导读:本文包含了敲除突变体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:香蕉枯萎病,尖孢镰刀菌古巴专化型,高通量测序,差异表达基因
敲除突变体论文文献综述
丁兆建,吴小霞,孙君梅,陈丽霞,傅琪彦[1]（2019）在《尖孢镰刀菌古巴专化型MAPK FoSlt2敲除突变体的转录组分析》一文中研究指出尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f. sp. cubense(FOC)是威胁香蕉生产的重要土传病原真菌。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)FoSlt2信号通路在调控尖孢镰刀菌古巴专化型的生长发育、细胞壁完整性和致病性方面发挥着重要作用。为了揭示FoSlt2信号通路的致病机理和寻找农药靶标,本研究利用高通量RNA-seq技术对该病菌野生型菌株和FoSlt2敲除突变体菌株的转录组进行了比较分析,结果表明差异表达基因共有2 164个,其中上调表达基因有1 184个,下调表达基因有980个。Gene Ontology(GO)功能分析结果表明,差异表达基因主要参与在结合、催化分子功能组和代谢过程、细胞过程生物学通路中。KEGG功能富集分析结果表明,差异基因主要参与戊糖和葡糖醛酸盐转换、氨基糖和核苷酸糖、氨基葡聚糖降解、磷酸肌醇和碳类物质代谢通路,说明这些通路与尖孢镰刀菌古巴专化型的生长发育和致病性相关。该研究为尖孢镰刀菌古巴专化型致病机制的阐明奠定了理论基础。(本文来源于《菌物学报》期刊2019年07期）
李海娟[2]（2019）在《双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体》一文中研究指出为在噬热栖热菌(Thermusthermophilus)中开収无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体幵转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型。结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体迚行转化,获取表观Δ0042突变体的概率为10–4,而使用闭合环状载体,该概率可达10–3;基因型及表现型分析显示,这些表观Δ0042均为TTP0042无痕敲除型突变体。该敲除手段在染色体上的基因TTC0340_0341中得到验证,从300个单菌落中成功鉴定出了1个Δ0340_0341突变株。(本文来源于《湖南农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年02期）
周运迪,吴星星,赵海萍,罗大极[3]（2019）在《青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析》一文中研究指出【目的】建立青鳉(Oryziaslatipes)foxl2基因突变体材料,为阐释foxl2基因功能提供良好的动物模型和研究基础。【方法】利用CRISPR/Cas9技术敲除青鳉foxl2基因,建立突变体材料。观察foxl2基因突变体的第二性征、性腺等形态特征;组织学分析性腺结构与性腺中细胞类型;用定量PCR检测性腺发育相关基因的表达情况。【结果】通过CRISPR/Cas9技术成功敲除青鳉foxl2基因,建立foxl2基因缺失4个碱基的青鳉突变体。从第二性征与性腺表型上,foxl2-/-突变体均表现为生理雄性;组织切片分析发现,foxl2-/-突变体的性腺结构与野生型卵巢和野生型精巢均有显着差异,存在退化的核仁外周卵母细胞与精子,提示foxl2-/-的性腺在组织结构上类似精巢;定量PCR结果显示,foxl2-/-突变体中雄性性腺发育关键基因sox9b、gsdf、amh等的表达量升高,雌性性腺发育关键基因cyp19a1a等的表达量下降。【结论】通过CRISPR/Cas9技术成功建立青鳉foxl2基因缺失的突变体,foxl2-/-突变体有遗传雌性、生理雄性的表型特征,foxl2对维持青鳉性腺功能有重要作用。(本文来源于《广东海洋大学学报》期刊2019年02期）
张强,罗能杰,韦圣博,金健[4]（2019）在《基于CRISPR/Cas9技术对水稻ALOG家族成员的基因敲除突变体的构建》一文中研究指出ALOG (Arabidopsis LSH1 and Oryza G1)基因家族成员广泛存在陆生植物中,并在其生长发育的过程中起到关键作用。在水稻ALOG基因家族中总共有10个成员(G1, G1L1～G1L9),G1、G1L5和G1L6已经被证明是影响水稻花发育的关键基因,然而其余7个基因成员的功能还未知。本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑系统对水稻ALOG基因家族功能未知的7个成员进行基因敲除,得到它们的突变株系,借此研究它们的基因功能并观察植株表型。在得到的所有T0代突变体植株中,G1L1、G1L2、G1L3、G1L8和G1L9经过测序和解码已经检测到各自纯合的突变株,经过对纯合突变株基因型和氨基酸序列的分析发现,它们各自的序列都发生移码并且编码的氨基酸序列都存在不同程度的突变,说明基因敲除成功。通过对T0代纯合植株的表型观测,我们在G1L1和G1L2的纯合突变株中发现了穗发育缺陷的表型,即主穗轴变长,且上面的小穗变少。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻ALOG基因家族成员进行敲除,为进一步研究水稻发育尤其是水稻花发育调控分子机制提供了重要的遗传材料。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年03期）
张柱坚,陈子强,顾建强,田大刚[5]（2018）在《稻瘟病抗性基因Pi-d2、Pi-d3和Pigm不同敲除突变体的抗性评价》一文中研究指出谷丰B是一个广谱高抗稻瘟病水稻保持系,含有稻瘟病抗性基因Pi-d2,Pi-d3和Pigm。为了进一步明确3个抗性基因在谷丰B中的作用,本研究利用CRISPR/Cas9多基因编辑系统构建了共敲除Pi-d2+Pi-d3+Pigm基因载体。通过遗传转化试验以及DNA测序,T_0代植株获得多种突变体组合类型。对其中的Pi-d2、Pigm、Pi-d2+Pi-d3、Pi-d2+Pigm、Pi-d2+Pi-d3+Pigm等5种纯合突变体的T_1代株系进行稻瘟病室内接种鉴定,研究结果表明,Pi-d2、Pi-d3和Pigm分别对86/501-3、KJ201/CHE86061和86/CHE86061/501-3的菌株存在显着的抗性效应,Pi-d2+Pi-d3,Pi-d2+Pigm和Pi-d2+Pi-d3+Pigm的敲除株系的抗性不完全等同于单个基因的简单迭加,其中Pi-d2+Pi-d3+Pigm的突变体对菌株CHL768表现完全不同于其他类型突变体的感病性。上述结果为解析广谱高抗稻瘟病水稻材料谷丰B的抗性遗传机理提供重要信息,也为水稻稻瘟病抗病育种研究提供参考。(本文来源于《福建农业学报》期刊2018年12期）
姚俊敏,张韶芮,金鑫,凡肖,束长龙[6]（2018）在《苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建》一文中研究指出细菌生物被膜(bacterial biofilm,BBF)可以提高细菌的紫外线抗逆性,调控细菌对环境胁迫的适应能力。本研究以课题组前期比较基因组工作中筛选出的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)XL6-(Gen Bank No.CP013000.1)的调控生物被膜形成的候选基因00940为基础,分析其基因功能,并构建基因敲除突变株。通过生物信息学分析发现00940基因可能编码谷氨酰胺合成酶,并受到转录因子Sig L、CcpA、Deg U和Lex A的调控。在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)中,Sig L是一种增强子,位于枯草芽孢杆菌的谷氨酸脱氢酶基因的下游,负责转录编码谷氨酸脱氢酶的roc G基因;CcpA转录因子参与代谢产物的分解;Deg U控制鞭毛形成和生物被膜形成的基因表达;Lex A蛋白在DNA损伤的情况下被诱导,是细菌SOS DNA修复系统的转录抑制因子,推测这些转录因子在Bt中也发挥相似的作用。通过PCR获得00940基因上、下游同源臂和卡那霉素(kan)抗性基因,利用重迭PCR获得完整的基因敲除片段。根据酶切位点将基因敲除片段和p MAD温敏载体进行重组反应,得到重组质粒。将重组质粒电击转化Bt XL6-,筛选获得了00940基因敲除突变株。以Bt Xl6-作为对照,对Bt Xl6-00940基因突变株进行表型分析,包括生长曲线测定、群游能力测定以及生物被膜形成能力测定。结果表明,00940基因的敲除对菌株的生长趋势没有影响,但是群游能力和生物被膜形成能力提高,初步确定00940基因的敲除提高Bt Xl6-菌株的生物被膜形成能力。基因敲除突变株的获得为进一步分析相关调控基因的功能提供科学依据和基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年08期）
刘震,陈迪,张铸涛,张荣意,缪卫国[7]（2018）在《基于转录组分析玉米弯孢霉叶斑病菌Clf敲除突变体差异表达基因》一文中研究指出玉米是重要的粮食作物之一,由新月弯孢[Curvularia lunata(Wakker)Boed]引起的玉米弯孢霉叶斑病对我国玉米生产造成严重损失。因此深入研究该病菌的致病机理,将为病害的防治提供理论依据。Clf属于MAPKKK蛋白激酶的一员,位于MAPK途径的上游,与丝裂原活化蛋白激酶(MEK)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)组成叁级酶联反应系统,调控胞外信号向细胞内传递,参与弯孢霉叶斑病菌的菌丝生长和产孢,可降低其致病性。通过转录组测序分析△Clf突变体和野生型菌株,结果分别产生23 944 383条和23 995 571条clean reads,拼接后△Clf突变体和野生型菌株中分别获到10 640个和10 639个基因。通过比较分析Clf基因敲除后共有324个基因差异表达,包括155个基因上调、169个基因下调。其中有41个已知功能的基因差异表达(21个上调和20个下调),其中糖基水解酶家族20,糖基水解酶家族76,细胞色素P450蛋白,Clg2p,Can a 1 allergen-like,碳水化合物酯酶家族等显着下调。糖基水解酶属于细胞壁降解酶系的一种参与病原菌的致病性,Clg2p可与Clf互作调控病原菌致病性,细胞色素P450蛋白参与细胞内的解毒,Can a 1 allergen-like是富含半胱氨酸的蛋白在病原菌寄生过程中有着重要作用。碳水化合物酯酶也属于细胞壁降解酶系的一种参与病原菌的侵染过程,这些基因广泛参与病原菌的致病性和调控产孢能力。Asp f 13-like protein调控细胞凋亡,在Clf基因敲除突变体中显着上调。转录组测序结果显示,Clf基因影响弯孢霉叶斑病菌的信号传递、催化活性、细胞凋亡、物质合成、代谢通路等多个生物学过程,暗示Clf基因有复杂的信号调控机制。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
张强[8]（2018）在《基于CRISPR/Cas9的水稻ALOG家族成员基因敲除突变体的构建及其成员G1L6的调控网络的研究》一文中研究指出ALOG(ArabidopsisLSH1andOryza G1)基因家族成员广泛存在于陆生植物中,并在其生长发育的过程中起到关键的作用。在水稻中ALOG基因家族共有10个成员(Gi,G1I1～G1L9)。其中叁个成员(G1,G1L5和G1L6)的功能已被研究,它们都参与了水稻花发育的过程,而其它7个成员的功能尚属未知。本项目主要关注水稻功能未知的7个ALOG基因和已经报道过的G1L6基因,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建它们的基因敲除株系,并进一步地构建基因过表达株系,以此来研究它们的基因功能。观察发现,所有的基因家族成员过表达株系都没有明显的发育缺陷表型,而大多数的家族成员的基因敲除株系也没有明显的发育缺陷表型(G1L1和G1L2的基因敲除株系除外)。考虑到这些基因家族成员之间序列有相似性,这种家族内单基因突变未出现缺陷表型的原因可能跟他们之间功能冗余性有关。G1L6转基因敲除植株表型跟之前报道过的内外稃变窄,呈现“鸟嘴”状的表型很相似,但是其纯合植株表现出明显的不育性状。G1L1和G1L2的转基因敲除株系表现出穗发育缺陷的表型,具体表现为主穗轴变长,而且上面的小穗变少。在转录组KEGG富集通路分析中,我们找到了8个和水稻淀粉、蔗糖生物合成途径相关基因得到差异表达,这可能跟KO-g1l6灌浆失败有关;另外,15个和水稻植物激素信号转导途径相关的基因得到差异表达,揭示着植物激素可能在G1L6介导的水稻内外稃发育的过程中扮演着重要的角色。本研究中,我们运用分子生物学技术,通过RNA-Seq基因组学技术来研究G1L6的调控网络。通过该项目的研究,我们构建了 ALOG家族成员的基因敲除株和过表达株,为今后进一步地研究ALOG家族成员提供了关键的遗传材料,同时,通过对G1L6调控网络的研究,可以进一步了解水稻内外稃发育的分子生物学机制。(本文来源于《广西大学》期刊2018-06-01）
唐浚博,曹浩伟,许蕊,张丹丹,黄娟[9]（2018）在《果蝇睾丸基因敲除突变体的构建及表型分析》一文中研究指出生殖系统功能的正常维持是物种繁衍的基础,需要多基因协同作用,但其中许多基因的具体功能和作用机制并不清楚。本研究选取了果蝇(Drosophila melanogaster)中8个在睾丸中表达、功能未知且与人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)高度同源的基因(CG4161、CG11475、CG2921、CG10541、CG7276、CG3800、CG8117和CG16779),分析了它们在不同组织中的表达水平,并分别检测了它们在雄性生殖系统中的功能。在这8个基因中,前5个为睾丸优势表达基因,其余3个为全身性表达。首先,利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术结合同源定向修复(homology-directed repair,HDR)在果蝇中对8个候选基因逐一进行敲除,建立了纯合的基因敲除突变品系;然后对这些品系的雄蝇进行了生育力测试及睾丸细胞学观察。结果显示,CG7276和CG3800基因敲除果蝇出现部分雄蝇不育且可育雄蝇后代数量较野生型显着下降。睾丸解剖观察显示CG7276和CG3800的功能缺失可导致雄蝇分别出现不同程度的精囊缩小及精原干细胞减少和细胞分布混乱;染色结果也提示CG7276和CG3800在精子的成熟过程中发挥一定作用。其他6个基因突变并未导致雄蝇育性变化或睾丸形态异常。这些突变体的获得及表型的初步分析为进一步研究基因功能及机制提供了良好的动物模型及基础。(本文来源于《遗传》期刊2018年06期）
赵绍阳[10]（2018）在《斑马鱼pik3c3敲除突变体中炎症性肠病的机制研究》一文中研究指出炎症性肠病(IBD)是一类在西方国家高发的消化系统炎症的统称,由于对其发病机理尚未有明确的结论,目前主要通过药物维持和手术切除来维持患者处于缓解期。这类疾病本身不会影响患者的生命,但是对其生理和心理产生了痛苦的折磨。本课题利用斑马鱼为模式动物,通过CRISPR/Cas9技术敲除了 pik3c3/vps34基因,获得了致死的斑马鱼突变体。与小鼠同源基因Pik3c3敲除的突变体死于原肠运动不同的是,斑马鱼pik3c3突变体早期发育基本没有异常,但是在8dpf至9dpf时期其小肠组织会产生严重的畸形,并且很快死亡。通过二代测序以及组织学分析,我们得知,pik3c3突变体表现出了炎症性肠病样的特征:(1)小肠上皮组织结构的破坏(小肠褶皱的消失、上皮细胞的脱落、膜蛋白定位异常等);(2)大量的中性粒细胞迁移到了小肠上皮组织;(3)炎症因子(tnfα、illb)和cxcl8a等)表达显着升高。目前,斑马鱼的IBD遗传模型并不多,并且多是由于微生物过度增殖导致。但是通过肠道微生物检测以及无菌培养实验,我们发现pik3c3突变体中的炎症反应并不是由于肠道微生物过度增殖引起的。另外,根据pik3c3已知的功能,我们发现了该突变体的创新之处。首先,Pik3c3的催化产物是磷酸肌醇3-磷酸(PI3P),而在该突变体的小肠上皮组织基本没有PI3P表达。这就证明了 pik3c3缺失导致的小肠表型是通过PI3P介导的。其次,pik3c3缺失导致的炎症反应是上皮细胞自主性的。一方面,通过人为诱导斑马鱼尾鳍损伤,我们发现中性粒细胞可以迁移到损伤部位,并且可以反向迁移离开,这就说明体内中性粒细胞的损伤应答没有受到影响。另一方面,体外3D培养人源结肠上皮细胞Caco2的实验也证明了 PIK3C3的抑制可以破坏上皮细胞的完整性,并且这是通过胞内体运输介导的。第叁,pik3c3缺失导致的炎症反应不依赖于细胞自噬和内质网应激。通过TEM以及蛋白表达的检测发现小肠上皮细胞自噬并没有受到明显抑制。这就排除了细胞自噬以及内质网应激在该突变体中导致炎症应答的影响。此外,pik3c3突变体还有极大的应用意义。大量IBD患者的GWAS筛选发现了许多与上皮细胞屏障作用相关的基因(cdh1、hnf4a、ttc7a等),我们发现在该突变体的上皮细胞中这些基因表达显着下调。同时,我们发现tnfa并没有在小肠组织中明显激活,这也就解释了为什么TNFα抑制剂对某些患者没有作用。因此,该突变体在IBD药物的筛选方面也具有很大的价值。综上所述,pik3c3突变体不仅解释了该基因在上皮细胞稳态维持方面的作用,还建立了上皮细胞损伤IBD模型,在IBD机理研究和临床治疗方面都有光明的前景。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2018-05-02）
敲除突变体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为在噬热栖热菌(Thermusthermophilus)中开収无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体幵转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型。结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体迚行转化,获取表观Δ0042突变体的概率为10–4,而使用闭合环状载体,该概率可达10–3;基因型及表现型分析显示,这些表观Δ0042均为TTP0042无痕敲除型突变体。该敲除手段在染色体上的基因TTC0340_0341中得到验证,从300个单菌落中成功鉴定出了1个Δ0340_0341突变株。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
敲除突变体论文参考文献
[1].丁兆建,吴小霞,孙君梅,陈丽霞,傅琪彦.尖孢镰刀菌古巴专化型MAPKFoSlt2敲除突变体的转录组分析[J].菌物学报.2019
[2].李海娟.双交换同源重组法构建Thermusthermophilus基因无痕敲除突变体[J].湖南农业大学学报(自然科学版).2019
[3].周运迪,吴星星,赵海萍,罗大极.青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析[J].广东海洋大学学报.2019
[4].张强,罗能杰,韦圣博,金健.基于CRISPR/Cas9技术对水稻ALOG家族成员的基因敲除突变体的构建[J].分子植物育种.2019
[5].张柱坚,陈子强,顾建强,田大刚.稻瘟病抗性基因Pi-d2、Pi-d3和Pigm不同敲除突变体的抗性评价[J].福建农业学报.2018
[6].姚俊敏,张韶芮,金鑫,凡肖,束长龙.苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建[J].农业生物技术学报.2018
[7].刘震,陈迪,张铸涛,张荣意,缪卫国.基于转录组分析玉米弯孢霉叶斑病菌Clf敲除突变体差异表达基因[C].中国植物病理学会2018年学术年会论文集.2018
[8].张强.基于CRISPR/Cas9的水稻ALOG家族成员基因敲除突变体的构建及其成员G1L6的调控网络的研究[D].广西大学.2018
[9].唐浚博,曹浩伟,许蕊,张丹丹,黄娟.果蝇睾丸基因敲除突变体的构建及表型分析[J].遗传.2018
[10].赵绍阳.斑马鱼pik3c3敲除突变体中炎症性肠病的机制研究[D].中国科学技术大学.2018
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