导读:本文包含了糖基化酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶,DNA甲基化,DNA主动去甲基化,表观遗传学
糖基化酶论文文献综述
葛长宇,徐鹏,宫榭阳,匡野[1]（2019）在《胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶的研究现状及进展》一文中研究指出胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶(thymine DNA glycosylase,TDG)属于单功能尿嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶(uracil DNA glycosidase,UDG)超家族中的成员,在基因组稳定和表观遗传调控中具有双重作用。TDG参与调控DNA甲基化(DNA methylation)和去甲基化(DNA demethylation)。DNA甲基化主要为胞嘧啶(cytosine,C)甲基化,是指胞嘧啶以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl Methionine,SAM)为甲基供体,在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的作用下,在胞嘧啶第5位碳原子上加上一个甲基,形成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)。5mC广泛存在于哺乳动物基因组中,并在基因组稳定性维持、组织特异性基因沉默、逆转录转座子沉默等诸多生物学过程中发挥重要作用。DNA去甲基化是指5mC还原为C,这个过程也是由DNMTs完成的。DNA去甲基化包括被动去甲基化和主动去甲基化2种途径。被动DNA去甲基化是指在DNA复制过程中,新合成的子链DNA未能维持甲基化状态,导致DNA甲基化的被动稀释(passive dilution);DNA主动去甲基化过程不涉及DNA复制,是指通过TDG等酶的作用去除5mC和5-羧基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)的氧化产物,即5-甲羟基胞嘧啶(5-formylcytosine,5fC)和5-羧基胞嘧啶(5-carboxylcytosine,5caC)。TDG还通过碱基切除修复途径(base excision repair,BER)切割糖与靶碱之间的N-糖苷键,在纠正错配及损伤的DNA碱基对(base pair,bp)中起重要作用。最近的研究表明TDG还在转录调控、胚胎发育及肿瘤治疗等领域发挥重要作用。本文总结了近年来TDG的研究现状及进展,为进一步的深入研究提供理论支持。(本文来源于《中华全科医学》期刊2019年02期）
吴玉姝,吴敏,刘敏[2]（2018）在《连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性》一文中研究指出目的:灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)活性有利于生物医学研究和疾病预后.这里,构建一种连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测UDG活性.方法:在本策略中,两条短寡核苷酸链分别与发夹探针环部序列的一半杂交,形成含缺口的DNA复合物.在UDG作用下,发夹探针环部的单个U碱基被移除,产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点.AP位点能抑制缺口处的连接酶反应,使位于发夹探针末端的立足点和链迁移区域仍彼此邻近,从而引发杂交链式反应(HCR),产生大量G四倍体(G4)结构.最后,G4与N甲基卟啉IX(NMM)结合,产生增强的荧光信号.结果:本策略检测限低至0.000 20U/mL,并能区分UDG与其它DNA糖基化酶.结论:本策略为生物医学研究和疾病预后提供了一种有潜力的工具用于灵敏定量检测UDG活性.(本文来源于《聊城大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
张苹苹[3]（2018）在《基于碱基切除修复的荧光生物传感策略用于尿嘧啶-DNA糖基化酶活性检测》一文中研究指出尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)对DNA中尿嘧啶特异性识别和移除,属于尿嘧啶损伤修复蛋白,它通过识别DNA中的尿嘧啶并切断尿嘧啶与脱氧核糖之间的N-糖苷键来移除尿嘧啶(U)碱基,产生无碱基或无嘧啶(AP)位点,启动碱基切除修复路径,然后结合其他蛋白酶完成整个DNA损伤修复过程。它在碱基切除修复路径中具有重要的作用,可维持基因组完整性。鉴于以上分析,本文利用碱基切除修复的荧光生物传感方法对UDG活性进行灵敏、准确检测。本文共分为叁章:第一章为绪论,概述了碱基切除的产生原因和机理、UDG的结构和功能、研究意义以及分析归纳了目前关于UDG活性的传统检测方法和新型生物传感检测方法,并指出检测方法中存在的问题。第二章构建了一种基于自引物自模板循环滚环扩增(Self-RRCA)策略用于UDG活性的灵敏和准确检测。首先,设计了含有一个U的不成熟的模板链,它与引物链部分互补,形成一个前体扩增子识别探针。经UDG和内切酶Ⅳ(endoⅣ)作用后,前体扩增子探针发生构象转变,进而形成一个RCA扩增子。然后RCA扩增子被用于触发RCA反应,经Nt.BbvCI切刻酶作用,新的扩增子被释放来触发下一轮RCA,这就构成了一个Self-RRCA。在这个方法中,设计的不成熟模板与引物在连接部分不完全互补,这可有效地避免非特异性连接,最终有效地避免非特异性扩增。相比线性RCA,Self-RRCA展现了更高的扩增效率。由于以上优势,本方法实现了 UDG的灵敏和准确检测,检测限低至5><10-5U mL-1。而且,这个方法用于筛选UDG抑制剂和分析HeLa细胞裂解液中的UDG活性。这个方法将会提供一种有前景的分析工具用于进一步的UDG生物研究和临床诊断。第叁章构建了一种基于内源性酶触发的DNA walker用于胞内检测UDG活性。首先,金纳米颗粒上修饰有3'端标记荧光团FAM的且含有U碱基的底物链(SR)和DNAwalker链(DW)。由于荧光共振能量转移,金纳米颗粒将SR上荧光淬灭掉。其次,DW上有一部分与SR碱基互补,在目标物UDG作用下,尿嘧啶碱基被移除,产生AP位点。紧接着在AP内切酶(APE1)作用下,将AP位点切割,底物链被切断后荧光恢复。随后,DW继续与下一条SR杂交,产生增强的荧光信号。此策略中,首先,DNA walker的运行是由胞内内源性酶触发的,无需外加蛋白酶或其他任何物质,保证了 DNAwalker在胞内的正常运行。其次,由于金纳米颗粒上DNA局部浓度增大,可进一步促进酶切反应和底物链的卸载,这有利于DNA walker的快速反应和荧光释放,最后,由于DNA负载到金纳米颗粒上可有效避免胞内核酸酶对DNA链的降解。本文提出的这一策略将为胞内检测其他DNA修复酶提供一个重要的工具。(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-31）
任明[4]（2018）在《细胞内尿嘧啶-DNA糖基化酶的超灵敏检测研究》一文中研究指出DNA碱基结构特性可能被多种因素破坏,如果不及时修复,将会导致机体基因组的不稳定性而诱发癌变。对此,生物机体有相应的修复措施,如碱基切除修复路径(BER),这是一种高度保守的DNA切割活动,该路径由DNA糖基化酶来启动。尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是负责修复由尿嘧啶诱导的DNA损伤和维持基因组完整性的重要碱基切除修复酶,并且,UDG的异常表达与各种癌症有关。因此,精准检测UDG活性对于生物医学研究和临床诊断至关重要。目前,核酸的等温扩增技术在成为了一种有前途的超灵敏检测方法,该方法操作简便,可应用于超灵敏检测多种目标物,如蛋白质,细胞,小分子和离子。在这里,我们开发了一种超灵敏检测UDG活性的荧光方法,该方法包括(1)UDG驱动尿嘧啶切除修复,(2)切口酶介导的恒温指数扩增,(3)核糖核酸酶H(RNase H)诱导水解信号探针,产生荧光信号。UDG的存在使得能够从U-A碱基对中的U被去除,并产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点。核酸内切酶IV(Endo IV)随后裂解AP位点,破坏DNA底物。被切割的DNA底物同时起到了引物和模板的作用,启动了恒温指数扩增,产生大量的触发器。所产生的触发器可以选择性地与信号探针杂交,形成RNA-DNA异质双链体,随后加入的RNase H可以水解RNA-DNA异质双链体中的RNA,产生荧光信号。该检测方法具有超高的灵敏度,可以测量单个细胞水平上的UDG活性。此外,该方法还可应用于酶活动力学参数的测定和抑制剂的筛选,这为DNA修复酶的相关生物医学研究和临床诊断提供了强有力的工具。(本文来源于《山东师范大学》期刊2018-05-25）
刘明昊[5]（2018）在《肺癌细胞中多种糖基化酶的同时分析》一文中研究指出生物体内每天自发产生大量DNA损伤,从而诱发基因突变并具有潜在致癌性。但是,生物体内存在多种DNA修复通路,碱基切除修复为其中最普遍形式。DNA糖基化酶参与碱基切除步骤,所有哺乳动物均分泌多种DNA糖基化酶以维持基因组稳定性。然而,多种DNA糖基化酶的同时检测始终是一个巨大的挑战。在本论文中,我们开发了一种基于DNA糖基化酶切割分子信标的单分子检测方法用于同时检测人类8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶1(hOGG1)和人类N-甲基嘌呤DNA糖基化酶(hAAG)。我们设计了一种Cy3标记的修饰有8-羟基鸟嘌呤(8-oxoG)的分子信标用于检测hOGG1和一种Cy5标记的修饰有脱氧次黄嘌呤的分子信标用于检测hAAG。hOGG1能够催化移除8-羟基鸟嘌呤/胞嘧啶碱基对中的8-羟基鸟嘌呤从而形成一个无嘌呤/无嘧啶(AP)位点,hAAG能够催化移除脱氧次黄嘌呤/胸腺嘧啶碱基对中的8-oxoG从而形成一个AP位点。在无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶(APE1)的协助作用下,AP位点裂解导致分子信标裂解,从而Cy3指示hOGG1的存在,Cy5指示hAAG的存在。Cy3和Cy5信号均能被以全内反射荧光显微镜为基础的单分子检测简单量化。该方法能够同时检测多种DNA糖基化酶,且能在不需要任何目标扩增步骤的情况下对hOGG1检测限为2.23×10~(-6)U/μL,对hAAG检测限为8.69×10~(-7)U/μL。更重要的是,该方法可应用于筛选酶抑制剂,同时检测肺癌细胞中的hOGG1和hAAG,在早期临床诊断推广应用方面具有巨大潜力。(本文来源于《山东师范大学》期刊2018-05-25）
葛蒙蒙[6]（2018）在《利用CRISPR/Cas9技术构建CHO的糖基化酶CMAH和GGTA1基因突变细胞株》一文中研究指出研究背景和目的治疗性重组蛋白的生产是生物制药中重要的一部分,而重组糖蛋白用于治疗许多疾病。通常情况下,哺乳动物表达系统是生物制药的首选体系。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞是最常用的哺乳动物细胞系,用其作为宿主,能产生接近人源糖蛋白糖基化的治疗性重组糖蛋白。人源细胞和CHO细胞糖基化最大的不同就是CHO细胞有两个糖基化酶,α-1,3-半乳糖转移酶(α-1,3-Galactosyltransferase,GGTA1)和胞苷酸N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMP-N-acetylneuraminic acid hydroxylase,CMAH),而这两个酶在人体中已经缺失。在用CHO细胞生产治疗性糖蛋白时,GGTA1产生的α-1,3-半乳糖(α-1,3-galactose,α-gal)和CMAH产生的N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminic acid,Neu5Gc)会引起人体的免疫反应。本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑技术对CHO细胞进行遗传改造,构建了CMAH和GGTA1基因突变的CHO细胞株,希望改进治疗性重组糖蛋白的治疗安全性。方法1.生物信息学分析:在NCBI上查找中国仓鼠的CMAH和GGTA1基因序列,确定CMAH的CDS8和GGTA1的CDS9为目标序列,选择在线软件ZIFIT的CRISPR/Cas Nucleases,设计出CMAH和GGTA1的sg RNA。根据sg RNA序列位置设计Reporter序列。2.构建载体:将合成的CMAH-sg RNA和GGTA1-sg RNA分别和p GL3-U6质粒进行酶切连接,CMAH-Reporter和GGTA1-Reporter分别和pm Cherry-EGFP质粒进行酶切连接,然后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒DNA,酶切后进行琼脂糖电泳鉴定。3.细胞转染:p GL3-U6-CMAH-sg RNA、pm Cherry-EGFP-CMAH-Reporter、Cas9和p GL3-U6-GGTA1-sg RNA、pm Cherry-EGFP-GGTA1-Reporter、Cas9用lip3000分别共转染HEK293T细胞,验证sg RNA的切割效率。选择切割效率较高的p GL3-U6-CMAH-sg RNA转染目的细胞CHO-S。再选择切割效率较高的p GL3-U6-GGTA1-sg RNA转染CMAH基因突变的CHO-S细胞。4.单细胞克隆筛选:通过流式细胞分选仪分选得到6株CHO-S单克隆细胞,选取CMAH基因突变的CHO-S单克隆细胞进一步突变GGTA1基因,经流式分选获得6株CHO-S单克隆细胞,并扩大培养。5.突变细胞株基因测序分析:在靶序列两端设计PCR引物,提取CHO-S单克隆细胞基因组DNA,PCR扩增后进行sanger测序。6.突变细胞株m RNA表达检测:提取目的细胞RNA并反转录成c DNA,设计CMAH和GGTA1基因的Q-PCR引物,检测其基因m RNA的表达量。7.目的基因表达:将含人促红细胞生长素(Erythropoietin,EPO)的载体p IRES-neo-EPO转染到CHO细胞突变株,western blot检测EPO的表达能力。结果1.应用CRISPR/Cas9技术成功构建了CMAH基因的切割载体p GL3-U6-CMAH-sg RNA和报告载体pm Cherry-EGFP-CMAH-Reporter。2.应用CRISPR/Cas9技术成功构建了GGTA1基因的切割载体p GL3-U6-GGTA1-sg RNA和报告载体pm Cherry-EGFP-GGTA1-Reporter。3.通过流式分选技术获得CMAH和GGTA1基因突变的单克隆CHO-S细胞。4.突变株细胞1-5均在CMAH基因99546bp位置缺失一个碱基C,在GGTA1基因68384-68385 bp之间插入一个碱基T。5.与野生型CHO-S细胞相比,突变株细胞1-5的CMAH和GGTA1基因m RNA的表达量明显降低。6.与野生型CHO-S细胞相比,突变株细胞1-5具有更强的增殖能力,且能够表达EPO蛋白。结论1.应用CRISPR/Cas9技术成功构建了CMAH和GGTA1基因突变的CHO-S细胞亚系1-5。2.突变株细胞1-5在增殖方面与野生型CHO-S存在异质性。3.突变株细胞1-5能够表达目的糖蛋白。(本文来源于《郑州大学》期刊2018-05-01）
李梓彰[7]（2018）在《小麦的5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶沉默子转化和HD2基因家族鉴定》一文中研究指出表观遗传修饰(Epigenetic modification)是生物体生长发育过程中调控基因表达的重要手段,甲基化和乙酰化是其中最重要的两种修饰方式,参与生物体的许多调控过程。小麦是世界上重要的粮食作物之一,其基因组庞大而复杂,目前其表观遗传学方面的研究还不多。5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶(DME)是植物体内一种重要的去甲基化双功能酶,参与植物体内许多重要的生物过程。HD2基因家族是植物体内特有的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)亚家族,参与植物体多个器官组织的生长发育过程,同时在植物非生物胁迫响应中具有重要作用。本研究通过构建pUbi-DMEhp沉默质粒,将其转化得到转基因小麦植株,以沉默小DME基因的表达,为进一步研究小麦中DNA甲基化/去甲基化作用奠定一定的基础。通过生物信息学方法鉴定小麦HD2基因家族所有成员,并对其基本生物学特性和调控网络等进行了分析,同时利用qRT-PCR方法对其在小麦不同生长发育时期热胁迫下的表达模式进行了分析;建过表达载体的构建,为进一步研究小麦HD2基因的作用以及利用其改良小麦品质提供重要基础。本研究获得如下结果:1.以pHMW-DMEhp质粒和pGEM-Ubi-GFP-nos为基础,通过一步克隆法构建质粒,构建得到广谱表达的DME基因发夹结构沉默载体(pUbi-DMEhp)。2.将pUbi-DMEhp载体转化进入小麦未成熟胚中,经培养得到转基因小麦T_0代植株,PCR检测得到5株阳性植株。继续种植得到T_1代,PCR检测得到35株阳性植株。3.利用HMMER和BLAST等生物信息学方法,鉴定得到12个小麦HD2基因,并对其等电点、亚细胞定位和蛋白质相对分子质量等信息进行了预测。根据其蛋白质C端是否具有锌指结构将其分为Group 1和Group 2,并结合其染色体位置信息对其命名。4.利用WheatExp网站,分析了小麦HD2基因在不同组织不同时期的表达量,根据结果取log 2值绘制热图。利用NCBI-SRA数据库中的RNA-seq数据,分析得到小麦HD2基因在热胁迫、干旱胁迫以及热胁迫加干旱胁迫下的表达模式。5.设计特异性引物,分别选取出芽3天和7天、分蘖、春化、起身、拔节、挑旗、抽穗、开花、灌浆早期、灌浆晚期和成熟期十二个时期的小麦植株,进行35℃/1h、42℃/1h处理。然后取其叶片进行qRT-PCR实验。结果发现,大多数小麦HD2基因在在挑旗期和抽穗期热胁迫下表达量明显上升,表明小麦HD2基因可能在小麦生长发育的挑旗期和抽穗期对热胁迫响应具有重要作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
张小芳[8]（2018）在《基于G-四链体和酶促放大策略构建生物传感器用于DNA糖基化酶的检测》一文中研究指出作为一种重要的DNA修复酶,尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)在保持生物体基因完整性中起着至关重要的作用。它对尿嘧啶碱基突变的修复过程有着重要影响,而且UDG与淋巴瘤,布卢姆综合征,化疗耐药性等一些疾病密切相关。因此,UDG活性的监测对于碱基切除修复(BER)机制的研究和临床诊断至关重要。作为一种安全、简便、灵敏的生物传感器,DNA荧光传感器在生化分析领域得到了广泛的应用。此外,由于超灵敏的特性,共振瑞利散射(RRS)技术也逐渐地被应用于构建DNA传感器以实现生化分析。因此,本文分别基于G-四链体放大策略和核酸外切酶Ⅲ(Exo Ⅲ)辅助的放大手段设计了两种DNA荧光生物传感器用于活性UDG的检测。此外,由于G-纳米线能引起RRS信号的明显增强,本文基于G-纳米线结构构建了一个Exo Ⅲ辅助的RRS生物传感器用于活性UDG检测。研究的主要内容如下:1.桥链杂交诱导的分裂的G-四链体荧光传感器用于检测活性尿嘧啶DNA糖基化酶通过连接桥杂交诱导形成分裂的G-四链体(SQ),实现了一个用于活性UDG检测的DNA生物传感器的构建。成功地筛选出了信噪比较好的分裂的G-四链体序列(SQS)。在这项工作中,UDG能够识别发卡DNA(HP)茎部的尿嘧啶碱基,并将尿嘧啶碱基移除。然后,低熔解温度的HP与设计好的SQS杂交,形成具有SQ的叁通道DNA结构。随着硫磺素T的加入,形成大量G-四链体/硫黄素T的复合物,系统荧光强度显着增强。计算得检测限低至7.8×10~(-3) U/mL。此外,还成功地研究了此荧光生物传感器对HeLa细胞裂解物中活性UDG的响应。这种简单,快速和经济的光学DNA生物传感器不仅适用于活性UDG测定,通过调节HP识别区域的序列也可以灵活的实现其他目标物的检测。2.基于双放大策略的共振瑞利散射方法用于尿嘧啶DNA糖基化酶检测提出了一种RRS方法,用于在Exo Ⅲ催化作用下免标记双重扩增DNA生物传感器的构建,实现了活性UDG的灵敏检测。设计了含有触发剂和特异性尿嘧啶碱基的双链DNA复合物S1-S2。为了实现双重扩增策略,设计了发卡探针HP1和HP2。特殊的发夹探针HP1和HP2分别与S1和S2部分互补配对。随着UDG切除反应的发生,尿嘧啶碱基从双链S1-S2的S2上被移除,导致S1-S2获得较低的熔解温度。因此,S1-S2解离成游离的单链S1和S2。随后,释放的单链分别与发卡探针杂交,在Exo Ⅲ催化作用下开启双重扩增。当K+存在时,由扩增反应产生的大量c-myc序列形成稳定的G-四链体结构。最后,加入Mg~(2+),在Mg~(2+)的辅助作用下G-四链体堆迭成长而连续的G-纳米线,引起RRS强度明显增强。提出的RRS生物传感器对于活性UDG的测定获得的检测限为1.0×10~(-5) U/mL。此外,在HeLa细胞裂解物中成功实现了活性UDG的分析。说明设计的DNA生物传感器在UDG临床诊断或功能研究方面有潜在的应用前景。3.构建外切酶Ⅲ辅助的级联多重放大荧光传感器实现尿嘧啶DNA糖基化酶的检测设计了一个Exo Ⅲ辅助的灵敏的级联多重放大荧光传感器用于活性UDG的灵敏检测。在UDG的切除反应下,含有突变尿嘧啶碱基的双链DNA分离成两个解离的单链DNA,它们分别与两个环状发夹探针杂交,引发Exo Ⅲ辅助的双重循环。用修饰有荧光基团和猝灭基团的发卡DNA作信号分子探针。双循环后,产生大量相同的短DNA片段,能够与信号分子探针杂交,启动新的Exo Ⅲ辅助循环扩增并释放大量仅携带荧光基团的单链DNA。因此,检测系统的荧光强度增强。活性UDG检测的检测限低至2.4×10~(-4) U/mL。在HeLa细胞裂解物的分析实验和选择性实验中,设计的DNA生物传感器表现出良好的性能。(本文来源于《西南大学》期刊2018-04-18）
王媛,邓小飞[9]（2018）在《DNA糖基化酶1对幽门螺杆菌致胃上皮细胞DNA损伤的保护作用》一文中研究指出目的:探讨氧化性DNA损伤修复关键酶DNA糖基化酶1(OGG1)在幽门螺杆菌(HP)感染致胃上皮细胞(GES-1)DNA损伤中的作用。方法:实验分为对照组、HP感染组、OGG1干扰组、HP感染组+OGG1干扰组。采用RNA干扰技术沉默GES-1细胞OGG1表达,24 h后进行HP感染,于感染后24 h和48 h分别采用CCK-8试验和LDH释放试验检测细胞活力和细胞坏死情况;感染48 h后分别采用彗星试验和γH2AX焦点形成试验检测细胞DNA损伤;采用TUNEL试验和PARP表达检测细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,HP感染组和单纯OGG1干扰组的细胞活力、LDH水平、DNA损伤情况、γH2AX焦点形成、TUNEL阳性细胞数目及活性PARP表达水平均无显着变化(P均>0.05)。而OGG1干扰+HP感染则引起胃上皮细胞活力下降、LDH释放增加、DNA损伤加重、γH2AX焦点形成增多、TUNEL阳性细胞增多及活性PARP表达升高,与对照组及HP感染组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论:OGG1在HP感染致胃上皮细胞氧化性DNA损伤中发挥了保护作用,为防护HP感染相关的胃部疾病提供了新的策略和方向。(本文来源于《癌变·畸变·突变》期刊2018年02期）
丁宁[10]（2018）在《5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶的表达对大麦种子醇溶蛋白组成的影响》一文中研究指出大麦(Hordeum vulgare,2n=14),自花授粉,禾本科、大麦属,是我国主要种植作物之一。与小麦的营养成分近似,但谷蛋白含量较少,β-葡聚糖和可溶性纤维含量略高,在我国主要分布在长江流域、黄河流域和青藏高原。大麦籽粒醇溶蛋白作为种子胚乳中主要的贮藏蛋白质之一,其含量不仅对啤酒酿造、饲料加工产生一定的影响,甚至也能成为乳糜泻疾病的重要抗原来源。本研究选用叁个国外品种:来自美国的Steptoe和Morex以及来自澳大利亚的Clipper作为实验材料。利用大麦醇溶蛋白启动子区域具有不同的甲基化机制差异,构建5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶(DME)的沉默子,并转化大麦,主要得到以下结论:1.以大麦Morex品种为材料,扩增高分子量醇溶蛋白(D-hordein)的启动子Hor3-1,通过使用不同保真性能的酶,最终确定有4个碱基差异的位点是由品种特异性造成的。之后,对得到的序列进行CpG岛的预测,得出该序列的GC频率介于0.4~1.2之间,绝大部分位点高于阈值0.6,而CpG岛的GC含量介于40%~50%,低于显着水平。通过对顺式调控元件的预测得出,除了含有TATA-box和CAAT-box外,还发现一个涉及胚乳调控表达的元件,Prolamin框,它可以结合Dof类蛋白的转录因子。2.通过生物信息学的方法,分析了大麦HvDME(FM164415.1)的基因中含有17个外显子和16个内含子,其5946个碱基对的编码序列可翻译成1981个推定的氨基酸,这与小麦TaDME(AEF38424)1982个氨基酸基本相同。且两者蛋白二级结构都含有共同的保守基序:N端富含赖氨酸的区域、A结构域、DNA糖基化酶保守域、EndIII_4Fe-4Se结构域和B结构域,其中DNA糖基化酶保守域中的螺旋-发夹-螺旋结构具有双功能性,在DME功能发挥中起着重要作用。3.利用本实验室保存的小麦pHMW-DMEhp载体为改造对象,以小麦TaDME-5A构建的发夹片段(Hairpin)在大麦DME核苷酸序列中有93%的相似性,这为利用小麦DME片段在大麦中产生功能奠定了基础。然后通过酶切连接的方法构建了大麦胚乳特异性的pHor3-DMEhp表达载体。4.为了提高大麦未成熟胚的诱导率和愈伤组织的分化率,以大麦Clipper和Steptoe为转化材料,逐步优化了大麦基因枪遗传转化的条件。优化后的条件为:受体幼胚的大小必须要适宜,最好介于1~2 mm;愈伤组织诱导培养基中需要添加浓度为2.5 mg·L~(-1)的Dicamba;轰击前,需要浓度为0.5 mol·L~(-1)甘露醇对愈伤进行高渗处理。5.经过基因枪转化,在56株成活苗中,首先通过设计特异性引物和PCR的方法筛选到6株阳性苗:2株为Clipper,4株为Steptoe,其T_0代转化率为10.71%。然后对阳性植株T_1代进行聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)检测发现,Clipper中P_1E_81-DME的B组分中有一条条带缺失,Steptoe中,P_1E_41-DME和P_1E_(18)1-DME的目标条带较暗,这些结果暗示对B组分的下调取得初步成功,并为进一步鉴定提供了材料。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-03-01）
糖基化酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)活性有利于生物医学研究和疾病预后.这里,构建一种连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测UDG活性.方法:在本策略中,两条短寡核苷酸链分别与发夹探针环部序列的一半杂交,形成含缺口的DNA复合物.在UDG作用下,发夹探针环部的单个U碱基被移除,产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点.AP位点能抑制缺口处的连接酶反应,使位于发夹探针末端的立足点和链迁移区域仍彼此邻近,从而引发杂交链式反应(HCR),产生大量G四倍体(G4)结构.最后,G4与N甲基卟啉IX(NMM)结合,产生增强的荧光信号.结果:本策略检测限低至0.000 20U/mL,并能区分UDG与其它DNA糖基化酶.结论:本策略为生物医学研究和疾病预后提供了一种有潜力的工具用于灵敏定量检测UDG活性.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
糖基化酶论文参考文献
[1].葛长宇,徐鹏,宫榭阳,匡野.胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶的研究现状及进展[J].中华全科医学.2019
[2].吴玉姝,吴敏,刘敏.连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性[J].聊城大学学报(自然科学版).2018
[3].张苹苹.基于碱基切除修复的荧光生物传感策略用于尿嘧啶-DNA糖基化酶活性检测[D].山东大学.2018
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标签：胸腺嘧啶脱氧核糖核酸糖基化酶; DNA甲基化; DNA主动去甲基化; 表观遗传学;