达水平明显提高,而SMAD2的表达没有明显改变。【结论】SMAD2作为关键因子,介导了Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化,并转录调控Brachyury和Sox17的表达;SMAD2的磷酸化,激活并介导了Activin A诱导的信号转导通路。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2012年08期）
孙懿,周静,林戈,卢光琇[8]（2012）在《Activin A特异性对人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化的促进作用》一文中研究指出【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞(hESCs)向限定性内胚层(DE)诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96,120h的细胞,用实时荧光定量RT-PCR检测原条标记Gsc和Mixl1、中内胚层共同前体标记Brachyury、内胚层标记Foxa2和Sox17、中胚层标记Flk1、外胚层基因Pax6、多能性相关基因Oct4与Nanog表达水平的变化,用细胞免疫荧光检测Brachyury和Sox17蛋白表达水平的变化。【结果】在人饲养层(HEF)培养体系上,高浓度Activin A能更快地促进中内胚层基因的表达并提高其表达水平;Brachyury和Sox17蛋白的细胞免疫荧光检测表明,Activin A诱导12和48h就可检测二者的表达明显增加,且二者的表达水平分别在诱导48和96h时达到高峰;hESCs高效分化为限定性内胚层细胞,DE细胞分化率为(81.7±5.4)%,并且体外的内胚层分化过程遵循从原条开始、经过中内胚层共同前体阶段、再到内胚层的发育过程,与体内发育规律相似。【结论】Activin A能特异性地诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层分化,转录调控Brachyury和Sox17蛋白的表达。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2012年06期）
周静,李进,林戈,卢光琇[9]（2010）在《Wnt3a和Activin A共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化》一文中研究指出【目的】研究Wnt3a和Activin A在限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎干细胞中,加入25 ng/mL Wnt3a和100 ng/mL Activin A,共同作用不同时间(1~4 d),收集不同作用时间点(0,1,2,3,4,5 d)细胞,对原条、内中胚层前体标记Brachyury及限定性内胚层标记Sox17分别进行免疫荧光染色,统计阳性细胞总数,计算阳性细胞率。以看家基因β-actin作为对照,采用RT-PCR方法对原肠作用基因(Goosecoid(GSC)、Mixl1)及叁胚层发育相关基因(内胚层基因Sox17、Foxa2,内中胚层前体基因Brachyury,中胚层基因Flk-1,外胚层基因Pax6,胚外内胚层基因Sox7、CDX2)的表达进行检测。【结果】Wnt3a与Activin A共同作用1~4 d,均能获得限定性内胚层细胞,其中二者共同作用1 d分别能获得(78.9±7.3)%Brachyury阳性细胞和(85.2±3.8)%的Sox17阳性细胞。RT-PCR结果显示,在Wnt3a与Activin A共同作用下,原肠作用基因及叁胚层发育相关基因表达的时间有差异。【结论】Wnt3a和Activin A共同作用1 d,是有效促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的最佳作用时间窗。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2010年04期）
定性内胚层论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨糖原合成酶激酶(GSK)3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞的可行性。方法将人胚胎干细胞H1细胞置于无滋养层培养基(Essential 8)培养。采用免疫荧光法检测人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。于细胞中加入0.33、1.00、3.00、9.00、27.00μmol/L浓度的CHIR99021培养3 d,以不加CHIR99021的细胞作对照。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞多能性相关基因OCT4、SOX2和限定性内胚层相关基因GATA4、SOX17的表达水平。实验数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果免疫荧光法能够检测到人胚胎干细胞多能性标志物Oct4、Nanog的表达。经0.33、1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的人胚胎干细胞生长状态良好,CHIR99021浓度较高时细胞生长状态较差或死亡。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞多能性相关基因OCT4表达均下调(LSD-t=-40.54,-59.12;P<0.05),SOX2表达亦明显下调(LSD-t=-20.46,-3.87;P<0.05)。经1.00、3.00μmol/L CHIR99021处理后的细胞限定性内胚层相关基因GATA4表达上调(LSD-t=137.21,65.29;P<0.05),SOX17表达亦明显上调(LSD-t=50.93,6.56;P<0.05)。结论人胚胎干细胞应用无滋养层培养仍然保持良好的干细胞生物学特性。CHIR99021可以高效诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
定性内胚层论文参考文献
[1].李静,杨岩磊,赵春华.人脂肪间充质干细胞向限定性内胚层细胞分化体系的优化[J].基础医学与临床.2019
[2].杜聪,邱东波,蔡楠,王亚彬,奉源.糖原合成酶激酶3β抑制剂CHIR99021诱导人胚胎干细胞分化为限定性内胚层细胞[J].中华肝脏外科手术学电子杂志.2014
[3].苏家荪.DMD病人特异性iPSCs诱导及hESCs向限定性内胚层细胞分化的研究[D].中南大学.2014
[4].李进,贺菁菁,林戈,卢光琇.视黄酸促进限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞分化[J].激光生物学报.2014
[5].李进,贺菁菁,林戈,卢光琇.不同人胚胎干细胞系向限定性内胚层分化能力存在差异[J].激光生物学报.2013
[6].孙博,孙莹璞.人胚胎干细胞向肝脏样细胞诱导分化中限定性内胚层分化的研究进展[J].国际生殖健康/计划生育杂志.2013
[7].孙懿,周静,卢光琇,林戈.SMAD2介导的ActivinA信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2012
[8].孙懿,周静,林戈,卢光琇.ActivinA特异性对人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化的促进作用[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2012
[9].周静,李进,林戈,卢光琇.Wnt3a和ActivinA共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2010