导读:本文包含了辅助成分蛋白酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甘蔗花叶病毒,辅助成分-蛋白酶,原核表达,抗血清
辅助成分蛋白酶论文文献综述
许小洁,于伟鹏,杨广玲,韩士玲,何梦君[1]（2019）在《甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备》一文中研究指出利用RT-PCR克隆甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV) DWK1分离物辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)基因,酶切后连接原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-HC-Pro。将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,经IPTG诱导后,表达出57 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,多点注射法免疫新西兰长耳兔,制备SCMV HC-Pro抗血清。间接ELISA结果表明,该血清效价为1∶8 192。感染DWK1的玉米叶片病汁液稀释128倍时,该血清仍然能够有效检测出HC-Pro。Western-blot检测结果表明,该血清可特异性检测SCMV第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2,与同属的烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和马铃薯Y病毒(PVY)均无反应。本研究为准确、快速检测SCMV HC-Pro并进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年03期）
栾雅梦[2]（2019）在《辅助成分蛋白酶和柱状内含体蛋白在马铃薯Y病毒病症状形成过程中的作用机制》一文中研究指出马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是最大的植物RNA病毒属—马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的代表种,其基因组编码两个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),在自身蛋白酶的作用下切割成11个成熟蛋白,其中,辅助成分蛋白酶(Helper component proteinase,HCpro)参与病毒的复制、RNA沉默抑制、蚜虫传毒和症状形成等重要生命过程。圆柱状内含体蛋白(Cytoplasmic inclusion protein,CI)在病毒侵染的细胞中形成的风轮状内含体是马铃薯Y病毒科Potyviridae病毒鉴定的重要特征,同时参与病毒复制、细胞间移动和症状形成等过程。HCpro与CI参与症状形成过程,但具体机制还不清楚。研究表明HCpro的叁维结构与抗性基因的识别密切相关,暗示HCpro叁维结构在病毒症状形成过程中具有重要作用。对CI编码的氨基酸序列分析发现PVY CI的C端存在真核生物翻译起始因子eIF4E的潜在结合基序:YxxxxLΦ基序。为研究HCpro和CI在症状形成过程中的作用,本研究在PVY~N605侵染性克隆基础上,分别将HCpro不同位置插入标签序列,分析HCpro叁维结构与症状之间的关系,通过定点突变技术突变YxxxxLΦ基序中保守位点鉴定该基序在病毒症状形成过程中作用。具体结果如下:(1)HCpro结构变化影响PVY症状形成。N端与中心区域对PVY的症状形成的影响更大。在PVY~N605侵染性克隆基础上,将标签序列IDAGGS分别插入HCpro的N端区域、中心区域和C端区域氨基酸S_1S_2、I_(252)V_(253)和L_(313)V_(314),获得PVY-HCS_1-S_2、PVY-HCI_(252)-V_(253)、PVY-HCL_(313)-V_(314)突变体。通过农杆菌浸润的方法将野生型及其突变体病毒接种本氏烟。结果显示,所有的突变体均能够系统侵染本氏烟。接种4天后PVY-HCS_1-S_2突变体能够移动到系统叶片;接种后25天,与PVY野生型病毒相比,接种PVY-HCS_1-S_2突变体引起寄主系统叶片严重皱缩,植株明显矮化。接种4天后,未能在本氏烟系统叶片检测到PVY-HCI_(252)-V_(253)突变体,但接种后25天可在系统叶片观察到绿色荧光。接种突变体PVY-HCL_(313)-V_(314)25天后本氏烟的症状与野生型相比无显着差异。(2)在HCpro不同区域插入标签序列影响HCpro抑制沉默能力。将标签序列IDAGGS分别插入瞬时表达载体pCa-35S:HCpro的N端区域、中心区域和C端区域氨基酸S_1S_2、I_(252)V_(253)和L_(313)V_(314),获得野生型HCpro及突变体HCproS_1-S_2、HCproI_(252)-V_(253)、HCproL_(313)-V_(314)的瞬时表达载体。抑制RNA沉默试验结果显示,与野生型相比,突变体HCproS_1-S_2抑制RNA沉默能力增强,突变体HCproI_(252)-V_(253)抑制RNA沉默能力显着减弱,突变体HCproL_(313)-V_(314)的抑制RNA沉默能力与野生型相比无明显差异,表明HCpro不同区域的特定结构或序列在抑制RNA沉默过程中具有重要作用。(3)突变CI中YxxxxLΦ基序影响PVY的症状形成。将PVY CI中潜在的eIF4E识别基序YxxxxLΦ基序中保守位点Y、L突变为A,获得PVY-CI_(Y513AL518A)突变体。通过农杆菌浸润方法分别接种本氏烟、普通烟,结果显示,与野生型相比,PVY-CI_(Y513AL518A)突变体病毒RNA和蛋白积累水平降低,病毒扩散能力减弱。(4)未发现CI中YxxxxLΦ基序与eIF4E互作的充分证据。已有研究表明YxxxxLΦ基序普遍存在于eIF4E互作蛋白中。构建含野生型PVY-CI与及突变体CI_(Y513AL518A)全长编码序列,和CI及突变体CI_(Y513AL518A)C端的酵母表达载体,结果未发现CI通过YxxxxLΦ基序与eIF4E、eIF(iso)4E互作证据。构建CI及突变体CI_(Y513AL518A)、eIF4E、eIF(iso)4E的BiFC载体,结果发现CI及突变体CI_(Y513AL518A)均与eIF4E体内存在互作。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-01）
张丽丽,崔百明,郑银英,黄先忠,向本春[3]（2014）在《马铃薯Y病毒辅助成分蛋白酶与加工番茄OPA3-like蛋白结合及其定位研究》一文中研究指出为了研究加工番茄OPA3-like蛋白与马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的辅助成分蛋白酶(helper component proteinase,HC-Pro)的相互作用,进行了2种蛋白的结合及其定位研究。通过PCR的方法从加工番茄中克隆OPA3-like基因,同时利用Blast方法对其分析,进行了OPA3-like蛋白基因氨基酸序列同源性分析。通过构建双分子荧光互补载体pSPYCE-35S-OPA3-like和pSPYNE-35S-HC-Pro,利用农杆菌介导法共侵染洋葱表皮细胞60 h后,在共聚焦显微镜下观察洋葱表皮细胞中的黄色荧光。结果显示:加工番茄OPA3-like基因ORF长510 bp,编码169个氨基酸,编码蛋白属OPA3蛋白家族。激光共聚焦显微镜下可观察到沿细胞膜呈小泡状分布黄色荧光,说明PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白结合并且共定位在细胞膜附近。这为进一步研究PVY的HC-Pro蛋白与加工番茄OPA3-like蛋白的相互作用机制奠定了一定的基础。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2014年04期）
李雅君,席小莉,张立伟,陈廷贵,王晓菊[4]（2014）在《木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根中的有效成分研究》一文中研究指出文章对木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根中的有效成分进行了研究。以葛根素及葛根总黄酮得率为指标,采用单因素实验法筛选了酶解时间、酶质量分数、酶解温度、酶解pH值等;采用综合加权评分法进行数据分析,以葛根素及葛根总黄酮得率为综合评价指标,对酶解时间、酶质量分数、酶解温度叁个主要影响因素进行了正交试验的筛选。文章首次选用木瓜蛋白酶酶解的方法,对葛根中的有效成分进行了辅助提取,并确定了其最佳提取工艺条件。实验结果表明:酶解pH值为6,酶质量分数为2%,酶解温度为60℃,酶解时间为4h时,木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根中有效成分的效果为最佳。(本文来源于《山西大学学报(自然科学版)》期刊2014年02期）
辅助成分蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是最大的植物RNA病毒属—马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的代表种,其基因组编码两个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),在自身蛋白酶的作用下切割成11个成熟蛋白,其中,辅助成分蛋白酶(Helper component proteinase,HCpro)参与病毒的复制、RNA沉默抑制、蚜虫传毒和症状形成等重要生命过程。圆柱状内含体蛋白(Cytoplasmic inclusion protein,CI)在病毒侵染的细胞中形成的风轮状内含体是马铃薯Y病毒科Potyviridae病毒鉴定的重要特征,同时参与病毒复制、细胞间移动和症状形成等过程。HCpro与CI参与症状形成过程,但具体机制还不清楚。研究表明HCpro的叁维结构与抗性基因的识别密切相关,暗示HCpro叁维结构在病毒症状形成过程中具有重要作用。对CI编码的氨基酸序列分析发现PVY CI的C端存在真核生物翻译起始因子eIF4E的潜在结合基序:YxxxxLΦ基序。为研究HCpro和CI在症状形成过程中的作用,本研究在PVY~N605侵染性克隆基础上,分别将HCpro不同位置插入标签序列,分析HCpro叁维结构与症状之间的关系,通过定点突变技术突变YxxxxLΦ基序中保守位点鉴定该基序在病毒症状形成过程中作用。具体结果如下:(1)HCpro结构变化影响PVY症状形成。N端与中心区域对PVY的症状形成的影响更大。在PVY~N605侵染性克隆基础上,将标签序列IDAGGS分别插入HCpro的N端区域、中心区域和C端区域氨基酸S_1S_2、I_(252)V_(253)和L_(313)V_(314),获得PVY-HCS_1-S_2、PVY-HCI_(252)-V_(253)、PVY-HCL_(313)-V_(314)突变体。通过农杆菌浸润的方法将野生型及其突变体病毒接种本氏烟。结果显示,所有的突变体均能够系统侵染本氏烟。接种4天后PVY-HCS_1-S_2突变体能够移动到系统叶片;接种后25天,与PVY野生型病毒相比,接种PVY-HCS_1-S_2突变体引起寄主系统叶片严重皱缩,植株明显矮化。接种4天后,未能在本氏烟系统叶片检测到PVY-HCI_(252)-V_(253)突变体,但接种后25天可在系统叶片观察到绿色荧光。接种突变体PVY-HCL_(313)-V_(314)25天后本氏烟的症状与野生型相比无显着差异。(2)在HCpro不同区域插入标签序列影响HCpro抑制沉默能力。将标签序列IDAGGS分别插入瞬时表达载体pCa-35S:HCpro的N端区域、中心区域和C端区域氨基酸S_1S_2、I_(252)V_(253)和L_(313)V_(314),获得野生型HCpro及突变体HCproS_1-S_2、HCproI_(252)-V_(253)、HCproL_(313)-V_(314)的瞬时表达载体。抑制RNA沉默试验结果显示,与野生型相比,突变体HCproS_1-S_2抑制RNA沉默能力增强,突变体HCproI_(252)-V_(253)抑制RNA沉默能力显着减弱,突变体HCproL_(313)-V_(314)的抑制RNA沉默能力与野生型相比无明显差异,表明HCpro不同区域的特定结构或序列在抑制RNA沉默过程中具有重要作用。(3)突变CI中YxxxxLΦ基序影响PVY的症状形成。将PVY CI中潜在的eIF4E识别基序YxxxxLΦ基序中保守位点Y、L突变为A,获得PVY-CI_(Y513AL518A)突变体。通过农杆菌浸润方法分别接种本氏烟、普通烟,结果显示,与野生型相比,PVY-CI_(Y513AL518A)突变体病毒RNA和蛋白积累水平降低,病毒扩散能力减弱。(4)未发现CI中YxxxxLΦ基序与eIF4E互作的充分证据。已有研究表明YxxxxLΦ基序普遍存在于eIF4E互作蛋白中。构建含野生型PVY-CI与及突变体CI_(Y513AL518A)全长编码序列,和CI及突变体CI_(Y513AL518A)C端的酵母表达载体,结果未发现CI通过YxxxxLΦ基序与eIF4E、eIF(iso)4E互作证据。构建CI及突变体CI_(Y513AL518A)、eIF4E、eIF(iso)4E的BiFC载体,结果发现CI及突变体CI_(Y513AL518A)均与eIF4E体内存在互作。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
辅助成分蛋白酶论文参考文献
[1].许小洁,于伟鹏,杨广玲,韩士玲,何梦君.甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备[J].山东农业科学.2019
[2].栾雅梦.辅助成分蛋白酶和柱状内含体蛋白在马铃薯Y病毒病症状形成过程中的作用机制[D].山东农业大学.2019
[3].张丽丽,崔百明,郑银英,黄先忠,向本春.马铃薯Y病毒辅助成分蛋白酶与加工番茄OPA3-like蛋白结合及其定位研究[J].石河子大学学报(自然科学版).2014
[4].李雅君,席小莉,张立伟,陈廷贵,王晓菊.木瓜蛋白酶酶解辅助提取葛根中的有效成分研究[J].山西大学学报(自然科学版).2014