导读:本文包含了基因敲除突变论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:青鳉,foxl2,基因敲除,CRISPR,Cas9
基因敲除突变论文文献综述
周运迪,吴星星,赵海萍,罗大极[1]（2019）在《青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析》一文中研究指出【目的】建立青鳉(Oryziaslatipes)foxl2基因突变体材料,为阐释foxl2基因功能提供良好的动物模型和研究基础。【方法】利用CRISPR/Cas9技术敲除青鳉foxl2基因,建立突变体材料。观察foxl2基因突变体的第二性征、性腺等形态特征;组织学分析性腺结构与性腺中细胞类型;用定量PCR检测性腺发育相关基因的表达情况。【结果】通过CRISPR/Cas9技术成功敲除青鳉foxl2基因,建立foxl2基因缺失4个碱基的青鳉突变体。从第二性征与性腺表型上,foxl2-/-突变体均表现为生理雄性;组织切片分析发现,foxl2-/-突变体的性腺结构与野生型卵巢和野生型精巢均有显着差异,存在退化的核仁外周卵母细胞与精子,提示foxl2-/-的性腺在组织结构上类似精巢;定量PCR结果显示,foxl2-/-突变体中雄性性腺发育关键基因sox9b、gsdf、amh等的表达量升高,雌性性腺发育关键基因cyp19a1a等的表达量下降。【结论】通过CRISPR/Cas9技术成功建立青鳉foxl2基因缺失的突变体,foxl2-/-突变体有遗传雌性、生理雄性的表型特征,foxl2对维持青鳉性腺功能有重要作用。(本文来源于《广东海洋大学学报》期刊2019年02期）
张强,罗能杰,韦圣博,金健[2]（2019）在《基于CRISPR/Cas9技术对水稻ALOG家族成员的基因敲除突变体的构建》一文中研究指出ALOG (Arabidopsis LSH1 and Oryza G1)基因家族成员广泛存在陆生植物中,并在其生长发育的过程中起到关键作用。在水稻ALOG基因家族中总共有10个成员(G1, G1L1～G1L9),G1、G1L5和G1L6已经被证明是影响水稻花发育的关键基因,然而其余7个基因成员的功能还未知。本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑系统对水稻ALOG基因家族功能未知的7个成员进行基因敲除,得到它们的突变株系,借此研究它们的基因功能并观察植株表型。在得到的所有T0代突变体植株中,G1L1、G1L2、G1L3、G1L8和G1L9经过测序和解码已经检测到各自纯合的突变株,经过对纯合突变株基因型和氨基酸序列的分析发现,它们各自的序列都发生移码并且编码的氨基酸序列都存在不同程度的突变,说明基因敲除成功。通过对T0代纯合植株的表型观测,我们在G1L1和G1L2的纯合突变株中发现了穗发育缺陷的表型,即主穗轴变长,且上面的小穗变少。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻ALOG基因家族成员进行敲除,为进一步研究水稻发育尤其是水稻花发育调控分子机制提供了重要的遗传材料。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年03期）
陈妍妍,蔡双虎,简纪常[3]（2018）在《溶藻弧菌sodB基因敲除突变株的构建及其表型特征》一文中研究指出溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种条件性嗜盐革兰氏阴性致病菌,它不仅限制了水产养殖业的健康发展,还影响了人类的健康。超氧化物歧化酶(SOD)在机体抗氧化防御中起着重要的作用。本实验利用OverlapPCR和同源重组技术,构建sodB基因基因框内敲除突变株,以研究sodB在溶藻弧菌致病性上发挥的生理作用。结果表明,与野生型溶藻弧菌HY9901相比,sodB的缺失对溶藻弧菌的生长曲线的影响不明显,sodB缺失株在生物膜形成和ECPase活性方面明显增强,而其泳动能力、CIK细胞粘附能力、SOD活性显着下降,同时石斑鱼致病性试验结果显示,突变株毒力下降了10.13倍。此外,sodB缺失株对抗生素的敏感程度有显着的改变。这些结果表明,sodB对于溶藻弧菌正常的生理功能、对氢氧化钠的抗氧化能力及毒力都很重要。(本文来源于《2018年中国水产学会学术年会论文摘要集》期刊2018-11-15）
姚俊敏,张韶芮,金鑫,凡肖,束长龙[4]（2018）在《苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建》一文中研究指出细菌生物被膜(bacterial biofilm,BBF)可以提高细菌的紫外线抗逆性,调控细菌对环境胁迫的适应能力。本研究以课题组前期比较基因组工作中筛选出的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)XL6-(Gen Bank No.CP013000.1)的调控生物被膜形成的候选基因00940为基础,分析其基因功能,并构建基因敲除突变株。通过生物信息学分析发现00940基因可能编码谷氨酰胺合成酶,并受到转录因子Sig L、CcpA、Deg U和Lex A的调控。在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)中,Sig L是一种增强子,位于枯草芽孢杆菌的谷氨酸脱氢酶基因的下游,负责转录编码谷氨酸脱氢酶的roc G基因;CcpA转录因子参与代谢产物的分解;Deg U控制鞭毛形成和生物被膜形成的基因表达;Lex A蛋白在DNA损伤的情况下被诱导,是细菌SOS DNA修复系统的转录抑制因子,推测这些转录因子在Bt中也发挥相似的作用。通过PCR获得00940基因上、下游同源臂和卡那霉素(kan)抗性基因,利用重迭PCR获得完整的基因敲除片段。根据酶切位点将基因敲除片段和p MAD温敏载体进行重组反应,得到重组质粒。将重组质粒电击转化Bt XL6-,筛选获得了00940基因敲除突变株。以Bt Xl6-作为对照,对Bt Xl6-00940基因突变株进行表型分析,包括生长曲线测定、群游能力测定以及生物被膜形成能力测定。结果表明,00940基因的敲除对菌株的生长趋势没有影响,但是群游能力和生物被膜形成能力提高,初步确定00940基因的敲除提高Bt Xl6-菌株的生物被膜形成能力。基因敲除突变株的获得为进一步分析相关调控基因的功能提供科学依据和基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年08期）
张强[5]（2018）在《基于CRISPR/Cas9的水稻ALOG家族成员基因敲除突变体的构建及其成员G1L6的调控网络的研究》一文中研究指出ALOG(ArabidopsisLSH1andOryza G1)基因家族成员广泛存在于陆生植物中,并在其生长发育的过程中起到关键的作用。在水稻中ALOG基因家族共有10个成员(Gi,G1I1～G1L9)。其中叁个成员(G1,G1L5和G1L6)的功能已被研究,它们都参与了水稻花发育的过程,而其它7个成员的功能尚属未知。本项目主要关注水稻功能未知的7个ALOG基因和已经报道过的G1L6基因,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建它们的基因敲除株系,并进一步地构建基因过表达株系,以此来研究它们的基因功能。观察发现,所有的基因家族成员过表达株系都没有明显的发育缺陷表型,而大多数的家族成员的基因敲除株系也没有明显的发育缺陷表型(G1L1和G1L2的基因敲除株系除外)。考虑到这些基因家族成员之间序列有相似性,这种家族内单基因突变未出现缺陷表型的原因可能跟他们之间功能冗余性有关。G1L6转基因敲除植株表型跟之前报道过的内外稃变窄,呈现“鸟嘴”状的表型很相似,但是其纯合植株表现出明显的不育性状。G1L1和G1L2的转基因敲除株系表现出穗发育缺陷的表型,具体表现为主穗轴变长,而且上面的小穗变少。在转录组KEGG富集通路分析中,我们找到了8个和水稻淀粉、蔗糖生物合成途径相关基因得到差异表达,这可能跟KO-g1l6灌浆失败有关;另外,15个和水稻植物激素信号转导途径相关的基因得到差异表达,揭示着植物激素可能在G1L6介导的水稻内外稃发育的过程中扮演着重要的角色。本研究中,我们运用分子生物学技术,通过RNA-Seq基因组学技术来研究G1L6的调控网络。通过该项目的研究,我们构建了 ALOG家族成员的基因敲除株和过表达株,为今后进一步地研究ALOG家族成员提供了关键的遗传材料,同时,通过对G1L6调控网络的研究,可以进一步了解水稻内外稃发育的分子生物学机制。(本文来源于《广西大学》期刊2018-06-01）
唐浚博,曹浩伟,许蕊,张丹丹,黄娟[6]（2018）在《果蝇睾丸基因敲除突变体的构建及表型分析》一文中研究指出生殖系统功能的正常维持是物种繁衍的基础,需要多基因协同作用,但其中许多基因的具体功能和作用机制并不清楚。本研究选取了果蝇(Drosophila melanogaster)中8个在睾丸中表达、功能未知且与人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)高度同源的基因(CG4161、CG11475、CG2921、CG10541、CG7276、CG3800、CG8117和CG16779),分析了它们在不同组织中的表达水平,并分别检测了它们在雄性生殖系统中的功能。在这8个基因中,前5个为睾丸优势表达基因,其余3个为全身性表达。首先,利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术结合同源定向修复(homology-directed repair,HDR)在果蝇中对8个候选基因逐一进行敲除,建立了纯合的基因敲除突变品系;然后对这些品系的雄蝇进行了生育力测试及睾丸细胞学观察。结果显示,CG7276和CG3800基因敲除果蝇出现部分雄蝇不育且可育雄蝇后代数量较野生型显着下降。睾丸解剖观察显示CG7276和CG3800的功能缺失可导致雄蝇分别出现不同程度的精囊缩小及精原干细胞减少和细胞分布混乱;染色结果也提示CG7276和CG3800在精子的成熟过程中发挥一定作用。其他6个基因突变并未导致雄蝇育性变化或睾丸形态异常。这些突变体的获得及表型的初步分析为进一步研究基因功能及机制提供了良好的动物模型及基础。(本文来源于《遗传》期刊2018年06期）
赖慧玲[7]（2018）在《Rictor基因敲除在Kras/Pten突变导致的小鼠卵巢癌模型中的抗肿瘤活性研究》一文中研究指出PI3K/AKT/mTOR通路异常发生于大约70%的卵巢癌病例中。mTOR通过组成两个不同的复合物(mTORC1和mTORC2)执行它的功能。mTORC1对营养物质的反应敏感,与蛋白质合成密切相关。mTORC2对细胞外生长因子敏感,在细胞骨架重组,增殖和存活中发挥重要作用。作为支架蛋白,Rictor可调节mTORC2的组装,定位和底物结合。Rictor/mTORC2可直接激活Insulin/PI3K/AKT信号通路,在细胞代谢调控,器官生长发育,免疫功能调节等方面均显示了举足轻重的作用。在本研究中,利用Kras/Pten突变介导的卵巢子宫内膜样腺癌小鼠模型,我们证明了Rictor基因的缺失显着抑制小鼠卵巢癌的发生。在正常上皮细胞向恶性细胞转化过程中,Rictor/mTORC2促进了Kras/Pten突变导致的PI3K/AKT信号通路的活化。它也介导了谷胱甘肽代谢的上调作为细胞内的抗氧化进程来对抗细胞快速增殖和代谢过程中产生的氧化挑战,而为肿瘤的发生提供一个还原性的环境。这种还原性的环境促进Kras激活和Pten缺失合并突变介导的PI3K/AKT/Foxo3a通路及Wnt/β-catenin通路之间的协同作用而促进正常上皮细胞恶变。Rictor基因删除一方面介导PI3K/AKT信号的关闭,促进转录因子Foxo3a的去磷酸化和核定位;另一方面通过抑制细胞内谷胱甘肽代谢,导致细胞内氧化应激而激活Foxo3a。氧化应激状态下,核内Foxo3a大量结合β-catenin增强转录,竞争性地减少了β-catenin和Tcf4的结合而抑制经典的Wnt/β-catenin的激活。随着PI3K/AKT及Wnt/β-cateninling两条重要通路的同时关闭,上皮细胞的恶性转化被阻滞。可见Rictor/mTORC2通过维持氧化还原稳态,激活PI3K/AKT通路和Wnt/β-cat通路活性而促进卵巢癌的发生。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
唐浚博[8]（2018）在《果蝇睾丸基因敲除突变休的构建及雄性生殖相关表型分析》一文中研究指出雄性生殖系统的发育和功能的维持依赖许多基因的协同作用。这些基因在雄性生殖系统中表达并发挥功能,它们的突变可能影响睾丸的发育及精子的成熟,并最终导致育性的变化。随着生殖生物学研究的进展,已有很多基因功能得到深入研究但仍有许多基因的具体功能和作用机制未知。对这些基因功能的研究有助于人们了解精子发生机制并为诊断和治疗不育症提供理论基础。近年来,随着CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9(CRISPR-associated protein 9)基因编辑技术的成熟,简捷、高效、精准的基因编辑在越来越多的生物体中得以实施,其中就包括黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)这一经典的基因功能研究模型。利用CRISPR/Cas9技术结合同源定向修复(Homology Directed Repair,HDR)策略对果蝇基因组进行编辑,可以根据设计敲除目的基因或引入分子修饰。为研究果蝇睾丸基因在雄性生殖中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9技术结合HDR在果蝇中对候选基因逐一进行敲除,建立纯合的突变果蝇品系,并对获得的突变体进行生殖表型的初步分析,以期望进一步开展基因相关功能的研究。我们依据数据库信息,按照睾丸中表达、与人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)基因高度同源、雄性生殖方面功能尚未见报道这叁个标准进行了筛选,最终确定8个候选基因(CG4161、CG11475、CG2921、CG10541、CG7276、CG3800、CG8117和CG16779)进行研究。首先,我们通过RT-PCR对这些基因在果蝇和小鼠不同组织中的表达水平进行了检测,对数据库中的结果进行了验证。其次,针对这些基因的结构和序列,分别设计构建sgRNA质粒及带有红色荧光标记的供体模板质粒,利用显微注射导入表达有Cas9蛋白的果蝇胚胎中,通过对后代进行荧光标记筛选,得到基因敲除候选果蝇,并对候选果蝇进行了分子鉴定,最终获得纯合突变体品系。再次,为检测这些基因在雄性生殖中的作用,我们对8个敲除品系的雄蝇进行了生育力测试,结果显示CG3800~(-/-)和CG7276~(-/-)雄蝇部分不育,且可育果蝇后代数量较野生型显着下降,而其它基因敲除突变体育性正常,后代数量与野生型无显着差异。最后,我们还对这些突变体进行了细胞学分析。睾丸解剖观察显示CG3800~(-/-)和CG7276~(-/-)不育雄蝇出现不同程度精囊缩小、精原干细胞减少和细胞分布混乱,而其他突变体雄蝇成熟精子数量充足。染色结果也提示部分CG3800~(-/-)和CG7276~(-/-)雄蝇出现个性化复合体(individualization complex,IC)不同步及精子散乱等现象。这些突变体的获得及表型的初步分析为进一步研究基因功能及机制提供了良好的动物模型及基础。(本文来源于《南京医科大学》期刊2018-05-01）
刘晓柱,李银凤,于志海,刘晓辉,黄名正[9]（2018）在《菜豆晕疫病原菌甘油激酶基因敲除突变体的构建与表型分析》一文中研究指出以菜豆晕疫病菌(Pseudomonas syringae pv.phaseolicola)NPS3121株系为出发材料,根据Gen Bank中登录的1448A甘油激酶(glycerol kinase,GK)氨基酸序列设计同源引物,通过PCR克隆NPS3121 GK基因,序列全长为1 506 bp,可编码1条含501个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,NPS3121 GK包含469个氨基酸,相对分子质量为55 800,富含α–螺旋结构,等电点为5.44。通过整合突变的方式构建了NPS3121 GK敲除突变体,敲除突变体与野生型相比,在M9培养基中生长速率降低18%,在KBM培养基中生长速率降低16%。敲除突变体中甘油浓度较野生型提高了6倍。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
杨腊英,陈平亚,郭立佳,梁昌聪,汪军[10]（2018）在《尖孢镰刀菌古巴专化型中SIX2和SIX6基因敲除突变体的生物学特性》一文中研究指出尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense,Foc)依据对寄主易感性分为4个不同的生理小种,其中4号生理小种(Foc4)几乎能危害目前所有栽培品种。为研究其SIX(secreted in xylem)蛋白编码基因SIX2和SIX6在Foc4对寄主差异性选择中的作用,利用PEG介导的原生质体转化法将基于pCT74质粒框架构建的SIX2、SIX6基因敲除质粒分别转入Foc4 B2菌株,分别得到了SIX2和SIX6基因敲除突变体,然后分析敲除突变体与野生型的生物学特性差异。生物学研究结果表明:SIX2、SIX6基因的缺失突变体均呈现菌丝稀疏、生长速率减慢、产孢率降低、菌丝异核率增加,对渗透压、外源氧等外源胁迫更为敏感等特征。致病力分析实验发现ΔFoSIX2和ΔFoSIX6突变体的孢子在香蕉苗的幼嫩根部附着量减少,孢子根部定殖能力降低;ΔFoSIX2菌株基本上丧失了对巴西蕉的致病力,而对粉蕉仍有较强的致病能力;ΔFoSIX6菌株则对粉蕉苗、巴西香蕉苗盆栽致病力均呈极显着下降。依据生物学与致病力测定结果,推测Foc4中SIX6基因决定Foc4对寄主的致病力,而SIX2基因则决定Foc4对寄主的差异性选择能力。(本文来源于《热带作物学报》期刊2018年04期）
基因敲除突变论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
ALOG (Arabidopsis LSH1 and Oryza G1)基因家族成员广泛存在陆生植物中,并在其生长发育的过程中起到关键作用。在水稻ALOG基因家族中总共有10个成员(G1, G1L1～G1L9),G1、G1L5和G1L6已经被证明是影响水稻花发育的关键基因,然而其余7个基因成员的功能还未知。本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑系统对水稻ALOG基因家族功能未知的7个成员进行基因敲除,得到它们的突变株系,借此研究它们的基因功能并观察植株表型。在得到的所有T0代突变体植株中,G1L1、G1L2、G1L3、G1L8和G1L9经过测序和解码已经检测到各自纯合的突变株,经过对纯合突变株基因型和氨基酸序列的分析发现,它们各自的序列都发生移码并且编码的氨基酸序列都存在不同程度的突变,说明基因敲除成功。通过对T0代纯合植株的表型观测,我们在G1L1和G1L2的纯合突变株中发现了穗发育缺陷的表型,即主穗轴变长,且上面的小穗变少。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻ALOG基因家族成员进行敲除,为进一步研究水稻发育尤其是水稻花发育调控分子机制提供了重要的遗传材料。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因敲除突变论文参考文献
[1].周运迪,吴星星,赵海萍,罗大极.青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析[J].广东海洋大学学报.2019
[2].张强,罗能杰,韦圣博,金健.基于CRISPR/Cas9技术对水稻ALOG家族成员的基因敲除突变体的构建[J].分子植物育种.2019
[3].陈妍妍,蔡双虎,简纪常.溶藻弧菌sodB基因敲除突变株的构建及其表型特征[C].2018年中国水产学会学术年会论文摘要集.2018
[4].姚俊敏,张韶芮,金鑫,凡肖,束长龙.苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建[J].农业生物技术学报.2018
[5].张强.基于CRISPR/Cas9的水稻ALOG家族成员基因敲除突变体的构建及其成员G1L6的调控网络的研究[D].广西大学.2018
[6].唐浚博,曹浩伟,许蕊,张丹丹,黄娟.果蝇睾丸基因敲除突变体的构建及表型分析[J].遗传.2018
[7].赖慧玲.Rictor基因敲除在Kras/Pten突变导致的小鼠卵巢癌模型中的抗肿瘤活性研究[D].华中科技大学.2018
[8].唐浚博.果蝇睾丸基因敲除突变休的构建及雄性生殖相关表型分析[D].南京医科大学.2018
[9].刘晓柱,李银凤,于志海,刘晓辉,黄名正.菜豆晕疫病原菌甘油激酶基因敲除突变体的构建与表型分析[J].湖南农业大学学报(自然科学版).2018
[10].杨腊英,陈平亚,郭立佳,梁昌聪,汪军.尖孢镰刀菌古巴专化型中SIX2和SIX6基因敲除突变体的生物学特性[J].热带作物学报.2018